2172741 - Ингибиторы тромбина и промежуточные соединения для их получения

Ингибиторы тромбина и промежуточные соединения для их получения

Реферат

Описываются соединения формулы (I), а также их соли с физиологически приемлемыми кислотами и их стереоизомеры, где заместители имеют указанные в описании значения. Также в изобретении описываются промежуточные продукты формулы (II) для их получения. Соединения пригодны для борьбы с заболеваниями в системе свертывания крови, а также могут служить для профилактики тромбоза, например после хирургических вмешательств. 2 с.п. ф-лы.

Изобретение относится к новым ингибиторам тромбина и промежуточным соединениям для их получения.

Тромбин относится к группе серинпротеаз и играет главную роль в качестве концевого фермента в системе свертывания крови. Как внутренняя, так и также внешняя система свертывания крови через несколько стадий усиления приводит к образованию тромбина из протромбина. Катализируемое тромбином расщепление фибриногена до фибрина затем вызывает свертывание крови и агрегацию тромбоцитов, которые со своей стороны за счет связывания тромбоцитного фактора 3 и фактора свертывания XIII, а также целого ряда высокоактивных медиаторов усиливают образование тромбина.

Образование и действие тромбина представляют собой главные факторы при возникновении как белых, артериальных, так и также красных, венозных, тромбов и поэтому являются потенциально эффективными точками воздействия для лечения. Ингибиторы тромбина, в противоположность гепарину, независимо от кофакторов способны полностью подавлять одновременно действия тромбина как в системе свертывания, так и также на тромбоциты. При обострении заболевания они могут предотвращать тромбоэмболию после чрескожной транслюминальной коронарной ангиопластики и лизис и служить в качестве антикоагулянтов при экстракорпоральном кровообращении (аппарат "сердце - легкие", гемодиализ). Они также вообще могут служить для профилактики тромбоза, например, после хирургических вмешательств.

Известно применение в качестве ингибитора тромбина производных метазамещенного фенилаланина (см. заявку WO 92/08709).

Соединения формулы (I) могут быть либо в виде самих соединений, либо в форме их солей с физиологически приемлемыми кислотами. Примерами таких кислот являются следующие: соляная кислоты, лимонная кислота, винная кислота, молочная кислота, фосфорная кислота, метансульфокислота, уксусная кислота, муравьиная кислота, малеиновая кислота, фумаровая кислота, малоновая кислота, янтарная кислота, гидроксиянтарная кислота, серная кислота, глутаровая кислота, аспарагиновая кислота, пировиноградная кислота, бензойная кислота, глюкуроновая кислота, щавелевая кислота, аскорбиновая кислота и ацетилглицин.

Новые соединения можно применять для лечения и профилактики всех заболеваний, при которых играет роль тромбин. Ими являются в особенности тромбоэмболические заболевания, как инфаркт миокарда, периферическая артериальная обтурация, глубокий венозный тромбоз, эмболия легких и инсульт. Сверх того, их можно применять для предотвращения повторной окклюзии после вскрытия артериальных сосудов механическими способами или лизиса.

Далее, вещества пригодны для предотвращения образования тромбина путем прямого ингибирования калликреина.

Их особое преимущество состоит в том, что они эффективны также при оральном введении.

Объектом изобретения являются, далее, следующие вещества формулы (II), которые представляют собой ценные промежуточные продукты для получения соединений формулы (I): где R⁴, R² и D имеют указанные для формулы (I) значения, и R⁴ означает амидино-остаток в мета- или пара-положении к C(R¹, R²) и R⁵ означает водород, алкоксикарбонил, содержащий от одного до четырех атомов углерода, или фенилалкоксикарбонил, содержащий от одного до трех атомов углерода в алкоксильной части; p означает 1 или 2.

Используемые в описании и в примерах сокращения имеют следующие значения: Ac = ацетил Ala = аланин Am = амидино (m или р) Amb = (мета- или пара-)амидинобензил Asp = аспарагиновая кислота Aze = азетидин-2-карбоновая кислота Boc = трет-бутоксикарбонил Bzl = бензил Cbz = бензилоксикарбонил Cha = циклогексилаланин Chg = циклогексилглицин DCC = дициклогексилкарбодиимид Dch = дициклогексилаланин DCM = дихлорметан DIPEA = диизопропилэтиламин ДМФ = диметилформамид Dpa = дифенилаланин Dpg = дифенилглицин EDC = N-(3-диметиламинопропил)-N-этилкарбодиимид Et = этил Glu = глутаминовая кислота Gly = глицин Ham= гидроксиамидино pHamb = пара-гидроксиамидинобензил HOBT = гидроксибензотриазол HOSu = гидроксисукцинимид Hyp = гидроксипролин Icс = изохинолинкарбоновая кислота iPr = изопропил Leu = лейцин Man = миндальная кислота Me = метил (Me) Val = N-метил-валин Msu = метионинсульфон = -нафтилаланин NBS = N-бромсукцинимид Ngl = нафтилглицин n-Pr = н-пропил Ph = фенил Phe = фенилаланин Phg = фенилглицин 2-Phi = 2-пергидроиндолкарбоновая кислота Pic = пипеколиновая кислота (пиперидин-2-карбоновая кислота) pico = пиколил pip = метиллиперидинил Pro = пролин pym = метиллиримидил PyBrop = бром-трис(пирролидино)фосфонийгексафторфосфат Pyr = 3,4-пирролин-2-карбоновая кислота KT = комнатная температура Tal = тиенилаланин TBAB = тетрабутиламмонийбромид tBu = трет.-бутил TEA = триэтиламин TEACl = тетраэтиламмонийхлорид ТФУК = трифторуксусная кислота Tgl = тиенилглицин Tia = тиазолидин-4-карбоновая кислота Tic = тетрагидроизохинолинкарбоновая кислота Tol = толил Trp = триптофан Val = валин Z = бензилоксикарбонил (= Cbz) Примеры А. Общие методики A.I. Удаление и введение защитных групп A. I.а. Защитные группы отщепляют согласно способам, описанным Гроссом и Мейенхофером (Е. Gross, J. Meienhofer "Пептиды; анализ, синтез, биология", первое издание, том 3, Академик Пресс, Нью-Йорк, 1981).

A. I. б. Бензилоксикарбонильные (Cbz) защитные группы отщепляют либо гидрогенолитически в стандартных реакционных условиях, либо с помощью фтороводорода согласно способу, описанному J. М. Stewart, J.D.Young "Синтез пептидов в твердой фазе", второе издание, Пирс Кемикал Компани, 1984).

A. I. в. Если защищенная молекула содержит только трет.-бутоксикарбонильные (Boc) защитные группы, то их отщепляют с помощью хлороводорода в диоксане, соответственно, хлороводорода в метиленхлориде, соответственно, трифторуксусной кислоты в метиленхлориде в стандартных реакционных условиях (см. М. Bodansky и А. Bodansky "Практика синтеза пептидов", изд. Спрингер, 1984).

A.II. Общие методики гидролиза сложноэфирных групп, A.II.а. 1 ммоль Сложного эфира при 0^oC вносят в тетрагидрофуран (4 мл на ммоль). Затем добавляют 1,2 эквивалента гидроксида лития (1 М раствор) и смесь перемешивают в течение ночи при комнатной температуре. После обработки водой получают соответствующую кислоту.

A.II.б. 1 ммоль Сложного эфира при 0^oC вносят в метанол (4 мл на ммоль). Затем добавляют 1,2 эквивалента гидроксида лития (1 М раствор) и смесь перемешивают в течение ночи при комнатной температуре. После обработки водой получают соответствующую кислоту.

A. II.в. 1 ммоль Сложного эфира в 2 мл 2 н. соляной кислоты перемешивают в течение ночи при комнатной температуре. Продукт обрабатывают водой.

A.III. Общая методика амидирования A. III. 1. Следуя методике Vieweg и др. (Н. Vieweg и др., Pharmacia, 39, 226 (1984)), из нитрилов получают амидины, N-гидроксиамидины и N-аминоамидины следующим образом: 1 Эквивалент нитрила растворяют в смеси пиридина с триэтиламином в соотношении 10:1 (примерно 20-30 мл на грамм вещества). Затем раствор насыщают газообразным сероводородом и оставляют стоять в течение ночи при комнатной температуре. После этого реакционную смесь при перемешивании выливают в солянокислую смесь воды со льдом, выпавший осадок отсасывают, дополнительно промывают большим количеством воды и затем высушивают. Вещество растворяют в ацетоне (примерно 20-30 мл на грамм вещества). После добавления метилиодида (1 мл на грамм вещества) раствор оставляют стоять в течение ночи. Путем добавления деэтилового эфира осаждают гидроиодид сложного S-метил-тиоимидоэфира и с целью очистки еще раз переосаждают из метанола с помощью диэтилового эфира.

Соль вносят в абсолютный метанол (примерно 30 мл на грамм вещества). После добавления ацетата аммония (для синтеза N- гидроксиамидинов используют гидроксиаммонийацетат, соответственно, гидроксиаммонийхлорид, а для синтеза N-аминоамидинов применяют гидразинийацетат, соответственно, гидразинийхлорид) смесь перемешивают в течение ночи при комнатной температуре. После отфильтровывания суспензии часть растворителя удаляют в вакууме и амидиногидроиодид осаждают путем добавления эфира и отсасывают. Затем сырой продукт очищают с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии с обращенной фазой.

A.III.2. Амидирование также можно осуществлять с помощью реакции Пиннера (D. Neilson в книге Patai "Химия амидина и имидата", с. 385 - 489, John Wiley and Sons, Нью-Йорк, 1975; R. Roger, D. Neilson, Chem. Rev., 61 179 (1961); далее, см. пример 2).

A. III.3. Другая возможность амидирования состоит в превращении нитрильной группы в гидроксиамидиногруппу с помощью гидроксиламингидрохлорида и последующем гидрировании с помощью водорода в присутствии никеля Ренея (соответственно, с помощью водорода в присутствии палладия-на-угле) с получением амидина. 10 ммоль Нитрильного производного растворяют в 100 мл метанола и после добавления трех эквивалентов гидроксиламингидрохлорида и 4,5 эквивалентов триэтиламина перемешивают при комнатной температуре вплоть до полного превращения. Затем реакционную смесь концентрируют и остаток обрабатывают дихлорметаном. Органическую фазу промывают водой (pH 5-6), сушат на сульфатом натрия и концентрируют.

Остаток растворяют в 100 мл 5%-ного метанольного раствора уксусной кислоты и после добавления никеля Ренея (можно также 10%-ного палладия-на угле) гидрируют в атмосфере водорода. После полного превращения эдукта катализатор отфильтровывают и фильтрат концентрируют. Продукт в случае необходимости очищают либо путем разделения с помощью колоночной хроматографии на силикагеле, либо путем разделения с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии с обращенной фазой.

A.IV. Общая методика гуанидирования аминов A.IV.1. Получение свободных гуанидинов.

Свободные гуанидины синтезируют, исходя из соответствующих аминов в качестве предшественников, аналогично методике Миллера и др., соответственно, Мошера и др. (A.E. Miller, J.J. Bischoff, Synthesis, 777 (1986); К. Kim, Y. - T. Lin, H.S. Mosher, Tetrahedron Letters, 29, 3183 (1988)).

A.IV.1.a. 1 Эквивалент карбоната калия и 1 эквивалент амина растворяют в 10 мл воды. Затем порциями при интенсивном перемешивании добавляют 1 эквивалент аминоиминометансульфокислоты. После перемешивания в течение двадцати четырех часов реакционную смесь фильтруют. Отфильтрованным твердым веществом является гуанидин.

A.IV.1.б. Эквимолярные количества амина и аминоиминометансульфокислоты в абсолютном метаноле (1 мл на ммоль) перемешивают при комнатной температуре вплоть до образования прозрачного раствора. Затем растворитель удаляют в вакууме и сырой продукт очищают с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии с обращенной фазой.

A.IV.2. Получение алкоксикарбонилгуанидинов Превращение в алкоксикарбонилгуанидины осуществляют по аналогии со следующими, описанными в литературе методиками: 1. R.J. Bergeron. J.S. MeManis J. Org. Chem. 1987, 52, 1700 2. R. Dubey, S. Abuzar. S. Sharma, R.K. Chatterjee J. Hed. Cem. 1985, 28, 1748 3. S. Shawkat, S. Sharma Synthesis 1992, 664 4. A.S. Vendrini, P. Lucietto, G. Fossati, C. Giordani Tetrahedron Lett. 1992, 33, 6541 5. Z.P. Tian, P. Edwards, R.W. Roeske int. J. Pept. Prot. Res. 1192, 40, 119 A.V. Общие способы этерификации с образованием сложного эфира A. V. 1. 1 Эквивалент карбоновой кислоты вместе с 1,1 эквивалента гидрохлорида N'-(3-диметиламинопропил)-N- этилкарбодиимида, двумя эквивалентами спирта и каталитическим количеством диметиламинопиридина в метиленхлориде перемешивают в течение ночи при комнатной температуре. Затем раствор разбавляют метиленхлоридом, экстрагируют 20%-ным раствором гидросульфата натрия, сушат и концентрируют в вакууме.

A. V.2. Кипятят 1 эквивалент карбоновой кислоты вместе с соответствующим спиртом и каталитическим количеством п-толуолсульфокислоты в хлороформе (можно также в толуоле). После полного превращения (контроль с помощью тонкослойной хроматографии) раствор промывают с помощью насыщенного раствора гидрокарбоната натрия и раствора хлорида натрия, сушат и выпаривают в ротационном испарителе.

Б. Общая стратегия синтеза Соединения согласно изобретению можно получать несколькими путями: 1. Исходя из соответствующих защищенных A-производных W-A-OH можно последовательно, согласно известным способам синтеза, вводить в реакцию сочетания структурные элементы H-B-COOW' (W' = алкил) и H-N(H)-C(R¹R²)-(CH₂)_m-D-(NH)_n-C(NH)NHR³ , которые возможно находятся в пригодным образом защищенной форме (см. схему 1). Как обычно в химии пептидов, между отдельными стадиями сочетания нужно целенаправленно отщеплять защитные группы реакционных центров последующей реакции сочетания. Все используемые структурные элементы либо имеются в продаже, либо их можно синтезировать по известным из литературы методикам, соответственно, по аналогии с 2. Синтезы можно осуществлять также в обратной последовательности путем сочетания H-N(H)-C(R¹R²)-(CH₂)_m-D-(NH)_n-C(NH)NHR³ (где R³ означает пригодную защитную группу) с пригодным образом защищенными W-B-COOH и затем A-производными W-A-OH (см. схему II).

