Триазинсодержащие анионные соединения и фармацевтическая композиция на их основе

Триазинсодержащие анионные соединения и фармацевтическая композиция на их основе

Реферат

 

Описываются новые триазинсодержащие анионные соединения общей формулы (I), где А представляет радикал, выбранный из группы, включающей а, в, с, d; С' выбран из SO₃H или СООН; В' выбран из NR¹ или О, где R¹ выбран из H или (C₁-C₆) алкила с прямой или разветвленной цепью; Х выбран из Сl или радикала F, где U' выбран из группы, включающей -SO₂- или -СО-, -NHC(O) или -NHC(S)-; W выбран из радикалов i) или ii), где Y представляет -(СН₂)_n; n = 0-6; m = 0-2; Z выбран из H, СН₂ОН, СООН или CONR²R², где R² в каждом случае независимо выбран из H или (С₁-С₆)алкила, или их фармацевтически приемлемые соли или сложный эфир. Соединения пригодны для лечения вирусных инфекций, в частности, инфекций, вызванных респираторным синцитиальным вирусом. Описывается также фармацевтическая композиция на их основе. 2 с. и 40 з.п. ф-лы, 4 табл.

Настоящее изобретения относится к новым анионным соединениям, содержащим триазиновое кольцо, которые используются при лечении вирусных инфекций и, в частности, инфекций, вызванных респираторным синцитиальным вирусом человека (РСВЧ). Настоящее изобретение также относится к способам лечения вирусных инфекций и к фармацевтическим композициям для этого.

ПРЕДПОСЫЛКИ ИЗОБРЕТЕНИЯ Респираторный синцитиальный вирус человека (РСВЧ) был впервые в 1956 году широко распространен по всему миру. Он является важной причиной заболевания верхних и нижних дыхательных путей, вызывая болезнь у младенцев и у детей младшего возраста, давая в результате приблизительно 100000 госпитализаций и 5000 смертей в Соединенных Штатах Америки ежегодно (Chanock, R.М., Kim, H.K., Brandt, C.D. and Parrott, R.H. 1982. Respiratory syncytial virus, pp. 471-489, in Viral Infections of Humans, Second Edition, A.S. Evans, editor (Plenum Press, NY). Glezen, W.P., Taber, L.H., Frank, A.L. and Kasel, J. A. , 1986. Risk of primary infection and reinfection with respiratory syncytial virus. Am. J. Dis. Chil. 140; 543-546. MacDonald, N.E., Hall, C.B. , Suffin, S.C., Alexson, C., Harris, P.J., and Manning J. A. 1982. Respiratory syncytial virus infection in infants with congenital heart disease. New England Journal of medicine 307; 397-400.

Около 30% госпитализированных маленьких детей с острым респираторным заболеванием имеют инфекцию, вызванную респираторным синцитиальным вирусом человека. У детей более старшего возраста и у взрослых эта болезнь является менее острой. РСВЧ, по-видимому, является одной из главных причин (наравне с гриппом) заболеваемости и смертности у пожилых людей (Fleming, D.M., and Cross, K. W. , 1993. Respiratory syncytial virus or influenza? Lancet 342; 1507-1510).

Инфекции, вызванные респираторным синцитиальным вирусом, могут относиться ко всем сегментам дыхательных путей и обычно связаны с повышенной температурой, кашлем, насморком и утомляемостью, и диагностируются клинически как бронхит, воспаление бронхиол, пневмония, крупозное воспаление легких или вирусная инфекция. У детей более старшего возраста и у взрослых вирус обычно ограничивается репликацией в верхних дыхательных путях. Младенцы могут болеть в более острой форме, когда вирус распространяется в легкие. Заболевание легких может быть хроническим.

Первичное инфицирование респираторным синцитиальным вирусом происходит в начале жизни, обычно, в возрасте до 4 лет. Среди детей, болезнь, вызванная этим вирусом, имеет тенденцию происходить не менее раза в год в виде скорее резко выраженных приступов продолжительностью в несколько месяцев. Эпидемии являются резко ограниченными по времени, обычно в течение от 3 до 5 месяцев. При исследованиях в семьях, дети - учащиеся младших классов часто приносят вирус домой, инфицируя более младших членов семьи более серьезно, чем остальных членов семьи. Клинические последствия инфекции являются более серьезными при первом соприкосновении и становятся мягче у более старших индивидуумов, которые являются иммунологически защищенными.

Эффекты респираторного синцитиального вируса могут проявляться в виде от незаметной инфекции до острой пневмонии и смерти. Воспаление дыхательных путей является ответственным за большинство симптомов. Полное выздоровление в большинстве случаев происходит через одну- три недели с продуцированием антител, которые являются персистентными в течение всей жизни. В Соединенных Штатах Америки около 30% младенцев в возрасте одного года и 95% пятилетних детей имеют в крови антитела к респираторному синцитиальному вирусу. Повторная инфекция у младенцев постарше, у детей и взрослых с антителами дает в большинстве случаев слабо выраженные заболевания верхних дыхательных путей в форме простуды. У младенцев и детей младшего возраста инфекцию лечат рибавирином, противовирусным агентом широкого спектра действия. Использование этого вещества сильно ограничено из-за токсичности. Существует, следовательно, большая потребность в новом терапевтическом агенте для лечения инфекции, вызванной РСВЧ.

