Производные циклоалкано-индола и азаиндола, смесь их изомеров или отдельные изомеры и их фармацевтически приемлемые соли, производные карбоновой кислоты в качестве исходных соединений и фармацевтическая композиция, ингибирующая высвобождение ассоциированных с аполипопротеином в-100 липопротеинов

Производные циклоалкано-индола и азаиндола, смесь их изомеров или отдельные изомеры и их фармацевтически приемлемые соли, производные карбоновой кислоты в качестве исходных соединений и фармацевтическая композиция, ингибирующая высвобождение ассоциированных с аполипопротеином в-100 липопротеинов

Реферат

 

Описываются новые производные циклоалкано-индола и азаиндола, смесь их изомеров или отдельные изомеры общей формулы I, их фармацевтически приемлемые соли, в которой R¹ и R² вместе со связывающей их двойной связью означают фенильное или пиридильное кольцо или кольцо формулы (А), в которой R⁸ - водород, C₁-C₄-алкил; R¹, R⁴ вместе со связывающей их двойной связью означают фенильное кольцо или четырех- восьмичленный циклоалкеновый остаток, причем указанные для R¹/R² и R³/R⁴ кольца незамещены или замещены 1 - 3 одинаковыми или различными заместителями, выбранными из группы, включающей CF₃, C₁-C₆ алкокси, C₁-C₆ алкоксикарбонил, C₁-C₆ алкил, возможно замещенный гидроксигруппой; D - водород, C₄-C₁₂ циклоалкил, C₁-C₁₂ алкил; Е - группа СО- или CS; L - О, S, - NR⁹; R⁹ - водород, C₁-C₆ алкил, возможно замещенный фенилом, гидрокси; R⁵ - фенил, пиридил, тиенил, возможно замещенные, R⁶ - водород, карбоксигруппа, C₁-C₅алкоксикарбонил, C₁-C₆алкил, возможно замещенный гидроксигруппой, -O-CO-R¹⁵, R¹⁵ - фенил, возможно замещенный, C₁-C₂₂ алкил, C₂-C₂₂алкенил; R⁷ - водород, R⁶ и R⁷ вместе означают группу формулы =О; описываются также промежуточные соединения, ингибирующая высвобождение ассоциированных с аполипопротеином В-100 липопротеинов фармацевтическая композиция. 3 с. и 2 з.п. ф-лы, 35 табл.

Изобретение относится к новым азотсодержащим гетероциклическим соединениям, обладающим ценными биологическими свойствами, в частности к производным циклоалкано-индола и -азаиндола, смеси их изомеров или отдельным изомерам и их фармацевтически приемлемым солям, производным карбоновой кислоты в качестве исходных соединений и фармацевтической композиции, ингибирующей высвобождение ассоциированных с аполипопротеином В- 100 липопротеинов.

Из заявки ЕР N 0234708 известны производные циклоалкано- индола и -азаиндола, обладающие биологической активностью, например, ингибирующей высвобождение ассоциированных с аполипопротеином В-100 липопротеинов активностью.

Задачей изобретения является расширение ассортимента производных циклоалканоиндола и -азаиндола, обладающих биологической активностью, в частности ингибирующей высвобождение ассоциированных с аполипопротеином В-100 липопротеинов активностью.

