Средство для регулирования эндогенной продукции цитокинов и гемопоэтических факторов (варианты) и способ его использования

Средство для регулирования эндогенной продукции цитокинов и гемопоэтических факторов (варианты) и способ его использования

Реферат

 

Изобретение относится к медицине, в частности к фармакологии и терапии. Способ модуляции и/или воспроизведения эффектов эндогенной продукции цитокинов и гемопоэтических факторов и/или индукции механизмов, апоптоза состоит во введении в организм млекопитающих, нуждающихся в стимуляции цитокинов или гемопоэтических факторов, или их обоих, эффективного количества окисленного глутатиона, его фармацевтически приемлемого производного, на период времени, достаточный для модуляции эндогенной продукции цитокинов и гемопоэтических факторов до достижения терапевтического эффекта, при котором указанный окисленный глутатион, или/и его фармацевтически приемлемые соли, или/и его фармацевтически приемлемые производные вводятся парентерально или локально. Согласно изобретению, окисленный глутатион, или/и его фармацевтически приемлемые соли, или/и его фармацевтически приемлемые производные вводятся совместно с пролонгатором полужизни указанного окисленного глутатиона, или/и его фармацевтически приемлемых солей, или/и его фармацевтически приемлемых производных. Технический результат: расширение спектра средств для регулирования эндогенной продукции цитокинов и гемопоэтических факторов. 6 с. и 50 з.п. ф-лы, 7 ил., 48 табл.

Изобретение относится к медицине, в частности к фармакологии и терапии, и может быть использовано для профилактики и лечения различных заболеваний посредством регулирования эндогенной продукции цитокинов и гемопоэтических факторов и индукции механизмов апоптоза в вирус- и/или опухоле-трансформированных клетках.

Уровень техники Известно, что ряд гуморальных факторов, эндогенно вырабатываемых в организме млекопитающих, - цитокинов и гемопоэтических факторов - обладают высокой биологической активностью и способны оказывать существенный лечебный эффект при разнообразных заболеваниях у человека [1], [2]. Многие из этих факторов оценивались в рамках клинических испытаний и сегодня используются как лекарственные препараты.

Так в онкологической практике широко изучается применение следующих цитокинов и гематопоэтических факторов: интерлейкина 2 (IL-2) [3], [4], фактора некроза опухолей (TNF- ) [5], эритропоэтина, макрофагально-гранулоцитарного и гранулоцитарного колоние-стимулирующих факторов, (GM-CSF и G-CSF), соответственно [6] , [7]. Не менее интенсивно изучается использование цитокинов и гемопоэтических факторов для лечения инфекционных заболеваний: интерфероны (IFN - и IFN - ) [8], [9], [10], колоние-стимулирующие факторы [II], [12] и другие [13]. Колоние-стимулирующие факторы и эритропоэтин активно применяются в гематологии [14], [15].

Следует отметить, что лечебное применение этих веществ, вводимых экзогенно, имеет ограничения, связанные с отсутствием приемлемых лекарственных форм или их высокой стоимостью, коротким сроком полу-жизни веществ данного класса в биологических средах, трудностями в выборе доз, а также разнообразными токсическими и аллергическими эффектами [16], [17], поскольку рекомбинантные продукты достаточно иммуногенны для человеческого организма Известно, что уже оценивается ряд соединений, модулирующих эндогенную продукцию цитокинов и гемопоэтических факторов в экспериментальных и клинических условиях. Широко известно о применении, в том числе успешном, микробных продуктов для лечения рака, что связано со стимуляцией эндогенной продукции фактора некроза опухолей [18]. Продукты, способные вызывать одновременную продукцию различных цитокинов и гемопоэтических факторов, получили название мульти-цитокиновых индукторов (multi-cytokine inducer). К средствам подобного действия относят препарат убитых стрептококков, нокардий (Nocardia opaca) и другие бактериальные продукты [19], [20], [21]. Однако, практически все вещества, обладающие подобной способностью, это или убитые микроорганизмы, или микробные продукты, или соединения с неустановленной или переменной структурой, что существенно ограничивает возможности их медицинского применения в лечебных целях, а в ряде случаев делает такое применение невозможным.

Окисленный глутатион (также известный как глутатион дисульфид, GSSG) далее в данной заявке будет обозначаться как GSSG.

GSSG известен как димер трипептида глутатиона (-глутамил-цистеинил-глицина), в котором две молекулы трипептида с вышеозначенной структурой соединены друг с другом ковалентной дисульфидной связью между цистеиновыми остатками. Таким образом, как трипептид глутатион (глутатион, глутатион восстановленный, GSH; далее - GSH), так и его димер - GSSG - являются природными метаболитами и присутствуют в клетках и биологических жидкостях животных, организмов.

Известны свойства GSH, как одного из важнейших участников метаболизма аминокислот и фактора обеспечения внутриклеточного гомеостаза [22], [23]. Большое значение имеют восстановительные свойства GSH и его функция донора восстановительных эквивалентов, которую молекула GSH способна выполнять благодаря наличию сульфгидрильной группы цистеинового остатка. Этим качеством GSH определяется и его роль как принципиального элемента одной из важнейших внутриклеточных антиоксидантных систем, включающей собственно GSH и два основных фермента его метаболизма: глутатион пероксидазу и глутатион редуктазу [24] , [25] . Постоянное функционирование данной системы необходимо для инактивации или восстановления как эндогенно образующихся оксидантов, так и активных метаболитов веществ, попадающих в организм извне [26], [27].

Антиоксидантные свойства восстановленного глутатиона (GSH) являются именно тем, что делает эту молекулу особенно привлекательной с точки зрения поиска преимуществ ее медицинского использования и создания потенциальных лекарственных препаратов и методов лечения. При этом, GSH и другие фармацевтически приемлемые вещества, способные обеспечить поддержание повышенного содержания GSH в клетках и биологических средах, рассматриваются как многообещающие соединения для создания фармацевтических веществ при проведении антиоксидантной терапии, то есть, для поддержания низкого содержания прооксидантных факторов и перекисных продуктов.

Следует также отметить, что именно антиоксидантные свойства GSH используются при создании фармацевтических композиций для достижения терапевтических эффектов, описанных в подавляющем большинстве известных публикаций в том числе и патентов, предметом которых является глутатионовая (тиоловая) система.

Известно также участие GSH в обеспечении реакций детоксикации, протекающих с участием группы ферментов, объединяемых названием глутатион S-трансферазы [28]. Данные ферменты способны конъюгировать молекулу GSH с самыми разнообразными ксенобиотиками, формируя связь между ними и глутатионом через тиоловую группу цистеинового остатка трипептида. Последующая деградация конъюгата осуществляется ферментами - глутамильного цикла и может иметь значительные вариации, зависящие от природы ксенобиотика.

Известно изобретение [29], согласно которому окисленный глутатион (GSSG) применяют в качестве одного из компонентов композиции для лечения расстройств иммунитета у млекопитающих. Указанная композиция состоит из окисленного и неокисленного глутатиона и других фармацевтически активных компонентов, которые способны увеличивать уровень восстановленного глутатиона (GSH) в организме. Более того, присутствие окисленного глутатиона в указанной композиции не является существенным для достижения указанного эффекта, поскольку, как показано в [29], окисленный глутатион может быть заменен восстановленным глутатионом или любым иным активным соединением, способным увеличить уровень восстановленного глутатиона (GSH) в организме. Эту композицию используют в качестве пищевой добавки и дополнительного питания для медицинского использования у больных [29]. Следует отметить, что в известном изобретении [29] GSSG вводится через желудочно-кишечный тракт. Однако, будучи пептидной субстанцией, большая часть перорально вводимого GSSG расщепляется в желудочно-кишечном тракте, а оставшаяся часть восстанавливается в клетках кишечника и печени до GSH, который может частично поступать в кровоток только в виде восстановленного глутатиона. Таким образом, основной целью перорального применения GSSG согласно указанному изобретению является увеличение уровня восстановленного глутатиона (GSH) в крови и тканях.

Известно, что повышение эндогенного уровня GSH в лечебных целях предлагается для стимуляции иммунитета [30], при лечении интоксикаций, отравлений, сахарного диабета, сердечно-сосудистых, инфекционных, а также других заболеваний [31], [32], [33].

Известно также использование экзогенного GSH или его прямых (-глутамил-цистеин, n-ацетил-цистеин, n-ацетил-цистеинил-глицин) или непрямых (2-оксотиазолидин-4-карбоксилат) биохимических предшественников, или их солей и эфиров в качестве лекарственных средств или пищевых добавок при лечении различных заболеваний [34], [35], [36], [37], [38].

