С-22 стабилизированные производные рапамицина, способ индуцирования иммуносупрессии, способ лечения или профилактики отторжения трансплантанта или гомологичной болезни, способ лечения или профилактики гиперпролиферативных сосудистых нарушений

С-22 стабилизированные производные рапамицина, способ индуцирования иммуносупрессии, способ лечения или профилактики отторжения трансплантанта или гомологичной болезни, способ лечения или профилактики гиперпролиферативных сосудистых нарушений

Реферат

 

Описываются новые соединения общей формулы Iа и Ib, где R¹ - С₁-C₆алкил; R² - водород; SiEt₃ или радикал формулы С(=O)-(СН₂)_yNR²¹R²², где j - целое число 1-3; R²¹ и R²² - С₁-C₃алкил; R³ - водород или SiEt₃; R⁴ - водород или SiEt₃, или их пролиновые аналоги, или их фармацевтически приемлемые соли, которые полезны для индуцирования иммуносупрессии и лечения отторжения трансплантата, гомологичной болезни, аутоиммунных заболеваний, воспалительных заболеваний, твердых опухолей, грибковых инфекций, лейкоза/лимфом дифференцированных Т-клеток и гиперпролиферативных васкулярных нарушений. Описываются также способ индуцирования иммуносупрессии, способ лечения или профилактики отторжения трансплантата или гомологичной болезни, способ лечения или профилактики гиперпролиферативных сосудистых нарушений. 4 с. и 18 з.п.ф-лы, 1 табл.

или

Изобретение относится к C-22 циклическим стабилизированным рапамицин производным или их фармацевтически приемлемым солям, которые полезны для индуцирования иммунодепрессии и для лечения отторжения трансплантанта, гомологичной болезни, аутоаллергических болезней, воспалительных заболеваний, твердых опухолей, лейкоза/лимфом дифференцированных Т-клеток и гиперпролиферативных сосудистых (васкулярных) нарушений.

Рапамицин является макроциклическим триеновым антибиотиком, производимым Streptomyces hygroscopicus, который, как было найдено, обладает противогрибковой активностью, в частности против Candida albicans, как in vitro, так и in vivo [C.Vezina et al., J.Antibiot., 28, 721 (1975); S.N. Sehgal et al., J. Antibiot. , 28, 727 (1975), H. A. Backer et al., J.Antibiot., 31, 539 (1978), патент США 3.929,992 и патент США 3.993.749].

Показано, что рапамицин сам по себе (патент США 4.885.171) или в комбинации с пицибанилом (патент США, 4.401.653) обладает противоопухолевой активностью. R. Martel и др. [Can J. Physiol. Pharmacol 55, 48 (1977)] открыли, что рапамицин эффективен в экспериментальной модели аллергического энцефаломиелита, в модели множественного склероза, в модели адъювантного артрита, модели ревматоидного артрита и эффективно ингибирует образование IgE-подобных антител.

Иммуносупрессивное действие рапамицина раскрыто в FASEB 3.3411 (1989). Было также показано, что циклоспорин A и FK-506, другие макроциклические молекулы, эффективные в качестве иммуносупрессивных средств, кроме того, полезны в предотвращении отторжения трансплантата [FASEB 3, 3411 (1989), FASEB 3, 5256 (1989), R.J. Calne et al., Zancet 1183 (1978) и патент США 5,100,899].

Показано также, что рапамицин полезен в профилактике или лечении системной красной волчанки [патент США 5.078.999], воспаления легкого [патент США 5,080,899] , инсулинзависимого сахарного диабета [Fifth Int. Cont. Inflamm. Res. , Assoc. 121 (Abctract), (1990)], пролиферации клеток гладкой мышцы и интимального утолщения после васкулярной травмы [Morris, R.J Heart Zung Transplant. П (часть 2): 197 (1992)].

Показано, что моно- и диацилированные производные рапамицина (этерифицированные в положениях 28 и 43), полезны в качестве противогрибковых средств (патент США 4.316.885) и используются для изготовления водорастворимых пролекарств рапамицина (патент США 4.650.803).

Недавно была изменена условная нумерация для рапамицина, поэтому согласно номенклатуре Chemical Abstract описанные выше сложноэфирные группы должны соответствовать положениям 31- и 42-. Патент США 5.118.678 раскрывает карбаматы рапамицина, которые полезны в качестве иммуносупрессивных, противовоспалительных, противогрибковых и противоопухолевых средств. Патент США 5.100.883 раскрывает фторированные сложные эфиры рапамицина. Патент США 5.118.677 раскрывает амидоэфиры (сложные) рапамицина. Патент США 5.130.307 раскрывает сложные аминоэфиры рапамицина. Патент США 5.117.203 раскрывает сульфонаты и сульфаматы рапамицина. Патент США 5.194.447 описывает сульфонилкарбаматы рапамицина.