Поставленная задача решается предлагаемыми производными циклоалкано-индола и -азаиндола общей формулы (I) в которой R¹ и R² вместе со связывающей их двойной связью означают фенильное или пиридильное кольцо или кольцо формулы в которой R⁸ означает водород или неразветвленный или разветвленный алкил с 1 - 4 атомами углерода, R³ и R⁴ вместе со связывающей их двойной связью означают фенильное кольцо или четырех - до восьмичленный циклоалкеновый остаток, причем указанные для R¹/R² и R³/R⁴ кольца незамещены или замещены 1 - 3 одинаковыми или различными заместителями, выбранными из группы, включающей трифторметил, неразветвленную или разветвленную алкокси-группу с 1 - 6 атомами углерода, неразветвленный или разветвленный алкоксикарбонил с 1 - 6 атомами углерода в алкоксильной части, неразветвленный или разветвленный алкил с 1-6 атомами углерода, незамещенный или замещенный гидрокси-группой, D - водород, циклоалкил с 4-12 атомами углерода, или неразветвленный или разветвленный алкил с 1-12 атомами углерода, E - группа -CO- или - CS-, L - атом кислорода, серы, или группа -NR⁹, в которой R⁹ означает водород или неразветвленный или разветвленный алкил с 1-6 атомами углерода, незамещенный или замещенный гидрокси-группой или фенилом, R⁵- фенил, пиридил, тиенил, незамещенные или замещенные 1 - 3 одинаковыми или различными заместителями, выбранными из группы, включающей нитро-группу, карбокси-группу, галоген, неразветвленный или разветвленный алкоксикарбонил с 1-6 атомами углерода в алкоксильной части, неразветвленный или разветвленный алкил с 1-6 атомами углерода, незамещенный или замещенный гидрокси-группой, и/или группу формулы - OR¹⁰ или -NR¹¹/R¹², в которой R¹⁰ означает водород или неразветвленный или разветвленный алкил с 1-6 атомами углерода или алкенил с 2-6 атомами углерода, a R¹¹ и R¹² одинаковые или различные и означают водород, неразветвленный или разветвленный алкил с 1-6 атомами углерода или неразветвленный или разветвленный ацил с 1-8 атомами углерода, незамещенный или замещенный группой формулы -NR¹³/R¹⁴, в которой R¹³ и R¹⁴ одинаковые или различные и означают водород или неразветвленный или разветвленный ацил с 1-8 атомами углерода, R⁶ - водород, карбокси-группа, неразветвленный или разветвленный алкоксикарбонил с 1-5 атомами углерода в алкоксильной части или неразветвленный или разветвленный алкил с 1-6 атомами углерода, незамещенный или замещенный гидрокси-группой или группой формулы -O-CO-R¹⁵, в которой R¹⁵ означает фенил, незамещенный или одно- до трехкратно замещенный неразветвленным или разветвленным алкилом с 1-5 атомами углерода, или неразветвленный или разветвленный алкил или алкенил 1-22 атомами углерода, незамещенный или замещенный группой формулы -OR¹⁶, в которой R¹⁶ означает водород, бензил, или неразветвленный или разветвленный ацил с 1-6 атомами углерода, R⁷ - водород, или R⁶ и R⁷ вместе означают группу формулы = О, смесью их изомеров или их отдельными изомерами и их фармацевтически приемлемыми солями.

В качестве фармацевтически приемлемых солей можно назвать, например, соли предлагаемых соединений с минеральными кислотами, карбоновыми кислотами или сульфокислотами. Особенно предпочтительными являются, например, соли с хлористоводородной кислотой, бромистоводородной кислотой, серной кислотой, фосфорной кислотой, метансульфокислотой, этансульфокислотой, толуолсульфокислотой, бензолсульфокислотой, нафталиндисульфокислотой, уксусной кислотой, пропионовой кислотой, молочной кислотой, винной кислотой, лимонной кислотой, фумаровой кислотой, малеиновой кислотой или бензойной кислотой.

Дальнейшими фармацевтически приемлемыми солями являются соли металлов предлагаемых соединений или их аммониевые соли, содержащие свободную карбоксильную группу. Особенно предпочтительными являются, например, натриевые, калиевые, магниевые и кальциевые соли, а также аммониевые соли, производные от аммиака или органических аминов, как, например, этиламина, диэтиламина, триэтиламина, диэтаноламина, триэтаноламина, дициклогексиламина, диметиламиноэтанола, аргинина, лизина, этилендиамина или 2-фенилэтиламина.

Предлагаемые соединения могут иметься в стереоизомерных формах, имеющихся или в виде изображения и зеркального изображения (энантиомеры), или не имеющихся в виде изображения и зеркального изображения (диастереомеры). Изобретение относится и к энантиомерам, и к диастереомерам, и их смесям. Смеси энантиомеров и диастереомеров можно известным методом разделять на чистые стереоизомерные компоненты.