В патенте США 5359131 описаны стильбены сульфоновой кислоты, которые блокируют инфицирование клеток вирусом простого герпеса (ВПГ), вирусом иммунодефицита человека (ВИЧ) и цитомегаловирусом (ЦМВ).

Настоящее изобретение относится к новым анионным соединениям, содержащим триазиновое кольцо, которые обладают противовирусным действием, и, в частности, активностью в отношении респираторного синцитиального вируса человека (РСВЧ).

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ Настоящее изобретение относится к новым соединениям, выбранным из соединений общей формулы I: где A представляет собой радикал, выбранный из группы, включающей C' выбран из -SO₃H, -OSO₃H, -OH или COOH; В' является -NH, NR¹ или 0; R¹ выбран из H, (C₁-C₆) низшего алкила с прямой или разветвленной цепью, где атомы углерода могут быть необязательно замещены Cl, Br, F, OH или CN; X представляет Cl, F или радикал U' выбран из группы, включающей -SO₂, -CO, -NC(O) или -NC (S); W' выбран из радикалов: Y представляет -(CH₂)_n-; n равно 0-6; m равно 0-2; Z выбран из H, CH₃, CF₃, -CH₂-(галоген), где галогеном является Cl, Br, F или I, -CH₂OH, -COOH, -COO(C₁-C₆) низшего алкила с прямой или разветвленной цепью, -CONR²R², СN или и R², в каждом случае, независимо выбраны из H или (C₁-C₆) низшего алкила; или их фармацевтически приемлемые соли и эфиры.

Подразумевается, что в случаях, где m=0, пятичленные кольца указываются как W'.

Фармацевтически приемлемые соли соединений по настоящему изобретению являются такими солями, у которых катионы по существу не являются токсичными при дозе, вводимой для достижения желаемого эффекта, и не обладают независимой заметной фармакологической активностью. В качестве иллюстрации, эти соли включают соли щелочных металлов, например, Na или K; щелочноземельных металлов, таких как Ca или Mg; легких металлов группы IIIA, включая Al; и органических первичных, вторичных и третичных аминов и аммония. Предпочтительными являются соли натрия.

ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ Среди группы соединений, определенных формулой I, некоторые подгруппы соединений являются широко предпочтительными. Широко предпочтительными являются такие соединения или их фармацевтически приемлемые соли, где A представляет Особенно предпочтительными являются соединения, где C'=-SO₃H, B'=-NH, Y=-CH₂-, Z=-CH₂OH Наиболее предпочтительными являются соединения, где C'=-SO₃H, B'=-NH, Y=-CH₂CH₂-, Z=-CONH₂ Наиболее высоко предпочтительными являются соединения, где A представляет и C'=-SO₃H, B=-NH, Y=-CH₂CH₂-, Z=-CONH₂ Новые соединения по настоящему изобретению могут быть получены в соответствии со следующими схемами. Обращаясь к Схеме 1, конденсация 2, где A и В' указаны выше, с триазинами, имеющими структуру 3, где X является Cl, F или Br, при температуре около 0^oC и pH от около 6,5 до около 7,2 дает промежуточные соединения 4. Последующая реакция соединений формулы 4 с соединениями формулы 5, где U', В' и W' являются определенными выше, при температуре от около 45^oC до около 55^oC и pH 6,5-7,2, с последующим нагреванием при 100-120^oC и при pH 6,5- 7,2 дает желаемые продукты формулы I, выше, которые указаны на схемах I и II как 1.

При альтернативном подходе к соединениям формулы I, как показано на Схеме II, взаимодействие триазина 3, где X является Cl, Br или F, с соединениями 5, где В' и W' указаны выше, при температуре от около -5 до около 5^oC и pH 6,5- 7,2, дает продукты конденсации 6. Взаимодействие 6, где В' и W' указаны выше, и X является Cl, Br или F, с 2, где A и В' определены выше, при температуре от около 45^oC до около 55^oC и pH от около 6,5 до около 7,2, с последующим нагреванием от около 100^oC до около 120^oC и pH 6,5-7,2, дает 1.

Постадийная конденсация исходных соединений 2, как показано на Cхеме I, и 5, как показано на Схеме II, с триазинами 3, где X является Cl, Br или F, которые реагируют подобным образом в водных и в водно-органических средах в присутствии соответствующих оснований, таких как гидроксиды, карбонаты, фосфаты или бикарбонаты натрия или калия. Фосфатный буфер при pH 7,0 является предпочтительным.

Первая стадия конденсации проводится при pH в пределах от около 4 до около 8, предпочтительно при pH от около 6,5 до около 7,2 и при температурах от около -10^oC до около 30^oC, предпочтительно, от около -5^oC до около 5^oC. Обмен второго атома галогена в производных триазина осуществляется в том же диапазоне значений pH и при температуре от около 10 до около 70^oC, предпочтительно при температуре от около 45 до около 55^oC. Обмен третьего атома галогена у производных триазина осуществляется в том же самом диапазоне значений pH и при температурах от около 80^oC до около 150^oC, предпочтительно от около 100^oC до 120^oC.

