Ингибиторы сериновых протеаз

Ингибиторы сериновых протеаз

Реферат

 

Описываются новые ингибиторы сериновых протеаз, имеющие пиперидиновую боковую цепь общей формулы (I), где (A) - Н, необязательно замещенный D, L--гидроксиацетил, R¹, R¹-О-С(О)-, R¹-SO₂-, R²OOC-(chr²)_m-, где R¹ выбирают из (1-12С)алкила и (3-8С)циклоалкила, причем указанные группы могут быть замещены ОН-группой, и из (7-15С)аралкила, а каждая группа R² независимо представляет Н или имеет те же значения, которые указаны для R¹; m = 1, 2 или 3; В - связь, аминокислота формулы -NH-CH[CH₂)_pC(O)OH]-C(O)-, где р = 0, 1, 2 или 3; -N((1-12C)алкил)-СН₂-СО-, D-1-Piq, либо В представляет D-аминокислоту, имеющую гидрофобную боковую цепь, либо А и В, взятые вместе, представляют остаток R³R⁴N-chr⁵-C(O)-, где R³ и R⁴ независимо - R¹, R¹-О-С(О)-, R¹-С(О), R¹-SO₂-, а R⁵ представляет гидрофобную или основную боковую цепь; Х - L-аминокислота с гидрофобной боковой цепью; Y - -CO-NH-(1-6C)алкилен - С₆Н₅, -СООR⁶, где R⁶ - Н или (1-6С)алкил, -CONR⁷R⁸ независимо представляют Н или (1-6С)алкил либо R⁷ и R⁸, взятые вместе, представляют (3-6С)алкилен, либо Y представляет гетероцикл, выбранный из 2-тиазола, 2-бензотиазола, 2-оксазола или 2-бензоксазола; r = 0, 1, 2 или 3, или его фармацевтически приемлемые соли. Вышеуказанные соединения обладают антикоагулирующим действием и могут быть использованы для лечения или предупреждения заболеваний, опосредованных действием тромбина. Описывается также фармацевтическая композиция, содержащая этот ингибтор. 2 с. и 13 з.п. ф-лы, 2 табл.

Изобретение относится к ингибитору сериновых протеаз, имеющему пиперидиновую боковую цепь; к фармацевтическим композициям, содержащим этот ингибитор; а также к использованию указанного ингибитора в целях изготовления лекарственного средства для лечения и предупреждения заболеваний, ассоциированных с действием тромбина.

Сериновые протеазы представляют собой ферменты, которые, помимо других своих функций, играют важную роль в каскаде реакций свертывания крови. Членами этой группы протеаз являются, например, тромбин, трипсин, факторы VIIa, IXa, Ха, XIa, XIIa и белок С.

Тромбин представляет собой сериновую протеазу, которая регулирует последнюю стадию каскада реакций свертывания крови. Главная функция тромбина заключается в расщеплении фибриногена с продуцированием мономеров фибрина, которые посредством поперечных сшивок образуют нерастворимый гель. Кроме того, тромбин регулирует свое собственное продуцирование путем активации факторов V и VIII, которые действуют на более ранних стадиях каскада реакций. Важно также отметить, что тромбин функционирует на клеточном уровне, где он воздействует на специфические рецепторы, вызывая, тем самым, агрегацию тромбоцитов, активацию эндотелиальных клеток и пролиферацию фибропластов. Таким образом, тромбин играет роль центрального регулятора при гемостазе и образовании тромбов. Поскольку ингибиторы тромбина могут иметь широкий диапазон терапевтических применений, то в этой области были проведены обширные исследования.

При разработке синтетических ингибиторов сериновых протеаз, а более конкретно, тромбина, возрос интерес к небольшим синтетическим пептидам, которые распознаются протеолитическими ферментами по механизму, аналогичному распознаванию природных субстратов. В результате этого были получены новые пептидоподобные ингибиторы, такие как ингибиторы тромбина кратковременного действия.

Исследования по разработке более эффективных и более селективных ингибиторов тромбина неустанно продолжаются с целью получения ингибиторов тромбина, которые могли бы быть введены в малых дозах и которые имели бы меньше побочных эффектов и менее тяжелые побочные эффекты. Кроме того, особое внимание уделяется применимости ингибитора тромбина для перорального введения. Сильные ингибиторы тромбина для внутривенного введения являются клинически эффективными при острых состояниях, требующих лечения заболеваний, ассоциированных с действием тромбина. Однако для предупреждения заболеваний, ассоциированных с действием тромбина, таких как инфаркт миокарда, тромбоз и шок, требуется длительная терапия предпочтительно путем перорального введения определенных доз антикоагулянта.

Большинство пептидоподобных ингибиторов тромбина, описанных в предшествующих публикациях, содержат боковые цепи аргинина. Проблема заключается в том, что эти аргининсодержащие ингибиторы тромбина имеют низкую биодоступность при пероральном введении. В литературе описан ряд ингибиторов тромбина, которые вместо аргинина содержат лизиновые боковые цепи. Было высказано предположение, что более низкая основность лизина по сравнению с аргинином может приводить к повышению пероральной биодоступности этих ингибиторов. Примерами лизинсодержащих ингибиторов тромбина являются N-Me-Cha-Pro-Lys-COOH и их производные, описанные Jones et al., J.Enzyme Inhibition, 9 (1995), 43-60, и ингибиторы N-Me-D- Phe-Pro-Lys-X, где X представляет карбоксамид или карбоновую кислоту, описанные Lewis et al. Thrombosis and Haemostasis, 74(4) (1995), 1107-12. Однако ожидаемого улучшения не наблюдалось, и пероральная биодоступноссть нескольких лизинсодержащих ингибиторов тромбина была аналогична доступности ингибиторов, содержащих аргининовую боковую цепь (Lewis et al. Thrombosis and Haemostasis, 74(4) (1995), 1107-12). Другие ингибиторы тромбина были описаны в WO 94/25051, где лизиновые или аргининовые боковые цепи были заменены аминоциклогексильными радикалами, которые могут рассматриваться как изостеры лизина.

Авторами настоящей заявки было обнаружено, что ингибиторы сериновых протеаз, а в частности ингибиторы тромбина, Ха и VIIa, имеющие пиперидиновую боковую цепь, формулы I: где A представляет H, необязательно замещенный D,L--гидроксилацетил, R¹, R¹-O-C(O)-, R¹-C(O)-, R¹-SO₂-, R²OOC- (chr²)_m-SO₂, R²OOC-(chr²)_m-, H₂NCO-(chr²)_m- или N-защитную группу, где R¹ выбирают из (1-12C)алкила, (2-12C)алкенила, (2-12C)алкинила и (3-8C)циклоалкила, причем указанные группы могут быть необязательно замещены (3-8C)циклоалкилом, (1-6C)алкокси, оксо, ОН, COOH, CF₃ или галогеном, и из (6-14C)арила, (7- 15C)аралкила и (8-16C)аралкенила; причем их арильные группы могут быть необязательно замещены (1-6C)алкилом, (3-8C)циклоалкилом, (1- 6C)алкокси, ОН, COOH, CF₃ или галогеном; а каждая группа R² независимо представляет H или имеет те же значения, которые указаны выше для R¹; m=l, 2 или 3; В представляет связь, аминокислоту формулы -NH-СН[(CH₂)_pС(O)ОН]-С(O)- или ее сложноэфирное производное, где p = 0, 1, 2 или 3; -N((1-12C)алкил)-CH₂-СО-, N((2-12C)алкенил)-CH₂-СО-, -N((2-12C)алкинил)- CH₂-СО-, -N(бензил)-CH₂-СО-, D-1-Tiq, D-3-Tiq, D-Atc, Aic, D-1-Piq, D-3-Piq или L- или D-аминокислоту, имеющую гидрофобную, основную или нейтральную боковую цепь, где указанная аминокислота может быть необязательно замещенной N-(1-6C) алкилом; либо А и В, взятые вместе, представляют остаток R³R⁴N-chr⁵-C(O), где R³ и R⁴ независимо представляют R¹, R¹-O-C(О)-, R¹-C(О)-, R¹-SO₂-, R²OOC-(chr²)_m-SO₂, R²OOC -(chr²)_m-, H₂NCO-(chr²)_m- или N-защитную группу, либо один из R³ и R⁴, связанный с R⁵, образует 5- или 6-членное кольцо вместе с группой "N-C", с которой оно связано, где указанное кольцо может быть конденсировано с алифатическим или ароматическим 6-членным кольцом; a R⁵ представляет гидрофобную, основную или нейтральную боковую цепь; X представляет L-аминокислоту с гидрофобной боковой цепью, серин, треонин, циклическую аминокислоту, необязательно содержащую дополнительный гетероатом, выбранный из N, О или S, и необязательно замещенную (1-6C)алкилом, (1-6C)алкокси, бензилокси или оксо, либо X представляет -NR²-CH₂-C(O)- или фрагмент или где n=2, 3 или 4, a W представляет CH или N; Y представляет H, -CHF₂, -CF₂, -CO-NH-(1-6C)алкилен-C₆H₅, -COOR⁶, где R⁶ представляет H или (1-6C)алкил, -CONR⁷R⁸, а R⁷ и R⁸ независимо представляют H или (1-6C)алкил, либо R⁷ и R⁸, взятые вместе, представляют (3-6C)алкилен; либо Y представляет гетероцикл, выбранный из 2-тиазола, 2-тиазолина, 2-бензотиазола, 2-оксазола, 2-оксазолина и 2-бензоксазола, где указанные гетероциклы могут быть необязательно замещены (1-6C)алкилом, фенилом, (1-6C)алкокси, бензилокси или оксо; а r=0, 1, 2 или 3; либо их пролекарства или фармацевтически приемлемые соли являются сильными и селективными ингибиторами. Кроме того, некоторые соединения настоящего изобретения обладают хорошей биологической доступностью при пероральном введении.

Соединения настоящего изобретения могут быть использованы для лечения и предупреждения тромбин-опосредованных и ассоциированных с действием тромбина заболеваний. Такие заболевания включают ряд тромботических и протромботических состояний, при которых активируется каскад реакций свертывания крови и к которым относятся, но не ограничиваются ими, тромбоз глубокой вены, эмболия легких, тромбофлебит, окклюзия артерии в результате тромбоза или эмболии, повторная окклюзия артерии в процессе или после ангиопластики или тромболиза, рестеноз после повреждения артерии или после инвазивных кардиологических процедур, послеоперационный тромбоз или эмболия вен, острый или хронический артериосклероз, шок, инфаркт миокарда, рак и метастазы и нейродегенеративные заболевания. Соединения настоящего изобретения могут быть также использованы в качестве антикоагулянтов при искусственном кровообращении, необходимом при диализе и хирургических операциях. Соединения настоящего изобретения могут быть также использованы в качестве in vitro-антикоагулянтов.

Предпочтительные соединения настоящего изобретения имеют формулу I, где X представляет собой L-аминокислоту с гидрофобной цепью, серин, треонин или -NR²-CH₂-C(O). Другими предпочтительными соединениями формулы I являются соединения, в которых А является таким, как он был определен выше; B представляет связь, аминокислоту формулы -NH-CH[(CH₂)_pC(O)OH]-C(O)- или ее сложноэфирное производное, где p=0, 1, 2 или 3; -N((1-6C)алкил)-CH₂-СО-, N((2-6C)алкенил)-CH₂-СО-, N(бензил)-CH₂-СО-, D-1-Tiq, D-3-Tiq, D-Atc, Aic, D-1-Piq, D-3-Piq или D-аминокислоту, имеющую гидрофобную боковую цепь, где указанная аминокислота может быть необязательно замещенной N-(1-6C) алкилом; либо А и В, взятые вместе, представляют остаток R³R⁴N-chr⁵-C(O), а X представляет циклическую аминокислоту, необязательно содержащую дополнительный гетероатом, выбранный из N, О или S, и необязательно замещенную (1-6C) алкилом, (1-6C)алкокси, бензилокси или оксо; либо X представляет -NR²-CH₂-C(O)- или фрагмент или Более предпочтительными являются соединения формулы I, где А представляет H, 2-гидрокси-3-циклогексилпропионил-, 9-гидрокси-флуорен-9-карбоксил, R¹, R¹-SO₂-, R²OOC-(chr²)_m-SO₂, R²OOC-(chr²)_m-, H₂NCO-(chr²)_m- или N-защитную группу, где R¹ выбирают из (1-12C)алкила, (2-12C)алкенила, (6-14C)арила, (7-15C)аралкила и (8-16C)аралкенила; каждая группа R² независимо представляет H или имеет те же значения, которые были указаны для R¹; B представляет связь, D-1-Tiq, D-3-Tiq, D-Atc, Aic, D-1-Piq, D-3-Piq или D-аминокислоту, имеющую гидрофобную боковую цепь, где указанная аминокислота может быть необязательно замещенной N-(1-6C) алкилом; либо A и B, взятые вместе, представляют остаток R³R⁴N-chr⁵-C(О)-; Y представляет -CO-NH-(1-6C)алкилен-C₆H₅, - COOR⁶, -CONR⁷R⁸; либо Y представляет гетероцикл, выбранный из 2-тиазола, 2-тиазолина, 2-бензотиазола, 2-оксазола, 2-оксазолина и 2-бензоксазола.

Особенно предпочтительными являются соединения, в которых А представляет H, R¹, R¹-SO₂- или R²OOC-(chr²)_m-SO₂; B представляет связь, D-1-Tiq, D-3-Tiq, D-Atc, Aic, D-1-Piq, D-3-Piq или D-аминокислоту, имеющую гидрофобную боковую цепь; либо A и B, взятые вместе, представляют остаток R³R⁴N-chr⁵-С(O), где, по крайней мере, один из R³ и R⁴ представляет R²OOC-(chr²)_m- или R¹-SO₂-, а другой независимо представляет (1-12C)-алкил, (2-12C)алкенил, (2-12C)алкинил, (3-8C)циклоалкил, (7-15C)аралкил, R¹-SO₂- или R²OOC-(chr²)_m-, a R⁵ представляет гидрофобную боковую цепь; Y представляет -CO-NH-(1-6C)алкилен-C₆H₅, -COOR⁶, где R⁶ представляет H или (1-3C)алкил, -CONR⁷R⁸, где R⁷ и R⁸ независимо представляют H или (1-3C-алкил, либо R⁷ и R⁸, взятые вместе, представляют (3-5C)алкилен, либо Y представляет гетероцикл, выбранный из 2-тиазола, 2-бензотиазола, 2-оксазола или 2- бензоксазола.

Если А представляет R²OOC-(chr²)_m-, то B предпочтительно представляет D-аминокислоту, имеющую гидрофобную боковую цепь; либо А и В, взятые вместе, представляют остаток R³R⁴N-chr⁵-C(О)-, где, по крайней мере, один из R³ и R⁴ представляет R²OOC-(chr²)_m-, а другой независимо представляет (1-12C)алкил, (2-6C)алкенил, (3-8C)циклоалкил, бензил, R¹-SO₂- или R²OOC-(chr²)_m- ; X представляет 2-азетидинкарбоновую кислоту, пролин, пипеколиновую кислоту, 4-тиазолидинкарбоновую кислоту, 3,4-дегидропролин, 2-октагидроиндолкарбоновую кислоту или [N(3-8C)циклоалкил]-CH₂-C(О)-. Более предпочтительными являются соединения, где А представляет HOOC-CH₂-; B представляет D-Phe, D-Cha, D-Coa, D-Dpa, п-Cl-D-Phe, п-О метил-D-Phe, п-О этил-D-Phe, D- Nle, м-Cl-D-Phe, 3,4-ди-OMe-D-Phe, D-Chg; или A и B, взятые вместе, представляют остаток R³R⁴N-chr⁵-C(О)-, где, по крайней мере, один из R³ и R⁴ представляет HOOC-CH₂-, а другой независимо представляет (1-4C)алкил, (1-4C)алкил-SO₂- или HOOC-CH₂-; a R⁵ представляет (3-8C)циклоалкил, (3-8C)циклоалкил(1-4C)алкил, фенил, бензил, которые необязательно замещены хлором или (1-4C)алкокси. Наиболее предпочтительными являются соединения, в которых А представляет HOOC-CH₂-; B представляет D-Cha; X представляет пролин или -[N(циклопентил)] -CH₂-С(О)-.