Также известно о полезности применения GSH как хемопротекторного агента, что при химиотерапии рака предотвращало нейротоксичность [39], а также о комбинации с противоопухолевыми препаратами для повышения эффективности их действия [40].

Таким образом, известный нам предшествующий уровень техники в данной области свидетельствует, что применение биологически-активных веществ тиолового ряда направлено на обеспечение уровня повышенного содержания восстановленного глутатиона (GSH), чем, по-нашему мнению, достигается цель антиоксидантного и некоторого цитопротекторного эффектов.

Известно изобретение [41], в котором окисленный глутатион (GSSG) в составе сложных композиций (цистин, N-метил-D-глюкозамин, бутил-гидроперекись) вводится парентерально с одновременным применением микроволнового электромагнитного излучения в диапазоне 432-436 МГц в целях повышения количества T-лимфоцитов у иммунодефицитных больных, в частности больных ВИЧ- инфекцией. Эффективное повышение количества T-лимфоцитов (являющееся в сравнении с настоящей заявкой единственным показателем, демонстрирующим заявляемый эффект указанного изобретения) достигается только при одновременном воздействии указанных композиций и электромагнитного излучения.

Как уже упоминалось, использование GSH и GSSG, а также цистеина предлагается в лечебных целях для стимуляции иммунитета [30]. В данной публикации на сугубо экспериментальном материале (in vitro, культура клеток - лимфоциты) рассматривается влияние экзогенных тиолов: цистеина, GSH, GSSG на активность транскриптационного фактора NFkB, который и является объектом исследования. В настоящем изобретении, заявлена ранее неизвестная группа биологических, фармацевтических и терапевтических свойств окисленного глутатиона и его производных, а именно: мультицитокинактивирующее действие GSSG, воспроизведение им эффектов цитокинов и индукция механизмов апоптоза в трансформированных клетках. В отличие от упомянутого исследования (30), в заявляемом изобретении продемонстрированы ранее неизвестные свойства окисленного глутатиона (GSSG) на основе данных in vitro, in vivo и результатов клинических испытаний на людях. Данный уровень обоснований принципиально необходим, так как результаты, полученные в опытах in vitro (30), могут не только существенно отличаться от таковых в опытах in vivo, но даже быть противоположными. Более того, следует также подчеркнуть четкое различие между активными агентами, вызывающими биологические эффекты и функциональные изменения в биологических системах в случае вышеупомянутой публикации [30] и в соответствии с настоящим изобретением. В первом случае [30], то начало, которое вызывает биологические эффекты в биологических тест-системах - это цистеин, с использованием GSSG только в качестве носителя молекулы цистеина. Согласно настоящему изобретению цельная молекула GSSG заявляется в качестве активного вещества, фармакологического и терапевтического агента, а также - как молекулярная база для разработки семейства фармацевтически приемлемых производных (новые химические формулы или композиции и комбинации), обладающие благоприятным биолого-медицинским действием.

В настоящее время, по данным общедоступных источников информации, неизвестно о применении GSSG, как самостоятельного фармацевтического средства в виде моновещества, а также фармацевтически приемлемых производных окисленного глутатиона GSSG, в качестве модулятора эндогенной продукции цитокинов и гемопоэтических факторов, а также средств для воспроизведения эффектов цитокинов, и/или индуктора механизмов апоптоза в трансформированных клетках.

Краткое описание изобретения Согласно изобретению, заявляется применение окисленного глутатиона (GSSG), а также вещества лекарственные средства - с пролонгированным пребыванием GSSG в окисленной форме в биологических средах посредством получения его в форме лекарственных средств для достижения лечебных эффектов, на основе неизвестных ранее и выявленных нами биолого-фармацевтических свойств окисленного глутатиона: модулировать эндогенную продукцию цитокинов и гемопоэтических факторов; воспроизводить эффекты широкой группы цитокинов; осуществлять дифференцированное воздействие в отношении нормальных (регуляция метаболизма, пролиферация и дифференцировка) и трансформированных клеток (индукция апоптоза).