Обмен второго или третьего атомов галогена у производных триазина формулы 6 (Схема II) осуществляется также в органической среде в присутствии органических оснований, таких как триалкиламины, включая триэтиламин, диизопропилэтиламин или N-(низший)алкилпиперидин.

Исходные продукты для использования в общих процессах синтеза, описанных в Схемах I и II, являются коммерчески доступными или могут быть синтезированы в соответствии с H. Adkins, Е. F. Steinbring, Е. Pickering. J. Amer. Chem. Soc., v. 46, p.1917(1924), G. В. Pat. N 1194388 (June 10, 1970) и патент США N 5359131 (Октябрь 25, 1994). Исходные соединения Формулы 2, где В' является кислородом, могут быть получены из замещенного соединения формулы 2 (B'=-NH₂), как показано на Схеме III.

Первичные ароматические амины 7, где A указано выше, подвергают взаимодействию с азотистой кислотой или с другими химическими реагентами (например, с органическим эфиром азотистой кислоты) для диазотирования первичного амина с получением диазониевых солей 8, которые подвергают гидролизу до соединений формулы 9, содержащих фенольные группы.

Согласно Схеме IV, соединения (10) стильбенового ряда могут быть преобразованы в соединения (11) дибензильного ряда в условиях каталитического восстановления (водород - Pd/C) или в подобных условиях восстановления, известных в данной области для преобразования замещенных стильбеновых соединений в дибензильные соединения. [Huang-Minlon, J. Amer. Chem. Soc. (1948) 70, 2802].

Соединения (12 и 13) формулы I с Z=-COOH могут быть получены путем основного гидролиза из соединений (14) при pH от 7,5 до 10,0, предпочтительно 8,0-8,5, и при температуре от 80 до 150^oC, предпочтительно, от 100 до 120^oC (Схема V).

м-Аминобензамиды 17, где U' представляет -SO₂ или -CO, Y и Z определены выше, синтезируют в соответствии со Схемой VI.

Имиды 15 преобразуют в м-нитросульфонаты 16, используя подходящий вариант способов амидирования или тосилирования (T.W. Greene, P.G.M. Wuts, Protective Groups in Organic Chemistry, JohnWiley & Sons, New York 1991, pp. 349-379). Нитросоединения 1б затем восстанавливают до аминосоединений 17 путем каталитической гидрогенизации (водород-Pd/C).

Пиперазиновые производные 21, 22, где Z является -COOH или -CONH₂, синтезируют в соответствии со Схемой VII из 3,5-пиперидинкарбоновой кислоты 18. Восстановление ароматического кольца и м-нитротосилирование пиперидинового производного 19 ведет к соединению 20, которое либо восстанавливается до карбоксилсодержащего соединения 21, либо преобразуется в карбамоилсодержащее соединение 22 путем этерификации или аммонолиза.

Настоящее изобретение также включает способы лечения млекопитающего, предпочтительно, человека, прививку против вирусной инфекции, способы, включающие введение млекопитающему, страдающему от действия такой инфекции, одного или нескольких соединений по настоящему изобретению и/или одного или нескольких фармацевтически приемлемых солей соединений. Вирусные инфекции, излечиваемые с помощью соединений и способов по настоящему изобретению, включают такие инфекции, которые вносятся респираторным синцитиальным вирусом человека, вирусом простого герпеса, цитомегаловирусом человека и вирусом гриппа, в частности, паравирусом гриппа 3.

Соединения по настоящему изобретению могут вводиться нуждающемуся в них млекопитающему любым предписанным способом, включая интраназальный, оральный, наружный, трансдермальный, парентеральный и интраперитональный. Ясно, что лечение млекопитающего, предпочтительно, человека, будет требовать различных дозировок активного соединения и различных режимов лечения, в зависимости от различных факторов, включая возраст, пол, вес, общее состояние здоровья и степень заболевания данного индивидуума, дозировка и режим должны быть определены соответствующим лечащим врачом. Эффективное противовирусное количество соединений, которые должны вводиться, обычно будет находиться в пределах от около 0,5 мг/кг до около 500 мг/кг от веса тела животного в виде одной или нескольких дозировок в день. Дозировки предпочтительно даются в виде дробных доз от двух до четырех раз в день или в виде формы, обеспечивающей замедленный выход. Для наиболее крупных млекопитающих общая дневная доза составляет от около 1 до 100 мг, предпочтительно, от около 2 до 80 мг. Дозированные формы, пригодные для внутреннего использования, содержат от около 0,5 до 500 мг активного соединения в однородной смеси с твердым или жидким фармацевтически приемлемым носителем. Этот режим дозировки может быть установлен для обеспечения оптимальной терапевтической реакции. Например, несколько дробных доз могут вводиться ежедневно, либо доза может пропорционально уменьшена, если это показано необходимостью терапевтической ситуации. Соединения по настоящему изобретению могут вводиться с другими противовирусными агентами или без них.