Если А представляет R¹- SO₂-, то В предпочтительно представляет связь, D-1-Tiq, D-3-Tiq, D-Atc, Aic, D-1-Piq, D-3-Piq или D-аминокислоту, имеющую гидрофобную боковую цепь; либо А и В, взятые вместе, представляют остаток R³R⁴N-chr⁵-С(О)-, где, по крайней мере, один из R³ и R⁴ представляет R¹- SO₂-, а другой независимо представляет (1-12C)-алкил или R¹- SO₂-; X представляет 2-азетидинкарбоновую кислоту, пролин, пипеколиновую кислоту, 4-тиазолидинкарбоновую кислоту, 3,4-дегидропролин, 2-октагидроиндолкарбоновую кислоту, -[N(3-8C)циклоалкил]-CH₂-C(O)- или фрагмент или Более предпочтительными являются соединения, где А представляет этил-SO₂- или бензил-SO₂-; B представляет связь, D-Phe, D-Cha, D-Coa, D-Dpa, п-Cl-D-Phe, п-О метил-D-Phe, п-О этил-D-Phe, D-Nle, м-Cl-D-Phe, 3,4-ди-ОМе-В-Рhе, D-Chg; либо A и B, взятые вместе, представляют остаток R³R⁴N-chr⁵-C(О)-, где, по крайней мере, один из R³ и R⁴ представляет этил-SO₂- или бензил-SO₂-, а другой независимо представляет (1-12C)алкил или R¹-SO₂-, a R⁵ представляет (3-8C)циклоалкил, (3-8C)циклоалкил(1-4C)алкил, фенил, бензил, дифенилметинил, где указанные группы необязательно замещены хлором или (1-4C)алкокси. Наиболее предпочтительными являются соединения, где А представляет этил-SO₂; В представляет D-Cha, а X представляет пролин или -[N циклопентил]-CH₂-C(О)-.

Наиболее предпочтительно, если в соединениях формулы I, r=l.

В вышеприведенных определениях N-защитная группа радикала А представляет любую N-защитную группу, используемую в пептидах. Подходящие N-защитные группы могут быть найдены в работах Т.W.Green and P.G.M. Wuts: Protective Groups in Organic Synthesis, Second Edition (Wiley, NY, 1991) and in The Peptides, Analysis, Synthesis, Biology, Vol 3 E. Gross and J.Meienhofer, Eds., (Academic Press, New York, 1981).

Термин "необязательно замещенный D,L --гидроксиацетил" означает группу формулы HO-CR^aR^b-C(О)-, где R^a и R^b независимо представляют H, гидрофобную боковую цепь; либо R^a и R^b, взятые вместе, образуют 5- или 6-членное кольцо, которое необязательно конденсировано с одним или двумя алифатическими или ароматическими 6-членными кольцами, и где указанное 5-или 6-членное кольцо состоит из атомов углерода и необязательно одного гетероатома, выбранного из N, О и S. Предпочтительными D,L- -гидроксиацетильными группами являются 2-гидрокси-3-циклогексил-пропионил- и 9-гидрокси-флуорен-9-карбоксил.

Термин "(1-12C)алкил" означает разветвленную или неразветвленную алкильную группу, имеющую 1-12 атомов углерода, такую как метил, этил, трет-бутил, изопентил, гептил, додецил и т.д. Предпочтительными алкильными группами являются (1-6C)-алкильные группы, имеющие 1-6 атомов углерода. Наиболее предпочтительными группами, указанными выше для R⁶, R⁷ и R⁸, являются (1-3C)алкильные группы, имеющие 1-3 атома углерода, такие как метил, этил, изопропил. (2-12C)алкенильная группа представляет собой разветвленную или неразветвленную ненасыщенную углеводородную группу, имеющую 2-12 атомов углерода. Предпочтительными являются (2-6C)алкенильные группы. Примерами таких групп являются этенил, пропенил, аллил и т.п.

Термин "(1-6C)алкилен" означает разветвленную или неразветвленную алкиленовую группу, имеющую 1-6 атомов углерода, такую как (CH₂)_m-, где m=1-6; -CH(CH₃)-, -CH(CH₃)-(CH₂)- и т.п. Предпочтительными алкиленовыми группами в определении Y являются этилен и метилен.

(2-12C)Алкинильная группа представляет собой разветвленную или неразветвленную углеводородную группу, содержащую тройную связь и имеющую 2-12 атомов углерода. Предпочтительными являются (2-6C)алкинильные группы, такие как этинил и пропинил.

(6-14C)Арильная группа представляет собой ароматический радикал, состоящий из 6-14 атомов углерода. Арильная группа может, кроме того, содержать один или несколько гетероатомов, таких как N, S или О. Примерами арильных групп являются фенил, нафтил, (изо)хинолин, инданил и т.п. Наиболее предпочтительной является фенильная группа.

(7-15C)Аралкильная и (8-16C)аралкенильная группы представляют собой алкильные и алкенильные группы, соответственно замещенные одной или несколькими арильными группами, причем общее число атомов углерода в этих группах составляет 7-15 и 8-16 соответственно.