Данное изобретение касается C-22 замещенных рапамицин производных, которые проявляют иммуносупрессивную и/или противогрибковую и/или противоопухолевую активность in vivo и/или ингибируют тимоцитпролиферацию in vitro. Кроме того, эти соединения полезны для лечения Candida albicans инфекций, воспалительных заболеваний и аутоаллергической болезни отторжения трансплантата, включая волчанку, ревматоидный артрит, сахарный диабет, множественный склероз и т.д.

Более конкретно, данное изобретение касается производных рапамицина, стабилизированных замещением в C-22 положении, и всех их фармацевтически приемлемых солей. Такие производные имеют структуру или R¹ обозначает C₁-C₆ алкил, C₂-C₇ ацил, C₁-C₆ алкилтио, C₇-C₁₆ арилалкил, C₆-C₁₀ арилтио, C₇-C₁₆ арилалкилтио, циано, C₁-C₆ фторалкил или C₆-C₁₀ арил необязательно замещенный одним или более галогенами, C₁-C₆ алкокси, гидрокси, C₂-C₇ алканоил или циано, и R², R³ и R⁴ каждый независимо представляют: а) водород, или b) SiEt₃, или в которой R⁵ обозначает водород, алкил из 1-6 углеродных атомов, аминоалкил из 1-4 углеродных атомов, аралкил из 7-10 углеродных атомов, -(CH₂)_dCO₂R⁸, -(CH₂)_eNR⁹CO₂R¹⁰, карбамилалкил из 2-3 углеродных атомов, гидроксиалкил из 1-4 углеродных атомов, гуанилалкил из 2-4 углеродных атомов, меркаптоалкил из 1-4 углеродных атомов, алкилтиоалкил из 2-6 углеродных атомов, индолилметил, гидроксифенилметил, имидазоилметил или фенил необязательно моно-, ди- или три- замещенный заместителем выбранным из: алкила из 1-6 углеродных атомов, алкокси из 1-6 углеродных атомов, гидрокси, циано, галоида, нитро, карбалкокси из 2-7 углеродных атомов, трифторметила амино или карбоновой кислоты.

R⁶ и R⁹ каждый независимо представляют водород, алкил из 1-6 углеродных атомов или аралкил из 7-10 углеродных атомов.

R⁷, R⁸ и R¹⁰ каждый независимо представляют алкил из 1-6 углеродных атомов, аралкил из 7-10 углеродных атомов, флуоренил- метил или фенил необязательно моно-, ди- или три- замещенный заместителем, выбранным из: алкила из 1-6 углеродных атомов, алкокси из 1-6 углеродных атомов, гидрокси, циано, галоида, нитро, карбалкокси из 2-7 углеродных атомов, трифторметила амино или карбоновой кислоты, a равно 0-4, b равно 0-4, c равно 1-2, d равно 0-4, e равно 0-4, где R⁵, R⁶, a и b - независимы в каждой из субъединиц: когда c = 2, или d) -CONH(CR¹¹R¹²)_f - X где R¹¹ и R¹² каждый независимо представляют водород, алкил из 1-6 углеродных атомов, аралкил из 7-10 углеродных атомов, циклоалкил из 3-8 углеродных атомов, галоген или трифторметил, X представляет водород, низший алкил из 1-6 углеродных атомов, циклоалкил из 3-8 углеродных атомов, трифторметил, нитро, алкокси из 1-6 углеродных атомов, карбоалкокси из 2-7 углеродных атомов, аралкил из 7-10 углеродных атомов, галоид, диалкиламино из 1-6 углеродных атомов на алкил группу, тиоалкил из 1-6 углеродных атомов или Y, Y обозначает фенил группу, которая может быть необязательно моно-, ди- или три- замещенной группой, выбранной из: алкила из 1-6 углеродных атомов, аралкила из 7-10 углеродных атомов, алкокси из 1-6 углеродных атомов, циано, галоида нитро, карбалкокси из 2-7 углеродных атомов, трифторметила, диалкиламино из 1-6 углеродных атомов в алкильной группе, алкилтио из 1-6 углеродных атомов, SO₃H, PO₃H или CO₂H, f = 0-5, при условии, что R², R³ и R⁴ не все обозначают водород и когда f = 0, X представляет низший алкил из 1-6 углеродных атомов, циклоалкил из 3-8 углеродных атомов, аралкил из 7-10 углеродных атомов или Y, или где R¹³ обозначает моно-, ди-, поли- или перфторированную алкил группу из 1-10 углеродных атомов, при условии, что R², R³ и R⁴ не все являются водородом, алкил из 1-10 углеродных атомов или арил, в котором арил группа необязательно может быть моно-, ди- или три- замещенной группой, выбранной из: алкила из 1-6 углеродных атомов, арилалкила из 7-10 углеродных атомов, алкокси из 1-6 углеродных атомов, циано, галоида, нитро, карбалкокси из 2-7 углеродных атомов, трифторметил, амино, диалкиламино из 1-6 углеродных атомов в алкильной группе, алкилтио из 1-6 углеродных атомов, - SO₃H, PO₂H и CO₂H, или где X обозначает -(CH₂)_g- или -Ar.

