Способ увеличения продуктивности птиц, слитый гетерологичный белок и способ его получения

Способ увеличения продуктивности птиц, слитый гетерологичный белок и способ его получения

Реферат

 

Изобретение относится к области биотехнологии. Предложенный способ заключается в том, что птице вводят эффективное количество гетерологичного белка, содержащего альфа-субъединицу белка ингибина птиц или ее иммуногенный фрагмент и белок-носитель. Гетерологичный белок может быть либо ингибином, конъюгированным с белком-носителем, либо ингибином, слитым с белком-носителем. Способ получения слитого гетерологичного белка включает введение двухцепочечной комплементарной ДНК, кодирующей ингибин или его фрагмент, в вектор, который кодирует белок-носитель, такой как связывающий мальтозу белок или бычий сывороточный альбумин. После введения вектора в систему экспрессии в ней экспрессируется слитый гетерологичный белок. После очистки экспрессированного гетерологичного белка эффективное количество этого белка назначают животному, так что у животного возникает ответная иммунологическая реакция. Изобретение позволяет увеличить производство яйцеклеток у птиц, ускорить начало яйценоскости и увеличить продолжительность периода яйценоскости. 3 с. и 17 з.п.ф-лы, 3 ил., 4 табл.

Изобретение является частичным продолжением заявки на Патент США с серийным номером 08/202964, поданной 28 февраля 1994.

Настоящее изобретение относится в общем случае к способу ускорения полового созревания у птиц, в частности, у бескилевых и Psittaciformes, путем назначения ксеногенного белка, содержащего белок ингибин или его фрагмент и белок-носитель. Настоящее изобретение относится также к способу увеличения продуцирования яйцеклеток у животных, в частности, у птиц, особенно у бескилевых, путем назначения ксеногенного белка, содержащего белок ингибин или его фрагмент и белок-носитель. Настоящее изобретение относится далее к ксеногенному белку, содержащему белок ингибин или его фрагмент и белок-носитель, и способу получения ксеногенного белка, в котором ингибин либо слит, либо конъюгирован с белком-носителем.

Бескилевые представляют собой неспособных летать обычно крупных бегающих птиц, состоящих из нескольких отрядов, включающих такие виды, как страус, эму, нанду, казуар и киви. Эму (Dromiceius novaehollandiae) является австралийской бескилевой птицей, которую отличает наличие рудиментных крыльев и то, что ее голова и шея покрыты перьями. Рост среднего взрослого эму составляет приблизительно 6 футов (180 см), а вес приблизительно 150 фунтов (68 кг). Страус (Struthio camelius) представляет собой крупную бегающую птицу с короткими крыльями и толстыми мощными ногами. Рост обычного страуса составляет приблизительно 8 футов (240 см), а вес приблизительно от 325 до 375 фунтов (от 147 до 170 кг). Термин "нанду" является обычным для членов отряда птиц Rheiformes.

Rheiformes являются отрядом Южноамериканских бегающих птиц, называемых американскими страусами, которые отличаются от истинных страусов среди прочих своим меньшим размером, наличием перьев на голове и шее и трехпалыми ногами. Страус и эму давно ценятся в их естественном окружении, соответственно, в Южной Америке и в Австралии. Продукты, получаемые от страуса, пользуются спросом уже более ста лет, и во всем мире находят сбыт их шкуры, мясо и перья. Например, кожу страуса используют при изготовлении обуви, дамских сумочек, курток, атташе-кейсов, кошельков и многих других изделий. Перья страуса применяют для отделки одежды, платьев и для изготовления пылеуловителей. Например, перья страуса продаются в Европе приблизительно от 60 до 1200 долларов за килограмм. Кроме того, считается, что перья страуса являются "магнитном пыли", а потому широко используются в США и за рубежом в компьютерной технике и в автомобильной промышленности.