Предпочтительными являются соединения общей формулы (I), в которой R¹ и R² вместе со связывающей их двойной связью означают фенильное или пиридильное кольцо или кольцо формулы которой R⁸ означает водород или неразветвленный или разветвленный алкил с 1 - 3 атомами углерода, R³ и R⁴ вместе со связывающей их двойной связью означают фенильное кольцо или циклопентен, циклогексен, циклогептен, циклооктен, причем указанные для R¹/R² и R³/R⁴ кольца незамещены или замещены 1 или 2 одинаковыми или различными заместителями, выбранными из группы, включающей трифторметил, неразветвленную или разветвленную алкокси- группу с 1-4 атомами углерода, неразветвленный или разветвленный алкоксикарбонил с 1-4 атомами углерода в алкоксильной части и неразветвленный или разветвленный алкил с 1-4 атомами углерода, незамещенный или замещенный гидрокси-группой, D - водород, циклобутил, циклопентил, циклогексил, циклопентил, циклооктил или неразветвленный или разветвленный алкил с 1-10 атомами углерода, E - группа -CO- или CS-, L - атом кислорода, серы, или группа формулы -NR⁹, в которой R⁹ означает водород или неразветвленный или разветвленный алкил с 1-5 атомами углерода, незамещенный или замещенный гидрокси-группой или фенилом, R⁵ - фенил, пиридил, тиенил, незамещенные или замещенные 1 или 2 одинаковыми или различными заместителями, выбранными из группы, включающей фтор, хлор, бром, неразветвленный или разветвленный алкоксикарбонил с 1-4 атомами углерода в алкоксильной части, неразветвленный или разветвленный алкил с 1- 5 атомами углерода, незамещенный или замещенный гидрокси-группой, и/или группу формулы -OR¹⁰ или -NR¹¹R¹², в которых R¹⁰ означает водород или неразветвленный или разветвленный алкил с 1-4 атомами углерода или алкенил с 2-4 атомами углерода, a R¹¹ и R¹² одинаковые или различные и означают водород, неразветвленный или разветвленный алкил с 1-5 атомами углерода или неразветвленный или разветвленный ацил с 1-6 атомами углерода, незамещенный или замещенный группой формулы -NR¹³R¹⁴, в которой R¹³ и R¹⁴ одинаковые или различные и означают водород или неразветвленный или разветвленный ацил с 1-6 атомами углерода, R⁶ - водород, карбокси-группа, неразветвленный или разветвленный алкоксикарбонил с 1-4 атомами углерода в алкоксильной части или неразветвленный или разветвленный алкил с 1-5 атомами углерода, незамещенный или замещенный гидрокси-группой или группой формулы -O-CO-R¹⁵, в которой R¹⁵ означает фенил, незамещенный или одно- до трехкратно замещенный неразветвленным или разветвленным алкилом с 1-4 атомами углерода, или неразветвленный или разветвленный алкил или алкенил с 2-20 атомами углерода, незамещенный или замещенный группой формулы -OR¹⁶, в которой R¹⁶ означает водород, бензил, или неразветвленный или разветвленный ацил с 1 - 5 атомами углерода, R⁷ - водород, или R⁶ и R⁷ вместе означают группу формулы =О, смесь их изомеров или отдельные изомеры и их фармацевтически приемлемые соли.

Особенно предпочтительными являются соединения общей формулы (I), в которой R¹ и R² вместе со связывающей их двойной связью означают фенильное или пиридильное кольцо или кольцо формулы в которой R⁸ означает водород или метил, R³ и R⁴ вместе со связывающей их двойной связью означают фенильное кольцо или циклопентен, циклогексен, циклогептен, циклооктен, причем указанные для R¹/R² и R³/R⁴ кольца незамещены или замещены 1 или 2 одинаковыми или различными заместителями, выбранными из группы, включающей трифторметил, неразветвленную или разветвленную алкокси-группу с 1 - 3 атомами углерода, неразветвленный или разветвленный алкоксикарбонил с 1-3 атомами углерода в алкоксильной части и неразветвленный или разветвленный алкил с 1-3 атомами углерода, незамещенный или замещенный гидрокси-группой, D - водород, циклопентил, циклогексил, циклогептил, циклооктил или неразветвленный или разветвленный алкил с 1-6 атомами углерода, E - группа -CO- или CS-, L - атом кислорода, серы, или группа формулы -NR⁹ в которой R⁹ означает водород или неразветвленный или разветвленный алкил с 1 - 4 атомами углерода, незамещенный или замещенный гидрокси-группой или фенилом, R⁵ - фенил, пиридил, тиенил, незамещенные или замещенные 1 или 2 одинаковыми или различными заместителями, выбранными из группы, включающей нитро-группу, карбокси-группу, фтор, хлор, бром, неразветвленный или разветвленный алкоксикарбонил с 1-3 атомами углерода в алкоксильной части, неразветвленный или разветвленный алкил с 1 - 4 атомами углерода, незамещенный или замещенный гидрокси-группой, и/или группу формулы -OR¹⁰ или -NR¹¹R¹², в которых R¹⁰ означает водород или неразветвленный или разветвленный алкил с 1-3 атомами углерода или алкенил с 2-3 атомами углерода, а R¹¹ и R¹² одинаковые или различные и означают водород, неразветвленный или разветвленный алкил с 1 - 4 атомами углерода или неразветвленный или разветвленный ацил с 1-5 атомами углерода, незамещенный или замещенный группой формулы -NR¹³R¹⁴, в которой R¹³ и R¹⁴ одинаковые или различные и означают водород или неразветвленный или разветвленный ацил с 1-6 атомами углерода, R⁶ - водород, карбокси-группа, неразветвленный или разветвленный алкоксикарбонил с 1 - 3 атомами углерода в алкоксильной части или неразветвленный или разветвленный алкил с 1-4 атомами углерода, незамещенный или замещенный гидрокси-группой или группой формулы -O-CO-R¹⁵, в которой R¹⁵ означает фенил, незамещенный или одно- или трехкратно замещенный неразветвленным или разветвленным алкилом с 1-3 атомами углерода, или неразветвленный или разветвленный алкил с 1-19 атомами углерода или алкенил с 2-19 атомами углерода, незамещенный или замещенный группой формулы -OR¹⁶, в которой R¹⁶ означает водород, бензил, или неразветвленный или разветвленный ацил с 1-4 атомами углерода, R⁷ - водород, или R⁶ и R⁷ вместе означает группу формулы =O, смесь их изомеров или отдельные изомеры и их фармацевтически приемлемые соли.