3. Гуанидино-, амидино-, N-гидроксиамидино-, соответственно, N-амино- амидино-группы либо вводят в защищенной форме (протонированными или снабженными пригодными защитными группами) со структурным элементом H-N(R¹)-C(R¹R²)-(CH₂)_m-D-(NH)_n-C(NH)NHR³ получении активных веществ и затем защитные группы удаляют, либо, однако, получают после сочетания структурных элементов в стадии образования W-A-B-CO-N(H)-C(R¹R²)-(CH₂)_m-D-NH₂ путем гуанидирования, соответственно, W-A-B-CO-N(H)- C(R¹R²)-(CH₂)_m-D-CN путем амидирования, N-гидроксиамидирования или N-аминоамидирования.

Список литературы, относящейся к химии пептидов: 1. Е. Gross, J. Meienhofer "Пептиды; анализ, синтез, биология", первое издание, том 1, Академик Пресс, Нью-Йорк, 1979 2. Е. Gross, J. Meienhofer "Пептиды; анализ, синтез, биология", первое издание, том 2, Академик Пресс, Нью-Йорк, 1980 3. E. Gross, J. Meienhofer "Пептиды: анализ, синтез, биология", первое издание, том 3, Академик Пресс, Нью-Йорк, 1981 4. M. Deffner, E. Jaeger, P. Stelzel, P. Thamm, G. Wendenberg, E. Wbnsch в книге Губен-Вейл "Методы химии", четвертое издание том XV/1, редактор E. Wbnsch, изд. Georg Thieme, Штутгарт, 1974 5. M. Deffner, E. Jaeger, P. Stelzel, P. Thamm, G. Wendenberg, E. Wunsch в книге Губен-Вейл "Методы химии", четвертое издание том XV/2, редактор E. Wunsch, изд. Georg Thieme, Штутгарт, 1974 6. М. Bodansky и A. Bodansky "Практика синтеза пептидов", изд. Спрингер, 1984.

Б.1. Соединение структурных элементов (W-) A-ОН H-B-CO-N(H)-C(R¹R²)-(CH₂)_m-D-(NH)_n-C(NH)NHR³ или H-B-CO-N(H)-C(R¹R²)-(CH₂)_m-D-CN согласно формуле (I) (R¹, R², означают водород, алкил) и схеме II: Сначала из W-B-COOH (W означает защитную группу, предпочтительно Boc или Cbz) и амина H-N(H)-C(R¹R²)-(CH₂)_m-D-(NH)_n-C(NH)NHR³ соответственно H-N(H)-C(R¹R²-(CH₂)_m-D-CN получают гидрохлорид соответственно HCl H-B-CO-N(H)-C(R¹R²)-(CH₂)_m-D-CN в стандартных для сочетания пептидов условиях (см. М. Bodansky и A. Bodansky "Практика синтеза пептидов", изд. Спрингер, 1984) с последующим отщеплением защитных групп. Гидрохлорид затем превращают в индивидуальные соединения (согласно общей формуле) следующим образом: Б.I.a.W-A-OH означает защищенную аминокислоту (согласно общей формуле) 1 Эквивалент защищенной аминокислоты W-A-OH и 1,1 эквивалента гидрохлорида , соответственно, HClH-B-CO-N(H)-C(R¹R²)-(CH₂)_m-D-CN (согласно общей формуле (I)) по стандартным для сочетания пептидов методикам превращают в целевой продукт. Если E означает циангруппу, то согласно A. III.1-3 переводят в амидино- или гидроксиамидиногруппу. Затем имеющиеся защитные группы отщепляют по стандартным способам.

Б. I. б. A-ОН означает N-ацил-AK (AK представляет собой указанные в значении A в общей формуле (I) аминокислоты: ацил означает карбоксиалкилкарбонил, содержащий от одного до шести атомов углерода в алкильной части, алкилкарбонил, содержащий от одного до двенадцати атомов углерода в алкильной части, фенилалкилкарбонил, содержащий от одного до четырех атомов углерода в алкильной части, , соответственно, - нафтилалкилкарбонил, содержащий от одного до четырех атомов углерода в алкильной части).

Б. I. б. 1. Сначала защищенную аминокислоту W-A-OH как описано в Б.I.а. сочетают с описанным там гидрохлоридом R³ должен представлять собой обычную защитную группу). Затем удаляют защитную для концевой амино-функции группу аминокислоты (защитную группу нужно отщеплять ортогонально к R³ и последнюю вводят во взаимодействие с карбоновыми кислотами (согласно общей формуле) в стандартных для сочетания пептидов условиях с получением целевого продукта. Для высвобождения амидиногруппы, N-аминоамидиногруппы, N-гидроксиамидиногруппы или гуанидиногруппы защитную группу (если желательно) удаляют в стандартных условиях (см. раздел A.I.). Если E означает циангруппу, то ее, согласно A.III.1-3, переводят в амидиногруппу или гидроксиамидиногруппу.