При этом, в зависимости от исходного биологического состояния пациента, в том числе от состояния его системы иммунитета: иммунодефицит, то есть гипореактивность; или иммуноаутоагрессия, то есть гиперреактивность; наличие опухоле- или вирусотрансформированных клеток, окисленный глутатион (GSSG), и/или его фармацевтически приемлемые производные, способны выступать, соответственно как модулятор эндогенной продукции цитокинов и/или как средство, воспроизводящее эффекты цитокинов; и/или как индуктор механизмов апоптоза.

Согласно настоящему изобретению заявляется группа фармацевтически приемлемых решений, которые будут эффективны для предотвращения восстановления GSSG до GSH и пролонгирования его существования в окисленной форме в биологических средах. Эти притязания настоящего изобретения подтверждаются биомедицинскими результатами, полученными в ходе широко масштабной и последовательной программы доклинических и клинических исследований.

В этой связи, с точки зрения достижения более стабильного и значимого лечебного эффекта, не сопровождающегося побочными явлениями, более предпочтительной является модуляция эндогенной продукции аутологичных цитокинов и гемопоэтических факторов непосредственно в организме пациента. Лечебный эффект, достигаемый при этом, естественен для организма и лишен всех недостатков, связанных с экзогенным введением цитокинов и гемопоэтических факторов.

В настоящем изобретении заявляется биолого-медицинская целесообразность безусловно отличающегося фармакологического - прооксидантного - воздействия, которое достигается посредством введения в организм стабилизированной формы окисленного глутатиона (GSSG) в качестве вещества, обладающего прооксидантным потенциалом и соответствующими благоприятными фармакологическими свойствами.

В основу заявляемого изобретения положена концептуальная модель создания фармацевтических композиций - лекарственных средств, содержащих в качестве действующего вещества производные окисленного глутатиона (GSSG) в виде: его солей: или композитных препаратов, включая комбинации GSSG с веществами, пролонгирующими или усиливающими действие окисленного глутатиона или производных GSSG в качестве новых композиций, то есть, новых формул (новых соединений), когда последние получают посредством создания ковалентной связи между GSSG и каким-то иным веществом.

Данные соединения и их лекарственные формы, полученные на основе фармацевтически приемлемых производных окисленного глутатиона (GSSG), заявляются как лекарственные средства, способные в терапевтических целях в зависимости от исходного биологического состояния субъекта, нуждающегося в этом, осуществлять регуляцию (модуляцию) эндогенной продукции цитокинов и гемопоэтических факторов, а также воспроизведение эффектов цитокинов, и/или дифференцированное воздействие в отношении нормальных (регуляция метаболизма, пролиферации и дифференцировки) и опухоле- и/или вирусо-трансформированных клеток (индукция апоптоза).

"Субъект, нуждающийся в этом" означает млекопитающее, например человека, домашних животных и скот, включая кошек, собак, крупный и мелкий рогатый скот, лошадей, имеющих одно или более проявление заболеваний, при которых стимуляция/модуляция эндогенной продукции цитокинов и гемопоэтических факторов, а также регуляция механизмов апоптоза целесообразна с позиций современных биомедицинских знаний.

Понятие "лекарственное средство", используемое в данной заявке, подразумевает использование любой лекарственной формы, содержащей различные фармацевтические производные GSSG, которые обладают терапевтическим эффектом при лечении онкологических, инфекционных, гематологических, иммунологических, нейродистрофических и других заболеваний.

Понятие "фармацевтически приемлемое производное в форме соли", используемое в данной заявке, подразумевает производное окисленного глутатиона (GSSG) в виде соли, при этом в данные формулы входят, например, катионы натрия или лития, соответственно - динатриевая или дилитиевая соль.

Понятие "фармацевтически приемлемая комбинация", используемое в данной заявке, подразумевает комбинацию (как сочетание в растворе) окисленного глутатиона (GSSG) с иными веществами, которые по отношению к окисленному глутатиону выполняют функции либо стабилизатора-пролонгатора, либо усилителя/модулятора эффектов окисленного глутатиона (GSSG). Например, фармацевтически приемлемая комбинация окисленного глутатиона с инозином, или фармацевтически приемлемая комбинация окисленного глутатиона с холином.

