Узкополи- и монодисперсный водорастворимый олигомер, способ его получения, фармацевтический препарат, способ ингибирования активности вирусов

Узкополи- и монодисперсный водорастворимый олигомер, способ его получения, фармацевтический препарат, способ ингибирования активности вирусов

Реферат

 

Описывается узкополи- и монодисперсный водорастворимый олигомер, который имеет отношение полидисперсности 1,0 - 1,3 и который представляет полимочевину формулы (I), где R - атом водорода, С₁-С₄, алкильная группа, фенильная группа или фенильная группа, замещенная 1 - 2 фрагментами R¹ и имеющая до 3 заместителей, независимо выбранных из атомов хлора или брома или С₁-С₄ алкильных групп; R¹ - SO₃R², - CO₂R², - PO₃(R²)₂ или - OPO₃R²; R² - атом водорода или фармацевтически приемлемый катион; m = 0 или 1 при условии, что если m = 0, R является атомом водорода; Х - ароматический заместитель, значения которого описаны в п.1 формулы; Y - -CO₂-, -C=C-, -N=N- или (а), n = 3 - 15, целое число; R³ представляет -R или -X-NH₂, где R и Х имеют приведенные выше значения. Соединения проявляют биологическую активность против вируса человеческого иммунодефицита. Описывается также фармацевтический препарат на их основе, способ получения олигомера, способ ингибирования активности вирусов. 6 с. и 20 з.п. ф-лы, 15 ил., 3 табл.

Изобретение касается узкополи- и монодисперсных анионных олигомеров, их получения, препаратов и применения в качестве ценных средств против активности вируса человеческого иммунодефицита. Эти монодисперсные анионные олигомеры, таким образом, применимы при лечении синдрома приобретенного иммунодефицита (СПИД) и при лечении заболеваний, вызванных вирусом Herpes Simplex (HSV) типа 1 и 2 и цитомегаловирусом.

Большое число исследований ведется в настоящее время по разработке терапии и методов лечения вирусных инфекций у людей и животных, особенно вызванных вирусом Herpes Simplex (HSV) типов 1 и 2 и СПИД и связанного со СПИД комплекса (КСС). Частота СПИД и КСС у людей увеличивается с особенно тревожащей скоростью. Пятилетний срок жизни заболевших СПИД удручает, а больные СПИД, чья иммунная система серьезно нарушена инфекцией, страдают от многочисленных инфекций, вызванных условнопатогенными возбудителями, включая саркому Капоши и пневмонию, вызываемую Pheumocystis carinii. Способ лечения СПИД неизвестен, и текущая терапия в большинстве случаев применяется без достаточных доказательств эффективности и имеет многочисленные неблагоприятные побочные эффекты. Страх перед болезнью привел к социальному остракизму и дискриминации в отношении заболевших или подозреваемых на заболевание людей.

Ретровирусы являются классом вирусов, содержащих рибонуклеиновую кислоту (РНК), которые реплицируются с помощью обратной транскриптазы с образованием цепочки комплементарной ДНК (кДНК), из которой продуцируется двухцепочечная провирусная ДНК. Эта провирусная ДНК затем случайным образом включается в хромосомную ДНК клетки-хозяина, делая возможной репликацию вируса путем более поздней трансляции вирусной информации с интегрированного вирусного генома.

Многие из известных ретровирусов являются онкогенными или вызывающими опухоль. В самом деле, первые два открытых человеческих ретровируса, обозначенных как вирусы I и II человеческого T-клеточного лейкоза или HTLV-I и II, как было обнаружено, вызывают редкие лейкозы у людей после инфицирования T-лимфоцитов. Третий такой человеческий вирус, который был открыт, HTLV-III, теперь называемый ВИЧ, как было обнаружено, вызывает гибель клеток после инфицирования T-лимфоцитов, и был идентифицирован как этиологический агент СПИД и КСС.

Белок оболочки ВИЧ представляет собой гликопротеин в 160 кДа. Этот белок расщепляется протеазой с получением наружного белка в 120 кДа, gp 120, и трансмембранного гликопротеина, gp 41. Белок gp 120 содержит аминокислотную последовательность, которая распознает антиген CD 4 на человеческих T-хелперных (T4) клетках.

Один используемый подход состоит в предотвращении связывания ВИЧ с его мишенью, клетками T4 у людей. Эти клетки T4 имеют специфическую область, антиген CD4, который взаимодействует с gp 120. Если это взаимодействие можно будет разорвать, то инфицирование клеток-хозяев может быть подавлено.

Вмешательство в образование вирусного оболочечного белка могло бы предотвратить первичное взаимодействие вируса и клетки-хозяина или последующее слияние, или могло бы предотвратить дупликацию путем предотвращения построения соответствующего гликопротеина, необходимого для завершения мембраны вируса. Сообщалось (смотрите H. A. Blough et al., Biochem. Biophys, Res. Comm. 141(1), 33-38 (1986), что ингибиторы неспецифического гликозилирования, 2-дезокси-D-глюкоза и -гидроксинорвалин подавляют экспрессию гликопротеинов ВИЧ и блокируют образование синцития. Размножение вируса в инфицированных ВИЧ клетках, обработанных этими веществами, останавливается, по-видимому, из-за отсутствия гликопротеина, необходимого для образования мембраны вируса. В другом сообщении говорится (W. Mc Dowell et. al., Biochemistry, 24 (27), 8145-52 (1985), что как было обнаружено, ингибитор гликозилирования, 2-дезокси-2-фтор-D-манноза, подавляет противовирусную активность в отношении инфицированных вирусом гриппа клеток через предотвращение гликозилирования вирусного мембранного белка. В этом сообщении также говорится о том, что была изучена противовирусная активность 2-дезоксиглюкозы и 2-дезокси-2-фторглюкозы и обнаружено, что каждая подавляла гликозилирование вирусного белка с помощью различных механизмов. Однако, как было показано, другие известные ингибиторы гликозилирования не обладают противовирусной активностью. Таким образом, противовирусная активность в отношении вирусов вообще и специфическая противовирусная активность ингибиторов гликозилирования совершенно непредсказуема.

Проводятся в настоящее время по всему миру исследования по разработке терапии и способов лечения инфекций, вызванных HSV типа 1 и 2. Оба HSV типа 1 и 2 демонстрируют предрасположенность к инфицированию эктодермальных тканей, где такое инфицирование вирусом вызывает поражения на коже, ротовой полости, влагалища, конъюктивы и нервной системы. В основном, инфицирование HSV типа 1 (HSV) связано с поражениями ротовой полости, лица и глаз. Инфицирование HSV типа 2 (HSV 2) в основном приводит к генитальным и анальным повреждениям. Инфекции HSV, оставленные нелеченными, часто приводят к слепоте, смерти новорожденных и энцефалиту. Инфекции, вызванные HSV типа 2, находятся на эпидемическом уровне в США в результате передачи половым путем. В настоящее время больше чем примерно двадцать миллионов человек поражены этим заболеванием в этой стране при свыше полумиллиона новых случаев и рецидивов ежегодно. Ежегодные затраты по HSV инфекциям приводят к существенным экономическим потерям на диагностику и лечение. Эпидемиологический контроль инфекций HSV очень слаб из-за того, что большинство населения, до 90%, подвергались заражению этим вирусом.

Человек служит естественным хозяином для инфекций, вызванных HSV типов 1 и 2, причем вирус передается во время тесного персонального контакта. Начальное или первичное инфицирование HSV типа 1 и 2 происходит через разрывы слизистой оболочки. У здорового носителя вирус может быть выделен из слез, слюны, вагинальных и других секретов, даже при отсутствии явного заболевания. Из слизистой оболочки они способны реплицироваться и распространяться в региональные лимфатические узлы. Иногда эти вирусы могут инфицировать клетки системы гемопоэза и вызывать виремию.

Часть затруднений при лечении HSV инфекций возникает из-за способности этих вирусов персистировать в латентной или покоящейся форме. Когда первичная инфекция стихает или отступает, вирус, в основном, остается в латентной форме в чувствительных нервных ганглиях, которые иннервируют место первичной инфекции. При глазных или оральных инфекциях, вызванных HSV типа 1, вирус обычно остается в тройничном ганглии. При инфекции, вызванной HSV типа 2, вирус в основном остается в крестцовом ганглии, обслуживающем гениталии и нижнюю часть брюшной полости. Определяющий период латентности HSV неизвестен, кроме того, этот период может быть нарушен перегревом, охлаждением, солнечным облучением, гормональными и эмоциональными отклонениями или иммуносупрессивными средствами, приводя, в основном, к повторной инфекции.

Лечение HSV инфекций, в основном, неэффективно. Был разработан целый ряд стратегий, чтобы остановить вирус. Эти средства, в основном, подавляют любой одну из ряда специфических функций вируса, таких как (1) адсорбция, (2) утрата оболочки, (3) транскрипция, (4) синтез белка, (5) репликация нуклеиновой кислоты, (6) созревание и (7) выделение.

Большинство антивирусных средств, используемых до сих пор для лечения HSV инфекций, были веществами, которые вмешиваются в синтез вирусной ДНК. Эти вещества включают идоксуридин, цитозин, арабиноза, аденинарабинозид и трифтортимидин. Такие вещества вмешиваются также и в сходные функции клетки-хозяина, что приводит к общим проблемам клеточной токсичности и систематического использования у людей. В настоящее время ацикловир является предпочтительным лекарственным средством для лечения инфекций, вызванных HSV 1 и HSV 2 благодаря его сильному противовирусному действию и незначительной токсичности. Однако, слабая растворимость при высокой дозировке и появление лекарственноустойчивых вирусов ограничивает применение этого лекарства.

Ряд РНК- и ДНК-содержащих вирусов имеют оболочки, в которые включаются кодируемые вирусом гликопептиды. HSV и цитомегаловирус (ЦМВ) являются двумя такими оболочечными вирусами. Инфицирование клетки-хозяина оболочечными вирусами изначально основывается на взаимодействии различных рецепторов на поверхности клетки-хозяина с оболочечными гликопротеинами мембраны вируса. Затем вирусная и клеточная мембраны сливаются, и содержимое вириона вливается в цитоплазму клетки-хозяина. Содержащая гликопротеин оболочка вируса играет важную роль как в первоначальном взаимодействии вириона и клетки-хозяина, так и в последующем слиянии мембран вируса и клетки-хозяина. По-видимому оболочка вируса происходит из клеточной оболочки, но ее специфичность связана с кодируемыми вирусом гликопептидами. Поэтому, ингибитор, способный быть помехой образованию вирусспецифических мембран, может предотвращать образование инфицирующего потомства вируса.

В Европейской заявке 04065512, опубликованной 9 января 1991 г., было раскрыто, что очищенная форма гепарина, сульфатированного полисахарида, связывается через взаимодействие с вирусным белком, который ответственен за распознавание клетки и создает ограниченное подавление инфицирования клетки-хозяина. Однако, гепарин вызывает некоторые побочные эффекты, особенно кровоизлияния и увеличенное время образования сгустка, а также тромбоцитопению. Применение гепарина противопоказано у больных с активным кровотечением или с гемофилией, пурпурой, тромбоцитопенией, внутричерепным кровоизлиянием, бактериальным эндокардитом, активным туберкулезом, повышенной капиллярной проницаемостью, язвенными поражениями желудочно-кишечного тракта, тяжелой гипертонией, угрозой аборта или висцеральной карциномой. Особый интерес представляет противопоказание для применения у больных гемофилией, так как в настоящее время много таких лиц являются сероположительными на ВИЧ.

Давно известно, что определенные синтетические водорастворимые полимеры проявляют широкий спектр биологической активности. (R. M. Ottenbrite b "Biological Activities of Polymers". Amer. Chem. Soc. Symp. Ser. N 182, pp. 205-220, eds. C. E. Carsaher and C.G. Gebelein (1982)). Как было показано, сополимер дивинилового эфира и малеинового ангидрида активен против ряда вирусов, и его использование при химиотерапии рака изучалось в течение ряда лет (Breslow D. S. Pure and Applied, Chem, 46, 103 (1976)). Полиакриловый, полиметакриловый и ряд других алифатических каркасных водорастворимых полимеров, как было показано, также обладают широким спектром биологической активности (W. Regelson et al., Nature 186, 778 (1960)). Европейская заявка 0043974 раскрывает сульфонированные полиуретаны, которые не имеют желаемого противовирусного применения. Британский патент 781479 раскрывает разделение сульфонированных полимочевин путем центрифугирования, но средний показатель полученного молекулярного веса составляет 10000 или более. К сожалению, чрезвычайная токсичность этих полимеров препятствовала их клиническому применению. К тому же эти полимеры имеют высокий молекулярный вес и не способны проходить через почечные мембраны.

Были предприняты попытки преодолеть проблемы токсичности и экскреции путем синтеза алифатических полимеров с низким молекулярным весом (от 1000 до 10000) (P.M. Ottenbrite b в "Biological Activities of Polymers".. Ames. Chem. Soc. Symp. Ser. N 182, pp. 205-220, еds. C.B. Cassaher and C.G. Gebelein (1982)). Было обнаружено, что такие полимеры менее токсичны, но имеют намного сниженную противовирусную активность. Эти алифатические полимеры с низким молекулярным весом могут быть классифицированы как полимеры "дающие статистический клубок". Такие полимеры имеют непредсказуемую конфигурацию из-за гибкости каркасных связывающих групп. Конфигурация полимеров, дающих статистический клубок в растворе, в основном, может быть описана как шарообразная. Хотя механизм действия таких водорастворимых полимеров неизвестен, одно из требований состоит в том, что этот полимер связывается с оболочкой вируса, например, вируса, вызывающего энцефаломиокардит, посредством ионного притяжения, таким образом делая вирус неспособным инфицировать клетки-хозяева.