R¹⁴ и R¹⁵ каждый независимо обозначают водород, алкил из 1-12 углеродных атомов, -(CH₂)_h-Ar, (CH₂)_i -NR¹⁶R¹⁷ или -(CH₂)_i -N+R¹⁶R¹⁷R¹⁸ Y-, R¹⁶ и R¹⁷ каждый независимо обозначают водород, алкил из 1-12 углеродных атомов или -(CH₂)_h -Ar, Ar является необязательно моно- или ди- замещенным группой, выбранной из в которых необязательные заместители выбирают из группы, содержащей алкил из 1-6 углеродных атомов, аралкил из 7-10 углеродных атомов, алкокси из 1-6 углеродных атомов, циано, галоид, нитро, карбалкокси из 2-7 углеродных атомов или перфторалкил из 1-6 углеродных атомов, R¹⁸ обозначает алкил из 1-6 углеродных атомов, Y обозначает галид, сульфат, фосфат или п-толуолсульфонат анион, g = 1-6, h = 1-6, i = 1 - 6 или g) -CONHSO₂-Ar где Ar обозначает фенил, нафтил, пиридил, хинолил, изохинолил, хиноксалил, тиенил, тионафтил, фурил, бензофурил, бензодиоксил, бензоксазолил, бензоизоксазолил или бензодиоксолил; где Ar группа может быть необязательно моно-, ди- или три- замещенной группой, выбранной из: алкила из 1-6 углеродных атомов, арилалкила из 7-10 углеродных атомов, алкокси из 1-6 углеродных атомов, циано, галоида, нитро, карбалкокси из 2-7 углеродных атомов, трифторметила, амино, диалкиламино из 1-6 углеродных атомов на алкил группу, алкилтио из 1-6 углеродных атомов, - SO₃H, -PO₃H или CO₂H, при условии, что R², R³ и R⁴ не все обозначают водород, или его фармацевтически приемлемая соль, когда Ar группа содержит основной азот или когда Ar группа замещена диалкиламино из 1-6 углеродных атомов на алкил группу, - SO₃H, -PO₃H или CO₂H, h) -SO₂R¹⁹ где R¹⁹ - алкил, алкенил или алкинил, содержащий 1-6 углеродных атомов, или ароматический радикал, выбранный из группы, содержащей фенил или нафтил, или гетероциклический радикал, выбранный из группы, содержащей тиофенил или хинолил или NHCO₂R²⁰, в котором R²⁰ представляет низший алкил, содержащий от 1 до 6 углеродных атомов, где R²¹ и R²² каждый представляют водород или алкил из 1-3 углеродных атомов или R²¹ и R²² вместе с азотом, к которому они присоединены, образуют насыщенный гетероцикл, имеющий 4-5 углеродных атомов, и j = 1-3, или R² и R³, взятые вместе также представляют бирадикал формулы в которой R²⁴ обозначает водород, алкил из 1-6 углеродных атомов, арилалкил из 7-10 углеродных атомов, (CH₂)_pNR²⁵R²⁶, аминоалкил из 1-4 углеродных атомов, гидроксиалкил из 1-4 углеродных атомов, гуанилалкил из 2-4 углеродных атомов, меркаптоалкил из 1-4 углеродных атомов, алкилтиоалкил из 2-6 углеродных атомов, индолметил, гидроксифенилметил, имидазолилметил или фенил, который необязательно моно-, ди- или три- замещен заместителем, выбранным из: алкила из 1-6 углеродных атомов, алкокси из 1-6 углеродных атомов, гидрокси, циано, галоида, нитро, карбалкокси из 2-7 углеродных атомов, трифторметила, амино или карбоновой кислоты, R²⁵ обозначает водород, алкил из 1-6 углеродных атомов или аралкил из 7-10 углеродных атомов, R²³ и R²⁶ каждый независимо обозначают водород, формил, алканоил из 2-7 углеродных атомов, арилалканоил из 8-11 углеродных атомов, арилоил или CO₂R²⁷, R²⁷ обозначает алкил из 1-6 углеродных атомов, арилалкил из 7-10 углеродных атомов, аллил, флуоренилметил, или фенил, который необязательно моно-, ди- или три- замещен заместителем, выбранным из: алкила из 1-6 углеродных атомов, алкокси из 1-6 углеродных атомов, гидрокси, циано, галоида, нитро, карбалкокси из 2-7 углеродных атомов, трифторметила, амино или карбоновой кислоты, k равно 0-4, l равно 0-4, m равно 0-1, n равно 0-4, о равно 0-4 и p равно 0-4 или их фармацевтически приемлемая соль, или их пролиновый аналог, или фармацевтически приемлемая соль этого пролинового аналога.