Термин "(1-6C)алкокси" означает алкокси-группу, которая имеет 1-6 атомов углерода и алкильная часть которой является такой, как она была определена выше.

Термин "(3-8C)циклоалкил" означает циклоалкильную группу, имеющую 3-8 атомов углерода и представляющую собой циклопропил, циклобутил, циклопентил, циклогексил, циклогептил или циклооктил. При этом предпочтительными циклоалкильными группами являются циклопентил и циклогексил.

Термин "галоген" означает фтор, хлор, бром или йод.

Термин "сложноэфирное производное" означает любое подходящее сложноэфирное производное, предпочтительно (1-4C)-алкиловые сложные эфиры, такие как метиловые, этиловые или трет-бутиловые сложные эфиры.

Термин "1- и 3-Tiq" означают 1,2,3,4- тетрагидроизохинолин-1- или 3-карбоновая кислота соответственно; термин "1- и 3-Piq" означает 1- и 3-карбоксипергидроизохинолин соответственно; Atc означает 2-аминотетралин-2-карбоновую кислоту; Aic означает аминоинданкарбоновую кислоту; Phe означает фенилаланин; Cha означает циклогексилаланин; Dpa означает дифенилаланин; Coa означает циклооктилаланин; Chg означает циклогексилглицин; Nle означает норлейцин; Asp означает аспаргиновую кислоту.

Термин "гидрофобная боковая цепь" означает (1-12C)алкил, необязательно замещенный одной или несколькими (3-8C) циклоалкильными группами или (6-14C)арильными группами (которые могут содержать гетероатом, например азот), например, такую боковую цепь как циклогексил, циклооктил, фенил, пиридинил, нафтил, тетрагидронафтил и т.п.; причем указанная гидрофобная боковая цепь может быть необязательно замещена такими заместителями как галоген, трифторметил, низший алкил (например, метил или этил), низший алкокси (например, метокси), фенилокси, бензилокси и т.п.

В вышеприведенных определениях термин "замещенный" означает: замещенный одним или несколькими заместителями. Примерами аминокислот, имеющих основную боковую цепь, являются, но не ограничиваются ими, аргинин и лизин, предпочтительно аргинин. Термин "аминокислоты, имеющие нейтральную боковую цепь" относится к таким аминокислотам, как метионинсульфон и т.п.

Примерами циклических аминокислот являются 2-азетидинкарбоновая кислота, пролин, пипеколиновая кислота, 1-амино-1-карбокси-(3-8C)циклоалкан (предпочтительно 4C, 5C или 6C), 4-пиперидинкарбоновая кислота, 4-тиазолидинкарбоновая кислота, 3,4-дегидропролин, азапролин, 2-октагидроиндолкарбоновая кислота и т.п. Предпочтительными являются 2-азетидинкарбоновая кислота, пролин, пипеколиновая кислота, 4-тиазолидинкарбоновая кислота, 3,4-дегидропролин и 2-октагидроиндолкарбоновая кислота. Термин "пролекарственный предшественник" означает соединение, в котором атом азота в пиперидиновой группе соединения формулы 1 является защищенным, например, гидрокси-группой, (1-6C)алкокси-группой или (1-6C)алкоксикарбонильной группой.

Настоящее изобретение, кроме того, относится к способу получения соединения формулы I, предусматривающему присоединение соответствующим образом защищенных аминокислот или аналогов аминокислот, с последующим удалением защитных групп.

Соединения формулы 1 могут быть получены способом, обычно используемым для получения таких соединений. Модифицированные аминокислоты, имеющие пиперидиновую боковую цепь, вводят способом, аналогичным известным способам, обычно используемым для других аминокислот.

Для этой цели подходящие производные или пептид N-защищенных (и защищенных по боковой цепи в случае, если присутствуют реакционноспособные боковые цепи) - аминокислот активируют и присоединяют к соответствующим образом карбоксилзащищенной аминокислоте или ее пептидному производному либо в растворе, либо на твердом носителе. Защиту функциональных -аминогрупп обычно осуществляют с использованием уретановых функциональных групп, таких как неустойчивая к кислоте трет-бутоксикарбонильная группа (BOC), бензилоксикарбонильная (Z) группа и замещенные аналоги; либо неустойчивая к основанию 9-флуоренил-метоксикaрбонильная (Fmoc) группа. Группа Z может быть также удалена путем каталитического гидрирования. Другими подходящими аминозащитными группами являются Nps, Bmv, Врос, Msc и т.п. Хороший обзор аминозащитных групп приводится в работе The Peptides, Analysis, Synthesis, Biology, Vol. 3, E. Gross and J.Meienhofer, Eds., (Academic Press, New York, 1981). Защита карбоксильных групп может быть осуществлена путем образования эфиров, например неустойчивых к основанию сложных эфиров, таких как метиловый или этиловый сложный эфир; неустойчивых к кислоте сложных эфиров, таких как трет-бутиловый сложный эфир, или гидрогенолитически неустойчивых сложных эфиров, таких как бензиловый сложный эфир. Защита пиперидиновой боковой цепи может быть осуществлена с использованием вышеуказанных групп. Активация карбоксильной группы соответствующим образом защищенных аминокислот или пептидов может быть осуществлена с использованием азида, смешанного ангидрида, активного сложного эфира или карбодиимида, в частности, путем добавления каталитических и подавляющих рацемизацию соединений, таких как 1-гидроксибензотриазол, N-гидроксисукцинимид, 3-гидрокси-4-окси-3,4-дигидро-1,2,3-бензотриазин, N-гидрокси-3- норборнен-2,3-дикарбоксамид. См., например, Peptides, Analysis, Synthesis, Biology (см. выше) и Pure and Applied Chem., 59(3), 331-344 (1987).