Б.I.б.2. Сначала аминокислоту с концевой аминогруппой H-A-OCH₃ амино-концом вводят во взаимодействие с карбоновой кислотой (согласно общей формуле (I)) в стандартных для сочетания пептидов условиях с получением N-ацилированного сложного эфира аминокислоты и затем сложноэфирную группу гидролизуют. После этого ацилированную амино кислоту, как описано в Б.I.б.1., сочетают с гидрохлоридом; соответственно, HCl H-B-CO- N(H)-C(R¹R²)-(CH₂)_m-D-CN в стандартных условиях.

Если E означает циангруппу, то ее согласно A.III.1-3, переводят в амидиногруппу, соответственно, гидроксиамидиногруппу. Затем защитные группы отщепляют.

Б. I.в. A-OH означает N-алкил-AK (AK представляет собой указанные в значении A в общей формуле (I) аминокислоты: алкил означает алкил, содержащий от одного до двенадцати атомов углерода, фенилалкилен, содержащий от одного до четырех атомов углерода в алкиленовой части, карбоксиалкилен, содержащий от одного до шести атомов углерода в алкиленовой части, - , соответственно, - нафтилалкилен, содержащий от одного до четырех атомов углерода в алкиленовой части): Один путь синтеза (путь синтеза 1) представляет собой получение алкилированного структурного элемента A-OH (или A-B-COOH) с последующим сочетанием со структурным элементом H-B-CO-N(H)-C(R¹R²)-(CH₂)_m-D-(NH)_n-C(NH)NHR³ (соответственно, H-N(H)-C(R¹R²)-(CH₂)_m-D-(NH)_n-C(NH)NHR³ или H-B-CO-N(H)-C(R¹R²)-(CH₂)_m-D-CN (соответственно, H-N(H)-C(R¹R²)-(CH₂)_m-D-CN). Альтернативный путь (путь синтеза 2) представляет собой синтез структурного элемента H-AK-B-CO-N(H)-C(R¹R²)-(CH₂)_m-D-(NH)_n-C(NH)NHR³ соответственно, H-AK-B-CO-N(H)-C(R¹R²)-(CH₂)_m-D-CN с последующим алкилированием концевой аминогруппы. Имеющаяся амидиногруппа, соответственно, гуанидиногруппа должна быть пригодным образом защищена.

Если E означает циангруппу, то ее, согласно A.III.1-3, переводят в амидиногруппу, соответственно, гидроксиамидиногруппу.

Путь синтеза 2: Б. I. в. 1. 1 ммоль H-AS-B-CO-N(H)-C(R¹R²)-(CH₂)_m-D-(NH)_n-C(NH)NHR³ соответственно, H-AS-B-CO-N(H)-C(R¹R²-(CH₂)_m-D-CN растворяют в 10 мл метанола. После добавления 1 ммоль тетраэтиламмонийхлорида, 0,7 ммоль цианборгидрида натрия и 1,05 ммоль альдегида реакционную смесь перемешивают в течение ночи. Растворитель удаляют в вакууме и остаток обрабатывают этилацетатом. Органическую фазу промывают два раза водой и один раз насыщенным раствором хлорида натрия и сушат над сульфатом натрия. После удаления растворителя сырой продукт очищают с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии с обращенной фазой.

Б. I.в.2. 1 ммоль H-AK-B-CO-N(H)-C(R¹R²)-(CH₂)_m-D-(NH)_n-C(NH)NHR³ соответственно, H-AK-B-CO-N(H)-C(R¹R²)-(CH₂)_m-D-CN вводят в ацетонитрил вместе с 2,5 эквивалентами карбоната калия. После добавления алкилирующего агента реакционную смесь перемешивают при 60^oC вплоть до полного превращения эдукта. После охлаждения смесь обрабатывают водой и продукт очищают с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии с обращенной фазой.

Путь синтеза 1: Алкилированный структурный элемент A-OH (где A означает N- алкил-AK) получают аналогично известной из литературы методике Ивасаки и др. (G. Iwasaki и др. , Chem. Pharm. Bull., 31, 280 (1989), и Chem. Lett., 1691 (1988)). Нижеследующая методика основана на этой, известной из литературы методике: Б. I. в. 3. 1,5 Эквивалента H-AK-OCH₃ или H-AK-B-COOCH₃ вместе одним эквивалентом алкилирующего агента и двумя эквивалентами карбоната аммония в смеси нитрометана с водой перемешивают в течение четырех дней при 60^oC. Смесь обрабатывают водой и продукт очищают с помощью хроматографии. После защиты N-алкиламинофункции с помощью пригодной защитной группы омыляют сложноэфирную функцию аминокислоты и продукт превращают аналогично Б.I.а.

Б.I.в.4. Структурный элемент N-алкил-AK-OCH₃ или N-алкил-AK-B-COOCH₃ можно также получать путем восстановительного аминирования из H-AK-OCH₃ или H-AK-B-COOCH₃ и альдегида.

Б. I. г. A-OH означает N-замещенный аминокарбонил-AK (AK представляет собой указанные для A в общей формуле (I) аминокислоты; замещенный аминокарбонил означает алкиламинокарбонил, содержащий от одного до шести атомов углерода в алкильной части, фенилалкиламинокарбонил, содержащий от одного до четырех атомов углерода в алкильной части).