Предлагаемые соединения общей формулы (I) можно получать, например, путем перевода соединения общей формулы (II) в которой R¹, R², R³, R⁴ и D имеют вышеуказанные значения, в амид с использованием соединения общей формулы (III) в которой R⁵ имеет вышеуказанные значения, R¹⁷ имеет указанное для R⁶ значение, за исключением карбокси-группы, в среде инертного растворителя и в присутствии оснований и/или вспомогательных веществ, в случае необходимости с последующей вариацией функциональных групп путем гидролиза, этерификации или восстановления.

Получение предлагаемых соединений можно описать, например, с помощью следующей схемы I (см. в конце описания).

В качестве растворителя при амидировании пригодны инертные органические растворители, не изменяющиеся в условиях реакции. К ним относятся простые эфиры, как, например, простой диэтиловый эфир или тетрагидрофуран, галогенированные углеводороды, как, например, дихлорметан, трихлорметан, тетрахлорметан, 1,2-дихлор-этан, трихлорэтан, тетрахлорэтан, трихлорэтилен, углеводороды, как, например, бензол, ксилол, толуол, гексан, циклогексан, или нефтяные фракции, нитрометан, диметилформамид, ацетон, ацетонитрил и триамид гексаметилфосфорной кислоты. Кроме того, можно использовать смеси указанных растворителей. Особенно предпочтительными являются дихлорметан, тетрагидрофуран, ацетон или диметилформамид.

В качестве оснований пригодны неорганические или органические основания. Предпочтительными являются гидроокиси щелочных металлов, как, например, гидроокись натрия или калия, гидроокиси щелочноземельных металлов, как, например, гидроокись бария, карбонаты щелочных металлов как, например, карбонат натрия или калия, карбонаты щелочноземельных металлов, как, например, карбонат кальция, или алкоголяты щелочных или щелочноземельных металлов, как, например, метанолат или этанолат натрия или калия или трет.бутилат калия, органические амины (триалкиламины с 1 - 6 атомами углерода в каждой алкильной части), как, например, триэтиламин, или гетероциклы, как 1,4-диазабицикло[2.2.2]октан, 1,8-диазабицикло[5.4.0]-ундец-7-ен, пиридин, диаминопиридин, метилпиперидин или морфолин. Кроме того, в качестве оснований можно также использовать щелочные металлы, как, например, натрий, и их гидриды, как, например, гидрид натрия. Предпочтительными являются карбонаты натрия и калия и триэтиламин.

Основание используют в количестве 1 - 5 моль, предпочтительно 1 - 3 моль на моль соединения общей формулы (II).

Реакцию обычно осуществляют при температуре от 0 до 150^oC, предпочтительно от +20 до +110^oC, при атмосферном давлении или при повышенном или сниженном давлении, составляющем, например, 0,5 - 5 бар. Обычно работают при атмосферном давлении.

В случае необходимости амидирование можно осуществлять более интенсивным путем с использованием галоидангидридов кислот, которые можно получать из соответствующих кислот путем взаимодействия с тионилхлоридом, трихлоридом фосфора, пентахлоридом фосфора, трибромидом фосфора или оксалилхлоридом.

При необходимости вышеуказанные основания можно использовать также в качестве связывающих кислоту вспомогательных веществ при амидировании.

В качестве вспомогательных агентов пригодны также реагенты дегидратации. К ним относятся, например, карбодиимиды, как диизопропилкарбодиимид, дициклогексил-карбодиимид или гидрохлорид N-(3-димeтилaминoпpoпил)-N'-этилкapбoдиимидa, соединения карбонила, как, например, карбонилдиимидазол, 1,2-оксазолиевые соединения, как, например, 3-сульфонат 2-этил-5-фенил-1,2- оксазолия, ангидрид пропанфосфорной кислоты, изо-бутилхлороформат, гексил-фторфосфат бензотриазолил-окси-трис-(диметиламино)фосфония, амид сложного дифенилового эфира фосфоновой кислоты, хлорангидрид метансульфокислоты, в случае необходимости в присутствии основания, как, например, триэтиламина, N-этилморфолина, N-метилпиперидина или дициклогексилкарбодиимида и N- оксисукцинимида.

Связывающие кислоту агенты и агенты дегидратации обычно используют в количестве от 0,5-3 моль, предпочтительно 1 - 1,5 моль на моль соответствующей карбоновой кислоты.