Соединения настоящего изобретения, которые могут существовать в форме свободного основания, могут быть выделены из реакционной смеси в виде фармацевтически приемлемой соли. Фармацевтически приемлемые соли могут быть также получены путем обработки свободного основания формулы I органической или неорганической кислотой, такой как хлористый водород, бромистый водород, йодистый водород, серная кислота, фосфорная кислота, уксусная кислота, пропионовая кислота, гликолевая кислота, малеиновая кислота, малоновая кислота, метансульфоновая кислота, фумаровая кислота, янтарная кислота, винная кислота, лимонная кислота, бензойная кислота и аскорбиновая кислота.

Соединения настоящего изобретения имеют один или несколько хиральных атомов, и поэтому они могут быть получены в виде чистого энантиомера или смеси энантиомеров, или смеси, содержащей диастереомеры. Способы получения чистых энантиомеров хорошо известны специалистам, например кристаллизация солей, которые получают из оптически активных кислот и рацемической смеси; или хроматография с использованием хиральных колонок. В случае диастереомеров могут быть использованы колонки с прямой фазой или с обращенной фазой.

Соединения настоящего изобретения могут быть введены путем приема внутрь или парентерально, при этом предпочтительная суточная доза для человека составляет 0,001-100 мг на 1 кг веса тела, а более предпочтительно 0,01-10 мг на 1 кг веса тела. Соединения настоящего изобретения, смешанные с фармацевтически приемлемыми носителями, описанными, например, в известном руководстве Gennaro et al., Remington's Pharmaceutical Sciences (18^th ed., Mack Publishing Company, 1990, см., в частности. Part 8: Pharmaceutical Preparations and Their Manufacture), могут быть спрессованы в твердые стандартные лекарственные формы, такие как драже или таблетки; либо они могут быть изготовлены в виде капсул или суппозиториев. С использованием фармацевтически приемлемых жидких носителей эти соединения могут быть также изготовлены в виде раствора, суспензии или эмульсии, например, для введения в качестве препарата для инъекций; либо в виде спрея, например, при использовании в качестве аэрозолей для введения через нос.

Для изготовления лекарственных форм, например таблеток, предусматривается использование стандартных добавок, таких как наполнители, красители, полимерные связующие и т.п. В основном может быть использована любая фармацевтически приемлемая добавка при условии, что она не будет оказывать неблагоприятного действия на функцию активного соединения. Подходящими носителями, которые могут быть введены в композиции, являются лактоза, крахмал, производные целлюлозы и т.п., или их смеси, используемые в соответствующих количествах.

Настоящее изобретение, кроме того, проиллюстрировано нижеследующими примерами.

Примеры Термины -Ppa[COCO]-ОН, Ppa-ОМе и Ppa-(2-тиазолил) означают где Y представляет COOH, OCH₃ и 2-тиазолил соответственно. Azt = 2-азетидинкарбоновая кислота; Boc = трет-бутилоксикарбонил; Cbz = бензилоксикарбонил; TsOH = паратолуолсульфоновая кислота.

Пример 1 HOOC-CH₂-D-Cha-Pro-Ppa[COCO]-ОН (a) H-D-Cha-OMe.HCl К холодному (-20^oC) и сухому метанолу (195 мл) по каплям добавляли тионилхлорид (28 мл). После добавления H-D-Cha-ОН.HCl (40 г), реакционную смесь нагревали с обратным холодильником в течение 5 часов. Смесь концентрировали в вакууме и выпаривали вместе с метанолом (3 раза). Остаток кристаллизовали из метанол/диэтиловый эфир и получали H-D-Cha-OMe.HCl в виде белого кристаллического порошка (40,9 г).

ТСХ: R_f 0,66, силикагель, н-бутанол/уксусная кислота/вода, 10/1/3, об/об/об.

(b) N-(т-Бутилоксикарбонилметил)-D-Cha-OMe Трет-бутилбромацетат (36 г) добавляли к перемешанному раствору H-D-Cha-OMe. HCl (40,9 г) в 400 мл ацетонитрила. pH смеси доводили до 8,5 путем добавления N, N-диизопропилэтиламина. Смесь перемешивали в течение 16 часов при комнатной температуре и упаривали в вакууме. Остаток растворяли в дихлорметане и раствор промывали водой, сушили сульфатом натрия и упаривали в вакууме. После хроматографии на силикагеле с использованием в качестве элюента гептан/этилацетат, 9/1, об/об, было получено 64 г N-(т-бутилоксикарбонилметил)-D-Cha-OMe.

ТСХ: R_f 0,25, силикагель, этилацетат/гептан, 1/1, об/об.

(с) N-(т-Бутилоксикарбонилметил)-N-Boc-D-Cha-OMe pH раствора N-(т-Бутилоксикарбонилметил)-D-Cha-ОМе (64 г) и ди-т-бутилдикарбоната (40,3 г) доводили до 8,5 путем добавления N,N-диизопропилэтиламина. Смесь перемешивали в течение 16 часов при комнатной температуре. Растворитель удаляли в вакууме. К остатку добавляли дихлорметан и воду. Органический слой отделяли, промывали холодной 1 н хлористоводородной кислотой, водой, 5% бикарбонатом натрия и снова водой, а затем сушили сульфатом натрия, и фильтрат упаривали с получением N-(т-бутилоксикарбонилметил)-N-Вос-D-Cha-OMe в виде аморфного твердого вещества с выходом 59,6 г.