Дополнительный подход с применением синтетических полимеров состоит в помещении ионных групп на каркас полимера, который проявляет более определенную геометрию. Существуют многочисленные примеры неионных синтетических полимеров, которые показывают более линейную геометрию в неводном растворе, чем проявляют алифатические полимеры, описанные выше (J. Macromol. Sci. Reviews in Macromol. Chem, Phys., С26(4), 551 (1986)). Определяющие факторы, которые вызывают эту структуру нестатистического клубка, сложны и плохо поняты. В основном, такие полимеры имеют или очень ограниченное число вращаемых связей, которые не параллельны оси полимера, или существует водородное связывание или диполярные взаимодействия, которые благоприятствуют линейным структурам. Эти полимеры называются имеющими "жесткий каркас". Полиамид, полученный из терефталевой кислоты и П-диаминобензола (известный под коммерческим названием Кевлар, поставляемый фирмой Du Pont), хорошо известный пример таких полимеров.

Синтетические водорастворимые жесткие полимеры значительно менее обычны, но известно несколько примеров с высоким молекулярным весом (например, смотрите патенты США 4824916 и 4895660). Структура этого класса полимеров, не образующих статистический клубок, приводит к высокой для данного молекулярного веса и концентрации вязкости растворов.

Были обнаружены некоторые анионные олигомеры, которые подавляют репликацию вируса без побочных эффектов, демонстрируемых гепарином. Олигомеры имеют упорядоченное размещение анионов, жесткий каркас и растворимы в воде. Олигомеры в виде полидисперсных смесей были описаны в Европейской заявке 0467185, опубликованной 22 января 1992 г. Хотя в этих заявках раскрываются различные анионные олигомеры, все анионные олигомеры были смесями соединений с различным молекулярным весом.

Ясно, что было бы желательно найти терапию и метод лечения СПИД, КСС и HSV инфекций, которые проявляли бы минимальное побочное действие или его отсутствие и создавали бы явное превосходство над полимерами, ранее используемыми в качестве фармацевтических препаратов. К тому же, такие олигомеры должны, предпочтительно, иметь узкий интервал молекулярных весов, низкую токсичность и легко определяемые характеристики.

В сопровождающих фиг. 1-4 по вертикальной оси откладывается поглощение в УФ области, а по горизонтальной оси - время в минутах.

Фиг. 1 показывает неочищенную полидисперсную сульфонированную полимочевину формулы 1 с широкой полидисперсностью в качестве исходного материала.

Фиг. 2 показывает снижение дисперсности после стадии 1, что определено на странице 11, от грубой полидисперсной сульфонированной мочевины с фиг. 1 до узкой полидисперсности сульфонированной полимочевины, как одной из нескольких фракций.

Фиг. 3 показывает комбинацию фракций с 7 по 17 при гельфильтрационной хроматографии сырого полидисперсного олигомера с фиг. 1, в качестве рекомбинации фракций с фиг. 2.

Фиг. 4 показывает монодисперсный олигомер сульфонированной полимочевины, фракционированный из грубого полидисперсного олигомера с фиг. 1, с применением жидкостной хроматографии с обращенной фазой.

На фиг. 5-9 по вертикальной оси - относительное поглощение, а по горизонтальной оси - время в минутах.

Фиг. 5 показывает различные профили ВЭЖХ полимочевины с формулой I.

Фиг. 6 показывает профиль ВЭЖХ узкополидисперсной полимочевины с формулой I, при использовании водного раствора триметиламинацетата (Et₃NHOAc) в качестве элюента.

Фиг. 7 показывает профиль ВЭЖХ узкополидисперсной полимочевины с формулой I, при использовании водного раствора тетрабутиламмонийфосфата (н-Bu₄N)PO₄) в качестве элюента.

Фиг. 8 показывает профиль ВЭЖХ фракций монодисперсной полимочевины с формулой I с фиг. 6 при использовании водного раствора тетрабутиламмонийфосфата (н-Bu₄N)PO)₄ в качестве элюента.

Фиг. 9 показывает гистограмму антивирусных концентраций IC₅₀ различных фракций олигомеров, содержащих повторяющиеся единицы, от 3 до 50, которые соединяются связывающими карбонильными частями, причем вышеназванные олигомеры имеют анионные группы и преобладающую линейную геометрию, так что между анионными группами в водной среде существуют постоянные интервалы. Предпочтительные олигомеры этого изобретения представляются любой одной из формул I-IV, представленных ниже.

