Способ диагностики внутреннего эндометриоза

Способ диагностики внутреннего эндометриоза

Реферат

 

Изобретение относится к медицине, а именно к гинекологии. В менструальной крови женщин определяют относительное содержание CD95+ лимфоцитов, при значении которого, равном 15% и менее, диагностируют внутренний эндометриоз с точностью 80%. Технический результат - повышение точности диагностики внутреннего эндометриоза. 1 табл.

Изобретение относится к медицине, а именно к гинекологии, и может быть использовано для диагностики внутреннего эндометриоза.

Актуальность данного изобретения определяется высокой частотой встречаемости эндометриоза (50%), в структуре которого внутренний эндометриоз составляет 41,5% среди различных форм данной патологии [6]. Имеющиеся способы диагностики внутреннего эндометриоза несовершенны и не информативны, что влечет за собой возрастание частоты таких его форм, которые требуют уже только хирургического лечения [2].

Известен способ диагностики внутреннего эндометриоза путем определения в периферической крови фосфатидилинозитов (ФИ), суть которого заключается в том, что в периферической крови женщин определяют содержание ФИ и при значениях данного показателя 356 - 426 мкмоль фосфора ФИ на 1 литр крови диагностируется внутренний эндометриоз матки [2]. Недостатки способа: - используется периферическая венозная кровь, то есть способ является инвазивным, - известно, что ФИ являются биорегуляторами фундаментальных биохимических процессов, отличаются высокой лабильностью и на показатели ФИ может оказывать влияние наличие другой патологии, связанной с пролиферативными процессами или изменением свойств клеточных мембран, - авторы не указывают точность способа.

Наиболее близким по техническому решению к заявляемому способу является способ диагностики эндометриоза матки, включающий гистероскопию с выскабливанием слизистой матки, отличающийся тем, что с целью повышения точности за счет выявления активности процесса определяют митотический индекс, метафазно-профазные соотношения, удельное количество патологических митозов и наличие их различных форм и при значениях митотического индекса более 8,6, метафазно-профазных соотношений более 49,2, удельном количестве патологических митозов более 14,6 и наличии различных форм патологических митозов диагностируют эндометриоз матки в активной форме [3].

Данный способ был выбран нами в качестве прототипа. Однако он имеет ряд недостатков: - забор материала для исследования проводится во время гистероскопии, то есть метод является инвазивным, предусматривает госпитализацию пациентки, - выскабливание полости матки может привести к повреждению базального слоя эндометрия и прогрессированию патологического процесса, - большая продолжительность выполнения исследования (3-5 дней) [5], - оценка проводится на основании рассчета трех индексов, сочетание которых характерно чаще для опухолевых процессов [1], - визуально - количественная оценка результатов (рассчет показателей производится при световой микроскопии на 1000 клеток [1]) предполагает субъетивный подход к чтению результатов, - данный способ позволяет диагностировать эндометриоз матки только в активной форме, частота встречаемости которой составляет 66% [4], что исключает возможность диагностики неактивной формы заболевания, - отсутствуют данные о точности способа.

Указанные недостатки предлагается устранить в заявляемом способе.

Заявляемый технический результат достигается тем, что в менструальной крови женщин определяют относительное количество CD95+ лимфоцитов и при значениях этого показателя равном 15% и менее диагностируют внутренний эндометриоз с точностью 80%.

Новизна заявляемого способа заключается в том, что впервые предлагается диагносцировать внутренний эндометриоз по определению относительного содержания CD95+ лимфоцитов в менструальной крови.

Исследование экспрессии CD95 молекулы проводилось лишь на клетках периферической крови, но не менструальной крови. Ранее этот показатель использовали при диагностике хронического аднексита, миомы матки, кисты яичников. Было установлено, что при этих заболеваниях экспрессия CD95 антигена лимфоцитами периферической крови повышена [7]. Для диагностики внутреннего эндометриоза этот показатель ранее не применяли.

Известно, что CD95 молекула участвует в процессе контроля над обновлением нормальных клеток через индукцию апоптоза [9]. Этот тип клеточной гибели является одним из компонентов механизма поддержания гомеостаза в обновляющихся клеточных популяциях. Причем отсутствие или ухудшение функционирования CD95 молекулы приводит к незлокачественному аккумулированию атипичных Т-клеток и может индуцировать пролиферативный процесс и даже модулировать формирование опухоли [10]. Вероятно, снижение экспрессии CD95 антигена лимфоцитами менструальной крови женщин с внутренним эндометриозом отражает нарушение процессов элиминации активированных клонов лимфоцитов, что может быть одним из факторов, способствующих формированию эндометриальных гетеротопий.

Способ осуществляется следующим образом.

К 3 мл менструальной крови, собранной во второй-третий день менструального цикла в чашку Петри с трилоном Б, добавляют 3 мл Среды 199 и далее выделение лимфоцитов проводится по стандартной методике скоростного центрифугирования в градиенте плотности фиколл-верографин [8]. Лимфоциты собирают в интерфазе Среда 199 - фиколл-верографин и отмывают 2 раза Средой 199 центрифугированием при 1500 об/мин в течение 10 минут.