ТСХ: R_f 0,50, силикагель, этилацетат/гептан, 1/1, об/об.

(d) N-(т-Бутилоксикарбонилметил)-N-Boc-D-Cha-OH Раствор N- (т-бутилоксикарбонилметил) -N-Boc-D-Cha-OMe (59,6 г) в 900 мл диоксан/вода (9/1, об/об) обрабатывали достаточным количеством 6 н гидроксида натрия для поддержания pH = 12 в течение 6 часов при комнатной температуре. После подкисления смесь выливали в воду и экстрагировали дихлорметаном. Органический слой промывали водой и сушили сульфатом натрия. Фильтрат упаривали и получали 54 г N-(т- бутилоксикарбонилметил)-N-Boc-D-Cha-OH.

ТСХ: R_f 0,60; силикагель, дихлорметан/метанол, 9/1, об/об.

(е) N-(т-Бутилоксикарбонилметил)-N-Boc-D-Cha-Pro-OBzl К холодному (0^oC) раствору N-(т-бутилоксикарбонилметил)-N-Boc-D-Cha-OH (13,5 г) в N,N-диметилформамиде (150 мл) последовательно добавляли 1-гидроксибензотриазол (HOBT) (7,09 г), дициклогексилкарбодиимид (DCCl) (7,61 г), H-Pro-Obzl. HCl (9,31 г) и триэтиламин (6 мл). Смесь перемешивали при 0^oC в течение 1 часа, а затем выдерживали при комнатной температуре в течение ночи. Эту смесь охлаждали до -20^oC, а дициклогексилмочевину удаляли путем фильтрации. Фильтрат упаривали досуха. Остаток растворяли в этилацетате и последовательно промывали 5% бикарбонатом натрия, водой, 3% лимонной кислотой и насыщенным солевым раствором, после чего сушили сульфатом натрия и концентрировали в вакууме. Остаток хроматографировали на силикагеле, используя в качестве элюента гептан/этилацетат, 3/1, /об/об. Фракции, содержащие N-(т-бутилоксикарбонилметил)-N-Вос-D-Cha-Pro-ОВzl, объединяли и выпаривали. Выход составил 15 г.

ТСХ: R_f 0,70, силикагель, гептан/этилацетат, 1/1 об/об.

(f) N-(т-Бутилоксикарбонилметил)-N-Boc-D-Cha-Pro-OH К раствору N-(т-бутилоксикарбонилметил)-N-Вос-D-Cha-Рго-OBzl (15 г) в метаноле (150 мл) добавляли 10% палладий на угле (750 мг). Смесь гидрировали при атмосферном давлении и при комнатной температуре в течение 1 часа. Палладиевый катализатор удаляли путем фильтрации, а растворитель удаляли путем выпаривания при пониженном давлении, в результате чего получили 11,2 г N-(т-бутилоксикарбонилметил)-N-Boc-D-Cha-Pro-OH.

ТСХ: R_f 0,65, силикагель, этилацетат/пиридин/уксусная кислота/вода, 213/20/6/11, об/об/об/об.

(g) Диэтил 2-ацетамидо-2-[(пиридин-4-ил)метил]-малонат Порцию (46 г) металлического натрия добавляли к 3,5 л этанола и нагревали. К полученному раствору этоксида натрия добавляли диэтилацетамидомалонат (217 г) и 4-пиколилхлорида гидрохлорид (164 г). Реакционную смесь нагревали до 100^oC в течение 4 часов, охлаждали, фильтровали и концентрировали в вакууме. Остаток растворяли в дихлорметане, фильтровали через диацель и силикагель и концентрировали в вакууме. Остаток обрабатывали 1 л диэтилового эфира, фильтровали и промывали диэтиловым эфиром. Выход: 142 г.

ТСХ: R_f 0,5 этилацетат/пиридин/уксусная кислота/вода, 63/5/1,5/2,75, об/об/об/об, на силикагеле.

(h) Этил 2-ацетамидо-2-[(пиридин-4-ил)метил]-малонат Раствор 142 г диэтил 2-ацетамидо-2-[(пиридин-4-ил)метил]-малоната, 46 г гидроксида калия в 2 л этанола и 800 мл воды перемешивали в течение 16 часов. Смесь подкисляли и концентрировали в вакууме. В результате совместного упаривания с метанолом и толуолом получали 187 г этил 2-ацетамидо-2-[(пиридин- 4-ил)метил]-малоната (содержащего хлорид калия).

ТСХ: R_f 0,95 на силикагеле; этилацетат/пиридин/уксусная кислота/вода, 63/5/1,5/2,75, об/об/об/об.

(i) Этил 2-N-ацетиламино-3-(пиридин-4-ил)пропаноат Раствор 394 г этил 2-ацетамидо-2- [(пиридин-4-ил)метил]-малоната в 1,5 л N, N-диметилформамида нагревали с обратным холодильником в течение 1,5 часов и концентрировали в вакууме. Остаток растворяли в воде и pH доводили до 11,5. Смесь экстрагировали этилацетатом, сушили сульфатом натрия и концентрировали в вакууме. Выход: 158,8 г.

