Лиофилизированный состав, содержащий в качестве противоопухолевого действующего вещества тиоксантенон, и способ лечения с применением этого состава

Лиофилизированный состав, содержащий в качестве противоопухолевого действующего вещества тиоксантенон, и способ лечения с применением этого состава

Реферат

 

Изобретение относится к области медицины и касается лиофилизированного состава для лечения опухолей у млекопитающих, восстановленного по влагосодержанию, содержащего в качестве противоопухолевого действующего вещества тиоксантенон в сочетании с маннитом или сахарозой в качестве стабилизатора в лактатном буфере. Состав обладает повышенной стабильностью. 8 с. и 4 з.п. ф-лы, 16 табл.

Область изобретения Изобретение относится к лиофилизированным противоопухолевым препаратам для парентерального введения в форме водного раствора. Более конкретно, изобретение относится к лиофилизированному составу, содержащему в качестве противоопухолевого действующего вещества тиоксантенон, и способу лечения с применением этого состава.

Известный уровень техники Многочисленные традиционные лекарственные вещества и белки, предназначенные для терапевтического или диагностического использования, обладают нестабильной формой в водном растворе и требуют превращения их в твердые продукты. В технологии производства фармацевтических продуктов лиофильная сушка является одним из наиболее широко используемых методов для обеспечения необходимой стабильности препарата.

По различным причинам лиофильную сушку биоактивных веществ редко осуществляют в их чистом виде. В процессе получения препарата обычно для достижения определенных целей прибавляют другие химические компоненты, например введения буферных веществ для обеспечения необходимого показателя pH, повышения растворимости или обеспечения осмолярного равновесия. При разработке способа лиофильной сушки, состав препарата в целом оказывает влияние главным образом на параметры цикла. Таким образом, любое изменение в составе, не только содержание самого активного вещества обычно требует последующей модификации технологического цикла. Также как и наполнители, вводимые по вышеупомянутым причинам, лиофильная сушка обычно требует еще и введения вспомогательных добавок для облегчения самого процесса лиофилизации или обеспечения механической прочности "пробке" лиофилизированного препарата во время последующего его хранения и транспортировки. Такие наполнители называются лиопротекторами или стабилизаторами. Использование стабилизаторов иллюстрируется следующими ссылками.

В Международной заявке PCT/US89/04099 (WO 90/03784) раскрывается лиофилизированный фармацевтический состав, содержащий полипептид и стабилизирующее или солюбилизующее количество циклодекстрина, выбранного из группы, состоящей из гидроксипропильного, гидроксиэтильного, глюкозильного, мальтозильного, мальтотриозильного производных - и -циклодекстрина.

В патенте США N 4983586 раскрывается способ снижения частоты преципитации липофильного и/или гидрофильного лекарственного средства в месте его инъекции при парентеральном введении, заключающийся в том, что лекарственный препарат вводят в форме водного раствора, содержащего примерно от 20% до 50% гидроксипропил--циклодекстрина. В объем заявленных лекарственных препаратов: противоопухолевые средства, седативные средства, транквилизаторы, противосудорожные средства, антидепрессанты, снотворные средства, миорелаксанты, спазмолитики, противовоспалительные средства, антикоагулянты, кардиотонические средства, сосудорасширяющие средства и антиаритмические средства.

В патенте США N 5298410 раскрываются лиофилизированные фармацевтические составы биологически активных веществ, в которых в качестве стабилизатора используют циклодекстриновое производное, буфер, например как фосфат натрия, ацетат натрия и карбонат натрия. Указанные составы могут содержать, при желании, сахарозу или трегалозу.

В качестве исходного материала для лиофилизации обычно используют ненасыщенный водный раствор, и конечный продукт получают в виде твердого вещества. Весь технологический процесс состоит из стадий, во время которых происходит удаление до > 99% воды. Во время стадии охлаждения, водные растворы превращаются в лиофилизированный концентрат, при этом одновременно удаляют воду в виде льда. Весь технологический процесс состоит из нескольких фазовых превращений, например как фазовый переход жидкость - твердое вещество и твердое вещество-газ, которые необходимо принимать во внимание для обеспечения эффективной переработки и стабильности получаемых продуктов. По мере понижения температуры, раствор обычно вначале претерпевает частичное охлаждение (то есть охлаждение до температуры ниже равновесной температуры замерзания) до начала спонтанного образования зародышей льда. Образование зародышей льда и центров роста кристаллов представляют собой сложные реакционные процессы, скорости протекания которых зависят от скорости охлаждения, концентрации раствора и других факторов. Эта стадия процесса в значительной степени определяет строение целевого лиофилизированного продукта. В процессе лиофильной сушки, растворенное вещество удерживается в фазе остатка жидкости в форме с повышающейся концентрацией, при этом степень его концентрации регулируется по диаграмме фазового равновесия. В конечном счете, раствор становится насыщенным, и одновременно в этой точке образуется твердая фаза растворенного вещества. Полученная система на следующей стадии состоит из смеси кристаллов растворенного вещества и льда.