Настоящее изобретение также включает фармацевтические композиции, которые могут быть использованы с этими способами лечения. Фармацевтические композиции могут содержать одно или несколько соединений по настоящему изобретению или их фармацевтически приемлемые соли и один или несколько фармацевтически приемлемых носителей, разбавителей, наполнителей, связующих, ароматизирующих агентов и так далее. Для орального введения, композиции, содержащие соединения по настоящему изобретению, включают твердые или жидкие композиции, такие как капсулы, драже, лепешки, пилюли, таблетки, порошки, сиропы, растворы, суспензии и эмульсии. Твердые формы могут быть инкапсулированы в твердых или мягких желатиновых капсул и могут содержать обычно используемые фармацевтически различные наполнители, волокна, вспомогательные вещества, разбавители, смазывающие вещества, разрыхлители, суспендирующие или стабилизирующие агенты, и связывающие агенты, включающие, но не ограничивающиеся ими, стеарат магния, лаурилсульфат натрия, микрокристаллическую целлюлозу, поливинилпирролидон, желатин, альгиновую кислоту, аравийскую камедь, цитрат натрия, комплексные силикаты, карбонат кальция, глицин, декстрин, сахарозу, сорбит, фосфат кальция, дикальцийфосфат, сульфат кальция, лактозу, каолин, маннитол, хлорид натрия, тальк, сухой крахмал (например, крахмал из кукурузы, картофеля или тапиоки) и порошкообразный сахар. Препараты также могут включать антиоксиданты, например, витамин Е, аскорбиновую кислоту, ВНТ и ВНА. Такие фармацевтические препараты могут, например, содержать от около 0,05 вплоть до около 90% активного ингредиента в сочетании с носителем, чаще, между около 5% и 60% по массе.

Подходящие наполнители для жидких пероральных препаратов включают такие разбавители, как вода и спирты, такие как этанол, бензиловый спирт и полиэтиленовые спирты, с поверхностно-активным веществом, суспендирующим агентом или эмульгирующим агентом или без них. Дисперсии могут быть приготовлены в глицерине, жидких полиэтиленгликолях или в их смесях в маслах. При обычных условиях хранения и использования, эти препараты содержат консерванты для предотвращения роста микроорганизмов.

Соединения по настоящему изобретению также могут вводиться парентерально в виде дозированной формы для инъекции в физиологически приемлемом разбавителе, таком как стерильные жидкости или их смеси с водой, включая воду, солевой раствор, водный раствор декстрозы и другие фармацевтически приемлемые растворы сахаров, спирты, такие как этанол, изопропанол или гексадециловый спирт, гликоли, такие как пропиленгликоль или полиэтиленгликоль, кетали глицерина, такие как 2,2-диметил-1,3- диоксолан-4-метанол, простые эфиры, такие как поли(этиленгликоль)400, фармацевтически приемлемое масло, жирная кислота, эфир жирной кислоты или глицерид, или ацетилированный глицерид жирной кислоты при добавлении или без добавления фармацевтически приемлемого поверхностно-активного вещества, такого как мыло или детергент, суспендирующего агента, такого как пектин, карбомеры, метилцеллюлоза, гидроксипропилметилцеллюлоза или карбоксиметилцеллюлоза, эмульгирующего агента или фармацевтических вспомогательных веществ. Во всех случаях, форма должна быть стерильной и должна быть жидкой до такой степени, чтобы обеспечивать легкое набирание в шприц. Она должна быть стабильной при условиях производства и хранения и должна быть защищена от разрушающего действия микроорганизмов, таких как бактерии и грибки.

Фармацевтически приемлемые масла, которые пригодны для использования в рассматриваемом препарате, включают такие масла из нефти, животного, растительного или синтетического происхождения, включая арахисовое масло, соевое масло, кунжутное масло, хлопковое масло, оливковое масло, подсолнечное масло, вазелин и минеральное масло. Жирные кислоты, которые могут использоваться, включают олеиновую кислоту, стеариновую кислоту и изостеариновую кислоту, при этом пригодные для использования эфиры жирных кислот могут включать этилолеат и изопропилмиристат. Подходящие мыла включают соли жирных кислот и щелочных металлов, аммония и триэтаноламина. Приемлемые детергенты включают катионные детергенты, например, диметилдиалкиламмоний галогениды, алкилпиридиний галогениды и алкиламиноацетаты, и анионные детергенты, такие как алкил, арил и олефинсульфонаты, алкил, олефин, эфир и моноглицеридсульфаты, и сульфосукцинаты. Пригодные для использования неионные детергенты могут включать оксиды жирных аминов, алканоламиды жирных кислот и полиоксиэтиленполипропиленовые сополимеры. Амфотерные детергенты могут включать алкил-бета-аминопропионаты и четвертичные соли 2-алкилимидазолина, и их смеси.

Парентеральные композиции по настоящему изобретению предпочтительно содержат от около 0,5% до около 25% по весу активных соединений, описанных здесь, в растворе. Парентеральные препараты в форме стерильных растворов или суспензий для инъекций будут также предпочтительно содержать от около 0,05% до около 5% суспендирующего агента в изотонической среде. Могут быть добавлены буферы и консерванты. Может быть также добавлено соответствующее поверхностно-активное вещество. Эти поверхностно-активные вещества могут включать эфиры полиэтиленсорбитан жирных кислот, такие как сорбитанмоноолеат, и высокомолекулярные аддукты этиленоксида с гидрофобным основанием, получаемые путем конденсации пропиленоксида с пропиленгликолем.