ТСХ: R_f 0,35, этилацетат/пиридин/уксусная кислота/вода, 63/5/1,5/2,75, об/об/об/об, на силикагеле.

(j) Ac-Ppa-OEt Раствор 39,5 г этил 2-N-ацетиламино-3- (пиридин-4-ил)пропаноата в 1 л этанола восстанавливали в атмосфере водорода с использованием 4 г 10% палладия на активированном угле в качестве катализатора. Через 18 часов катализатор удаляли путем фильтрации и фильтрат концентрировали досуха с получением 40 г нужного соединения.

(k) H-Ppa-OH Раствор 81,5 г Ac-Ppa-OEt в 6 н хлористоводородной кислоте нагревали с обратным холодильником в течение 4 часов. Реакционную смесь концентрировали в вакууме и получали 90 г H-Ppa-OH.HCl.

ТСХ: R_f 0,97, 1-бутанол/пиридин/уксусная кислота/вода, 8/3/1/4, об/об/об/об, на силикагеле.

(l) Cbz-Ppa(Boc)-ОН Доводили pH раствора 90 г H-Ppa-OH, 51,23 г пентагидрата сульфата меди (II) и 166 г ди-т-бутилдиикарбоната в воде (1730 мл) и диоксане (1250 мл) до значения 9 путем добавления 2 н гидроксида натрия. Смесь перемешивали в течение 16 часов при комнатной температуре. Осадок собирали и тщательно промывали водой. Осадок на фильтре растворяли в диоксане, а pH доводили до 12,5 путем добавления 4 н гидроксида натрия и добавляли 200 г бензилоксикарбонилоксисукцинимида. Смесь перемешивали в течение 16 часов. Осадок собирали и промывали диоксаном. Фильтрат концентрировали до небольшого объема и pH доводили до 2,5. Остаток разбавляли этилацетатом. Органический слой промывали водой, сушили сульфатом натрия и упаривали досуха с получением 160 г целевого соединения.

ТСХ: R_f 0,77; этилацетат/пиридин/уксусная кислота/вода, 63/20/6/11, об/об/об/об, на силикагеле.

(m) Cbz-Ppa(Boc)-OMe К раствору 160 г Cbz-Ppa(Boc)-ОН в дихлорметан/метанол (9/1, об/об) (3 л) добавляли 120 г тетрафторбората 2-(1Н-бензотриазол-1-ил)-1,1,3,3-тетраметилурония (TBTU), после чего pH доводили до 8,5 путем добавления триэтиламина. Полученную смесь перемешивали в течение 1 часа при комнатной температуре. Органический слой промывали 2 н хлористоводородной кислотой, водой, 5% раствором бикарбоната натрия и снова водой, после чего сушили сульфатом натрия и концентрировали в вакууме. Остаток хроматографировали на силикагеле с использованием в качестве элюента дихлорметан/этилацетат, 9:1, об/об. Фракции, содержащие сложный метиловый эфир, объединяли, а растворитель удаляли в вакууме. Остаток кристаллизовали из диизопропиловый эфир/диэтиловый эфир и получали первый сбор 75 г нужного продукта. Маточный раствор хроматографировали в толуол/этилацетат, 8/2, об/об и получали 34 г Cbz-Ppa(Boc)-OMe.

ТСХ: R_f 0,77, дихлорметан/метанол, 95/5, об/об, на силикагеле.

(n) 2-Ацетокси-3-(бензилоксикарбониламино)-4-(1-т-бутилоксикарбонил(пиперидин-4-ил)бутанитрил При -78^oC 908 мл предварительно охлажденного гидрида диизобутилалюминия (1,0 М раствор в гексане) добавляли к перемешанному раствору 109 г Cbz-Ppa(Boc)-ОМе в дихлорметане (3 л) так, чтобы температура поддерживалась ниже -70^oC. Раствор перемешивали в течение 1 часа при -70^oC, а затем добавляли 1 л насыщенного раствора лимонной кислоты. Смесь выливали в два литра раствора лимонной кислоты и экстрагировали дихлорметаном. Объединенные экстракты промывали водой, 5% раствором бикарбоната натрия и снова водой, а затем сушили сульфатом натрия и фильтровали. Фильтрат охлаждали до 0^oC и последовательно добавляли 15 г хлорида бензилтриэтиламмония, 58 мл уксусного ангидрида и раствор 118 г цианида натрия в воде (1,5 л). Полученную смесь интенсивно перемешивали в течение 30 минут. Органический слой отделяли, дважды промывали водой, сушили сульфатом натрия и концентрировали в вакууме. Остаток хроматографировали на силикагеле, элюируя гексан/этилацетат, 6/4, об/об, в результате чего получали целевое соединение в виде твердого вещества: 98 г.

ТСХ: R_f 0,65, дихлорметан/метанол, 95/5, об/об, на силикагеле.

(о) Cbz-Ppa[CHOHCO]-OMe Перемешиваемую суспензию 98 г 2- ацетокси-3-(бензилоксикарбониламино)-4-(1-т-бутилоксикарбонил(пиперидин-4-ил)бутанитрила в 3 л смеси диэтиловый эфир/метанол (9/1, об/об) обрабатывали газообразным хлористым водородом (260 г) при -20^oC. Смесь перемешивали в течение 24 часов при 0-5^oC. Затем смесь охлаждали до -20^oC и добавляли 408 мл вод