Вариацию функциональных групп, например, путем гидролиза, этерификации или восстановления, а также разделение изомеров и получение солей осуществляют путем известных методов.

Карбоновые кислоты общей формулы (II) являются новыми, так что они представляют собой дальнейший объект изобретения. Их можно получать путем взаимодействия соединения общей формулы (IV) в которой D имеет вышеуказанные значения, T - типичная отщепляемая группа, как, например, хлор, бром, йод, тозилат или мезилат, предпочтительно бром, R¹⁸ - алкил с 1 - 4 атомами углерода, с соединением общей формулы (V) в которой R¹, R², R³ и R⁴ имеют вышеуказанные значения, в среде инертного растворителя, в случае необходимости в присутствии основания.

В качестве растворителя пригодны обычные органические растворители, не изменяющиеся в условиях реакции. Предпочтительными являются простые эфиры, как, например, простой диэтиловый эфир, диоксан, тетрагидрофуран, простой гликольдиметиловый эфир, углеводороды, как, например, бензол, ксилол, толуол, гексан, циклогексан, или нефтяные фракции, галогенированные углеводороды, как, например, дихлорметан, трихлорметан, тетрахлорметан, дихлорэтилен, трихлорэтилен или хлорбензол, сложный эфир уксусной кислоты, триэтиламин, пиридин, диметилсульфоксид, диметилформамид, триамид гексаметилфосфорной кислоты, ацетонитрил, ацетон или нитрометан. Кроме того, можно использовать смеси указанных растворителей. Особенно предпочтительными являются диметилформамид и тетрагидрофуран.

В качестве оснований пригодны неорганические или органические основания. Предпочтительными являются гидроокиси щелочных металлов, как, например, гидроокись натрия или калия, гидроокиси щелочноземельных металлов, как, например, гидроокись бария, карбонаты щелочных металлов, как, например, карбонат натрия или калия, карбонаты щелочноземельных металлов, как, например, карбонат кальция, или алкоголяты щелочных или щелочноземельных металлов, как, например, метанолат или этанолат натрия или калия или трет.бутилат калия, органические амины (триалкиламины с 1 - 6 атомами углерода в каждой алкильной части), как, например, триэтиламин, или гетероциклы, как 1,4-диазабицикло[2.2.2] октан, 1,8- диазабицикло[5.4.0]-ундец-7-ен, пиридин, диаминопиридин, метилпиперидин или морфолин. Кроме того, в качестве оснований можно также использовать щелочные металлы, как, например, натрий, и их гидриды, как, например, гидрид натрия. Предпочтительными являются гидрид натрия, карбонат калия, триэтиламин, пиридин, трет. бутилат калия, 1,8-диазабицикло[5.4.0]ундец-7-ен и 1,4- диазабицикло[2.2.2]октан.

Обычно основание применяют в количестве от 0,05 моль до 10 моль, предпочтительно от 1 моль до 2 моль на моль соединения общей формулы (IV).

Взаимодействие соединения общей формулы (IV) с соединением общей формулы (V) целесообразно осуществляют при температуре от -30 до +100^oC, предпочтительно от -10 до +60^oC, причем обычно работают при атмосферном давлении, хотя также возможно работать при повышенном или сниженном давлении, составляющем, например, 0,5 - 5 бар.

Соединения общей формулы (III) известны.

Соединения общих формул (VI) и (V) известны, или их можно получать аналогично известным методам.

Предлагаемые соединения общей формулы (I) обладают неожиданным диапазоном фармакологического действия.

Их можно использовать в качестве активных веществ в лекарствах для уменьшения изменений на стенках сосудов, а также для лечения коронарных сердечных заболеваний, недостаточности сердца, нарушений функций мозга, ишемических заболеваний головного мозга, апоплексии, нарушений местного кровообращения, нарушений микроциркуляции и тромбозов. При окклюзии сосудов решающую роль играет пролиферация гладких мышечных клеток. Предлагаемые соединения способны к торможению такой пролиферации и, таким образом, атеросклеротических процессов. Предлагаемые соединения отличаются способностью к снижению ассоциированных с аполипопротеином В-100 липопротеинов (липопротеинов очень низкой плотности и продуктов его разложения, например, липопротеина низкой плотности), аполипопротеинов В-100, триглицеридов и холестерина, то есть, они обладают ценными фармакологическими свойствами. Неожиданно действие предлагаемых соединений заключается прежде всего в снижении или полном ингибировании образования и/или высвобождения ассоциированных с аполипопротеином В-100 липопротеинов из печеночных клеток, что приводит к снижению уровня липопротеинов очень низкой плотности в плазме. Такое снижение уровня липопротеинов очень низкой плотности обязательно связано со снижением уровня аполипопротеина В-100, липопротеина низкой плотности, триглицеридов и холестерина, то есть, одновременно уменьшаются несколько из вышеприведенных факторов риска, способствующих изменениям стенок сосудов. Поэтому другим объектом изобретения является фармацевтическая композиция, ингибирующая высвобождение ассоциированных с аполипопротеином В- 100 липопротеинов, содержащая по меньшей мере один фармацевтически приемлемый носитель и по меньшей мере одно соединение вышеуказанной общей формулы (I) в виде смеси изомеров или отдельного изомера, в свободном виде или в виде фармацевтически приемлемой соли, в эффективном количестве.