1 Эквивалент H-AK-B-CO-N(H)-C(R¹R²)-(CH₂)_m-D-(NH)_n-C(NH)NHR³ соответственно, H-AK-B-CO-N(H)-C(R¹R²)-(CH₂)_m-D-CN вводят во взаимодействие с различными изоцианатами в стандартных реакционных условиях (Arnold и др., Chem. Rev. , 57, 47 (1957)) с получением соответствующих производных мочевины.

Б. II. Связывание амина H-N(H)-C(R¹R²)-(CH₂)_m-D-(NH)_n-C(NH)NHR³ соответственно, H-N(H)-C(R¹R²)-(CH₂)_m-D-CN со структурным элементом A-B-COOH (согласно общей формуле (I) и схеме 1).

Сначала синтезируют структурный элемент A-B-COOH аналогично общей методике, описанной в разделе Б.1. Затем амин H-N(H)-C(R¹R²)-(CH₂)_m-D-(NH)_n-C(NH)NHR³ сочетают со структурным элементом A-B-CO-OH согласно нижеописанному: Б. II. a. R² означает водород, алкил, содержащий от одного до четырех атомов углерода, фенилалкилен, содержащий от одного до четырех атомов углерода в алкиленовой части; n означает ноль.

Б. II. а. 1. Структурный элемент (возможно замещенный) A-B-COOH в стандартных для сочетания пептидов условиях вводят во взаимодействие с амином H-N(H)-C(R¹R²)-(CH₂)_m-D-(NH)_n-C(NH)NHR³ (где R³ означает алкоксикарбонил, содержащий от одного до двадцати атомов углерода в алкоксильной части). После обработки водой сырой продукт очищают с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии с обращенной фазой. Вещества, где ³ означает водород, можно получать путем стандартных способов удаления защитных групп.

Б. II. а. 2. Структурный элемент (возможно замещенный) A-B-COOH в стандартных для сочетания пептидов условиях вводят во взаимодействие с амином H-N(H)-C(R¹R²)-(CH₂)_m-D-CN (где R¹, R², D, m имеют значения, указанные в случае общей формулы (I)). После обработки водой сырой продукт очищают с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии с обращенной фазой. Полученный нитрил, как описано в разделе A.III., переводят в амидин (R³ означает водород), N-гидрокси-амидин (R³ означает гидроксил), N-аминоамидин (R⁴ означает аминогруппу).

Б. II. б. R¹ означает водород, алкил, содержащий от одного до четырех атомов углерода; R² означает водород, алкил, содержащий от одного до четырех атомов углерода, фенилалкилен, содержащий от одного до четырех атомов углерода в алкиленовой части: n означает 1.

Б. II. б. 1. Структурный элемент (возможно защищенный) A-B-COOH в стандартных для сочетания пептидов условиях вводят во взаимодействие с амином H-N(H)-C(R¹R²)-(CH₂)_m-D-(NH)_n- C(NH)NHR³ (где R³ означает алкоксикарбонил, содержащий от одного до двадцати атомов углерода в алкоксильной части). После обработки водой сырой продукт очищают с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии с обращенной фазой. Вещества, где ³ означает водород, можно получать путем стандартных способов удаления защитных групп.

Б. II. б. 2. Структурный элемент (возможно защищенный) A-B-COOH в стандартных для сочетания пептидов условиях вводят во взаимодействие с амином H-N(H)-C(R¹R²)-(CH₂)_m-D-NHW (где W означает ортогональную к одновременно имеющимся защитным группам защитную группу). После обработки водой сырой продукт очищают с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии с обращенной фазой. Полученный защищенный амин высвобождают с помощью стандартных способов удаления защитных групп и, как описано в разделе A.IV, переводят в гуанидин (где R³ означает водород).

Б.II.в. 1. R³ означает -CO-X¹⁴ (где X¹⁴ означает алкил, аралкил) Структурный элемент A-B-CO-N(H)-CR¹(COOH-(CH₂)_m-D-(NH)_n-C(NH)NHR³ получают согласно стандартным способам COX¹⁴-Функцию затем получают по реакции Дакин-Веста в стандартных реакционных условиях (W. Steglich, G. Hofle, Angew. Chem. Int. Ed., 8, 981 (1969); W. Steglich, G. Hofle, Chem. Ber., 102. 883 (1969)). В случае этого превращения R^3' должен представлять собой алкоксикарбонильную группу (предпочтительно Вое или Cbz). Альтернативно этому в реакции Дакин-Веста можно использовать также A-B-CO-N(H)-CR¹(COOH)-(CH₂)_m-D-CN. В этом случае затем нитрильную функцию, согласно A.III.1-3, переводят в амидиногруппу, соответственно, гидроксиамидиногруппу. Общая методика для реакции Дакин-Веста следующая: 1 Эквивалент защищенного на амино-конце трипептида вместе с 2,5 эквивалентами триэтиламина, 5 эквивалентами ангидрида [X¹⁴- C(O)-O-(O)C-X¹⁴, согласно общей формуле (I)] и 0,1 эквивалента диметиламинопиридина перемешивают при 50 - 60^oC вплоть до полного прекращения выделения диоксида углерода. Затем реакционную смесь вместе с насыщенным раствором карбоната натрия перемешивают в течение двух часов при 60^oC. Смесь распределяют между этилацетатом и насыщенным раствором гидрокарбоната натрия и органическую фазу после этого экстрагируют два раза с помощью насыщенного раствора гидрокарбоната натрия и один раз с помощью 20%-ного раствора гидросульфата натрия, сушат над сульфатом натрия и выпаривают в ротационном испарителе. Сырой продукт очищают с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии с обращенной фазой.