Из заместителей, перечисленных выше, для R¹ более предпочтительны C₁-C₆ низшие алкильные группы. Из них наиболее желательны метил и этил заместители. Специалисту в соответствующей технике должно быть ясно, что R¹ заместители, перечисленные выше, могут быть линейными или разветвленными и могут включать заместители с дополнительными замещениями. Заместители этих R¹ групп могут включать, но не ограничиваются, группами: гидрокси, кето, циано и галоид. В случае сложных аминоэфиров, описанных выше в разделе с), предпочтительными являются те соединения, в которых a = 0, d = 0, и C = 1; а = 0, b = 0, и c = 2; b = 0, и R⁵ обозначает -(CH₂)_d CO₂R⁷; a = 0, b = 0 и R⁵ обозначает -(CH₂)_e NR⁹CO₂R¹⁰; a = 0, b = 0 и R⁵ обозначает водород. Из C₁-C₆ фторалкил соединений, перечисленных для R¹, наиболее предпочтительными заместителями являются трифторметил и трифторэтил.

В рамках данного описания термин "низший алкил", когда он используется отдельно или в комбинации, относится к радикалам, имеющим 1-6 углеродных атомов в углеродной цепи. Термин "ацил" относится к заместителям общей структуры где R обозначает углеводород из 1-6 углеродных атомов, например, ацетил или пропионил.

Под термином "арил", используемым здесь для обозначения группы или части группы, таким как арилалкил или арилокси, подразумевается (i) любой одновалентный карбоциклический радикал, обладающий ароматическим характером и включающий группы, содержащие от 6 до 10 углеродных атомов, такие как фенил или нафтил и (ii) гетероциклические группы, обладающие ароматическим характером с 5-10 атомами в цикл и одним или более (например, 2 или 3) гетероатомами, выбранными из кислорода, азота и серы. Примерами последних являются фурил, тиенил, пирролил, пиридинил, пиримидинил, хинолил, бензимидазолил, тиазолил и имидазолил. Эти группы могут необязательно быть замещены, под чем подразумевается необязательное замещение одним или более заместителями. Эти заместители могут быть обычно используемыми в фармацевтической химии, такими как галоген (например, Cl, Br, F), C₁-C₆ алкил, C₁-C₆ алкокси, галоид (C₁-C₆)-алкил (например, CF₃, CF₃CH₂-) или галоид (C₁-C₆) алкокси (например, CHF₂О, CF₃CH₂O-), NO₂, NH₂, CN, C₁-C₆ алкиламино, ди(C₁-C₆)алкил)амино, карбокси, (C₁-C₆ алкокси) карбонил, ацил (например (C₁-C₆ алкил) карбонил, арилкарбонил), ациламино, например, (C₁-C₆ алкил) CONH, арил (например, фенил) или амино (C₁-C₆)алкил.

Термин "арилалкил" относится к ароматическим заместителям, имеющим приблизительно от 7 до 16 углеродных атомов, с единичной валентностью, локализованной в боковой цепи. Примеры таких арилалкил заместителей включают бензил, толил, бензетил, фенетил и стирил группы. Термины "алкилтио", "арилтио" и "арилалкилтио" относятся к заместителям, имеющим структуру -SR, где R относится соответственно к только что упомянутым "низший алкил", "арил" и "арилалкил" группам. Термин "галоид" относится к фтору, хлору, брому или иоду.

Фармацевтически приемлемые соли этих соединений, которые содержат основные функциональные группы, такие как амино группа, могут быть получены из неорганических катионов, таких как натрий, калий и тому подобных и органических кислот, таких как уксусная, молочная, лимонная, винная, янтарная, малеиновая, малоновая, глюконовая и тому подобные.

Такие сложные аминоэфиры могут быть получены ацилированием соединения формулы 1a или 1b, приведенной выше, где один или более R^2-4 представляет водород, ацилирующим агентом, имеющим общую структуру: где X обозначает ОН в присутствии реагента конденсации, такого как дициклогексилкарбодиимид. Сложные аминоэфиры могут также быть получены использованием смешанного ангидрида вышеописанной карбоновой кислоты в качестве ацилирующего агента. Или же иначе, ацилирующим агентом может быть галоид ангидрид, в котором X является C1, Br или I. Группы ацилирующих соединений, используемые для получения соединений данного изобретения, выпускаются промышленностью или могут быть получены способами, описанными в литературе.

Из карбамилированных соединений, раскрытых выше в разделе d), предпочтительными членами являются те, в которых R³ представляет водород; те, в которых R² представляет водород, те, в которых R⁴ представляет водород; те, в которых f равно 0 и X представляет Y; те, в которых R³ - водород, f = 0 и X обозначает Y; и те, в которых f равно 0, X является Y и Y представляет фенил, 4-фторфенил, 2,4-дифторфенил, 4-нитрофенил или 4-метилфенил.