100 мкл клеток в концентрации 1х106 кл./мл инкубируют с 20 мкл моноклональных анти-CD95, меченных FITC, в течение 30 минут при комнатной температуре в темноте, после чего клетки отмывают 1 раз 1 мл физиологического раствора центрифугированием при 1500 об/мин в течение 2 минут. Клетки ресуспендируют в 500 мкл физиологического раствора. Учет реакции проводят на проточном цитометре, определяя относительное содержание CD95+ клеток в лимфоцитарном гейте.

Использование предлагаемого способа позволяет с высокой точностью (80%) диагносцировать внутренний эндометриоз матки.

Отличительными признаками способа являются: - установлен диагностический параметр относительного содержания CD95+ лимфоцитов в менструальной крови, при количественных значениях которого 15% и менее диагносцируется внутренний эндометриоз.

Сущность заявляемого способа поясняется следующими примерами.

Пример 1. Больная П., 40 лет. Обратилась по поводу болей внизу живота, периодического кровомазания после менструации. Больна около 6 лет. В анамнезе 2 своевременных родов. Проводилось неоднократное антибактериальное лечение как амбулаторно, так и в стационаре с кратковременным эффектом по поводу хронического 2-стороннего аднексита, метроэндометрита. Вводилась ВМС - удалена через 1,5 года по поводу обострения воспалительного процесса (боли, кровомазание).

При влагалищном исследовании: незначительное увеличение матки, тяжистость в сводах.

Клинический диагноз: хронический эндомиометрит, двухсторонний аднексит.

По данный УЗС: тело матки с ровным контуром, ячеистой неоднородной структуры, повышенной эхоплотности, размерами 64х40х54 мм, М-эхо - 12 мм, шейка матки 42х38х39 мм, однородной структуры. Правый яичник - в петлях кишечника, с нечетким контуром, 37х23 мм, с эхо-негативными включениями по периферии диаметром 7х10х13 мм. Левый яичник не определяется (картина соответствует эндомиометриту, аднекситу).

По данным иммунологического обследования по заявляемому способу показатель относительного содержания CD95+ лимфоцитов в менструальной крови 15%.

Заключение: диагносцируется внутренний эндометриоз.

Проведено лечение по схеме Баскакова, применяемой при эндометриозе, лечение гестагенными препаратами в течение 6 месяцев, затем назначены контрацептивы с преобладанием гестагенного компонента. Боли исчезли с началом применения гестагенов, менструальный цикл нормализовался при приеме монофазного орального контрацептива. По данным УЗС: тело матки с ровным контуром однородной структуры, обычной эхоплотности, размерами 61 х 40 х 52 мм, М-эхо - 10 мм. Шейка матки и яичники без динамики. Улучшение клинико-инструментальных показателей свидетельствует о правильности поставленного диагноза и проведенного лечения.

Пример 2. Больная Л., 38 лет. Обратилась с жалобами на периодические боли внизу живота, постменструальные кровянистые выделения. В анамнезе 1 своевременные роды, 5 медицинских абортов без осложнений, ВМС 4 года.

Объективно: при осмотре тело матки чуть больше нормальных размеров, неоднородной структуры, чувствительное при пальпации, придатки справа болезненны, тяжисты, слева - без особенностей.

Клинический диагноз: метроэндометрит с ВМС, правосторонний аднексит, внутренний эндометриоз.

Данные УЗС: тело матки округлой формы с нечетким контуром ячеистой структуры, размерами 61х44х64 мм, неоднородной структуры. М-эхо - 10 мм. В полости матки ВМС правильно расположенная. Правый яичник - 37х29 мм. Левый яичник - 30х26 мм с плотным центром и с фолликулярными включениями по периферии до 11 мм, без доминантных фолликулов. Данные инструментального исследования подтверждают воспалительный процесс матки и придатков, а также внутреннего эндометриоза.

Обследование по заявляемому способу показало, что содержание CD95+ лимфоцитов в менструальной крови составило 20,6%.

Заключение: диагноз эндометриоза не подтверждается.

Проведено удаление ВМС и неспецифическое противовоспалительное лечение. Лечение эндометриоза по схеме гормональной терапии не проводилось. Больная отмечает улучшение самочувствия, отсутствие болей, нормализацию менструального цикла в течение 4 месяцев после лечения, рекомендована ВМС.

Пример 3. Больная С., 40 лет. Обратилась с жалобами на кровомазание до и после менструации, боли внизу живота и пояснице, обильные менструации в течение последних 4-х лет. Неоднократно проводимое противовоспалительное лечение давало кратковременный эффект. В анамнезе 1 роды и 2 медицинских аборта.

При объективном осмотре отмечается увеличение матки до 5-6 недель беременности, структура ее неоднородная, матка болезненна при пальпации, ограниченно-подвижна. Придатки не определяются своды свободны, выделения слизистые необильные.

Данные УЗС: матка размерами 72х54х68 мм неоднородной ячеистой структуры, с нечетким контуром, утолщением передней стенки до 23 мм, правый яичник и левый яичник 34х25 и 35х23 мм сооответственно, структура и локализация их не изменены.

Заключение: воспалительный процесс.

По данным обследования по заявляемому способу содержание CD95+ лимфоцитов в менструальной крови было 4,6%.

Заключение: диагносцируется внутренний эндометриоз.

Проведенное неспецифическое противовоспалительное лечение эффекта не дало. Проведено лечение по схеме Баскакова с последующим назначением гестагенных препаратов в режиме аменореи 6 месяцев. