Штамм бактерий enterobacter agglomerans гиск n 257, обладающий комплексом факторов патогенности

Штамм бактерий enterobacter agglomerans гиск n 257, обладающий комплексом факторов патогенности

Реферат

 

Изобретение предназначено для получения термолабильного энтеротоксина (ЛТ-энтеротоксин) и анатоксина Enterobacter agglomerans при производстве вакцин. Штамм Enterobacter agglomerans N 5356 выделен из испражнений больного с микозом стоп, депонирован в коллекции Государственного научно-исследовательского института стандартизации и контроля медицинских биологических препаратов им. Л.А.Тарасевича и имеет регистрационный номер 257. Штамм Enterobacter agglomerans ГИСК N 257 характеризуется следующими признаками. При выращивании на обычных питательных средах при 37°С штамм на поверхности питательной среды растет с образованием характерных изолированных колоний с желтоватым оттенком. При выращивании в бульоне Хоттингера (рН 7,2) при 37°С в течение 24 ч вызывает равномерное помутнение с выпадением осадка. Субплантарное введение мышам весом 15-16 г 0,05 мл центрифугата 20-часовой бульонной культуры вызывает отек лапки более 95 мг. Интраназальное введение 0,05 мг 20-часовой бульонной культуры вызывает гибель 95% мышей-самцов весом 15-16 г в течение 4 ч при явлениях тонических судорог и асфиксии. Внутрикожное введение 300 млн. микробных клеток 20-часовой бульонной культуры вызывает некроз кожи кролика диаметром 30 см. В опыте петля тонкой кишки кролика при введении 500 млн. м.т. 20- часовой бульонной культуры дает положительный результат (V/L=1,2). Гретый при 56°С в течение 45 мин центрифугат 20-часовой бульонной культуры вызывает отек лапки мышей до 30 мг, не вызывая некроза кожи кролика. Гретая при 100°С 20-часовая культура не вызывает накопления жидкости в изолированной петле тонкого кишечника кролика (V/L=0,3). Среды для размножения - бульон Хоттингера (рН 7,2), содержащий 5% эритроцитов кролика при 37°С в течение 24 ч. Генетические особенности: Нly+, Ent+, MS+, MR+. Устойчив к пенициллину, тетрациклину, эритромицину, левомицетину, карбенициллину, рифампицину, олеандомицину. Штамм Enterobacter agglomerans ГИСК N 257 обладает повышенной токсинпродуцирующей способностью. 1 табл.

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано для получения термолабильного энтеротоксина (ЛТ-энтеротоксин) и анатоксина Enterobacter agglomerans, при производстве вакцин.

Техническим результатом является штамм Enterobacter agglomerans N 5356, обладающий повышенной токсинопродуцирующей способностью.

Штамм Enterobacter agglomerans N 5356 выделен из испражнений больного с микозом стоп в 1998 г. в городской больнице г.Ишимбая Республики Башкортостан, депонирован в коллекции Государственного научно-исследовательского института стандартизации и контроля медицинских биологических препаратов им. Л.А. Тарасовича и имеет регистрационный номер 257.

Штамм Enterobacter agglomerans ГИСК N 257 характеризуется следующими признаками: Культуральные признаки.

При выращивании на обычных питательных средах при 37^oC штамм на поверхности питательной среды растет с образованием характерных изолированных колоний с желтоватым оттенком. При выращивании в бульоне Хоттингера (рН 7,2), при 37^oC, в течение 24 ч вызывает равномерное помутнение с выпадением осадка.

Способы определения активности ЛТ-энтеротоксина: Субплантарное введение мышам весом 15-16 г 0,05 мл центрифугата 20-часовой бульонной культуры вызывает отек лапки более 95 мг (Аксенова Е.В. 1980 г.).

Интраназальное введение 0,05 мг 20-часовой бульонной культуры вызывает гибель 95% мышей-самцов весом 15-16 г в течение 4 ч при явлениях тонических судорог и асфиксии (Войно-Ясенецкая Н.К. 1967 г.).

Внутрикожное введение 300 млн. микробных клеток 20-часовой бульонной культуры вызывает некроз кожи кролика диаметром 3 см.

В опыте петля тонкой кишки кролика при введении 500 млн. м.т. 20-часовой бульонной культуры дает положительный результат (V/L =1,2).

Гретый при 56^oC в течение 45 мин, центрифугат 20-часовой бульонной культуры вызывает отек лапки мышей до 30 мг, не вызывая некроза кожи кролика. Гретая при 100^oC 20-часовая культура не вызывает накопления жидкости в изолированной петле тонкого кишечника кролика (V/L=0,3).

Условия хранения культуры после леофильной сушки при выращенной в 0,3%-ном МПА (рН 7,2), залитым стерильным вазелиновым маслом, при температуре 4^oC.

Среды для размножения - бульон Хоттингера (рН 7,2), содержащий 5% эритроцитов кролика при 37^oC в течение 24 ч.

Генетические особенности: Hly+, Ent+, MS+, MR+.

Устойчив к пенициллину, тетрациклину, эритромицину, левомицетину, карбенициллину, рифампицину, олеандомицину.

Пример 1. 0,1 мл 1 млрд. суспензии суточной агаровой культуры в физиологическом растворе сеют в стерильный бульон Хоттингера (5 мл рН 7,2) инкубируют в термостате при 30^oC в течение 20 часов, центрифугируют при 6000 об/мин в течение 7 мин. Полученную надосадочную жидкость (центрифугат) в объеме 0,05 мл вводят субплантарно в заднюю левую лапку мышей-самцов весом 15-16 г. Через 24 ч животных умерщвляют эфиром и ампутированные по голеностопному суставу лапки взвешивают на торсионных весах, при этом центрифугат штамма Enterobacter agglomerans ГИСК N 257 давал разницу между левой и правой лапками более 95 мг, остальные 20 штаммов, способные продуцировать ЛТ-энтеротоксин, от 65 до 79 мг. Контроли - нативный стерильный бульон Хоттингера (рН 7,2) и гретый при 56^oC центрифугат 20-часовой бульонной культуры 30-35 мг, соответственно.

Результаты приведены в таблице.

Пример 2.

0,1 мг 1 млрд. суспензии суточной агаровой культуры сеют в бульон Хоттингера (рН 7,2), инкубируют в термостате при 30^oC в течение 20 ч и 500 млн. м. т. суспензию в объеме 1 мл вводят в сегмент изолированной петли тонкого кишечника кролика. Через 16 ч животных умерщвляют воздушной эмболией и рассчитывают соотношение объема экссудата к длине сегмента (V/L). При этом 20-часовая бульонная культура штамма Enterobacter agglomerans ГИСК N 257 оказалась способной давать накопление жидкости в большом количестве и показатель V/L составил 1,2. У остальных 20 штаммов, способный продуцировать ЛТ-энтеротоксин, показатель V/L колебался в пределах 0,9-1,0. При введении стерильного бульона Хоттингера и гретой при 100^oC 20-часовой бульонной культуры отношение объема накопленной жидкости к длине сегмента составило 0,25 и 0,3, соответственно.

Формула изобретения

Штамм бактерий Enterobacter agglomerates ГИСК N257, обладающий комплексом факторов патогенности.

РИСУНКИ

Рисунок 1