Фармацевтические композиции по настоящему изобретению также включают композиции, пригодные для наружного и трансдермального употребления. Такие препараты могут включать накожное нанесение соединений по настоящему изобретению в системе растворителей, предназначенной для усиления трансдермального поглощения, включая этанол или диметил- сульфоксид, вместе или без наполнителей. Предпочтительно, эти рассматриваемые наружные и трансдермальные композиции включают добавление соединений по настоящему изобретению в повязку из резервуара и пористой мембраны или в пластырь из разнообразных твердых матриц. Трансдермальные пластыри такого типа описаны в патентах США NN 3742951, 3797494, 3996934, 4031894, 4573996 и 4956171.

Интраназальные препараты и лекарства по настоящему изобретению могут вводиться в виде капель в нос или в виде интраназального спрея, такого как ингалятор. Препараты могут включать любое сочетание фармацевтически приемлемых компонентов, которые являются пригодными для использования в интраназальном препарате, включая стерильную воду, солевой раствор, стабилизирующий агент, такой как полиэтиленгликоль, имеющий молекулярный вес в диапазоне от около 200 до 7500, или их смеси.

Соединения по настоящему изобретению могут быть использованы для лечения вирусных инфекций либо профилактического, либо терапевтического. Для профилактического использования соединения может быть введено интраназально в виде спрея, или в виде капель ежедневно для предотвращения инфицирования вирусом, в частности, РСВ. Продолжительность времени, в течение которого должно проводиться лечение, будет отражать вероятность инфицирования конкретным вирусным агентом и может зависеть от эпидемической ситуации и факторов риска, которым подвергается данный пациент. Соединения, вводимые таким путем, могут быть в различных концентрациях от 0,1 до 30 мг/мл, получаемый объем изменяется от 0,1 до 1 мл/ноздря. Альтернативно, соединения могут вводиться в организм путем перорального и внутривенного дозирования. Для терапевтического использования соединения могут вводиться местно в легкие в виде аэрозоля или могут вводиться системно путем перорального или внутривенного дозирования. Такое дозирование может вводиться в течение периода времени, необходимого для подавления вирусной инфекции.

Соединения по настоящему изобретению и их получение станет понятным далее с помощью последующих неограничивающих примеров. Промежуточные продукты реакций, продукты и возможные побочные продукты анализируют с помощью тонкослойной хроматографии (ТСХ) на силикагеле, с использованием пропан-2- ола/этилацетата/4% аммония в воде (8:1:1, объем/объем) в качестве растворителя и высокоэффективную жидкостную хроматографию с обращенной фазой (ВЭЖХ - ОФ) [колонка: Vydac C₁₈ (4,6 мм х 25 см), 5 мм; подвижная фаза: A - ацетонитрил, B - 0,1 М аммонийацетат в воде (pH 5,5), C-метанол; градиент: от смеси A-B-C (20: 65:15, объем/объем) до смеси A-B-C (20:55:25, объем/объем) в течение 10 минут] . Препаративная ВЭЖХ-ОФ производится на системе для градиентной ВЭЖХ Rainin, с использованием препаративной колонки Vydac C₁₈ Peptide/Protein (10 мм, 22 мм х 25 см); подвижная фаза: A - метанол/0,1 М аммонийацетат в воде (pH 5,5) (1:4, объем/объем), B - метанол/ацетонитрил (1:4, объем/объем); градиент: 18-32% B в течение 10 минут.

Пример 1 Динатриевая соль 4,4'-бис[4,6-ди[3-аминофенил-N, N-бис(2- карбамоилэтил)сульфонилимино] -1,3,5-триазин-2-иламино] - стильбен-2,2'-дисульфоновой кислоты Раствор хлорангидрида циануровой кислоты (3,87 г, 21 ммоль) в диоксане (25 мл) добавляют к фосфатному буферу (100 мл, 0,3 М, pH 7) с перемешиванием при температуре -3 - ^oC.

Затем добавляют раствор 4,4'-диаминостильбен-2,2'- дисульфоновой кислоты (3,70 г, 10 ммоль) в 1 н. NaOH (20 мл) в течение 20-минутного периода и pH поддерживают при 6,5-7,2 путем добавления 1 н. NaOH. Перемешивание продолжают в течение последующего 1 часа при той же температуре и pH, при этом реакцию контролируют на степень завершенности с помощью аналитической ВЭЖХ (выход 95%). Добавляют раствор 3-аминофенил-N,N-бис(2-карбамоилэтил)сульфонилимина (13,20 г, 42 ммоль) (Патент Великобритании 1194388; Июль 10, 1970) в диметилсульфоксиде (ДМСО) (100 мл) в течение 20-минутного периода и температуру поднимают до 50^oC. Перемешивание продолжают в течение 2,5 часов при той же температуре, а затем в течение 40 часов при 100-110^oC, поддерживая pH при 6,6-7,2 путем добавления 1 н. NaOH. Как только реакция завершается, что определяют с помощью аналитической ВЭЖХ (или ТСХ), смесь охлаждают до 20^oC и подкисляют 5,6 н. хлористоводородной кислотой до pH 2. Добавляют хлорид натрия (60 мл, 4 М) и выпавший в осадок продукт фильтруют, повторно растворяют в минимальном объеме воды путем добавления 1 н. NaOH до pH 7 и повторно высаживают путем добавления хлорида натрия. Выпавший осадок фильтруют, промывают холодной водой (20 мл), пропан-2-олом (40 мл), ацетоном (60 мл) и сушат в вакууме при 50^oC. Выход 13,0 г (72%); т.пл. > 250^oC, разл. ; УФ (вода): 273 нм ( log 5,11), 350 нм ( log 4,89); MC(ES) (m/z): М^-2 887,9; MB 1821,2.