Наполнители, прибавляемые, главным образом, для облегчения процесса лиофилизации, обычно служат для обеспечения одной из двух функций. Наполнители используются непосредственно для увеличения суммарного содержания твердого осадка с целью достижения механически более стабильного лиофилизированного продукта. Такие наполнители должны обладать способностью к кристаллизации из раствора в течение всего процесса лиофилизации, предпочтительно на стадии замораживания, поскольку именно только в виде самостоятельной фазы они будут оказывать нейтральный эффект на стабильность продукта. Стабилизаторы, с другой стороны, обеспечивают химическую защиту во время концентрирования вымораживанием и облегчают переход в стеклообразное состояние; они также обеспечивают физическую прочность лиофилизированного продукта. Температура стеклования представляет собой зависимость (функцию) химического состава от суммарного содержания твердого вещества.

В то время как в прототипе внимание в большей степени было сконцентрировано на физико-химических параметрах для коррекции состава продуктов для лиофилизации (см., например, статью Franks, F, Freeze Drying: a combination physics, chemistry, engineering and economics в журнале, Jap. J. Freeze Drying, вып. 38, стр. 5-16 (1992), таких параметров недостаточно, чтобы специалист в данной области техники смог получить конечные продукты, которые отвечали бы требуемым целям. Таким образом, все еще существует необходимость проведения тщательного исследования и/или выявления неожиданного открытия, на основе которых можно получить требуемые продукты, которые станут очевидны специалистам из описания настоящего изобретения.

В процессе создания настоящего изобретения авторы в результате проведения кропотливой научно-исследовательской работы установили, что производные тиоксантенона, обладающие противоопухолевой активностью, при доставке их в организм в традиционных фармацевтических носителях, например в форме таблетки и капсулы для перорального приема, обычно не отвечают в должной мере требованиям эффективного лекарственного средства. Возникла проблема создания лекарственной формы для производных тиоксантенона, отвечающей требованиям эффективного лекарственного средства.

Краткое изложение сущности изобретения В основу изобретения положена задача создания препарата с действующим веществом тиоксантенон в виде лиофилизированного состава, который, после восстановления его влагосодержания, превращается в форму, пригодную для парентерального введения, и который обладает стабильностью и не подвержен какой-либо деградации или изменению во время продолжительного хранения.

Задача решена тем, что заявляемый лиофилизированный состав для лечения опухолей у млекопитающего, восстановленный по влагосодержанию, согласно изобретению, содержит: а) от 1 до 50 мг/мл противоопухолевого средства на основе соединения формулы (I) где n означает 2 или 3; R¹ и R² каждый независимо означает низший алкил; Q означает углеводородный остаток, выбранный из группы, состоящей из CH₂NHR³, CH₂N(R⁴)SO₂R⁷, CH₂NHCHO, CH=N-Ar, C(O)NR⁵R⁶, CH₂N(R⁴)C(O)R⁷, CH₂N(C₂H₅)CHO, CH₂N(R⁴)P(O)(O - низший алкил)₂, CH₂N=CH-N(R⁹)(R¹⁰), CH₂N(R⁴)C(O)CF₃ и CH₂N(R⁴)C(O)OR⁷; R³ означает водород или низший алкил; R⁴ означает водород, низший алкил или Ar; R⁵ означает водород, низший алкил или Ar; R⁶ означает водород, низший алкил; R⁷ означает низший алкил или Ar; R⁸ означает водород, низший алкил, низший алкокси или гидроксил; Ar означает фенил или фенил, замещенный метилом, метоксилом, гидроксилом, галогеном или нитрогруппой, при условии, что когда n равно 2, то R¹ и R² означают этил, R⁸ означает водород, a Q означает CH₂NHSO₂Ar, при этом группа Ar может быть 4-монозамещенной метилом или галогеном; и R⁹ и R¹⁰ каждый независимо означает низший алкил; или его фармацевтически приемлемая соль присоединения кислоты или сольват; b) от 10 мг/мл до 125 мг/мл стабилизатора, выбранного из группы, состоящей из маннита и сахарозы; и c) от 0,025 до 0,25 М лактатного буфера, причем указанный состав имеет pH от 3,0 до 4,5. Заявляемый лиофилизированный состав может содержать также от 1,0 до 10,0 мг/мл хлорида натрия, а в качестве лактатного буфера предпочтительно содержит лактат натрия.

Лиофилизированный состав, восстановленный по влагосодержанию, для лечения опухолей у млекопитающего может также содержать: а) от 1 до 20 мг/мл противоопухолевого средства на основе соединения формулы (II): где n означает 2 или 3; R¹ и R² каждый независимо означает низший алкил; Q означает углеводородный остаток, выбранный из группы, состоящей из CH₂NHR³, CH₂NHCHO, CH= N-Ar, C(O)NR⁵R⁶, CH₂N(R⁴)C(O)R⁷, CH₂N(C₂H₅)CHO, CH₂N(R⁴)P(O)(O - низший алкил)₂, CH₂N=CH-N(R⁹)(R¹⁰), CH₂N(R⁴)C(O)CF₃ и CH₂N(R⁴)C(O)OR⁷; R³ означает водород или низший алкил; R⁴ означает водород, низший алкил или Ar; R⁵означает водород, низший алкил или Ar; R⁶ означает водород, низший алкил; R⁷ означает низший алкил или Ar; R⁸ означает водород, низший алкил, низший алкокси или гидроксил; Ar означает фенил или фенил, замещенный метилом, метоксилом, гидроксилом, галогеном или нитрогруппой, и R⁹ и R¹⁰ каждый независимо означает низший алкил; или их фармацевтически приемлемые соли присоединения кислот или сольват; (b) от 30 мг/мл до 100 мг/мл стабилизатора, выбранного из группы, состоящей из маннита и сахарозы; и c) от 0,025 до 0,25 М лактатного буфера, причем указанный состав имеет pH от 3,0 до 4,5.