Напротив, эму относительно недавно появились на рынке. Ценятся те же самые их продукты, а также эфирное масло, которое используется в косметической промышленности. Масло эму, которое вытапливают из толстого слоя подкожного жира, обладает способностью глубоко проникать в ткани, а потому это масло полезно для изготовления косметических кремов, таких как смягчающие составы для предотвращения образования морщин. В настоящее время исследуется возможность применения масла эму в медицине, например при лечении артрита. Типичный взрослый эму может достигать высоты от 1,6 до 1,9 м или более и веса от 30 до 45 кг или более. Зрелые эму в возрасте приблизительно один год и препубертантные и постпубертантные эму не показывают связанные с полом фенотипные различия. Аналогично страусам в течение нескольких последних лет наблюдается стремительный рост популяции эму в Соединенных Штатах. В 1994 году в США было приблизительно всего 150000 эму, в том числе 15000 размножающихся пар. Предполагают, что количество эму в 1995 году увеличится до величины от 500000 до 750000 птиц, из которых 45000 будут составлять размножающиеся пары.

В ряде стран, включая Австралию, Бельгия Израиль, Канаду, Голландию, Намибию, Южно-Африканскую Республику и Зимбабве, наблюдается рост спроса на продукты, получаемые от бескилевых. Так, в течение нескольких лет на внутреннем рынке наблюдается стремительный рост спроса на страусов и эму и в меньшей степени на нанду. За последние пять лет количество размножающихся пар страусов и общее количество птиц в Соединенных Штатах увеличилось, соответственно, в 7,5 раз и 20 раз. По оценкам в 1995 году в Соединенных Штатах будет 200000 страусов, в том числе 20000 размножающихся пар. Огромный интерес к выращиванию этих животных вызван высокой стоимостью взрослых, а также молодых животных и особенно установленных размножающихся пар страусов, цена которых составляет 75000 долларов, а цена пары эму составляет 30000 долларов и более. Цена молодых страусов в возрасте от трех до четырех месяцев составляет приблизительно 7500, а стоимость молодого эму оценочно составляет приблизительно 5000 долларов. Большинство животных покупают, когда их возраст составляет от трех до шести месяцев.

Далее, огромный интерес проявляется к бескилевым как к альтернативе более традиционным формам животноводства. Несколько присущих бескилевым факторов обеспечивают им преимущество перед более традиционными формами животноводства (т.е. разведением крупного рогатого скота, свиноводством и овцеводством). Этими факторами являются: более высокая степень усвоения пищи, лучшая приспособленность для интенсивного разведения, большой размер животных, высокая производительность и исключительная питательная ценность их мяса.

Например, мясо страуса, которое представляет собой мясо красного цвета, напоминающее говядину, содержит значительно меньше жира, калорий и холестерина, чем мясо цыплят и индейки. В частности, порция мяса страуса весом 85 граммов содержит 2 грамма жира, 58 мг холестерина и 97 калорий. Напротив, порция мяса индейки весом 85 граммов содержит 3 грамма жира, 59 мг холестерина и 135 калорий. Порция мяса цыпленка весом 86 граммов содержит 3 грамма жира, 73 мг холестерина и 140 калорий. Порция говядины (для жаренья) весом 85 граммов содержит 15 граммов жира, 77 мг холестерина и 240 калорий. И, наконец, порция свинины весом 85 граммов содержит 19 граммов жира, 84 мг холестерина и 275 калорий. (Данные для мяса страуса получены из Отчета 0800100 лаборатории качества AMSI. Данные для других видов мяса взяты из справочника U. S. D.A.Handbook N 8, "Nutritive Value of Foods".) Аналогично страусам, мясо эму представляет собой мясо красного цвета, которое содержит мало жира. В частности, порция мяса эму весом 100 граммов содержит 1,7 грамма жира, 57,5 мг холестерина и 109 калорий. (Данные для мяса эму получены от компании "Siliker Laboratories of Texas, Inc.").

Кроме того, бескилевые, такие как страус, дают приблизительно 100 фунтов (45,3 кг) мяса в возрасте 12 месяцев, а потому производят значительное количество мяса за относительно короткий период времени.

Иллюстрацией того, насколько велико преимущество бескилевых над более традиционными формами животноводства, является следующее сравнение между страусом и коровой. Во-первых, период созревания и инкубации для страуса составляет 42 дня, в то время как аналогичный период для коровы составляет 280 дней. Во-вторых, средний страус дает потомство более чем 20 голов в год, в то время как корова дает лишь одного теленка. В-третьих, степень усвоения пищи для страуса составляет менее чем 2:1, в то время как степень усвоения пищи для коровы составляет 5:1. В-четвертых, количество дней от оплодотворения яйцеклетки до убоя составляет приблизительно 407 дней для страуса по сравнению с 645 днями для коровы. Наконец, страусы, помимо мяса и кожи, дают перья, в то время как коровы не дают никаких продуктов, помимо мяса и кожи.

Учитывая указанные обстоятельства и возрастающую потребность населения мира в мясе, которое обладает питательной ценностью, но содержит тем не менее мало жира и холестерина, и которое может быть эффективно произведено при минимальном негативном воздействии на окружающую среду, индустрия бескилевых обладает высоким потенциалом для роста в будущем.

В настоящее время спрос на бескилевых далеко превосходит предложение. Однако заводчики бескилевых ограничены тем, что производство яиц многими размножающимися самками меньше оптимального. В зависимости от вида большинство бескилевых в неволе откладывают в среднем 10-20 яиц в год, в то время как их генетический потенциал для производства яиц, как полагают, превышает 60 яиц в год. Например, высокопроизводительный страус в диких условиях способен откладывать в период размножения яйцо приблизительно через каждые 48 часов, а высокопроизводительный эму в диких условиях способен откладывать в период размножения яйцо каждые 72 часа. Напротив, в неволе страусу часто требуется от 5 до 10 дней, чтобы отложить яйцо, а эму, чтобы отложить яйцо, требуется от 4 до 8 дней.

Рынок бескилевых, предназначенных на убой, не сможет вырасти до тех пор, пока ежегодно не будет производиться достаточное количество потомства. По некоторым оценкам для поддержания уровня рынка бескилевых, предназначенных на убой, ежегодно должно появляться на свет, по крайней мере 250000 животных. По этой причине способ увеличения производства яиц значительно увеличит рост рынка. Таким образом, существует потребность в композициях и способе увеличения производства яиц у птиц, в частности у бескилевых, таких как страусы и эму.

Существует также необходимость в композиции и способе увеличения производства яиц экзотических птиц, таких как Psittaciformes . Psittaciformes включают попугаев и представляют собой состоящий из одного семейства отряд птиц, которые проявляют зигодактилизм и имеют сильный искривленный клюв. Попугай определяется как член семейства птиц Psittacidae (единственное семейство Psittaciformes), который отличается коротким, прочным, сильно искривленным клювом.

Недавно гормон ингибин исследовался в качестве потенциального средства увеличения овуляции у млекопитающих. Ингибин является пептидным гормоном, который в основном продуцируется половыми железами, в частности, растущими фоликулами. У млекопитающих он выполняет функцию ингибирующего регулятора секреции гипофизарного фолликулостимулирующего гормона, который осуществляет функцию обратной связи. Хотя существование ингибина постулировано более 60 лет назад, его выделение химическими методами осуществлено лишь недавно.

Ингибин млекопитающих представляет собой димерный белковый гормон, который состоит из -субъединицы (с молекулярным весом 18000) и -субъединицы (с молекулярным весом 14000). -Субъединица является уникальной для ингибина, поскольку димеры -субъединицы образуют активин, гормон, который высвобождает фолликулостимулирующий гормон из гипофиза, -Субъединица существует в двух формах (_A и _В), которые различаются, но весьма похожи. По этой причине в зависимости от наличной -субъединицы ингибин может существовать как ингибин-А или ингибин-Б. Обе субъединицы, когда они соединены дисульфидными связями, необходимы для проявления биологической активности при подавлении секреции фолликулостимулирующего гормона из гипофиза. Последовательность аминокислотных остатков -субъединицы ингибина приблизительно на 80 - 90% совпадает для образцов, выделяемых из свиней, коровы, человека, мышей и домашних цыплят. Превосходными обзорами по выделению, получению, анализу и биологическому действию ингибина является Risbridger et al., "Current Perspectives of Inhibin Biology", Acta Endocrinologica (Copenh), 122: 673-682 (1990); и C.Rivier et al., "Studies of the Inhibin Family of Hormones: A Review", Hormone Research, 28: 104-118 (1987), которые приводятся здесь для справок. У животных и птиц фолликулостимулирующий гормон играет роль в процессе роста и развития фолликул, в то время как лютенизирующий гормон, как полагают, индуцирует овуляцию. Несколько факторов мозга и половых желез (пептидных и стероидных гормонов) конкулируют между собой за контроль над высвобождением гормона гонадотропина. Из указанных факторов гонадотропин-высвобождающий гормон и ингибин оказывают противоположное контролирующее воздействие на гипофизарную секрецию фолликулостимулирующего гормона у млекопитающих. Гонадотропин-высвобождающий гормон представляет собой декапептид мозга, который стимулирует секрецию фолликулостимулирующего гормона и лютенизирующего гормона, в то время как ингибин представляет собой гормон половых желез, действие которого вероятно направлено на селективное ингибирование секреции фолликулостимулирующего гормона у млекопитающих.

Основы знаний о процессе овуляции у птиц необходимы для понимания роли ингибина в осуществлении эндокринного контроля над овуляцией у птиц. Растущие фолликулы у функционально зрелого яичника домашних кур существуют в определенной иерархии по размерам. Типичный яичник содержит от четырех до шести больших (от двух до четырех сантиметров в диаметре) наполненных желтком фолликул (от F1 до F4, F6), которых сопровождает большее количество меньших по размеру (от двух до десяти миллиметров) желтых фолликул и множество очень маленьких белых фолликул. Наибольшая предовуляционная фолликула (F1) предназначена для овуляции на следующий дань, вторая по величине (F2) - на другой день (приблизительно на 26 часов позднее) и так далее. Контроль за восстановлением фолликул и их развитием внутри указанной иерархии пока недостаточно выяснен. Участие гонадотропина из гипофиза было доказано, однако роль ингибина при контролировании секреции гонадотропина птиц и контролировании овуляции остается неясной.

Недавняя стратегия для индуцирования гиперовуляции у млекопитающих заключалась в развитии способов, которые заключаются в нейтрализации активности эндогенного ингибина. Например, изучалась активная иммунизация млекопитающих против различных ингибин-содержащих соединений. Иммунонейтрализация ингибина сопровождается повышенной скоростью овуляции у телок, овец, молодых свинок и крыс.

Обнаруженное у млекопитающих, которым вводили вакцины антигенных препаратов ингибина, ускорение овуляции, как полагают, является следствием повышения уровня содержания в плазме фолликулостимулирующего гормона, который приводит к усилению развития фолликул в яичнике. В этих исследованиях применялись вакцины различных антигенов, которые доказали увеличение скорости овуляции у млекопитающих. Некоторые из исследованных антигенов включают: фрагменты -субъединицы ингибина, полученные из рекомбинантной ДНК (Wrathall et al., "Effects of active immunization against a synthetic peptide sequence of inhibin -subunit of plasma gonadotropin concentrations, ovulation rate and lambing rate in ewes", J. Reprod. Fert., 95: 175-182, 1992; и Meyer et al. , "Antiserum to an Inhibin Alpha-Chain Peptide Neutralizers Inhibin Bioactity and Increases Ovulation Rate in Sheep", Scientific Journal Series of the Minnesota Agric. Exp. Sta. paper N. 17103, 1991), синтетические пептидные реплики N-концевой последовательности - субъединицы бычьего ингибина, связанной альбумином (Glencross et al., "Effects of active immunization of heifers against inhibin of plasma FSH concentrations, ovarian follicular development and ovulation rate", Journal of Endocrinology, 134, 11-18, 1992): синтетические пептидные последовательности - субъединицы бычьего ингибина, связанной альбумином сыворотки человека (Morris et al., "Effect of immunization against synthetic peptide sequences of вovine inhibin -subunit of ovulation rate and twin-calving rate in heifers", Journal of Reproduction and Fertility, 97: 255-261, 1993), и частично очищенный ингибин из фолликулярной жидкости коровы (Morris et al., "Effect of Immunizing Prepuberal Lambs of Low and High Ovulation Rate Genotypes with Inhibin Partially Purified from Bovine Fluid", Theriogenology, Vol. 35, N 2, 1991).

Несмотря на противоречивые сведения о том, как меняется содержание фолликулостимулирующего гормона во время цикла овуляции, во всех циклах изученных млекопитающих иммунонейтрализация эндогенного ингибина приводит к значительному усилению развития фолликул в яичниках и увеличению скорости овуляции независимо от используемого антигена или видов млекопитающих, которым вводили пробу.

Как указано ранее, участие ингибина в процессе регулирования репродуктивной функции видов птиц остается неясным. Опубликованные в настоящее время сообщения ограничены репродуктивной функцией ингибина у домашних птиц. Большая часть этой литературы поддерживает теорию, согласно которой ингибин вероятно играет у домашних птиц ту же самую физиологическую роль, что и установленная для млекопитающих: у кур ингибин может служить регулятором восстановления и/или развития фолликул. Однако у птиц участие ингибина в контроле за скоростью овуляции может осуществляться, а может и не осуществляться за счет подавления секреции гипофизарного фолликулостимулирующего гормона. Например, хотя у кур с низкой яйценоскостью в плазме было обнаружено более высокое содержание ингибина и слоев гранулезных клеток в предовуляционных фолликулах, чем у кур с высокой яйценоскостью, никаких отличий в уровне содержания в плазме фолликулостимулирующего гормона, связанных со скоростью кладки яиц, не найдено. Wang et al., "Increase in Ovarian -Inhibin Gene Expression and Plasma Immunoreactive Inhibin Level is Correlated with a Decrease in Ovulation Rate in the Domestic Hen", General and Comparative Endocrinology, 91, 52-58 (1993). В этой публикации, таким образом, высказывается предположение, что связанные со скоростью овуляции у кур изменения экспрессии гена -субъединицы ингибина и уровня содержания иммуноактивного ингибина в плазме не оказывают прямого воздействия на скорость овуляции путем модулирования содержания в плазме фолликулостимулирующего гормона. Далее, в публикации Р.А. Jonson, "Inhibin in the Hen", Poultry Sciences. 72: 955-958 (1993), в которой для проведения успешного определения иммуноактивного ингибина в плазме кур используют бычью систему радиоиммуноанализа, тем не менее не обнаружен значительный пик иммуноактивного ингибина в течение цикла овуляции, несмотря на предовуляционный всплеск лютенизирующего гормона. Таким образом, роль ингибина в развитии фолликул у птиц остается невыясненной. Недавно - субъединица ингибина цыплят была успешно подвергнута клонированию и определению последовательности аминокислотных остатков. Wang and Jonson, "Complementary Deoxyribonucleic Acid Cloning and Sequence Analysis of the -Subunit of Inhibin from Chicken Ovarian Granulosa Cells", Biology and Reproduction, 49, 1-6 (1993), которая полностью приводится здесь для справок. Сравнение последовательности ингибина птиц с известными последовательностями -субъединиц ингибина млекопитающих показывает 86-89%-ную гомологичность. Анализ по методу назерн-блоттинга с использованием двух выделенных зондов (cINA6 и cINA12) выявил, что -субъединица ингибина экспрессируется в гранулезных клетках яичника кур, но не экспрессируется в тканях мозга, почек, печени или селезенки кур.

Таким образом, биология ингибина в птицах по-прежнему плохо понятна, и не делалось попыток проследить ответную реакцию птиц на введение провокационных проб антигенного ингибина. Таким образом, поскольку рынок бескилевых в значительной степени ограничен меньшей, чем оптимальная, скоростью откладывания яиц многими страусами, эму и нанду, то необходима композиция или способ увеличения воспроизводства яиц у этих птиц. По этой причине необходимы также композиция и способ ускорения начала откладки яиц у птиц. Необходимы также композиции и способ увеличения периода яйценоскости птицы в течение ее жизни. Кроме того, в течение длительного времени сохраняется потребность в быстром, простом, надежном и недорогом способе определения, способна ли птица давать иммунологическую ответную реакцию на введение провокационной пробы в виде композиции антигенного ингибина. Кроме того, необходим быстрый, простой, надежный и недорогой способ определения, имеет ли птица гормональную предрасположенность обладать высокой или низкой яйценоскостью.

Потребность в композиции и способе увеличения воспроизводства яиц не ограничена лишь птицами. Сохраняется потребность в эффективной композиции и способе увеличения воспроизводства яйцеклеток у многих животных. Например, в течение длительного времени сохраняется потребность в увеличении воспроизводства яйцеклеток у большинства животных, которые разводятся в сельском хозяйстве, таких как свиньи, коровы, овцы и цыплята. В течение длительного времени сохраняется потребность в увеличении воспроизводства яйцеклеток у животных, имеющих мех, таких как норка, лисица, выдра, хорек и енот, а также высокая потребность для других животных, шкуры которых используются в декоративных целях. Необходимы также композиция и способ увеличения воспроизводства яйцеклеток для увеличения популяции многих животных, таких как экзотические виды или подверженные опасности виды, с целью предотвращения их вымирания. Далее, в течение длительного времени сохраняется потребность в увеличении воспроизводства яйцеклеток у животных, которые используются в гонках, для развлечений или шоу (соревнований), таких как лошади, собаки, кошки, животные, содержащиеся в зоопарках, и цирковые животные. Как свидетельствуют многочисленные примеры лечения бесплодия у человека, существует потребность увеличения воспроизводства яйцеклеток у человека. Таким образом, сохраняется потребность в композиции и способе увеличения овуляции у многих животных.

Настоящее изобретение относится к композиции и способу получения ксеногенного белка, содержащего ингибин или его фрагмент и белок-носитель. Белок ингибин или его фрагмент может быть ингибином птиц, ингибином млекопитающих или ингибином пресмыкающихся. Белок-носитель включает, помимо прочих, однако ими не ограничивается, белок, связывающий мальтозу, или бычий сывороточный альбумин. Предпочтительным белком-носителем является белок, связывающий мальтозу.

Ксеногенный белок может быть либо ингибином, конъюгированным с белком-носителем, либо ингибином, слитым с белком-носителем. Способ получения слитого ксеногенного белка включает введение комплементарной ДНК, которая кодирует экспрессию ингибина или его фрагмент, в вектор, содержащий кодирующую информацию для получения белка-носителя. После введения вектора в систему экспрессии в этой системе экспрессируется слитый ксеногенный белок. Преимущественно ксеногенный белок включает ингибин бескилевых, такой как ингибин страуса, ингибин эму и ингибин нанду.

Настоящее изобретение также относится к увеличению производства яйцеклеток у животных путем назначения ксеногенного белка по настоящему изобретению, который содержит ингибин или его фрагмент и белок-носитель. Способ заключается в назначении эффективного количества белка животному, так что воспроизводство яйцеклеток у животного увеличивается. Преимущественно у животного возникает иммунологическая ответная реакция, направленная против белка. Более предпочтительно иммунологическая ответная реакция направлена также против белка ингибина, продуцируемого животным (эндогенного ингибина). Способ приводит к увеличению воспроизводства яйцеклеток у женских особей животных, которые продуцируют ингибин, таких как млекопитающие, пресмыкающиеся и птицы, в частности, бескилевые птицы. В частности, указанный способ увеличивает воспроизводство яиц и женских особей бескилевых, таких как страус, эму и нанду.

Настоящее изобретение относится к способу ускорения начала яйценоскости у самок птиц, который включает стадию назначения самке птицы эффективного количества ксеногенного белка, содержащего альфа-субъединицу белка ингибина птиц или его фрагмент и белок-носитель, так что начало яйценоскости у птиц ускоряется. Настоящее изобретение относится также к способу увеличения количества яиц с низким содержанием холестерина, которые производятся самкой птицы, и включает стадию назначения самке птицы эффективного количества ксеногенного белка, содержащего альфа-субъединицу белка ингибина птиц или его фрагмент и белок-носитель, так что птица производит большее количество яиц с низким содержанием холестерина. Настоящее изобретение относится также к способу увеличения общей продолжительности периода яйценоскости у самок птиц, который включает стадию назначения самке птицы эффективного количества ксеногенного белка, содержащего альфа-субъединицу белка ингибина птиц или его фрагмент и белок-носитель, так что общая продолжительность периода яйценоскости у птиц увеличивается.

Настоящее изобретение относится также к способу получения антител, направленных против ксеногенного белка по настоящему изобретению. В общем случае способ получения антител, направленных против ксеногенного белка, заключается в назначении животному эффективного количества ксеногенного белка, содержащего белок ингибин или его фрагмент и белок-носитель, так что у животного возникает иммунологическая ответная реакция, направленная против ксеногенного белка. Наконец, у животного берут образец крови и из ее сыворотки выделяют антитела, направленные против ингибина. Антитела преимущественно выделяют из сыворотки, пропуская сыворотку через колонку, содержащую эффективные количества белка-носителя, с целью отделения антитела от сыворотки.