Биологическое действие соединений общей формулы (I) доказывается в нижеследующих примерах.

1. Торможение высвобождения ассоциированных с аполипопротеином В-100 (АроВ-100) липопротеинов Опыт по торможению высвобождения ассоциированных с АроВ-100 липопротеинов из печеночных клеток осуществляли in vitro с использованием выращиваемых печеночных клеток, предпочтительно клеток человеческой линии HepG2. Данные клетки выращивают в стандартных условиях в среде для культур эукариотных клеток, предпочтительно в среде RPMI 1640, содержащей 10% фетальной телячей сыворотки. Клетки HepG2 синтетизуют и выделяют в надосадочную жидкость частицы ассоциированного с аполипопротеином В-100 липопротеина, имеющие в принципе похожую имеющимся в плазме частицам липопротеида очень низкой плотности и липопротеида низкой плотности структуру. В случае человеческого липопротеина низкой плотности наличие этих частиц можно доказать с помощью иммунологического анализа, который осуществляют с использованием антител против человеческого липопротеина низкой плотности, индуцированных в стандартных условиях в кролике. Антитела против липопротеина низкой плотности (Kan-anti-LDL-Ak) очищали путем аффинной хроматографии на иммуносорбенте с использованием человеческого липопротеина низкой плотности. Очищенные Kan-anti- LDL-Ak адсорбируют к пластмассовой поверхности. Целесообразно их адсорбируют к пластмассовой поверхности микротитровых пластинок, снабженных 96 углублениями, предпочтительно плиток типа MaxiSorp. Если в надосадочной жидкости клеток Hep-G2 имеются ассоциированные с аполипопротеином В-100 частицы, то они могут связываться с Kan- anti/LDL-Ak, причем образуется иммунокомплекс, связанный с пластмассовой поверхностью. Не связанные протеины удаляют путем промывки. Наличие связанного с пластмассовой поверхностью иммунокомплекса доказывают с помощью моноклональных антител, индуцированных в стандартных условиях против человеческого липопротеина низкой плотности с последующей очисткой. Данные антитела конъюгировали с ферментом перкосидаза. Последняя в присутствии перекиси водорода превращает бесцветный субстрат ТМВ в окрашенный продукт. После подкисления реакционной смеси путем добавления серной кислоты определяют специфическое светопоглощение при 450 нм, представляющее собой меру количества ассоциированных с аполипопротеином В-100 частиц, выделенных клетками HepG2 в надосадочную жидкость.

Неожиданно предлагаемые соединения тормозят высвобождение ассоциированных с аполипопротеином В-100 частиц. Величиной KT₅₀ указывается концентрация соответствующего соединения, приводящая к 50%-ному снижению светопоглощения по сравнению с контролем (растворитель без активного вещества).

Соединение - KT₅₀ примера N - [10^-9 моль/л] 1 - 2,8 5 - 1,1 31 - 170 50 - 29 2. Определение секреции липопротеинов очень низкой плотности in vivo на хомяке Действие предлагаемых соединений на секрецию липопротеинов очень низкой плотности in vivo исследуют на хомяке. Для этого хомяки после предварительной дачи атропина (83 мг/кг подкожно) наркотизуют путем дачи кетавета (83 мг/кг подкожно) и нембутала (50 мг/кг внутрибрюшинно). При отсутствии рефлексов у животных их открывают, чтобы делать доступной яремную вену, в которую вводят канюлю. Затем дают 0,25 мл/кг 20%-ного раствора Triton WR-1339 в физиологическом растворе поваренной соли. Этот детергент ингибирует липопротеинлипазу и, таким образом, приводит к повышению уровня триглицерида вследствие отсутствия катаболизма выделяемых частиц липопротеинов очень низкой плотности. Поэтому повышение уровня триглицерида можно взять в качестве меры секреции липопротеинов очень низкой плотности. Перед дачей детергента и по истечении одного часа и двух часов после его дачи берут кровь путем пункции ретроорбитального венозного сплетения. Кровь инкубируют в течение двух часов при комнатной температуре и при температуре 4^oC в течение ночи для полного завершения свертывания. После этого подвергают центрифугированию в течение 5 минут при 10000 g. С помощью модифицированного ферментного анализа, который можно приобретать в торговле (анализ Merckotest Trigly-ceride N 14354) определяют концентрацию триглицерида в полученной таким образом сыворотке. Для этого к 100 мкл сыворотки в снабженных 96 углублениями плитках добавляют 100 мкл исследуемого соединения и инкубируют при комнатной температуре в течение 10 минут. Затем в автоматическом считывающем устройстве (SLT - Spectra) определяют оптическую плотность при длине волн, составляющей 492 нм. Пробы сыворотки, содержащие триглицерид в слишком высокой концентрации, разбавляют добавлением физиологического раствора поваренной соли. Концентрацию триглицерида в пробах определяют с помощью параллельно измеряемой стандартной кривой. Исследуемые соединения в данном опыте дают или внутривенно непосредственно перед дачей детергента, или орально, или подкожно перед вводом анестезирующих средств.