Пример 2 Динатриевая соль 4,4'-бис[4,6-ди[3-аминофенил-N, N-бис(2- карбамоилэтил)сульфонилимино] -1,3,5-триазин-2-иламино] - стильбен-2,2'-дисульфоновой кислоты Суспензию динатриевой соли 4,4'-диаминостильбен-2,2'- дисульфоновой кислоты (1,21 г, 2,92 ммоль) и 2-хлор-4,6-ди [3-аминофенил-N,N-бис (2- карбамоилэтил) сульфонилимино] -1,3,5-триазина (пример 6) (4,47 г, 6,44 ммоль) в сульфолане (70 мл) и диизопропилэтиламине (1,5 мл) нагревают в запаянной тонкостенной стеклянной пробирке до 115^oC. Нагревание продолжают в течение 40 часов. Как только реакция завершается, что определяют с помощью аналитической ВЭЖХ (или ТСХ), смесь охлаждают до 30^oC, добавляют 1 н. NaOH (6,6 мл) и продукт высаживают путем добавления пропан-2-ола (200 мл). Выпавший в осадок фильтруют, промывают ацетоном (30 мл) и повторно растворяют в минимальном объеме воды, и повторно высаживают путем добавления этанола. Выпавший осадок после фильтрования промывают эфиром (30 мл) и сушат в вакууме при 50^oC. Выход 4,84 г (91%).

Пример 3 Динатриевая соль 4,4'-бис[4,6-ди[3-аминофенил-N, N-бис(2- карбамоилэтил)сульфонилимино] -1,3,5-триазин-2-иламино] -стильбен-2,2' -дисульфоновой кислоты Указанное в заголовке соединение получают, используя общие условия примера 1, где 2,4,6-трифтор-1,3,5-триазин (304 мг, 2,25 ммоль) взаимодействует с 4,4'-диаминостильбен-2,2'-дисульфоновой кислотой (455 мг, 1,10 ммоль) в течение 1 часа, а затем с 3-аминофенил-N,N-бис(2-карбамоилэтил)сульфонилимином (1,45 г, 4,62 ммоль) (Патент Великобритании 1194388; Июнь 10, 1970), с последующей очисткой и получением желаемого соединения (1,21 г, 61%).

Соединения, синтезированные с помощью способов по примерам 1-3, являются идентичными, как показано ВЭЖХ, УФ и масс-спектрами.

Пример 4 Динатриевая соль 4,4'-бис[4,6-ди[3- аминофенил-N, N-бис(2-карбамоилэтил)сульфонилимино]-1,3,5- триазин-2-иламино]-бифенил-2,2'-дисульфоновой кислоты Указанное в заголовке соединение получают в соответствии со способом по примеру 2, используя динатриевую соль 4,4'- диаминобифенил-2,2'-дисульфоновой кислоты (1,02 г, 2,62 ммоль) и 2-хлор-4,6-ди[3-аминофенил-N,N-бис(2-карбамоилэтил)- сульфонилимино] -1,3,5-триазин (пример 6) (4,26 г, 5,76 ммоль) в 60 мл ДМСО-сульфолане (1:3, объем/объем) и диизопропилэтиламине (1,2 мл). Продукт получают в виде бесцветного твердого вещества (3,90 г, 83%); т.пл. >250^oC, разл.; УФ (вода): 272 нм (log 4,86); MC(ES) (m/z): М^-2 874,1; MB 1794,2.

Пример 5 Динатриевая соль 4,4'-бис[4,6-ди[3-аминофенил-]-N,N-бис(2- гидроксиэтил)сульфонилимино]-1,3,5-триазин-2-иламино]- стильбен-2,2'-дисульфоновой кислоты Указанное в заголовке соединение получают в соответствии со способом, используемым при осуществлении примера 2, применяя 4,4'-диаминостильбен-2,2'-дисульфоновую кислоту (28 мг, 0,075 ммоль) и 95 мг (0,15 ммоль) 2-хлор-4,6-ди[3- аминофенил-N,N-бис(3-гидроксиэтил)сульфонилимино]-1,3,5- триазин (пример 6) в сульфолане (20 мл) и диизопропилэтиламин (35 мл) при 110^oC в течение 18 часов. Охлажденную реакционную смесь смешивают с деионизированной водой (40 мл) и раствор сырого продукта очищают путем препаративной ВЭЖХ-ОФ. Фракции, содержащие желаемый продукт, объединяют, органические растворители выпаривают в вакууме (10 мм рт.ст.) при 30^oC, и продукт концентрируют, обессоливают и отделяют на октадециловом (C18) картридже (900 мг, получен от Burdick & Jackson). Картридж промывают водой (30 мл), и продукт повторно экстрагируют метанолом (50 мл). Выпаривание метанола дает 12 мг (11%) желаемого продукта; т. пл. >250^oC, разл.; УФ (вода): 273 нм (log 4,97); 350 нм (log 4,81); MC(ES) (m/z): М^-2 779,0; MB 1604,0.