Далее, настоящее изобретение относится к быстрому, простому, надежному и недорогому способу определения, имеет ли птица гормональную предрасположенность к обладанию высокой или низкой яйценоскостью. Способ заключается в определении количества ингибина, продуцируемого животным, которое коррелирует со способностью животного производить яйцеклетки. Если коротко, то способ определения количества ингибина в крови животного заключается в отборе образца крови у животного и контактировании образца крови с антиингибиновыми антителами, которые специфично направлены против эндогенного ингибина животного. Образец крови контактирует с антиингибиновыми антителами в условиях, которые позволяют антителам селективно взаимодействовать с ингибином, который присутствует в образце. Затем не вступившие во взаимодействие антитела отделяют от вступивших во взаимодействие антител и определяют количество антител, которые вступили во взаимодействие.

Настоящее изобретение относится также к быстрому, простому, надежному и недорогому способу определения, дает ли животное иммунологическую ответную реакцию на введение провокационной пробы в виде композиций, содержащей ингибин. Если коротко, то способ включает связывание ингибина или ксеногенного белка по настоящему изобретению с твердой фазой и контактирование иммобилизованного ингибина с образцом крови животного, которого подвергают тестированию.

Образец контактирует с иммобилизованным ингибином в условиях, при которых ингибин селективно взаимодействует с антиингибиновыми антителами в образце. После удаления не вступивших во взаимодействие антител из образца добавляют некоторое количество содержащих метку антител второго животного, которые направлены против класса антител первого животного. Содержащие метку антитела, которые направлены против антител животного затем селективно взаимодействуют с антителами, которые связаны с иммобилизованным ингибином. После удаления непрореагировавших антител, содержащих метку, определяют наличие или количество вступивших во взаимодействие антител, содержащих метку, путем визуализации метки. Так, способ позволяет установить присутствие и количество антител, направленных против ингибина животного, а потому позволяет определить, способно ли животное давать иммунологическую ответную реакцию на введение композиции, содержащей ингибин.

Таким образом, целью настоящего изобретения является содержащая ингибин композиция, которая индуцирует иммунологическую ответную реакцию у животного при ее введении животному.

Еще одной целью настоящего изобретения является ксеногенный белок, содержащий ингибин или его фрагмент и белок-носитель.

Еще одной целью настоящего изобретения является композиция, включающая слитый ксеногенный белок, содержащий ингибин или его фрагмент.

Целью настоящего изобретения является также способ получения ксеногенного белка, в котором один из белков содержит ингибин или его фрагмент.

Еще одной целью изобретения является способ получения слитого ксеногенного белка, в котором один из белков содержит ингибин или его фрагмент.

Еще одной целью настоящего изобретения является способ получения ксеногенного белка, содержащего ингибин или его фрагмент и белок-носитель.

Целью настоящего изобретения является способ ускорения начала яйценоскости (полового созревания) у птиц.

Целью настоящего изобретения является способ ускорения начала яйценоскости (полового созревания) у бескилевых, таких как страусы или эму.

Еще одной целью настоящего изобретения является способ ускорения начала яйценоскости (полового созревания) у Psittaciformes.

Еще одной целью настоящего изобретения является способ увеличения общей продолжительности яйценоскости птицы в течение ее жизни.

Еще одной целью настоящего изобретения является способ уменьшения или устранения необходимости в линьке яйценесущих птиц.

Еще одной целью настоящего изобретения является способ, позволяющий заставить птиц откладывать яйца, которые содержат меньшее количество холестерина, чем обычные яйца, откладываемые этими видами птиц.

Еще одной целью настоящего изобретения является способ увеличения уровня воспроизводства яйцеклеток у животных.

Еще одной целью настоящего изобретения является способ увеличения уровня воспроизводства яйцеклеток у млекопитающих.

Еще одной целью настоящего изобретения является способ увеличения уровня воспроизводства яйцеклеток у людей.

Еще одной целью настоящего изобретения является способ увеличения уровня воспроизводства яйцеклеток у коров.

Еще одной целью настоящего изобретения является способ увеличения уровня воспроизводства яиц у пресмыкающихся.

Еще одной целью настоящего изобретения является способ увеличения уровня воспроизводства яиц у птиц.

Еще одной целью настоящего изобретения является способ увеличения уровня воспроизводства яиц у бескилевых, таких как страус и эму.

Еще одной целью настоящего изобретения является способ увеличения уровня воспроизводства яиц у цыплят.

Еще одной целью настоящего изобретения является быстрый, простой, надежный и недорогой способ определения, дает ли животное иммунологическую ответную реакцию на введение провокационной пробы в виде композиции, содержащей ингибин или его фрагмент.