Указанный лиофилизированный состав может содержать также от 1,0 до 10,0 мг/мл хлорида натрия, а в качестве лактатного буфера предпочтительно содержит лактат натрия.

Предпочтительный вариант лиофилизированного состава, восстановленного по влагосодержанию, для лечения опухолей у млекопитающего содержит: от 1 до 50 мг/мл N-[[1-[[2-(диэтиламино)этил] амино]-9-оксотиоксантен-4-ил]метил]- метансульфонамида; b) от 0,025 до 0,25 М натрий-лактатного буфера; с) от 10 до 125 мг сахарозы; d) от 1,0 до 10,0 мг хлорида натрия; e) остальное составляет вода в объеме до 1,0 мл.

Другой предпочтительный вариант лиофилизированного состава, восстановленного по влагосодержанию, для лечения опухолей у млекопитающего содержит: от 1 до 50 мг/мл N-[[1-[[2-(диэтиламино)этил]амино]-7-метокси-9- оксотиоксантен-4-ил]метил]-формамид; b) от 0,025 до 0,25 М натрий-лактатного буфера; с) от 10 до 125 мг сахарозы; d) от 1,0 до 10,0 мг хлорида натрия; e) остальное составляет вода в объеме до 1,0 мл.

Восстановленные по влагосодержанию лиофилизированные составы настоящего изобретения предназначены для лечения злокачественных опухолей у млекопитающих.

Способ лечения предполагаемой опухоли у млекопитающего, согласно изобретению, заключается в том, что указанному млекопитающему вводят эффективную дозу состава (выбранного из вышеперечисленных), обеспечивающую уменьшение размера указанной опухоли.

Подробное описание изобретения Лиофилизированный состав предлагаемого изобретения включает: противоопухолевое средство, содержащее действующее вещество тиоксантенон и водный носитель.

Противоопухолевые средства В качестве противоопухолевого средства настоящего изобретения используют соединения формулы (I) в соответствии с патентом США N 5346917, включенного в полном объеме в данное описание в качестве ссылки: где n означает 2 или 3; R¹ и R² каждый независимо означает низший алкил; Q означает углеводородный остаток, выбранный из группы, состоящей из CH₂NHR³, CH₂N(R⁴)SO₂R⁷, CH₂NHCHO, CH= N-Ar, C(O)NR⁵R⁶, CH₂N(R⁴)C(O)R⁷, CH₂N(C₂H₅)CHO, CH₂N(R⁴)P(O)(O - низший алкил)₂, CH₂N= CH-N(R⁹)(R¹⁰), CH₂N(R⁴)C(O)CF₃ и CH₂N(R⁴)C(O)OR⁷; R³ означает водород или низший алкил; R⁴ означает водород, низший алкил или Ar; R⁵ означает водород, низший алкил или Ar; R⁶ означает водород, низший алкил; R⁷ означает низший алкил или Ar; R⁸ означает водород, низший алкил, низший алкокси или гидроксил; Ar означает фенил или фенил, замещенный метилом, метоксилом, гидроксилом, галогеном или нитрогруппой, при условии, что когда n равно 2, то R¹ и R² означают этил, R⁸ означает водород, a Q означает CH₂NHSO₂Ar, при этом группа Ar может быть 4-монозамещенной метилом или галогеном; и R⁹ и R¹⁰ каждый независимо означает низший алкил; или его фармацевтически приемлемая соль присоединения кислоты или сольват.

Указанные соединения можно использовать для лечения онкологических заболеваний у млекопитающих.

Предпочтительные противоопухолевые средства предлагаемого изобретения представляют собой соединения формулы (II): где n означает 2 или 3; R¹ и R² каждый независимо означает низший алкил; Q означает углеводородный остаток, выбранный из группы, состоящей из CH₂NHR³, CH₂NHCHO, CH= N-Ar, C(O)NR⁵R⁶, CH₂N(R⁴)C(O)R⁷, CH₂N(C₂H₅)CHO, CH₂N(R⁴)P(O)(O - низший алкил)₂, CH₂N=CH-N(R⁹)(R¹⁰), CH₂N(R⁴)C(O)CF₃ и CH₂N(R⁴)C(O)OR⁷; R³ означает водород или низший алкил; R⁴ означает водород, низший алкил или Ar; R⁵ означает водород, низший алкил или Ar; R⁶ означает водород, низший алкил; R⁷ означает низший алкил или Ar; R⁸ означает водород, низший алкил, низший алкокси или гидроксил; Ar означает фенил или фенил, замещенный метилом, метоксилом, гидроксилом, галогеном или нитрогруппой, и R⁹ и R¹⁰ каждый независимо означает низший алкил; или их фармацевтически приемлемые соли присоединения кислот или сольват. Типичные представители соединений в соответствии с настоящим изобретением приведены в нижеследующих примерах.

Пример 1 Получение 1-[[2-(Диэтиламино)этил]амино]-4-(N-фенилформимидоил)- тиоксантен-9-она (I: R¹=R²=Et; Q=CH=N-C₆H₅; R⁸=H; n=2).

Смесь, состоящую из 17,7 г (50 ммоль) 1-[[2-(диэтиламино)-этил]амино]- 9-оксо-тиоксантен-4-карбоксальдегида и 15,1 г (150 ммоль) анилина в 100 мл толуола кипятят с обратным холодильником в течение 8 часов с использованием конденсационного горшка Dean-Stark. Результаты тонкослойной хроматографии на двуокиси алюминия при использовании смеси хлороформ/гексан/изопропиламин, 10:10:2, свидетельствовали о неполном завершении реакции. Толуол отгоняют, к реакционной массе прибавляют 25 мл анилина, и затем кипятят с обратным холодильником в течение 4 часов. После этого к реакционной массе прибавляют 40 мл ксилола и смесь кипятят с обратным холодильником еще 3 часа. Растворитель и избыток анилина упаривают в вакууме, и остаток перекристаллизовывают из бензола с выходом 19, 9 г неочищенного продукта. После перекристаллизации полученного кристаллического продукта из примерно 1,5 л гексана получают 15,8 г (86%) названного соединения, т.пл 125-126^oC.

Пример 2 Получение N-[[1-[[2-(Диэтиламино)этил] амино]-9-оксотиоксантен-4-ил]метил]-формамида (I: R¹=R²=Et; Q=CH₂NHCHO; R⁸=H; n=2).

Раствор, содержащий 35,4 г (0,1 моль) 1-[[2-(диэтиламино)-этил]амино]-9- оксотиоксантен-4-карбоксальдегида, 420 мл формамида и 50 мл (1 моль) уксусной кислоты, кипятят при 160^oC в течение 1 часа. Реакционную смесь охлаждают, выливают в 2 л воды и затем подщелачивают путем прибавления примерно 50 мл 35% раствора гидроксида натрия. Выпавший в осадок смолянистый продукт отфильтровывают и сушат в вакууме. Высушенный осадок растворяют примерно в 1,5 л горячего этилацетата, очищают древесным углем и кристаллизуют при охлаждении. Полученный продукт отфильтровывают, промывают этилацетатом и после сушки получают 29,0 г (75%) названного соединения, т.пл. 154-155^oC.

Пример 3 Получение N-[[1-[2- (Диэтиламино)этил]амино]-9-оксотиоксантен-4-ил]метил]-N- метилформамида (IV: R¹=R²=Et; R⁴=Me; R⁸=H; n=2).

По аналогичной методике, приведенной в примере 2, из смеси, содержащей 35,4 г (0,1 моль) 1-[[2(диэтиламино)этил]амино]-9-оксо-тиоксантен-4- карбоксальдегида, 394 г N-метилформамида и 50 мл уксусной кислоты, получают 24,6 г N-метилформамида, который затем перекристаллизовывают из 150 мл ацетона с получением названного продукта с т.пл 127-130^oC.

Пример 4 Получение 4-(Аминометил)-1-[[2-(диэтиламино)этил]амино]-тиоксантен- 9-она (I: R¹=R²=Et; Q=CH₂NH₂; R⁸H; n=2), Раствор, содержащий 24,4 г (64 ммоль) формамида, полученного в примере 2 в 240 мл 2 н. соляной кислоты, кипятят на паровой бане в течение 1 часа. Реакционную смесь охлаждают до комнатной температуры, подщелачивают путем прибавления 35% водного раствора гидроокиси натрия, и выпавший желтый осадок собирают фильтрованием. Полученный продукт растворяют в бензоле, очищают древесным углем, сушат сульфатом магния, фильтруют и отгоняют азеотропной перегонкой для удаления следового количества воды. Высушенный остаток кристаллизуют из метанола и изопропанола с добавлением этерифицированного хлористого водорода. Полученный твердый продукт перекристаллизовывают несколькими порциями из метанола с выделением 10,6 г продукта, т.пл. 270-272^oC, в виде двусолянокислой соли.

Пример 5 Получение [[2-(диэтиламино)этил] амино]-4-[(метиламино)-метил]тиоксантен-9-она (I: R¹=R²=Et; Q=CH₂NHCH₃; R⁸=H; n=2).

По аналогичной методике, приведенной в примере 4, из 14,6 г (37 ммоль) N-метилформамида примера 3 и 50 мл 2н соляной кислоты получают 10,5 г метиламина в виде дигидрохлорида полугидрата. Полученный продукт плавится при температуре 241-243^oC.

Пример 6 Получение N-[[1-[[2- (Диэтиламино)этил]амино]-9-оксотиоксантен-4-ил]-метил]- метансульфонамида (I: R¹=R²=Et; Q=CH₂NHSO₂CH₃; R⁸=H; n=2).

Раствор, содержащий 10,65 г (30 ммоль) свободного основания амина, полученного в примере 4, в 100 мл пиридина охлаждают на ледяной бане и затем прибавляют одной порцией 4 г (35 ммоль) метансульфонилхлорида. Смесь перемешивают 2 часа при комнатной температуре и выливают в 750 мл воды, содержащей 2 г гидроокиси натрия. Выпавшее в осадок темно-желтое вещество собирают, промывают водой и сушат в вакууме в течение ночи. Вторую порцию продукта получают прибавлением избытка гидроокиси натрия к фильтрату с последующим фильтрованием полученного твердого вещества. Объединенные порции выпавшего продукта после сушки перекристаллизовывают из бензола. Получают 6,4 г метансульфонамида, т.пл. 169-170^oC.

Пример 7 Получение 1-[[2'-(диэтиламино)этил] амино] -9-оксотиоксантен- 4-карбоксамида (1: R¹=R²=Et; Q=CONH₂; R⁸=H; n=2).