Пример 6 2-Хлор-4,6-ди[3-аминофенил-N, N-бис(2-карбамоилэтил)- сульфонилимино]-1,3,5-триазин Раствор хлорангидрида циануровой кислоты (4,2 г, 22,7 ммоль) в диоксане (55 мл) добавляют по каплям, перемешивая, к фосфатному буферу (120 мл, 0,3 М, pH 7) и измельченному льду (10 г) при температуре -2^o - 0^oC. К полученной в результате мелкодисперсной суспензии добавляют по каплям в течение 30 минут раствор 3-аминофенил-N,N-бис(2-карбамоилэтил)сульфонилимина (15,0 г, 47,8 ммоль) (Патент Великобритании 1194388; Июнь 10, 1970) в N,N-диметилформамиде (125 мл) и pH поддерживают при 6,5-7,2 путем добавления 1 н. NaOH. Перемешивание продолжают в течение еще 1 часа (0^oC, pH 7,0) и температуру поднимают до 55^oC. Перемешивание продолжают в течение 2,5 часа, при этом реакцию контролируют на степень завершенности с помощью аналитической ВЭЖХ (или ТСХ). Как только реакция завершается, что определяется с помощью аналитической ВЭЖХ (или ТСХ), смесь охлаждают до 0^oC, добавляют воду (160 мл), и выпавший в осадок продукт фильтруют, промывают холодной водой (50 мл), ацетоном (50 мл) и сушат в вакууме при температуре 4 0^oC. Выход 14,5 г (86%); т. пл. > 250^oC, разл.; УФ (ДМСО): 282 нм ( log 4,77); MC(Cl) (m/z): MH 740,1.

Пример 7 Динатриевая соль 4-[4,6-ди[3-аминофенил-N,N-бис(2-карбамоилэтил) сульфонилимино] -1,3,5-триазин-2-иламино] -4'-[4-хлор-6- [3-аминофенил-N,N-бис(2-карбамоилэтил)сульфонилимино] -1,3,5- триазин-2-иламино] стильбен-2,2'-дисульфоновой кислоты Раствор хлорангидрида циануровой кислоты (205 мг, 1,12 ммоль) в диоксане (1,5 мл) добавляют к фосфатному буферу (10 мл, 0,3 М, pH 7) при перемешивании при температуре -3-0^oC. Добавляют раствор динатриевой соли 4,4'-диаминостильбен-2,2'-дисульфоновой кислоты (225 мг, 0,54 ммоль) в фосфатном буфере (3 мл), и поддерживают pH 6,5-7,2 путем добавления 1 н. NaOH. Перемешивание продолжают в течение еще 1 часа при той же температуре и pH, при этом реакцию контролируют на степень завершенности с помощью аналитической ВЭЖХ (выход 97%). Добавляют раствор 3-аминофенил-N,N-бис(2-карбамоилэтил)- сульфонилимина (700 мг, 2,23 ммоль) в N,N-диметилформамиде (10 мл) в течение 10 минут, и температуру поднимают до 60^oC. Перемешивание продолжают в течение 3 часов при той же температуре и 20 часов при температуре 100-110^oC, поддерживая pH 6,6-7,2 путем добавления 1 н. NaOH. Как только реакция завершается, что определяют с помощью аналитической ВЭЖХ (или ТСХ), смесь охлаждают до 20^oC и подкисляют 5,6 н. соляной кислотой до pH 2, добавляют хлорид натрия (5 мл, 4 М) и выпавший в осадок продукт фильтруют, промывают холодной водой (2 мл) и сушат в вакууме при температуре 40^oC. Две порции раствора сырого продукта (около 1 г) в деионизированной воде (250 мл) очищают по отдельности с помощью препаративной ВЭЖХ-ОФ. Фракции, содержащие желаемый продукт, объединяют, органические растворители выпаривают в вакууме (10 мм рт.ст. ) при температуре 30^oC и продукт концентрируют, обессоливают и отделяют на октадециловом (C18) картридже (900 мг, получен от Burdick & Jackson). Картридж промывают водой (30 мл), и продукт повторно эктрагируют метанолом (50 мл). Упаривание метанола приводит к 268 мг (32%) желаемого продукта; т.пл. >250^oC, разл. ; УФ (вода): 273 нм ( log 4,83); 350 нм ( log 4,44); MC(ES) (m/z): М^-2 749,15; MB 1544,3.

Пример 8 Динатриевая соль 4,4'-бис[4-хлор-6-[3-аминофенил-N, N-бис(2- карбамоилэтил)сульфонилимино] -1,3,5-триазин-2-иламино]- стильбен-2,2'-дисульфоновой кислоты Раствор хлорангидрида циануровой кислоты (0,91 г, 4,95 ммоль) в диоксане (8 мл) добавляют к фосфатному буферу (30 мл, 0,3 М pH 7) при перемешивании при температуре -3 - 0^oC.