В качестве одного из примеров этих соединений 31-карбамилированные соединения данного изобретения могут быть получены защитой 42-спиртовой группы рапамицина защитной группой, такой как трет-бутилдиметилсилил группа, с последующим карбамилированием 31-положения изоцианатом общей структуры: OCN-C(R¹¹R¹²)_n X.

Удаление защитной группы дает 31-карбамилированные соединения. В случае трет-бутил диметилсилил защитной группы снятие защиты производится в умеренно кислой среде.

При использовании соединений с 31-карбамилированным положением и 42-положением со снятой защитой 42-положение может взаимодействовать с иным изоцианатом, чем тот, с которым взаимодействовала 31-спиртовая группа, что дает соединения, имеющие различные карбаматы в 31- и 42-положениях. Или же иначе, 42-карбамилированные соединения, полученные как описано выше, могут взаимодействовать с другим изоцианатом, что дает соединения, имеющие различные карбаматы в 31- и 42-положениях.

Изоцианаты, используемые для получения этих карбамилированных соединений, выпускаются промышленностью или могут быть получены по опубликованным методикам.

Фармацевтически приемлемыми солями этих карбамилированных рапамицин соединений являются соли, полученные из таких органических и неорганических кислот, как; уксусная, молочная, лимонная, винная, янтарная, малеиновая, малоновая, глюконовая, хлористоводородная, бромистоводородная, фосфорная, азотная, серная метансульфоновая и аналогичные известные приемлемые кислоты.

Предпочтительными фторированными сложными эфирами группы, описанной выше в разделе e), являются те, в которых R³ представляет водород; те, в которых R¹³ представляет моно-, ди-, поли- или пер-фторированную алкил группу из 1-6 углеродных атомов; и те, в которых R³ представляет водород и R¹³ обозначает моно-, ди-, поли- или пер-фторированную алкил группу из 1-6 углеродных атомов.

Когда другие ацилированные соединения из разделов c) - j) содержат арил или арилалкил радикалы, предпочтительно, чтобы арил радикал представлял фенил, нафтил, пиридил, хинолил, изохинолил, хиноксалил, тиенил, тионафтил, фурил, бензофурил, бензодиоксил, бензоксозолил, бензоизоксазолил или бензодиоксолил группу, которая может быть необязательно моно-, ди- или три- замещенной группой заместителей, выбранных из: алкил из 1-6 углеродных атомов, арилалкил из 7-10 углеродных атомов, алкокси из 1-6 углеродных атомов, циано, галоид, нитро, карбалкокси из 2-7 углеродных атомов, трифторметил, амино, диалкиламино из 1-6 углеродных атомов на алкил группу, алкилтио из 1-6 углеродных атомов, - SO₃H, -PO₃H и -CO₂H. Более предпочтительно, чтобы арил радикал представлял фенильную группу, необязательно моно-, ди- или три-замещенную группой, выбранной из: алкил из 1-6 углеродных атомов, арилалкил из 7-10 углеродных атомов, алкокси из 1-6 углеродных атомов, циано, галоид, нитро, карбалкокси из 2-7 углеродных атомов, трифторметил, амино, диалкиламино из 1-6 углеродных атомов на алкил группу, алкилтио из 1-6 углеродных атомов, - SO₃H, -PO₃H и -CO₂H.

Ацилированные соединения данного изобретения могут быть получены ацилированием рапамицина с помощью ацилирующего агента, имеющего общую структуру в которой X представляет OH, в присутствии реагента сочетания, такого как CMC (1-циклогексил-3-(2-морфолиноэтил) карбодиимид мето-пара-толуолсульфонат). Соединения данного изобретения могут также быть получены использованием ангидрида вышеописанной карбоновой кислоты в качестве ацилирующего агента. Вдобавок ацилирующим агентом может быть галоидангидрид, в котором X может быть Cl, Br или I. Или же иначе, такие реагенты как Реагент Ishikawa (N, N-диэтил-1,1-2,3,3,3-гексафторпропиламин), могут быть использованы в качестве ацилирующего агента для получения соединений данного изобретения.

Соединения данного изобретения, ацилированные в каждом из 27-, 31- и 42- положений, могут быть получены способами, описанными выше, путем увеличения таких переменных, как реакционное время, температура и количество ацилирующего агента.

Например, 31-ацилированные соединения данного изобретения могут быть получены защитой 27- и 42-спиртовых групп рапамицина защитными группами, такими как трет-бутил диметилсилил группа, в присутствии основания, такого как имидазол, с последующим ацилированием 31-положения ацилирующим агентом, имеющим вышеприведенную общую структуру. Удаление защитных групп дает 31-ацилированные соединения. В случае трет-бутилдиметилсилил защитной группы удаление защиты выполняется в условиях умеренной кислотности, таких как смесь водной уксусной кислоты и ТГФ.