Понятие "фармацевтически приемлемая композиция" (дериват), используемое в данной заявке, подразумевает окисленный глутатион (GSSG), ковалентно связанный с фармацевтически приемлемым веществом из группы активных метаболитов или другим химическим соединением. Например, фармацевтически приемлемая композиция (дериват) - окисленный глутатион, ковалентно связанный с метионином, или окисленный глутатион, ковалентно связанный с цистеамином.

Под "онкологическими и инфекционными заболеваниями", "депрессией кроветворения и иммунитета различного происхождения" и "другими заболеваниями" понимаются любые онкологические или инфекционные заболевания, любые состояния, вызванные или сопровождающиеся угнетением красного или белого ростка кроветворения или депрессией количественных или функциональных показателей системы иммунитета, а также любые другие заболевания или патологические состояния, при которых модуляция эндогенной продукции цитокинов и гемопоэтических факторов, а также воспроизведение эффектов цитокинов, и/или дифференцированное воздействие в отношении нормальных (регуляция метаболизма, пролиферация и дифференцировка) и трансформированных клеток (индукция апоптоза) была бы целесообразна по соображениям, очевидным для специалиста в соответствующей области медицины.

В поисках приемлемого с точки зрения медицины и фармакологии индуктора эндогенной продукции цитокинов и гемопоэтических факторов, авторы заявляемого изобретения в ходе выполненных доклинических и клинико-экспериментальных исследований, обнаружили новые свойства известного ранее вещества - окисленного глутатиона (глутатион окисленный, глутатион дисульфид, далее - GSSG).

При парентеральном введении или действии на изолированные клетки GSSG способен модулировать эндогенную продукцию ряда цитокинов (TNF-, IFN- и IFN-, IL-1, IL-2, IL-6 и IL-10, эритропоэтина и GM-CSF) у млекопитающих (человека и животных) как в нормальных, так и в патологических условиях, а также индуцировать механизмы апоптоза в трансформированных клетках (тканях) в опытах in vitro и in vivo. Установленные авторами свойства GSSG определяют биолого-фармацевтические эффекты самого окисленного глутатиона (GSSG), а также получаемых на его основе фармацевтически приемлемых производных, в частности его солей, а значит, и лечебные эффекты лекарственных средств, в которых активным началом является GSSG и его соли.

Сущность заявляемого изобретения состоит в том, что в качестве действующего вещества (активной субстанции), обеспечивающей модуляцию эндогенной продукции цитокинов и гемопоэтических факторов, а также воспроизведение эффектов цитокинов, и/или индукцию апоптоза, у субъектов, нуждающихся в этом, предлагается использовать окисленный глутатион (GSSG) или его фармацевтически приемлемые производные, которые при парентеральном введении регулируют (модулируют) эндогенную продукцию ряда цитокинов и/или гемопоэтических факторов, чем достигается регуляция процессов метаболизма, пролиферации и дифференцировки нормальных клеток. При этом в опухоле- и/или вирусо-трансформированных клетках индуцируется механизм апоптоза.

Согласно заявляемому изобретению, авторы впервые показали и обосновали, что окисленный глутатион (GSSG) является мультицитокин-активирующим фактором, а также фактором воспроизведения эффектов цитокинов по отношению к нормальным иммунокомпетентным клеткам и индуктором механизмов апоптоза в трансформированных клетках.

Более того, авторы впервые обнаружили, что воздействие окисленного глутатиона (GSSG) на изолированные лимфоциты человека вызывает через 10 минут (пик наблюдается на 30 минуте) значимое возрастание уровня фосфорилирования по тирозину цитозольных белков лимфоцитов, что является интегративной характеристикой активности клеточных сигнал-передающих систем. Эти изменения вследствие действия GSSG (это также будет продемонстрировано в большей степени в примерах реализации изобретения благодаря действию композитных препаратов GSSG) вызывает экспрессию редокс-чувствительных генов, в первую очередь, иммунологически значимых генов, ответственных за синтез цитокинов и гемопоэтических факторов. Следовательно, применение GSSG или его производных в виде лекарственных средств в лечебных целях не только стимулирует эндогенную продукцию цитокинов и гемопоэтических факторов, но и обеспечивает воспроизведение биохимических и физиологических эффектов цитокинов, в частности, в случае потери чувствительности рецепторов, что наблюдается при онкологической и ретровирусной патологии.