Суспензию, приготовленную из 74 г (0,23 моль) 1-[[2- (диэтиламино)-этил] амино]-9-оксо-тиоксантен-4-карбоксальдегида и 74 г (1,06 моль) солянокислого гидроксиламина в смеси 400 мл пиридина и 400 мл этанола кипятят с обратным холодильником в течение 0,5 часа и затем прибавляют 70 мл воды для получения гомогенного раствора. Реакционный раствор кипятят в течение еще 2 часов и затем выдерживают при комнатной температуре 14 часов. Полученный кристаллический оксим отфильтровывают с количественным его выходом, т.пл. 215-218^oC.

123 г оксима быстро нагревают на паровой бане в 180 мл уксусного ангидрида для полного его растворения. Полученный раствор охлаждают, затем прибавляют 100 мл 1,8М HCl в простом эфире, и полученную суспензию разбавляют 500 мл простого эфира. Суспензию выдерживают в течение 14 часов при 0^oС и затем фильтруют. Остаток (123 г, т.пл. 109-112^oС) суспендируют в 250 мл ксилола и кипятят с обратным холодильником в течение 20 мин. Реакционную массу охлаждают, и отфильтровывают 71,3 г нитрила, т.пл. 265^oC.

Десять грамм нитрила перемешивают в 200 мл концентрированной H₂SO₄ при комнатной температуре в течение 3 дней. Реакционную массу затем нейтрализуют концентрированным раствором NH₄OH, осадок отфильтровывают и получают перевар в теплой смеси EtOAc/EtOH, который затем фильтруют и перекристаллизовывают из быстро охлажденного раствора, т.пл. 241-243^oС. Полученное кристаллическое вещество растворяют в этаноле, и затем прибавляют 1 эквивалент HCl в этаноле. Получают 6 грамм солянокислого амида, т.пл. 271-272^oC.

Пример 8 Получение N-[[1-[(2-(диэтиламино)этил)амино]-9- оксотиоксантен-4-ил]метил]-N-метилметансульфонамида (I: R¹=R²=Et; Q=CH₂N(CH₃)SO₂CH₃; R⁸=H; n-2).

Раствор, содержащий 1,5 г (3,5 ммоль) метансульфонамида из примера 6 в тетрагидрофуране (THF) (60 мл), охлаждают до 0^oC на ледяной бане, а затем прибавляют 0,16 г (4,0 ммоль) NaH. Реакционную массу доводят до комнатной температуры, перемешивают в течение 10 мин, а затем прибавляют 0,25 мл (4,0 ммоль) йодистого метила. Реакционную массу перемешивают при комнатной температуре в течение 24 часов, и растворитель упаривают в вакууме. Остаток очищают колоночной хроматографией на кремнеземе при элюировании сначала хлороформом (100%), а затем смесью 1% изопропиламин/хлороформ с выходом 1,15 г (74%) N-метилметансульфонамида в виде желтого порошка, т.пл. 175-177^oC. Свободное основание также очищают раствором метансульфокислоты в метаноле с выходом метансульфонатной соли, т.пл. 194-195,5^oC (обозначенной как продукт примера 8а, упоминаемого далее в описании).

Пример 9 Получение N-[[l-([2-(диэтиламино)этил] амино] -9-оксотиоксантен-4-ил] метил]фенилсульфонамида (I: R¹=R²=Et; Q=CH₂NHSO₂Ph; R⁸=H; n=2).

По методике, аналогичной примеру 6, из смеси, содержащей 2,54 г (7, 5 ммоль) свободного основания амина, полученного в примере 4, пиридина (50 мл) и бензолсульфонилхлорида (1,1 мл, 8,62 ммоль), получают 2,4 г (57%) фенилсульфонамида в виде соли метансульфокислоты, которую затем обрабатывают раствором метансульфокислоты в метаноле. Полученный продукт перекристаллизовывают из этанола.

Пример 10 Получение N-[[1-[[2-(Диэтиламино)этил]амино]-9- оксотиоксантен-4-ил]метил]-ацетамида (I: R¹=R²=Et; Q=CH₂NHC; R⁸=H; n=2).

По методике, аналогичной примеру 6, из смеси, содержащей 4,15 г (11,7 ммоль) свободного основания амина, полученного в примере 4, пиридина (60 мл) и хлористого ацетила (0,82 мл, 11,53 ммоль), получают 2,3 г (52%) названного ацетамида в виде оранжевого твердого вещества, которое перекристаллизовывают из ацетона. Выделенное кристаллическое вещество имеет т.пл. 182-183^oC.

Пример 11 Получение N-[[1-[[2-(Диэтиламино)этил]амино]-9-оксотиоксантен-4-ил] метил]бензамида (I: R¹=R²=Et; Q=CH₂NHC(O)Ph; R⁸=H; n=2).

По методике, аналогичной примеру 6, из смеси, содержащей 1,17 г (3,29 ммоль) свободного основания амина, полученного в примере 4, пиридина (25 мл) и бензоилхлорида (0,42 мл, 3,62 ммоль), получают 1,02 г (68%) названного бензамида в виде желтого порошка. Продукт очищают колоночной хроматографией на кремнеземе при элюировании последовательно хлороформом (100%), а затем смесью 1% изопропил/хлороформ. Выделенный продукт перекристаллизовывают из этанола и расплавляют при температуре 161-163^oC.

Пример 12 Получение N-[[1-[[2-(Диэтиламино)этил]амино]-9-оксо-тиоксантен-4- ил]диэтил]-фосфорамида (I: R¹=R²=Et; Q=CH₂NHP(O)(OEt)₂; R⁸=H; n=2).

Раствор, содержащий 2,28 г (6,41 ммоль) свободного основания амина из примера 4, CH₂Cl₂ (50 мл) и триэтиламин (2 мл), при 0^oC обрабатывают диэтилфосфорохлоридатом (1,0 мл, 6,9 ммоль). Реакционную массу перемешивают при 0^oC в течение 2 часов, затем при комнатной температуре 1 час. Растворитель упаривают в вакууме, и остаток очищают колоночной хроматографией на кремнеземе, вымывая последовательно этилацетатом (100%), смесью 5% метанол/этилацетат и смесью метанол/изопропиламин/этилацетат с выделением 2,28 г (72%) диэтилфосфорамида в виде желтого твердого вещества, которое после перекристаллизации из этилацетата имеет т.пл. 108-110^oC.

Пример 13 Получение N-[[1-[[2-(диэтиламино)этил]амино]-9- оксотиоксантен-4-ил]метил]-N-этилформамида (IV: R¹=R²=Et; R²=Et; R²=H; n=2).

Раствор, содержащий 2,0 г (5,6 ммоль) 1-[(2-(диэтиламино)этил]амино]-9-оксотиоксантен-4-карбоксальдегида, N-этилформамид (24,0 мл) и муравьиную кислоту (3,0 мл, 79,5 ммоль), кипятят при 170^oC в течение 4 часов. Реакционную смесь охлаждают, выливают в воду и подщелачивают путем прибавления 10% раствора NaOH. Выпавшее в осадок твердое вещество собирают фильтрованием и промывают водой. Твердый осадок растворяют в смеси хлороформ/вода, органический слой отделяют и сушат Na₂SO₄. Растворитель упаривают в вакууме и остаток очищают радиальной хроматографией при элюировании смесью изопропиламин/метанол/этилацетата (0,5: 1:98,5) с выходом 1,32 г (57%) N-этилформамида в виде оранжевого твердого вещества, т.пл. 75-77^oC.

Пример 14 Получение 1-[[2-(Диэтиламино)этил]амино]-4-[(этиламино)-метил]тиоксантен-9-она (I: R¹=R²=Et; Q=CH₂NHC₂H₅; R⁸=H; n=2).

По методике, аналогичной примеру 4, из смеси, содержащей 1,3 г (3,2 ммоль) свободного основания амина, полученного в примере 4, N-этилформамида примера 13 и 10,8 мл 2 н. соляной кислоты получают 1,29 г (92%) этиламина в виде дигидрохлорида. Полученный продукт перекристаллизовывают из этанола/тетрагидрофурана и расплавляют при температуре 160^oC (разл.).

Пример 15 Получение 1-[[2-(диэтиламино)] этил]амино]-4- (диметиламинометилен-аминометил)-тиоксантен-9-она тригидрохлорида (I: R¹=R²=Et; Q=CH₂N=CHN(Me)₂; R⁸=H; n=2).

N-[[1-[[2-(Диэтиламино)]этил]амино]-9-оксотиоксантен-4-ил]метил]формамид (3 г) разбавляют 50 мл 2 н. HCl, и реакционный раствор кипятят на паровой бане в течение 90 мин. Смесь охлаждают, подщелачивают до pH 10 35% раствором NaOH и экстрагируют в хлороформе. Органический слой отделяют, фильтруют через K₂CO₃ и упаривают в вакууме. Полученный неочищенный продукт подвергают взаимодействию с диметилформамида диметилацеталем в течение ночи при 60^oC. Избыток ДМФ-диметилацеталя удаляют в вакууме, и полученное названное соединение очищают флэш-хроматографией (силакагель; смесь хлороформ /iPrNH₂/MeOH (98: 1:1). Полученный продукт растворяют в 2,5 М растворе HCl/EtOH (100 мл), затем охлаждают на ледяной бане, фильтруют и после сушки получают 2,38 г 1-([2-(диэтиламино)] этил]амино]-4-(диметиламинометиленаминометил)- тиоксантен-9-она тригидрохлорид в виде оранжевого твердого вещества, т.пл. 258-260^oC.

Пример 16 Получение N-[[1-[[2-(Диэтиламино)этил] амино] -9-оксотиоксантен-4-ил] метил]-трифторацетамида (I: R¹=R²=Et; Q=CH₂NHC(O)CF₃; R⁸=H; n=2).

Раствор, содержащий 4-(аминометил)-1-[[2-(диэтиламино)этил] - амино]-тиоксантен-9-она (2,91 г; 8,19 ммоль) в 80 мл хлористого метилена при 0^oC обрабатывают трифторацетилхлоридом (14,75 мл 0,61М раствора в толуоле; 9,0 ммоль), и реакционную смесь перемешивают при 0^oC в течение 90 мин. Смесь затем упаривают в вакууме, остаток очищают флэш-хроматографией (силакагель; EtOAc (100%), затем смесью 2% изопропиламин/EtOAc) и после перекристаллизации из этилацетата получают 2,52 г (68%) продукта в виде свободного основания, т.пл. 189-190^oC (пример 16). Полученное свободное основание растворяют в метаноле, обрабатывают метансульфокислотой (0,55 г, 5,72 ммоль) и после перекристаллизации из ацетона получают метансульфонатную соль, т.пл. 152-154^oC (пример 16а).