При использовании 31-ацилированного положения и 42-положения со снятой защитой, 42-положение может взаимодействовать с заданным ацилирующим агентом, что дает соединения, имеющие различные ацил составляющие в 31- и 42-положениях. Аналогично, 42-ацил соединения, полученные как описано выше, могут взаимодействовать с ацилирующим агентом, имеющим различную структуру для введения различных ацильных групп в 31-положение. Ацилирующие агенты, используемые для получения соединений данного изобретения, выпускаются промышленностью или могут быть получены описанными в литературе способами.

Предпочтительными амидо эфирами рапамицина из описанных выше эфиров в разделе f) являются те, в которых X представляет -(CH₂)_g-; те, в которых X представляет -(CH₂)_g и R¹⁴ и R¹⁵ обозначают алкил из 1-6 углеродных атомов; и те, в которых X обозначает -(CH₂)-, R¹⁴ обозначает водород и R¹⁵ обозначает Ar обозначает -(CH₂)_h -Ar.

Фармацевтически приемлемые соли этих соединений могут быть получены, когда R¹⁴ или R¹⁵ представляют -(CH₂)_i -NR¹⁶R¹⁷ или когда Ar обозначает необязательно моно- или ди- замещенную пиридил или хинолил группу. Фармацевтически приемлемые соли являются производными таких органических или неорганических кислот, как уксусная, молочная, лимонная, винная, янтарная, малеиновая, малоновая, глюконовая, хлористоводородная, бромистоводородная, фосфорная, азотная серная, метансульфоновая и тому подобные.

Получение амидо эфиров рапамицина приведено в патенте США N 5.118.677, который приводится здесь в качестве ссылки.

Фармацевтически приемлемыми солями сульфонил карбамат рапамициновых соединений, описанных выше в разделе g), являются соли, полученные из таких неорганических катионов, как натрий, калий и тому подобные; органических оснований, таких как моно-, ди- и триалкил амины из 1-6 углеродных атомов на алкил группу, и моно-, ди- и тригидроксиалкил амины из 1-6 углеродных атомов на алкил группу и тому подобные, и органических и неорганических кислот, таких как уксусная, молочная, лимонная, винная, янтарная, малеиновая, малоновая, глюконовая, хлористоводородная, бромистоводородная, фосфорная, азотная, серная, метансульфоновая и подобные известные приемлемые кислоты.

Из этих соединений предпочтительными являются те, в которых Ar является необязательно моно-, ди- или три- замещенным фенилом. Когда Ar замещен арилалкилом из 7-10 углеродных атомов, предпочтительно, чтобы эта арил составляющая арилалкильного радикала являлась фенильной группой.

Соединения данного изобретения, карбамилированные по одному из 27-, 31- или 42-спиртовых положений или по всем этим положениям, могут быть получены взаимодействием рапамицина с изоцианатом, имеющим общую структуру O = C = N- SO₂-Ar, в нейтральной среде или в присутствии основания, такого как пиридин.

Карбамилированные соединения данного изобретения могут быть получены путем защиты спиртовых групп, которые не должны взаимодействовать, защитной группой, такой как трет-бутил диметилсилил группа, с последующим карбамилированием незащищенного положения изоцианатом, имеющим вышеуказанную общую структуру. Удаление защитной группы дает заданные карбамилированные соединения. В случае трет-бутил диметилсилил защитной группы снятие защиты может выполняться в умеренно кислой среде.

Имея одно или два положения карбамилированных и другое положение со снятой защитой, можно осуществить взаимодействие незащищенного положения с изоцианатом, отличным от того, который взаимодействовал с первой спиртовой группой, что дает соединения, имеющие различные карбаматы в рассматриваемых позициях.

Изоцианаты, используемые для получения соединений данного изобретения, выпускаются промышленностью или могут быть получены способами, раскрытыми в литературе. March J. [Advanced Organic Chemistry, 3d ed., p.p. 391, 452 и 479 (1985)] раскрывает общий способ получения арилсульфонил изоцианатов, которые могут быть использованы, когда отсутствует промышленный арилсульфонилизоцианат. Следующая схема иллюстрирует один способ, исходящий из арил-соединения. Другие способы получения арилсульфонил изоцианатов известны по литературе: Рапамицин 27-, 31- и 42-сульфонаты данного изобретения, приведенные выше в разделе h), могут быть получены по стандартным литературным методикам, как описано в приведенной ниже общей реакционной схеме: Образование сульфоната между спиртом и сульфонил галогенидом описано [Jerry March, Advanced Organic Chemistry, 3rd edition, punlished in 1985, p. 444] . Специфические условия реакции, используемые в данном изобретении, разработаны S. Rakhit of Ayerst Laboratories и приведены в патенте США N 4.316.885 (Февр. 23, 1982).