Авторы также впервые показали, что фармацевтически приемлемые производные GSSG в форме его солей; или комбинации GSSG с пролонгаторами; или комбинации GSSG с усилителями/модуляторами в качестве лекарственных средств значительно эффективнее и целенаправленнее индуцируют продукцию цитокинов и гемопоэтических факторов как в нормальных, так и в патологических условиях, а также более эффективно индуцируют механизмы апоптоза в опухоле- или вирус-трансформированных клетках.

Таким образом, заявляется полученный на основе окисленного глутатиона (GSSG) новый класс лекарственных средств, лечебные эффекты которых обусловлены впервые установленными и неизвестными ранее свойствами окисленного глутатиона (GSSG) и его производных осуществлять регуляцию продукции цитокинов и гемопоэтических факторов и воспроизведение эффектов цитокинов и, следовательно, регулировать пролиферацию и дифференцировку нормальных клеток, а также селективно индуцировать механизмы апоптоза в трансформированных клетках.

В изобретении представлен метод стимуляции эндогенной продукции цитокинов и гемопоэтических факторов, а также индукции механизмов апоптоза в случае, когда стимуляция цитокинов и гемопоэтических факторов и/или индукция механизмов апоптоза, или и то, и другое, является целесообразным, что может быть достигнуто путем введения в организм млекопитающих, нуждающихся в этом, эффективного количества GSSG, его солей и других фармацевтически приемлемых производных окисленного глутатиона на достаточный период времени для достижения терапевтического эффекта.

Предпочтительно применение окисленного глутатиона и его производных парентерально или местно. Метод заключается во введении окисленного глутатиона (GSSG) или его солей совместно с веществом, которое способно продлевать период пребывания GSSG в окисленной форме в биологических средах; или с веществом, способным повышать эффект GSSG для усиления регуляторного воздействия на эндогенную продукцию цитокинов и гемопоэтических факторов; или индуцировать механизмы апоптоза в трансформированных тканях, что обеспечивает регуляцию метаболизма, пролиферации и дифференцировки в тканях и достижение соответствующего терапевтического эффекта.

В процессе экспериментальных исследований установлено, что наибольшая терапевтическая эффективность достигается, когда производные GSSG выбраны из группы соединений, представляющих собой химически измененные молекулы GSSG посредством получения его солей, а также посредством ковалентного связывания GSSG с иными химическими соединениями, в том числе активными метаболитами. В свою очередь, биолого-фармацевтические, а, следовательно, и терапевтические эффекты солей окисленного глутатиона существенным образом возрастают в случае получения комбинации солей окисленного глутатиона, в частности, Na-GSSG, с веществами, стабилизирующими молекулу окисленного глутатиона и замедляющими его восстановление в GSH в биологических средах, т.е., с пролонгаторами; или с веществами, усиливающими биолого-фармацевтические эффекты, а, следовательно, и терапевтические эффекты солей окисленного глутатиона, т.е., усилителями/модуляторами.

Особое предпочтение отдается производным GSSG в форме его натриевой, литиевой, калиевой, кальциевой, цинковой, молибденовой, ванадиевой и других, например, содержащей фтор или платину солей, а также производным окисленного глутатиона, полученным посредством ковалентного связывания GSSG с цистеамином (S-тиоэтиламин-глутатион дисульфид), или с липоевой кислотой (бис-[6,8-дитиооктанил] глутатион дисульфид), или с карнозином ([b-аланил-гистидил]глутатион дисульфид), или с аденозином ([9- - D-рибофуранозиладенил] глутатион дисульфид), или с метионином (бис- - амино- - метилтиобутаноил] глутатион дисульфид), и некоторыми другими аминокислотами, включая D- и L-формы аминокислот, упомянутых в этом документе.

Проведенными исследованиями убедительно доказано, что эффективные "пролонгаторы" относятся к группе веществ, представленных фармацевтически приемлемыми прооксидантыми соединениями, то есть окислителями, например, аскорбиновая кислота; или к группе веществ, способных формировать слабые ионные и координационные (водородные) связи, которые способствуют стабилизации молекулы GSSG (диметилсульфоксид, соли платины); или веществ, которые обладают конкурентными свойствами в отношении NADP-Н-зависимого восстановления GSSG в GSH, катализируемого глутатионредуктазой; или веществ, способных осуществлять обратимое ингибирование восстановления NADP+ в NADP-H, катализируемого глюкозо-6-фосфат- дегидрогеназой или другими NADP-Н-зависимыми ферментами.