Соединение - ЭД₅₀ [мг/кг] примера N - орально 2 - 10 - 15 5 - 3 - 6 7 - 10 - 20 3. Торможение абсорбции триглицерида в кишке крыса in vivo Соединения, подлежащие исследованию относительно их тормозящего абсорбцию триглицерида in vivo действия, дают орально мужским крысам породы Wistar весом тела 170 - 230 г. Для этого 18 часов перед дачей соответствующего соединения животных разделяют на группы по 6 животных, и их больше не кормят, но питьевую воду предоставляют без ограничения. Животным контрольных групп дают водную трагантную суспензию или трагантную суспензию, содержащую оливковое масло. Содержащую оливковое масло трагантную суспензию получают с использованием смесителя марки Ultra-Turrax. Подлежащие исследованию соединения суспендируют непосредственно перед дачей в соответствующей содержащей оливковое масло трагантной суспензии, также с использованием смесителя Ultra-Turrax.

Перед дачей через желудочный зонд для определения содержания триглицерида в базальной сыворотке у каждой крысы берут кровь путем пункции ретроорбитального венозного сплетения. Затем содержащую трагант суспензию, трагантную суспензию без соединения (контроль) и соединения в суспендированном в содержащей оливковое масло трагантной суспензии виде дают животным натощак через желудочный зонд. Обычно далее берут кровь для определения повышения концентрации триглицерида в сыворотке после приема пищи час, два часа и три часа после дачи соединения через желудочный зонд.

Пробы крови подвергают центрифугированию, и после получения сыворотки концентрацию триглицеридов определяют путем фотометрии с использованием аппарата EPOS-Analyzer 5060 (фирма Eppendorf Geratebau, Netheler & Hinz GmbH/ г. Гамбург, DE). Определение триглицеридов осуществляют исключительно с применением ферментов путем стандартного ультрафиолетового анализа.

Данные по повышению триглицерида в сыворотке после приема пищи получают путем вычитания исходного количества триглицерида каждого животного от концентрации триглицерида после приема пищи (час, два часа и три часа после дачи исследуемого соединения).

Получают средние величины разностей (в ммоль/л) животных в каждой группе в каждый момент (час, два часа, три часа), и данные средние величины повышения уровня триглицерида в сыворотке (TG) обработанных исследуемым соединением животных сравнивали с животными, которым дали лишь содержащую масло трагантную суспензию.

Определяют также содержание триглицерида в сыворотке животных, которым дали лишь трагант. Действие исследуемого соединения в каждый момент (по истечении часа, двух часов, трех часов) рассчитывают следующим образом, его выражают в % нагруженной маслом контроли.

Действие 10 мг исследуемого соединения на кг веса тела при оральной даче на повышение триглицерида (%) по истечении двух часов после нагрузки триглицеридом в сыворотке крыс, которые не ели. Повышение триглицерида в сыворотке контрольных животных, нагруженных маслом, в отношении уровня триглицерида в сыворотке контрольных животных, которым дали трагант, соответствует 100%. Каждая группа содержит 6 животных.

Повышение триглицерида в сыворотке в % по истечении 2 часов после дачи Количество триглицерида - 100 Контроль (трагант) - 0 Исследуемое соединение в количестве 10 мг/кг веса тела, оральная дача Пример 10 - 34 Пример 66 - 67 Пример 54 - 54 Пример 71 - 18 Пример 5 - -16 Пример 20 - 35 Для статистической оценки используют Student's t-тест после предварительной проверки гомогенности исследуемых соединений.

Соединения, которые в один из моментов измерения снижают повышение триглицерида в сыворотке после приема пищи по меньшей мере на 30% по сравнению с контролем (p < 0,05), рассматривают как имеющие фармакологическое действие.