Способ производства настоящего изобретения позволяет получить ограниченно поли- и монодисперсные анионные олигомеры этого изобретения, особенно те, которые представлены формулами I-IV, помещенными ниже, с помощью стадий: 1) ограничения необработанной полидисперсной смеси анионных олигомеров до узкополидисперсной смеси анионных олигомеров, и/или 2) выделения монодисперсного анионного олигомера, и 3) по желанию, превращения солей узкополи- или монодисперсных олигомеров со стадий 1 и 2 в желаемую фармацевтически приемлемую соль, конкретно, натриевую или калиевую соль.

В вышеназванном процессе имеется в виду следующее сочетание стадий: стадии 1 и 2 выполняется отдельно, стадия 1 или 2, за которой следует стадия 3, или осуществляются все три стадии.

Узкополи- и монодисперсные олигомеры применимы в качестве средств, подавляющих активность вируса иммунодефицита человека и вируса Herpes Simplex, и таким образом, эти олигомеры применимы при лечении СПИД, КСС и инфекций, вызываемых HSV. Настоящее изобретение включает узкополи- и монодисперсные олигомеры, получение их лекарственных форм и применение в качестве средств для лечения СПИД, КСС и инфекций, вызванных HSV и способ их производства.

Узкополи- и монодисперсные анионные олигомеры настоящего изобретения являются водорастворимыми олигомерами, содержащими повторяющиеся единицы, от 3 до 50, которые соединяются связывающими карбонильными частями, причем вышеназванные олигомеры имеют анионные группы и преобладающую линейную геометрию, так что в водной среде существуют постоянные промежутки между анионными группам. Предпочтительно, эти олигомеры представляются любой одной из следующих формул: где R представляет атом водорода, C₁-C₄ алкильную группу, фенильную группу или фенильную группу, имеющую от 1 до 2 частей R₁ и до 3 заместителей, независимо выбираемых из атомов фтора, хлора и брома или C₁-C₂₀ алкильных групп, R₁ представляет - SO₃R², -CO₂R², -PO₃(R²)₂ или -OPO₃R², R₂ представляет атом водорода или фармацевтически приемлемый катион, m = 0 или 1, при условии, что когда m = 0, R является атомом водорода, X представляет (см. фиг. 10), Y представляет -CO₂, -CC-, -N=N-, n = 3 - 50, и R₃ представляет -R или -X-NH₂, где R и X дается определение, как и ранее, B) поликарбонат формулы где X и n дается определение, как и в формуле I, выше, X¹ представляет HO-X- группу, где X дается определение как и для формулы I, выше, или C₁-C₄ алкильную группу, фенильную группу или фенильную группу, замещенную от 1 до 2 составляющими R¹ и до 3 заместителей, независимо выбираемых из атомов фтора, хлора или брома или алкильных групп C₁-C₂₀, и X² представляет атом водорода или -CO₂X¹, где X¹ дается определение как и выше, C) полиэфир формулы X и n дается определение как и в формуле I, выше, R⁴ представляет -R², которому дано определение в формуле I, или -X¹, которому дано определение в формуле II, выше, R⁵ представляет где R⁴ дается определение как и в формуле III, выше, или -R², где R² дается определение как и в формуле I, выше; X³ представляет (см. фиг. 11).

где R¹ и Y дается определение как и в формуле I, выше; или D) полиамид с формулой: где X и n дается определение как и в формуле I, выше, X³ дается определение как и в формуле III, выше, R⁶ представляет H₂N-X-NH-, R²O-, RNH- или R-C(O)-NH-X-NH-, где R, R² и X дается определение как и в формуле I, R⁷ представляет атом водорода, где R и R² дается определение как в формуле I, выше, и X³ дается определение как в формуле III, выше.

Терминам, использованным в настоящей заявке, даются следующие определения: Термин "C₁-C₂₀алкил", заключающий в себе термин "C₁-C₄алкил", включает как группы с разветвленной, так и с прямой цепью, такие как, например, метил, этил, изопропил, т-бутил, н-децил, н-додесил и тому подобные.