Из "пролонгаторов" особенно предпочтительными являются инозин, аскорбиновая кислота, диметилсульфоксид, цистамин, соединения платины.

Следует подчеркнуть, что максимальная стабилизация молекулы экзогенного GSSG именно в окисленной форме, в том числе при введении в биологические среды, достигается в том случае, когда используется комбинация (смесь) молекул окисленного глутатиона, состоящая на 50% из GSSG, в котором все аминокислоты представлены в L-форме, и на 50% из GSSG, в котором две химически однозначные аминокислоты представлены в D-форме, а остальные - в L-форме.

Предпочтительно, чтобы "усилитель/модулятор" был выбран из группы веществ, являющихся донорами метильных групп (например, холин-хлорид {[2- гидроксиэтил] триметиламмониум хлорид}, или S-аденозил-метионин); и/или веществ, которые способны образовывать окислительно-восстановительные пары (липоевая/дегидролипоевая, фолиевая/дегидрофолиевая, аскорбиновая/дегидроаскорбиновая кислоты). "Усилитель" или "модулятор", или "усилитель/модулятор" в данном случае должен быть представлен веществом, которое увеличивает или целесообразно изменяет с точки зрения лечебных результатов терапевтический эффект GSSG или его производных, но посредством механизмов, отличающихся от механизмов действия пролонгаторов, которые увеличивают время пребывания GSSG в окисленной форме, то есть замедляют его восстановление в биологических средах в GSH.

В частности, наиболее предпочтительными "усилителями" или "модуляторами" являются холин-хлорид, S-аденозил-метионин, липоевая (6,8-тиооктановая) и фолиевая (птероилглутаминовая) кислоты.

Согласно предлагаемому изобретению, лекарственное средство для лечения онкологических, инфекционных, гематологических, иммунологических, ишемических, нейродегенеративных, метаболических, эндокринных и других заболеваний содержит в качестве фармацевтически активного компонента эффективное количество фармацевтически приемлемых производных окисленного глутатиона (GSSG) в форме его солей; или комбинаций с пролонгатором или усилителем/модулятором; или композиций, представляющих собой окисленный глутатион, ковалентно связанный с фармацевтически приемлемым веществом из группы активных метаболитов. Предпочтительно, чтобы фармацевтически приемлемые производные окисленного глутатиона для парентерального использования применяли в виде фармацевтически приемлемого раствора, например, водного раствора, включая воду, раствора глюкозы, изотонические растворы хлорида натрия, забуференные солевые растворы.

Обнаруженная в процессе исследований индуцированная посредством GSSG модуляция эндогенной продукции цитокинов и гемопоэтических факторов, а также индукция механизмов апоптоза в трансформированных клетках и связанная с этими эффектами регуляция метаболизма, пролиферации и дифференцировки клеток в организме, приводит к противоопухолевому, противоинфекционному, гемопоэтическому, иммуномодулирующему и другим фармакологическим эффектам, которые, в свою очередь, обеспечивают достижение в той или иной степени лечебного или профилактического эффекта при различных заболеваниях.

Является предпочтительным, чтобы фармацевтически приемлемые производные GSSG вводили в организм в дозе от 0.01 до 0.5 мг GSSG на кг массы тела в пересчете на основание или соль GSSG; или в дозе от 1 до 30 мг на 1 м² поверхности тела, а в случаях накожного применения/введения посредством инстилляций в дозе от 1 мг до 30 мг на 1 м² поверхности тела по крайней мере однократно в каждый период времени, состоящий из 24 часов. Также данное вещество может быть введено путем последовательных инъекций или другим способом получено организмом с целью достижения общей дозировки от 0.01 до 0.5 мг на кг массы тела - в случае введения солей GSSG, и от 1.0 до 3.0 мг на 1 кг поверхности тела в течение каждых 24 часов. Желательно, чтобы применение и введение данного вещества в организм проводили до тех пор, пока не будет получен желаемый эффект регуляции продукции цитокинов и гемопоэтических факторов и/или индукции апоптоза, и, тем самым, регуляции метаболизма, пролиферации и дифференцировки клеток, что определяет достижение соответствующего терапевтического эффекта.