27-, 31- и 42-(N-карбоалкокси)сульфаматы данного изобретения могут также быть получены по реакции рапамицина с внутренней солью гидроокиси алкил (карбоксисульфамоил)триэтиламмония (Соли Бургесса, см. J.M. Atkins Jr. and E. M. Burgess, J.Am. Chem. Soc., 90, 4744, 1968, Е.M. Burgess, H.R. Penton Ir. and E.A. Faylor, J. Orh. Chem. 38, 26, 1978).

где R¹ и R² - как определено выше.

Амино алкил сложноэфирные соединения раздела i), приведенного выше, могут быть получены ацилированием заданных положений(ия) подходящим ацилирующим агентом, как описано в патенте США N 4.650.803, который включен в описание в качестве ссылки, в то время как оставшиеся из положений 27-, 31- или 42- защищены такой группой, как триэтилсилил.

Сложные аминодиэфиры, включающие соединения данного изобретения, приведенные выше в разделе i), могут быть получены ацилированием рапамицина ацилирующим агентом, имеющим общую структуру в которой R²³, R²⁴, k, l, m, n и o - как описано выше, и X обозначает ОН, в присутствии агента сочетания (конденсации), такого как дициклогексилкарбодиимид или водорастворимый карбодиимид. Соединения данного изобретения могут также быть получены применением смешанного ангидрида или активированного сложного эфира вышеуказанной карбоновой кислоты (такого как эфир с п-нитрофенолом, пентахлор или пентафторфенолом, 2,4,5-нитрофенолом, N-гидроксисукцинимидом, N-гидроксифтальимидом или 1-гидрокси-1Н-бензотриазолом) в качестве ацилирующих агентов. Или же иначе, ацилирующими агентами могут быть галоидангидриды, в которых X может быть Cl, Br или F (за исключением, когда R²³ или R²⁷ = т-Bu), азид или имидазол производное названной кислоты.

Ацилирующие агенты, используемые для получения соединений данного изобретения, выпускаются промышленностью или могут быть получены описанными в литературе способами. Аминокислоты, используемые для получения соединений данного изобретения, могут быть либо R, либо S конфигурации, и оптически активный углерод сохраняет свою конфигурацию при превращении в соединение данного изобретения. В случаях, когда m равно 1, ацилирующие агенты могут обычно быть получены конденсацией двух аминокислот с образованием дипептида, который превращают в приведенный выше ацилирующий агент по стандартным химическим методикам.

Из этих аминодиэфирных соединений, предпочтительны те, в которых W равно 0, и те, в которых m равно 0 и l равно 1-2. Одним из наиболее предпочтительных сложных аминодиэфиров настоящего изобретения является C-22-метил-42-диметилглицин рапамицин. Данные по синтезу этого соединения приведены ниже в примере 7.

Каждому специалисту в соответствующей области техники должно быть ясно, что C-22 замещенные рапамицин производные данного изобретения могут включать те, в которых каждый из R², R³ и R⁴ представляют водород или в котором один или два из R², R³ и R⁴ представляют водород, а другая(ие) группы являются перечисленными выше в разделах b) - j). Данное изобретение включает также те соединения C-22 замещенного рапамицина, в которых каждый из R², R³ и R⁴ представляет группы, выбранные из разделов a) - j), приведенных выше, включая производные, в которых R², R³, R⁴ не являются выбранными из одних и тех же разделов, представленных выше в b) - j). Должно быть также понятно, что настоящее изобретение включает все фармацевтически приемлемые соли, аналоги, рацематы и индивидуальные энантиомеры таких соединений.

C-22 замещенные соединения данного изобретения могут быть получены сначала защитой 31- и 42- гидроксил положений и затем выполнением замещения по положению C-22. Пример такого замещения демонстрируется C-22 метилированием по схеме 1, приведенной ниже: В схеме 1, которая иллюстрирует синтез альфа-метил соединений, положения 31- и 42- гидроксильных групп сначала защищают с помощью подходящей защитной группы, такой как три-этилсилил (TES) защитная группа. Затем бис-TES рапамицин обрабатывают литий диизопропил амидом (LDA) с последующим алкилированием метилтрифторметансульфонатом (MeOTf). В соответствии с этой схемой ацилирование протекает исключительно по C-22 положению. TES защитные группы могут затем быть удалены обработкой HF-Pyr-комплексом. 31- и 42- гидроксил положения могут затем быть замещены, как описано выше. Или же иначе, C-22 замещенное, TES - защищенное соединение может быть восстановлено L - селектридом (L - selectride) с получением C-27-гидрокси-C-22-метил защищенного производного. После чего могут быть введены функциональные группы по 31 и 42 положениям, как описано ранее.