Термин "фармацевтически приемлемый катион" означает катион, приемлемый для фармацевтического использования. Те катионы, которые по существу нетоксичны при дозировке, применяемой для достижения желаемого эффекта, и самостоятельно не обладают значительным фармакологическим действием, включается в термин "фармацевтически приемлемый катион". Для иллюстрации, эти соли включают соли щелочных металлов, таких как натрий и калий, щелочноземельных металлов, таких как кальций и магний, аммония, легких металлов группы IIIA, включая алюминий, и органических катионов, производных первичных, вторичных и третичных аминов, аммония или алкиламмония, особенно третичные соли аммония. Примеры включают триалкиламины, включающие триэтиламин, прокаин, дибензиламин, N,N'-дибензилэтилендиамин, дигидроадиэтиламин, N-(C₁-C₄)алкилпиперидин и любой другой подходящий амин. Предпочтительны натриевые и калиевые соли. Термин "фармацевтически приемлемый" означает пригодный для введения теплокровным животным, особенно людям, и включает являющийся нетоксичным, например, пригодный для фармацевтического использования и неядовитый для теплокровных животных. Фармацевтически приемлемые катионы олигомеров настоящего изобретения получают с помощью общепринятых ионообменных процессов или путем обработки R¹-кислоты подходящим основанием. В частности, триэтиламмониевые соли, которые получаются в части способа производства (стадия 2), превращаются в более предпочтительные фармацевтически приемлемые соли, такие как натриевая соль.

Олигомеры настоящего изобретения являются узкополи- и монодисперсными водорастворимыми полимерами с низким молекулярным весом. Кроме того олигомеры имеют упорядоченное расположение анионов. Термин "упорядоченное расположение анионов" или "постоянный интервал между анионными группами" означает, что анионные группы (R¹) присутствуют на каркасе полимера с интервалами, определяемыми исходным материалом использованного реагента, и местонахождение анионных групп регулируется предсказуемым образом. Не желая пока быть связанными какой-либо теорией, полагают, что анионные группы олигомеров являются частью, которая связывается с ВИЧ, HSV и/или клеточной мембраной и тем самым прерывает способность вируса к репликации.

Термины "преимущественно линейная геометрия" в водной среде относится к конфигурации олигомера в растворе. Метод для характеристики конфигурации молекул полимера в растворе, хорошо известный в этой области знаний, основан на следующей формуле, называемой уравнением Mark-Houwink ("Introduction to Phisical Polimer Science ed. L.H.Sperling, pub. John Wiley & Sons; (1985), pp.81-83) [] = KM^d, где является собственной вязкостью, M - это средневесовой молекулярный вес, K - константа, связанная с размерами связи цепи, и является константой, определяемой конфигурацией полимера. Константа для полимера, образующего статистический клубок, составляет 0,5 < < 0,8, а для линейных полимеров составляет 0,8 < 1,8. Эта формула связывает вязкость раствора с молекулярным весом "М". Для этого изобретения определение линейных полимеров дается таким, которые имеют значения 0,8. Для жесткого стержневого полимера теоретический верхний предел составляет 1,8. Для данного молекулярного веса более высокая вязкость раствора будет получаться для полимеров с линейной конфигурацией, по сравнению с теми полимерами, которые существуют в виде статистического клубка. Другое соображение состоит в том, что значение является функцией использованного растворителя. для данного водорастворимого полимера может быть различной при различных концентрациях соли. Для этого изобретения концентрация соли устанавливается на уровнях, присутствующих в сыворотке крови (пример 80 г/л NaCl, 4 г/л KCl).

Термины "монодисперсный" и "полидисперсный" олигомеры (и подобные термины) относятся к распределению олигомеров в образце. Полидисперсность в образце определяется отношением средневесового молекулярного веса, M_в, к среднечисловому молекулярному весу, М_ч (смотрите G, Odian, Principles of Polymerization Ld, ed, pp.20-25, John Wiley & Jons, 1981). Для целей этого изобретения, "грубо полидисперсные" образцы олигомера представляются М_в/М_ч = 1,3 (смотрите фиг. 1). Для целей этого изобретения олигомер является "узко полидисперсным" олигомером, когда М_в/М_ч = 1,0 до 1,3 (смотрите фиг. 2), предпочтительно от 1,0 до 1,2 и более предпочтительно, от 1,0 до 1,15. Узко полидисперсный олигомер получали из грубо полидисперсной смеси олигомеров. Для целей этого изобретения олигомер является "монодисперсным" олигомером, когда М_в/М_ч= 1,0 до 1,1 (смотрите фиг. 4), которое представляет более узкий диапазон в пределах узко полидисперсного. Термин "узкий диапазон молекулярного веса" относится к снижению отношения полидисперсности на какую-то величину по сравнению с предшествующим образцом.

Термин "жесткий каркас" означает, что повторяющаяся единица, также называемая повторной единицей, состоит, преимущественно, из групп, которые ограничивают вращение на расстоянии от оси цепи. Например, п-фениленовые и амидные группы -(C(O)-ПР-) легко не поворачиваются на расстоянии от оси цепи. Ограниченное число повернутых групп имеют допустимое отклонение по оси цепи, такие как м-фенилен и мочевина. Олигомеры настоящего изобретения, предпочтительно, имеют такой жесткий каркас.