В. Получение эдуктов B.1. Получение N-трет.-бутоксикарбонил-(D)-фенилаланил-O-сукцинимида 1 Эквивалент N-трет.-бутоксикарбонил-(D)-фенилаланина вместе с 1,05 эквивалента гидроксисукцинимида и 1,05 эквивалента дициклогексилкарбодиимида в ацетонитриле (2,5 мл на ммоль) перемешивают в течение ночи при комнатной температуре. Затем суспензию отфильтровывают и фильтрат выпаривают в ротационном испарителе. Получают продукт почти с количественным выходом.

В.2. Получение N-трет.-бутоксикарбонил-(D,L)-дифенилаланина N-трет.-бутоксикарбонил-(D, L)-дифенилаланин получают по методике Каккара и др. (L. Cheng, C. A. Goodwin, M. F. Schully, V.V. Kakkar, J. Med. Chem., 35, 3364 (1992)).

В.3. Получение N-трет.-бутоксикарбонил-(D,L)-дициклогкесилаланина 1 ммоль N-трет. -бутоксикарбонил-(D,L)-дифенилаланина в 12 мл метанола вместе с каталитическим количеством 5%-ного родия на оксиде алюминия гидрируют при давлении 5 бар. После фильтрации и удаления растворителя в вакууме получают продукт с количественным выходом.

В. 4. Получение трет.-бутоксикарбонил-1-(D,L)- тетрагидроизохинолинкарбоновой кислоты трет. -Бутоксикарбонил-1- (D,L)-тетрагидроизохинолинкарбоновую кислоту получают по методике Р.Т. Шумана и др. (R.T. Shuman и др., J. Med. Chem., 36, 314 (1993)).

В.5. Получение N-бензилоксикарбонил-(D)-фенилаланилпролил-O- сукцинимида I. 30 г N-Бензилоксикарбонил-(D)-фенилаланина, 11,54 г гидроксисукцинимида, 20,68 г дициклогексилкарбодиимида и 300 мл диметоксиэтана перемешивают в течение ночи при комнатной температуре. Затем суспензию отфильтровывают, фильтрат выпаривают в ротационном испарителе и остаток растворяют в 200 мл ацетонитрила. Выпавшую в осадок дициклогексилмочевину отфильтровывают и фильтрат концентрируют. Получают 40 г сложного сукцинимидоэфира (твердое вещество белого цвета).

II. 40 г N-Бензилоксикарбонил-(D)-фенилаланил-O-сукцинимида, 17,31 г пролина, 12,63 г гидрокарбоната натрия, 225 мл воды и 225 мл диметоксиэтана перемешивают в течение ночи при комнатной температуре (выделение газа). Затем диметоксиэтан удаляют в вакууме и в оставшемся водном растворе устанавливают pH-значение, равное двум, с помощью 1 н. соляной кислоты. Выделившееся масло экстрагируют метиленхлоридом. Объединенные метиленхлоридные экстракты промывают насыщенным раствором хлорида натрия и после высушивания над сульфатом натрия выпаривают в ротационном испарителе. Получают 39,7 г N-Бензил-оксикарбонил-(D)- фенилаланилпролина (твердое вещество белого цвета).

III. 39,7 г N-Бензилоксикарбонил-(D)-фенилаланилпролина, 11,53 г гидроксисукцинимида, 20,66 г дициклогексилкарбодиимида и 400 мл диметоксиэтана перемешивают в течение ночи при комнатной температуре. На следующий день отфильтровывают дициклогексилмочевину, фильтрат концентрируют и остаток обрабатывают с по мощью 300 мл ацетонитрила. Еще раз выпавшую в осадок дициклогексилмочевину отфильтровывают и фильтрат концентрируют в вакууме. Получают 48,92 r сложного гидроксисукцинимидоэфира.

В. 6. Получение защищенных с помощью трет.-бутоксикарбонила производных фенилаланина Поскольку аминокислот H-A-OH, соответственно, Boc-A-OH нет в продаже, их получают по аналогии с известными из литературы способами (обзор: Губен-Вейл, том E 16d/часть 1 S 406 и последующие).

Зачастую используемыми эдуктами для производных аланина являются этиловый эфир бензофенонаминоуксусной кислоты, диэтиловый эфир ацетамидомалоновой кислоты и этиловый эфир изонитрилуксусной кислоты.