Краткое описание чертежей.

Вышеупомянутые преимущества настоящего изобретения более наглядно дополняет графически представленный материал.

На фиг. 1а, 1б, 1в и 1г представлены данные цитофлуорометрического анализа клеток HL-60, цитофлуорометрического анализа клеток HL-60 в присутствии представленного в данном изобретении фармакологического средства цитофлуорометрического анализа лимфоцитов человека и цитофлуорометрического анализа лимфоцитов в присутствии представленного в данном изобретении фармакологического средства соответственно. Описание дано в обсуждении примера 4, который имеет отношение к исследованию апоптоз-индуцирующей активности препарата на культуре клеток млекопитающих.

На фиг. 2 представлено схематическое изображение молекулы GSSG с указанием участков для химической модификации молекулы данного соединения для получения фармацевтически приемлемых производных GSSG.

В структурной формуле на фиг. 2, точки X1, X2, X3, X4, X5 и X6 являются участками, в которых возможно проведение химической модификации молекулы GSSG. Динатриевые и дилитиевые соли, где X1, X4 - это катионы натрия, либо катионы лития, либо катионы цинка, являются наиболее предпочтительными для обеспечения высокой проницаемости в клетки и максимального сродства лекарства к тем или иным тканям. В каждой из точек X1, X2, X3 и X4 может быть водород, если не используются другие заместители. Могут быть использованы другие соли GSSG, в том случае, когда они фармацевтически приемлемы, т.е. не обладают неблагоприятным воздействием на организм, например, во всех (в одной или более) точках X1, X2, X3 и X4 могут быть калий, кальций, цинк, молибден, ванадий, фтор, платина или любые другие фармацевтически приемлемые заместители. В данном изобретении использование водорастворимых солей является наиболее предпочтительным.

На фиг. 3, 4, 5, 6 и 7 приведены формулы новых веществ, полученных как дериваты GSSG, где GSSG ковалентно связан с цистеамином (S-тиоэтиламин-глутатион дисульфид, фиг. 3); или с липоевой кислотой (бис-[6,8-дитиооктанил] глутатион дисульфид, фиг. 4); или с карнозином ([b-аланил-гистидил] глутатион дисульфид, фиг. 5); или с аденозином ([9- - D-рибофуранозиладенил] глутатион дисульфид, фиг. 6); или с метионином (бис-[2-амино-4-[метилтио]бутаноил]глутатион дисульфид, фиг. 7).

В структурной формуле на фиг. 3 точка X1 (или, возможно, X1 и X2) указаны как участки ковалентного связывания с молекулой(ами) цистеамина (2-меркаптоэтиламин). В структурной формуле на фиг. 4 точки X5 и X6 отмечены как участки ковалентного связывания с молекулами липоевой кислоты (6,8-дитиооктановая кислота). В структурной формуле на фиг. 5 точка X3 отмечена как участок ковалентного связывания с молекулой карнозина (b-аланил-гистидин). В структурной формуле на фиг. 6 точка X2 указана в качестве участка ковалентного связывания с молекулой аденозина (9- - D-рибофуранозиладенин). В структурной формуле на фиг. 7 точки X5 и X6 отмечены как места ковалентного связывания с молекулами метионина (2-амино-4- [метилтио]бутановая кислота).

Описание предпочтительного воплощения идей изобретения.

Согласно настоящему изобретению предлагается базовое лекарственное средство и группа лекарственных средств, получаемых на основе GSSG, для лечения инфекционных, онкологических, гематологических, нейродегенеративных, ишемических и других заболеваний, а также заболеваний вследствие иммунных, метаболических и эндокринных нарушений, при которых регуляция эндогенной продукции цитокинов и гемопоэтических факторов и/или индукция механизмов апоптоза является целесообразной. Указанные лекарственные средства в качестве активного начала содержат эффективное количество GSSG или его фармацевтически приемлемых производных. Целесообразно применять лекарственную форму препарата в виде инъекционного раствора, содержащего от 0.01% до 4.0% основания GSSG или его солей; и от 1.0% до 10% основания GSSG или его солей в случае применения препаратов GSSG в форме растворов для ингаляций, локальных инстилляций, глазных капель, интраназального введения или мазей для накожных аппликаций.

Согласно настоящему изобретению, целесообразно использовать GSSG и его со