Чистота каждой монодисперсной фракции из любой желаемой n фракции составляет, по крайней мере, 75%, предпочтительно, от примерно 85 до примерно 100%. Чистота определяется как отношение площади желаемого олигомера к площади всех пиков, наблюдаемых при анализе с помощью ВЭЖХ.

Использованный здесь термин "олигомер" заключает в себе все возможные значения для n, например, с 3 до 50. Олигомеры являются, предпочтительно, линейными с n, равным целому числу от 3 до 50, предпочтительно от 3 до 15, более предпочтительно от 5 до 10, наиболее предпочтительно, с 6 до 9. Конечно, молекулярный вес прямо связан со значением n полученного в результате олигомера. Существенно, что эти олигомеры имеют достаточно низкий молекулярный вес для того, чтобы проходить через экскреторную мембрану почек, но способны подавлять ВИЧ.

Для целей настоящего изобретения олигомеры, описанные здесь, и их физиологически приемлемые соли считаются эквивалентными. Физиологически приемлемые соли относятся к солям тех оснований, которые будут образовывать соль с, по крайней мере, одной кислотной группой из групп R1 и которые не будут вызывать значительных побочных физиологических эффектов при введении, которое описано здесь. Подходящие основания включают, например, гидроксиды щелочных и щелочноземельных металлов, карбонаты и бикарбонаты, такие как гидроксид натрия, гидроксид калия, гидроксид кальция, карбонат калия, бикарбонат натрия, карбонат магния и тому подобные, аммиак, первичные, вторичные и третичные амины и тому подобное. Особенно предпочтительными основаниями являются гидроксиды щелочных металлов, карбонаты и бикарбонаты. Физиологически приемлемые соли могут получаться при помощи общепринятых ионообменных процессов или путем обработки кислоты P1 соответствующим основанием. Примеры дополнительных солей здесь описаны.

Препараты настоящего изобретения представлены в твердой и жидкой форме. Эти препараты могут быть в форме набора, так что компоненты смешиваются в соответствующее время перед применением. Для предварительно смешанных или в виде комплекта препаратов обычно необходим фармацевтически приемлемый носитель или адъювант.

Олигомеры настоящего изобретения растворимы в воде и в растворах солей, особенно с физиологическим pH и в физиологических растворах. Таким образом настоящие олигомеры легко получаются в виде удобной водной фармацевтической дозированной формы. К тому же, после введения настоящего олигомера он остается растворенным и in vivo.

Предпочтительными значениями для ранее описанных формул с I по IV являются следующие: R и R³ являются 4-метилфенильной группой, m = 1, n = 3 - 15, R⁴ и R⁵ являются водородом, R⁶ является фенилом, R⁷ является бензоилом, X¹ является 4-метилфенильной группой, X² является -CO₂-(4-метилфенил)-группой, X³ представляет собой X представляет собой (см. фиг. 12) Особенно предпочтительными являются полимочевины с формулой I, где R и R³ являются 4-метилфенильными группами, m = 1, n = 3 - 15, X представляет собой (см. фиг.13) и R² дано определение ранее. Конкретными примерами таких полимочевин являются: StOS/P/T = поли[имино(3-сульфо-1,4-фенилен)-1,2-этендиил-(2-сульфо-1,4-фенилен) аминокарбонил] , альфа - {[(4-метилфнил)амино]-карбонил}-омега-[(4-метилфенил)-амино] - и представлен формулой I, выше, когда R и R³ являются 4-метилфенилами, R² является водородом, X является PDS /P/T= поли[имино(2,5-дисульфо-1,4-фенилен)иминокарбонил] , альфа{ [(4-метилфнил)амино] карбонил} -омега-[(4-метилфенил)амино] - и представлен формулой I, выше, когда R и R³ являются 4-метилфенилами, R² является водородом, X является BPDS/P/T= поли{ имино[2,2'-дисульфо(1,1'-бифенил)-4,4'-диил} - иминокарбонил/, альфа-{[(4-метилфенил)амино]-карбонил}-омега- [(4-метилфенил)амино]- и представлен формулой I, когда R является 4-метилфенилом, R² является водородом, X является и особенно, когда n = 5, 6, 7, 8, 9 или 10.

Особенно предпочтительны поликарбонаты с формулой II, где X¹ является 4-метилфенилом, X² является -CO₂-(4-метилфенил), n = 3 - 15, и X является Конкретными примерами таких поликарбонатов являются: HBDS/P/C= поли[окси(2,5-дисульфо-1,4-фенилен)оксикарбонил] , альфа-[(4-метилфенокси)-карбонил] -омега-(4-метилфенокси)- и представлен формулой II, выше, когда X¹ является 4-метилфенилом, R² является водородом, X является и n = 3 - 15.

HBPDS/P/C = поли{окси[2,2'-дисульфо(1,1'-бифенил)-4,4'- диил]-оксикарбонил} , альфа-[(4-метилфенокси)карбонил]-омега-(4- метилфенокси)- и представлен формулой II, выше, когда X¹ является 4-метилфенилом, R² является водородом, X является X² является и n = 3 - 15.

Особенно предпочтительны полиэфиры с формулой III, где R⁴ и R⁵ являются водородом, n = 3 - 15, X³ представляет X представляет собой (см. фиг. 14) Конкретными примерами таких полиэфиров являются: HBPDS/TPC = поли{окси[2,2'-дисульфо(1,1'-бифенил)-4,4'- диил]-оксикарбонил-1,4-фениленкарбонил] - и представлен формулой III, выше, когда R⁴ и R⁵ являются водородом, X³ является п-фениленом, X является и n = 3 - 15.

HBDS /TPC = поли[окси(2,5-дисульфо-1,4-фенилен)-оксикарбонил-1,4-фенилкарбонил] - и представлен формулой III, выше, когда R⁴ и R⁵ являются водородом, X³ является п-фениленом, X является и n = 3 - 15.

Особенно предпочтительны полиамиды с формулой IV, где R⁶ является фенилом, R⁷ является метилбензоилом, n = 3 - 15, X³ представляет собой и X представляет собой (см. фиг. 15).

Конкретными примерами таких полиамидов являются: BPDS/TPC/MBC = поли{ имино[2,2'-дисульфо(1,1'-бифенил)- 4,4'-диил]иминокарбонил-1,4-фениленкарбонил}, альфа-{[(4-метилфенил)- амино]карбонил}-омега-[(4-метилфенил)амино] - и представлен формулой IV, выше, когда R⁶ является R-C(O)-NH-X-NH-, R является 4-метилфенилом, R² является водородом, R⁷ является 4-метилбензоилом, X³ является п-фениленом, X является и n = 3 - 15.

Настоящее изобретение относится к способу получения узкополи- и монодисперсных анионных олигомеров, которые имеют узкий диапазон молекулярного веса, который делает возможным использование этих олигомеров в качестве фармацевтических средств, особенно у людей, для лечения СПИД или КСС. Преимущества, полученные в результате наличия узкого интервала молекулярного веса у этих олигомеров, представляют собой более высокую активность, чем у соответствующих смесей, и лучшие характеристики олигомеров.

Настоящее изобретение направлено на способ разделения вышеназванных олигомеров на их отдельные компоненты, например, с узким диапазоном молекулярного веса, и на полученный таким образом продукт выделенного олигомера.

При процессе получения узкополи- и монодисперсных анионных олигомеров настоящего изобретения могут выполняться разные стадии следующим образом.

Стадия I - ограничения грубой смеси полидисперсного анионного олигомера до узкополидисперсной смеси анионного олигомера - может осуществляться путем гельфильтрации, селективного осаждения, мембранного разделения или с помощью хроматографии с обращенной фазой, и/или Стадия 2 - выделение монодисперсного анионного олигомера - может осуществляться с помощью электрофореза в геле или хроматографии с обращенной фазой. Монодисперсная чистота каждой желаемой n фракции составляет, по крайней мере 75%, предпочтительно от примерно 85 до примерно 100%, и Стадия 3 - по желанию, превращения соли узкополи- или монодисперсного анионного олигомера со стадии 1 или 2 в желаемую фармацевтически приемлемую соль, особенно натриевую или калиевую соль - может выполняться с помощью или ионного обмена, особенно когда образовывалась тетрабутиламмониевая соль, или путем добавления соли слабой летучей кислоты.

При процессе настоящего изобретения использованы обычные и известные в данной области техники методы. Все эти методики известны, некоторые примеры описаний этих методов могут быть найдены в нижеследующем: Гельфитрация - "Protein Purification", ed.Charles R. Cantor, Springer - Verlag, 1987, в главе Robert K.Scopes, "Separation in Solution", pp. 186-198.

Избирательное осаждение - "Polymer Fractionation", ed. Manfred J.R., Cantow, Academic Press, 1967, в главе Akira Kotera, Fractional Precipitation, pp. 43-65.

Мембран