Аналогичным образом могут быть приготовлены другие продукты алкилирования. Приведенная ниже схема 2 иллюстрирует C-22 этилирование рапамицина Каждому специалисту в соответствующей области техники должно быть понятно, что данные соединения легко могут быть приготовлены. Например, каждый специалист может приготовить C-42-ацилированные производные, такие как C-42-глицин-C-22-метил-рапамицин. Аналогичным образом могут быть введены функциональные группы по C-27 и C-31 положениям. Кроме того, поскольку пролиновые аналоги рапамицина известны, можно приготовить соответствующие алкилированные пролиновые аналоги, как иллюстрируется ниже схемой 3: где заданная алкильная группа иллюстрируется замещенной метил группой. Могут быть также получены C-42 и C-31 функциональные производные C-22 алкилированного пролинового аналога. Аналогично, может быть получен C-27 восстановленный пролиновый аналог, по способу приведенному в схеме 1. В это положение может также быть введена функциональная группа, как описано.

Любому специалисту в соответствующей технике совершенно очевидно, что алкилирования по C-22 положению могут быть выполнены хорошо известными в литературе способами.

Такие алкилирования должны включать способы, использующие альдегиды типа или хлорангидриды типа или алкилгалогениды типа где X означает C1, бром или иод. В каждой из формул альдегида, хлорангидрида и алкилгалогенида R обозначает часть C-22 замещенного R¹ заместителя указанного выше.

Понятно также, что алкилирование по положению C-22 может выполняться с использованием сульфонилхлорида, RSCl, такого, в котором R = алкил или фенил, или тозил цианида (TsCN). Понятно также, что предполагаемое тиоалкилирование может выполняться аналогичными способами. Примером может служить защита гидроксильной группы TES, обработка LDA (лаурилдиэтаноламидом) и тиоалкилирование диметилсульфидом или фенил-S-бромидом.

Иммуносупрессивные активности представленных соединений данного изобретения оценивают in vitro стандартными фармакологическими испытаниями для оценки пролиферации лимфацитов (LAF) и in vivo стандартными фармакологическими испытаниями для оценки времени выживания отщипнутого полнослойного кожного лоскута. Для in vitro измерения иммуносупрессивных воздействий представленных соединений используют методику комитогениндуцируемой тимоцит пролиферации (LAF). Кратко: клетки вилочковой железы нормального BALB/c мыши культивируют в течение 72 часов с РНА (ФГА) и IL-1 и вызывают пульсацию тритированным тимидином в течение шести часов. Клетки культивируют в присутствии или отсутствии различных концентраций рапамицина, циклоспорина A или испытуемого соединения. Собирают выращенные в культуре клетки и определяют содержащуюся в них радиоактивность. Ингибирование лимфопролиферации оценивают в процентах как изменение в счете импульсов в минуту по отношению к необработанным лекарственными средствами контролям. Результаты выражают в IC₅₀.

Представленные соединения изобретения оценивают также in vivo испытанием, предназначенным для определения времени выживания отщипнутого полнослойного кожного лоскута от мужских DBA/2 доноров, трансплантированного мужским BALB/c реципиентам. Способ адаптирован из Billingham R.E. and Medawar P.B. J. Exp. Biol. , 28:385-402, (1951). Кратко, отщипнутый полнослойный кожный лоскут у донора пересаживают на спину реципиента, как гомотрансплантант и аутотрансплантант используют в качестве контроля в той же области. Реципиенты обрабатываются внутрибрюшинно либо различными концентрациями циклоспорина A как контроля для испытания, либо испытуемых соединений. Необработанные реципиенты служат как контроль отторжения. Трансплантат подвергают ежедневно дозиметрическому контролю и записывают результаты до тех пор, пока трансплантат не станет сухим и не образуется почерневшая корка. Это считают днем отторжения. Среднее время жизни трансплантата (число дней стандартное отклонение (S.D.)) группы, обработанной лекарственным препаратом, сравнивают с группой контроля.

Кроме того, исследуют стабильность представленных соединений путем ВДЖХ в 0,1 М фосфатном буфере (pH 7.4, 37^oC).

Результаты каждого из этих испытаний (LAF, полнослойного кожного лоскута и стабильности) приведены в таблице.

Результаты этих стандартных фармакологических испытаний иллюстрируют как in vivo, так и in vitro иммуносупрессивную активность соединений настоящего изобретения. Результаты LAF испытания показывают, что стабилизированные рапамицин производные индуцируют супрессию T-клеточной пролиферации. Поскольку трансплантированные отщипнутые полнослойные кожные лоскуты обычно отторгаются на 6-7 дни без использования иммуносупрессивного агента, увеличенное время жизни, наблюдаемое при использовании 22-метил рапамицина дополнительно демонстрирует применимость соединений данного изобретения для иммуносупресcии.

Поскольку соединения данного изобретения структурно аналогичны рапамицину и имеют аналогичный рапамицину профиль активности, они также должны обладать против