Еще одной целью настоящего изобретения является быстрый, простой, надежный и недорогой способ определения, имеет ли животное гормональную предрасположенность к обладанию высокой или низкой яйценоскостью.

Еще одной целью настоящего изобретения является быстрый, простой, надежный и недорогой способ определения, имеет ли птица гормональную предрасположенность к обладанию высокой или низкой яйценоскостью.

Еще одной целью настоящего изобретения является способ получения антител, направленных против ингибина или его фрагмента.

Еще одной целью настоящего изобретения является способ получения антител, направленных против ксеногенного белка, содержащего ингибин или его фрагмент.

Еще одной целью настоящего изобретения является способ точного определения количества ингибина, содержащегося в крови животного.

Еще одной целью настоящего изобретения является композиция, содержащая антитела, направленные против антител другого животного.

Еще одной целью настоящего изобретения является способ получения антител животного, направленных против антител другого животного.

Эти и другие цели, особенности и преимущества настоящего изобретения станут понятны после рассмотрения приведенного далее подробного описания вариантов осуществления настоящего изобретения и прилагаемой формулы изобретения.

На фиг. 1 приведен полиакриламидный гель для электрофореза в присутствии додецилсульфата натрия, где А соответствует антителам анти (ингибин цыпленка связывающий мальтозу белок), В соответствует плазмиде pMAL-с, используемой в качестве стандартного вектора, С соответствует молекуле белка, применяемой в качестве стандарта массы, D соответствует реальному вектору pMAL-с, используемому для получения слитого ксеногенного белка, E соответствует очищенному слитому белку ингибин цыпленка - связывающий мальтозу белок (ксеногенному белку) по настоящему изобретению, a F соответствует элюенту после очистки, который не был загружен вместе со ксеногенным белком.

Фиг. 2 иллюстрирует воздействие иммунизации -субъединицей ингибина на количество яиц, откладываемых курицами за день ("HDEP"), для японского перепела с использованием связывающего мальтозу белка, слитого с белком, имеющим кодовое название сINA515. В частности, фиг. 2 является графическим представлением данных, приведенных в Таблице 2 Примера 8.

Фиг. 3 иллюстрирует воздействие иммунизации -субъединицей ингибина на количество яиц, откладываемых курицами за день ("HDEP"), для японского перепела с использованием связывающего мальтозу белка, слитого с белком, имеющим кодовое название cINA515, когда проводятся лишь две инъекции; контрольная и иммунизация ингибином. В частности, фиг. 3 является графическим представлением данных, приведенных в Таблице 3 Примера 8.

Термин "птица" или "домашняя птица" используется в настоящем описании для обозначения члена класса Aves животных, которые отличаются тем, что являются теплокровными откладывающими яйца животными, в основном приспособленными для летания. Термин "бескилевые" используется в настоящем описании для обозначения группы не способных влетать, в основном больших бегающих птиц, состоящих из нескольких отрядов и включающих эму, страусов киви и казуаров. Термин "Psittaciformes" в контексте настоящего изобретения обозначает попугаев, которые являются содержащим одно семейство отрядом птиц, проявляют зигодактилизм и имеют сильный кривой клюв. Под "попугаем" понимают любого члена семейства птиц Psittacidae (единственное семейство Psittaciformes), которые отличаются коротким, прочным, сильно искривленным клювом.

Термин "яйцо" используется в настоящем описании для обозначения большой женской яйцеклетки, заключенной в пористую известковую или кожаную оболочку, которая продуцируется птицей или пресмыкающимся. Выражение "продуцируется птицей или пресмыкающимся" используется в настоящем описании для обозначения акта кладки яйца птицей, или "откладки яиц". Термин "зрелая яйцеклетка" используется для обозначения женской половой клетки, которую называют также яйцом. Таким образом, воспроизводство яйцеклеток у всех животных, за исключением птиц или пресмыкающихся, обозначает в настоящем описании воспроизводство и кладку зрелой яйцеклетки из яичника, или "овуляцию". Таким образом, следует понимать, что термин "яйцо" используется для обозначения большой женской половой клетки, заключенной в пористую известковую или кожаную оболочку, которая продуцируется птицей или пресмыкающимся, или зрелой яйцеклетки, которая продуцируется всеми другими животными.

Термины "кладка яйца" или "полова