Например, следует упомянуть: 1 Эквивалент дифенилглицинимина, 3 эквивалента карбоната калия и соответствующий бензилбромид (возможно также бензилхлорид или бензилиодид) в ацетонитриле кипятят в течение ночи. После охлаждения реакционную смесь отфильтровывают и фильтрат концентрируют. Затем остаток перемешивают в 1 н. соляной кислоте вплоть до полного расщепления имина. После этого водную фазу экстрагируют этилацетатом, подщелачивают ее с помощью карбоната натрия и экстрагируют этилацетатом. Объединенные органические экстракты сушат над сульфатом натрия и выпаривают в ротационном испарителе. Остаток, соответствующее производное фенилаланина, в стандартных условиях защищают на амино-конце с помощью защитной группы (предпочтительно трет.-бутоксикарбонильной или бензилоксикарбонильной группы).

В. 7. Получение защищенных с помощью трет.-бутоксикарбонила производных глицина Различные производные глицина получают, например, исходя из этилового эфира изонитрилуксусной кислоты и соответствующего кетона (см. Н. - J. Prgtorius, J. Fiossdorf, М. - R. Kula, Chem. Ber., 108. 3079 (1995)).

N-трет. -Бутоксикарбонил-суберилглицин синтезируют аналогично известному из литературы способу (О.Р. Goel и др., Tetrahedron Lett., 34, 953 (1993)).

N-трет.-Бутоксикарбонил-(3-фенил)-пролин синтезируют аналогично методике J.Y.L. Chung и др. (J.Y.L. Chung и др., J.Org. Chem., 55, 270 (1990)).

Тетралинилглицин получают исходя из 1,2-дигидронафталина, причем 1,2-дигидронафталин сначала с помощью бромоводорода переводят в 1-тетралилибромид (аналогично J. Med. Chem., 37, 1586 (1994)). Затем бромид вводят во взаимодействие с диэтиловым эфиром ацетамидомалоновой кислоты, гидролитически расщепляют и полученную - аминокислоту в стандартных условиях переводят в защищенную трет.-бутоксикарбонильной группой форму.

В. 8. Получение N-трет.-бутоксикарбонил-(D)- - метил)- циклогексилаланина N-трет.-Бутоксикарбонил-(D)- - метил)- циклогексилаланин получают путем гидрирования (D)-( - метил)- фенилаланина и последующего введения трет. -бутоксикарбонильной защитной группы. Другими возможностями синтеззамещенных аминокислот являются синтез по способу Бухерера, при котором исходят из кетонов, а также алкилирование аминокислот.

В.9. Получение производных гидроксиуксусной кислоты Производные гидроксиуксусной кислоты получают либо аналогично S.Bajusz (международная заявка на патент 93/18060), либо исходя из соответствующих производных метилового эфира уксусной кислоты путем гидроксилирования с помощью реагента Дэвиса (F. A. Davis, L.C. Vishwakarma, J.M. Billmers, J. Org. Chem., 49, 3241 (1984)).

В. 10. n-(2-Аминоэтил)бензонитрил: Получают согласно европейскому патенту 445796 В.11. п-Цианобензиламин: В. 11. a. 200 г 4-Цианобензилбромида (1,02 моль), 700 мл толуола, 200 г азида натрия (3,07 моль), 32,9 г тетрабутиламмонийбромида и 700 мл воды перемешивают в течение ночи при комнатной температуре. Затем обе фазы разделяют и толуольную фазу еще раз дополнительно промывают водой. Объем растворителя уменьшают до 1/5 в вакууме.

В. 11. б. 267,6 г Трифенилфосфина (1,02 моль) при 10^oC вносят в 500 мл тетрагидрофурана. К этому раствору медленно прикапывают растворенный в 165 мл тетрагидрофурана азид (выделение азота). По окончании добавления медленно добавляют 27,6 мл воды (1,53 моль) и реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение сорока восьми часов. Раствор затем выпаривают в ротационном испарителе и остаток обрабатывают охлажденной 3 н. соляной кислотой (1 литр). Выпавшее в осадок твердое вещество отсасывают и фильтрат промывают толуолом вплоть до полного удаления трифенилфосфиноксида. Затем кислую водную фазу подщелачивают до pH-значения, равного девяти, с помощью твердого карбоната натрия, и выпавшее в осадок твердое вещество отфильтровывают и фильтрат экстрагируют диэтиловым эфиром. Твердое вещество растворяют в диэтиловом эфире и полученный раствор вместе с эфирными экстрактами сушат. Затем объем эфира уменьшают и гидрохлорид осаждают путем пропускания газообразного хлороводорода. Соль отфильтровывают, промывают диэтиловым эфиром и высушивают на воздухе (соль сублимируется в высоком вакууме).

Выход составляет 137,6 г.

В. 11. в. п-Цианобензиламин получают из п-цианобензилбромида также через фталимид с последующим расщеплением с помощью гидразингидрата при получении хороших выходов.

Также пригоден синтез через соль уротропиния (W. W

Ингибиторы тромбина и промежуточные соединения для их получения

Патент 2172741