Новые производные циклоалкано-индола и -азаиндола общей формулы (I) можно также использовать вместе с ингибитором глюкозидазы и/или амилазы для терапии семейной гиперлипидемии, ожирения и сахарного диабета. Ингибиторы глюкозидазы и/или амилазы представляют собой, например, акарбазу, адипозин, воглибазу, миглитол, эмиглитат, фермент MDL-25637, камиглибазу (MDL-73945), тендаминстат, фермент AI-3688, трестатин, прадимилин-Q и сальбостатин.

Предпочтительной является комбинация акарбазы, миглитола, эмиглитата или воглибазы с одним из вышеприведенных соединений общей формулы (I).

Новые активные вещества можно известным образом переводить в обычные препараты, как, например, таблетки, драже, капсулы, пилюли, грануляты, аэрозоли, сиропы, эмульсии, суспензии или растворы, с использованием инертных, нетоксичных, фармацевтически приемлемых носителей или растворителей. При этом обладающее терапевтическое действие соединения имеется в концентрации примерно 0,5 -90% от веса общей смеси, то есть в количестве, обеспечивающем достижение указанных доз.

Препараты получают, например, путем добавления растворителей и/или носителей к активным веществам, в случае необходимости с использованием эмульгаторов и/или диспергаторов, причем, например, в случае использования воды в качестве разбавителя можно в случае необходимости использовать органический растворитель в качестве вспомогательного растворителя.

Препараты дают обычным методом, предпочтительно орально или парентерально, в частности чрезъязычно или внутривенно.

В случае парентеральной дачи можно использовать раствор активного вещества с применением пригодных жидких носителей.

В общем для достижения желаемого эффекта целесообразной оказалась дача активного вещества в количестве примерно 0,001 - 1 мг на кг веса тела, предпочтительно примерно 0,01 - 0,5 мг на кг веса тела, если его дают внутривенно, и в количестве примерно 0,01 -20 мг на кг веса тела, предпочтительно 0,1-10 мг на кг веса тела в случае оральной дачи.

Однако, может требоваться отклонение от указанных количеств в зависимости от веса тела или способа дачи активного вещества, от индивидуальной реакции на активное вещество, вида препарата и момента или промежутков дачи. Таким образом, в некоторых случаях может быть достаточным использовать меньше указанного минимального количества активного вещества, в то время как в других случаях необходимо будет дать больше указанного максимума. В случае дачи активного вещества в большем количестве может рекомендоваться дача нескольких отдельных доз, даваемых в течение суток.

В нижеследующих примерах для изомеров использованы следующие сокращения: diaA = диастереомер с более высоким значением R_f diaB = диастереомер с более низким значением R_f ent = энантиомер R = R-энантиомер rac = рацемат rac dia A = рацемический диастереомер с более высоким значением R_f rac dia В = рацемический диастереомер с более низким значением R_f S = S-энантиомер Кроме того, использованы еще следующие сокращения: Ac = ацетил AcOH = уксусная кислота iBu = изо-бутил nBu = н-бутил sBu = с-бутил tBu = трет.бутил Et = этил cHept = циклогептил cHex = циклогексил Me = метил cPent = циклопентил nPent = н-пентил Ph = фенил iPr = изопропил TMS = тетраметилсилан EI = электронная ионизация CI = ударная ионизация MS = масс-спектр FAB = бомбардировка быстрыми атомами F_p = точка плавления В таблицах указаны следующие элюенты: Растворитель - Обозначение Дихлорметан и метанол 20:1 - A Дихлорметан и метанол 50:1 - B Дихлорметан и этанол 20:1 - C Дихлорметан и этанол 50:1 - D Петролейный эфир и сложный этиловый эфир уксусной кислоты 1:1 - E Дихлорметан, метанол и уксусная кислота 90:10:2 - F Петролейный эфир и сложный этиловый эфир уксусной кислоты 2:1 - G Петролейный эфир и сложный этиловый эфир уксусной кислоты 10:1 - H Толуол - I Толуол и сложный этиловый эфир уксусной кислоты 1:1 - K Петролейный эфир и сложный этиловый эфир уксусной кислоты 5:1 - L Дихлорметан - M Петролейный эфир и сложный этиловый эфир уксусной кислоты 20:1 - N Дихлорметан и метанол 10:1 - O Циклогексан и сложный этиловый эфир уксусной кислоты 1:1 - P Толуол и сложный этиловый эфир уксусной кислоты 9:1 - Q Толуол и сложный этиловый эфир уксусной кислоты 8:1 - R Петролейный эфир и сложный этиловый эфир уксусной кислоты 1:2 - S Дихлорметан и этанол 5:1 - T Дихлорметан и этанол 10:1 - U Используемый для тонкослойной хроматографии элюент ВАВА получают следующим образом: Смешивают 87,9 мл водного 0,06667-молярного раствора бифосфата калия и 12,1 мл водного 0,06667-молярного раствора бифосфата динатрия. 60 мл получ