Добавляют раствор динатриевой соли 4,4'-диаминостильбен- 2,2'-дисульфоновой кислоты (1,00 г, 2,41 ммоль) в деионизированной воде (9 мл), и pH поддерживают при 6,5-7,2 путем добавления 1 н. NaOH. Перемешивание продолжают в течение еще 1 часа при той же температуре и pH, при этом реакцию контролируют на степень завершенности с помощью аналитической ВЭЖХ (выход 98%). Добавляют раствор 3-аминофенил-N,N-бис(2-карбамоилэтил)- сульфонилимина (1,57 г, 5,0 ммоль) в N,N-диметилформамиде (25 мл) в течение 10 минут и температуру поднимают до 50^oC. Перемешивание продолжают в течение 6 часов при той же температуре, поддерживая pH при 6,6-7,2 путем добавления 1 н. NaOH. Как только реакция завершается, что определяют с помощью аналитической ВЭЖХ (или ТСХ), смесь охлаждают до 0^oC и подкисляют 5,6 н. соляной кислотой до pH 2. Добавляют хлорид натрия (5 мл, 4 М) и выпавший в осадок продукт фильтруют, промывают холодной водой (8 мл), ацетоном (20 мл) и эфиром (20 мл) и сушат в вакууме при температуре 40^oC. Выход 2,37 г (80%), т.пл. > 300^oC, разл. ; УФ (вода): 273 нм ( log 4,57); 350 нм ( log 4,42); MC(ES) (m/z): М^-2 610,1; MB 1266,2.

Пример 9 Динатриевая соль 4-[4,6-ди[3-аминофенил-N,N-бис(2-карбамоилэтил) сульфонилимино] -1,3,5-триазин-2-иламино] -4'-[4-[3-аминофенил-N,N-бис (2-карбамоилэтил)сульфонилимино] -6-[3-аминофенил-N-(2-карбамаилэтил)- N'-(3-пропионовая кислота)]-1,3,5-триазин-2-иламино]стильбен-2,2' -дисульфоновой кислоты и ПРИМЕР 10 Динатриевая соль 4-[4,6-ди[3-аминофенил-N,N-бис(2- карбамоилэтил)сульфонилимино] -1,3,5-триазин-2-иламино] -4'-[4-[3- аминофенил-N-N-бис(2-карбамоилэтил)сульфонилимино] -6-[3- аминофенил-N,N-бис(3-пропионовая кислота)]-1,3,5-триазин-2- иламино]стильбен-2,2'-дисульфоновой кислоты К раствору соединения по примеру 1 (200 мг, 0,11 ммоль) в деионизированной воде (20 мл) добавляют 1 н. NaOH (300 мл) и смесь нагревают до кипения. Реакционную смесь оставляют нагреваться в течение 3 часов, охлаждают до 0^oC и подкисляют 5,6 н. соляной кислотой до pH 2. Добавляют хлорид натрия (10 мл, 4 М) и выпавший в осадок продукт фильтруют, промывают холодной водой (2 мл) и сушат в вакууме при температуре 40^oC. Раствор сырого продукта (около 180 мг) в дистиллированной воде (125 мл) очищают путем препаративной ВЭЖХ-ОФ. Фракции, содержащие желаемый продукт (пример 9), объединяют, органические растворители выпаривают в вакууме (10 мм рт.ст.) при температуре 30^oC и продукт концентрируют, обессоливают и отделяют на октадециловом (C18) картридже (900 мг, получен от Burdick & Jackson). Картридж промывают водой (30 мл) и продукт повторно эктрагируют метанолом (50 мл). Выпаривание метанола дает 24 мг (12%) желаемого продукта; т.пл. >250^oC, разл.; УФ (вода): 273 нм ( 5,02); 350 нм ( log 4,76); MC(ES) (m/z): M^-2 888,3; MB 1822,6.

Второй продукт (пример 10) выделяют из другой фракции, содержащей желаемое соединение (пример 10), путем ВЭЖХ-ОФ-разделения, используя при этом такие же методы концентрирования, обессоливания и отделения на октадециловом (C18) картридже, как описанные в примере 9. Выход 18 мг (9%), т.пл. >250^oC, разл. ; УФ (вода): 273 нм ( log 4,92); 350 нм ( log 4,69); MC(ES) (m/z): М^-2 889,2; MB 1824,4.

Пример 11 Динатриевая соль 4,4'-бис[4,6-ди[3-аминофенил-N, N-бис(2- карбамоилэтил)сульфонилимино] -1,3,5-триазин-2-иламино] - бибензил-2,2'-дисульфоновой кислоты Раствор соединения по примеру 1 (30 мг) в 30 мл воды-метанола (1:1, объем/объем) перемешивают с палладием на угле (10% Pd) в атмосфере водорода в течение 5 дней. Реакционную смесь фильтруют и растворитель выпаривают. Продукт отделяют путем препаративной ВЭЖХ-ОФ. Фракции, содержащие желаемый продукт, объединяют, органические растворители выпаривают в вакууме (10 мм рт. ст. ) при температуре 30^oC и продукт отделяют на октадециловом (C18) картридже (300 мг, получен от Burdick & Jackson). Картридж п