Пример 17 (а) Смесь, состоящую из тиосалициловой кислоты (50,14 г, 0,33 моль) и ацетата меди (2) (5,0 г) в диметилсульфоксиде (500 мл), нагревают с обратным холодильником и прибавляют одной порцией (54,3 г) карбонат калия. Затем шприцем к реакционной массе прибавляют 3-бромхлорбензол (42 мл, 0,36 моль), и полученную смесь кипятят с обратным холодильником в течение 3 часов. Реакционную смесь выливают в воду, очищают древесным углем и фильтруют через целит. Фильтрат подкисляют концентрированной HCl, выпавший осадок собирают фильтрованием, промывают водой и после сушки в вакууме при температуре 60^oC получают 75,01 г (85%) 2-[(3-хлорфенил)тио]бензойной кислоты.

(b) К перемешанному раствору концентрированной H₂SO₄ при 0^oC прибавляют 2-[(3-хлорфенил)тио)бензойную кислоту (75,00 г, 0,28 моль) порциями в течение 1 часа. Смесь перемешивают в течение 2 часов, выливают в концентрированный раствор NH₄OH (500 мл) в воде (2,5 л). Выпавший осадок собирают фильтрованием, промывают водой и сушат в вакууме при температуре 60^oC с выходом 65,9 г (95%) смеси 1-хлор- и 3-хлортиоксантен-9-она.

(с) Смесь, состоящую из 1-хлор и 3-хлортиоксантен-9-она (14,01 г, 56,8 ммоль), пиридина (20 мл) и диэтиламинопропиламина (5,13 г, 39,4 ммоль), кипятят с обратным холодильником до полного завершения реакции. После отведения тепла, растворитель упаривают в вакууме, остаток растворяют в хлороформе и очищают колоночной хроматографией на кремнеземе, вымывая сначала хлороформом для удаления непрореагировавшего 3-хлорзамещенного изомера, а затем смесью 5% изопропиламин/хлороформ с выделением 5,10 г (54%) 1-[(3-диэтиламино)пропил]амино]-тиоксантен-9-она в виде оранжевой смолы.

(d) Смесь, состоящую из 1-[[3-(диэтиламино)пропил]амино]-тиоксантен- 9-она (5,10 г, 15,0 ммоль), формалина (160 мл) и 5 н. уксусной кислоты (0,8 мл), нагревают до температуры 90^oC в течение 16 часов, затем прибавляют дополнительную порцию 5 н. уксусной кислоты (0,20 мл), а затем формалина (50 мл), и реакционную массу кипятят при 90^oС в течение примерно 57 часов. Смесь разбавляют водой, подщелачивают 5 н. раствором NaOH и экстрагируют из хлороформа. Органический слой сушат на Na₂SO₄, пропускают через колонку с кремнеземом и извлекают при элюировании сначала смесью 2% метанол/хлороформ, а затем изопропиламин/метанол/хлороформ (2:2:96) 3,82 г (69%) 1-[[3-(диэтиламино)пропил] амино] -4- (гидроксиметил)-тиоксантен-9-она в виде оранжевой или коричневой смолы.

(e) Получение 1-[[3-(диэтиламино)пропил] амино]-9-оксотиоксантен-4- карбоксальдегида (II: R¹=R²=Et; R⁸=H; n=3).

Смесь, состоящую из 1-[[3-(диэтиламино)пропил]амино]-4- (гидроксиметил)-тиоксантен-9-она (3,82 г), толуола (60 мл) и окиси марганца (7,5 г), кипятят с обратным холодильником в течение 6,5 часов. Смесь охлаждают до комнатной температуры, фильтруют через целит, и фильтрат упаривают в вакууме. Получают 3,3 г (87%) 1-[[3-(диэтиламино)пропил]амино]-9-оксотиоксантен-4- карбоксальдегида в виде коричневого масла.

(f) Получение 1-[[3-(диэтиламино)пропил]амино]-4- (метиламинометил)тиоксантен-9-он-дигидрохлорида 3/2 гидрата (I: R¹=R²=Et; Q=CH₂NHMe; R⁸=H; n=3).

Раствор, содержащий 1-[[3-(диэтиламино)пропил]амино]-9-оксотиоксантен-4-карбоксальдегида (3,3 г, 8.96 ммоль) и 3 г уксусной кислоты в 50 мл N-метилформамида, кипятят с обратным холодильником в течение 2 часов. Смесь подщелачивают 5 мл 5 н. раствора NaOH и экстрагируют в хлороформе (3 х 150 мл). Органический слой сушат на сульфате натрия, упаривают в вакууме. Полученное масло растворяют в 3 н. водном растворе HCl (50 мл) и нагревают на паровой бане в течение 3 часов. Вышеуказанную реакционную массу подщелачивают 30 мл 35% раствора NaOH и экстрагируют в хлороформе (3 х 150 мл). Органический слой сушат на сульфате натрия, упаривают в вакууме с выходом коричневого масла, которое очищают флэш-хроматографией (силакагель; элюирование сначала смесью 5% триэтиламин/EtO₂, затем 5% Et₃N/EtOAc и затем смесью этиламин/метанол/EtOAc (5: 5:90)) с выделением 1,1 г 1-[[3-(диэтиламино)-пропил] амино]-4-(метил аминометил)тиоксантен-9-она в виде прозрачной оранжевой смолы. Названный смолянистый продукт превращают в соответствующую двусолянокислую соль путем обработки 6 н. HCl в простом эфире с выходом 1,04 г дигидрохлорида 3/2 гидрата в виде желтого порошка, т.пл. 222-224^oC.

Пример 18 (а) Получение 4-(аминометил)-1-[[2-(диметиламино)этил] амино] -9- оксотиоксантен-9-она-дигидрохлорида 1/2 гидрата (I: R¹=R²=Me; Q=CH₂NH₂; R⁸=H; n=2).

Смесь, состоящую из N-1[1-[[2-(диметиламино)этил] амино]-9- оксотиоксантен-4-ил]метил]формамида (6,2 г) и 2 н. HCl (52 мл), нагревают до 100^oC в течение 1,5-2 часов. Реакционную смесь затем выливают в ледяную воду, подщелачивают 35% раствором NaOH и экстрагируют хлороформом. Органический слой промывают водой (2х), затем солевым раствором (1х), сушат на Na₂SO₄ и упаривают в вакууме. Остаток очищают колоночной хроматографией на кремнеземе и извлекают при элюировании последовательно этилацетатом, смесью 0,5% триэтиламин/EtOAc, смесью 2% триэтиламин/EtOAc, CHCl₃/ 1-2% изопропиламин и CHCl₃/ 1-2% изопропиламин/ 2% MeOH 3,3 г (58%) требуемого продукта в виде свободного основания. Порцию свободного основания (1,25 г) растворяют в метаноле и обрабатывают концентрированной HCl (3,3 мл) в MeOH (6 мл) с выходом 1,2 г продукта в виде дигидрохлорида 1/2 гидрата, т.пл. 213^oC (разл.).

(b) Получение N-[[1-[[2-(диметиламино)этил]амино]-9- оксотиоксантен-4-ил]-метил]метаносульфонамида метансульфоната (I: R¹=R²=Me; Q=CH₂NHSO₂Me; R⁸=H; n=2).

4-(Аминометил)-1-[[2-(диметиламино)]этил]амино]-тиоксантен-9-она (2 г, 6 ммоль) в 30 мл сухого пиридина в атмосфере азота перемешивают при комнатной температуре до полного растворения реагентов. Реакционный раствор быстро охлаждают на ледяной бане и прибавляют по каплям раствор, содержащий 0,52 мл (6,7 ммоль) метансульфонилхлорида в пиридине. Реакционную массу перемешивают в течение 1 часа при комнатной температуре. Реакционную смесь затем выливают в 500 мл воды, содержащей 0,51 г гидроокиси натрия, экстрагируют в хлороформе, органический слой промывают водой (2х) и солевым раствором и сушат на безводном сульфате натрия. Смесь фильтруют и упаривают в вакууме. Остаток (2,5 г) перемешивают в простом эфире, фильтруют и после сушки фильтрата получают 2 г N-[[1-[[2- (диметиламино)этил]амино]-9-оксотиоксантен-4- ил)метил] метансульфонамида, т.пл. 126-127^oC. Полученное свободное основание растворяют в MeOH и обрабатывают метансульфокислотой (0,48 г). Получают 2,0 г (67%) требуемого продукта в виде метансульфонатной соли, т.пл. 168^oC (разл.).

(с) Смесь, состоящую из 1-[[2-(диметиламино)этил]амино]-4- (гидроксиметил)-тиоксантен-9-она (9,2 г, 0,028 моль) в толуоле (322 мл) нагревают до примерно 60^oC, а затем прибавляют окись марганца (MnO₂, 16 г). Реакционную массу нагревают при 60^oC в течение 1 часа. Смесь затем фильтруют и после упаривания фильтрата в вакууме получают 7,9 г (87%) 1-([2-(диметиламино)-этил]амино]-9- оксотиоксантен-4-карбоксальдегида (Формула II: R¹=R²=Me; R⁸=H; n=2).

(d) Получение N-[[1-[(2-(диметиламино)этил] амино] -9-оксотиоксантен-4-ил] метил]-формамида (I: R¹=R²=Me; Q=CH₂NHCHO; R⁸=H; n=2).

Смесь, состоящую из 1-[[2-(диметиламино)этил]амино]- 9-оксотиоксантен-4-карбоксальдегида (4,75 г), формамида (66,5 мл) и муравьиной кислоты (7,6 мл), кипятят при 170^oC в течение 4 часов. Смесь was выливают в воду со льдом (250 мл), подщелачивают 35% NaOH и экстрагируют в хлороформе. Органический слой промывают водой (2х), затем солевым раствором (1х), сушат на Na₂SO₄ и упаривают в вакууме с выходом 6,3 г N-[[1-[[2-(диметиламино)этил]амино]-9- оксотиоксантен-4-ил]метил]формамида.

(e) Получение 4-(Аминометил)-1-[[2-диметиламино)этил] амино] -9-оксотиоксантен-9-она дигидрохлорида 1/2 гидрата (I: R¹=R²Me; Q=CH₂NH₂; R⁸=H; n=2).

Смесь, состоящую из N-[[l-[[2- (диметиламино)этил]амино]-9-оксотиоксантен-4-ил] метил]формамида (6,2 г) и 2 н. HCl (52 мл) нагревают до 100^oC в течение 1,5-2 часов. Реакционную смесь выливают в воду со льдом, подщелачивают 35% раствором NaO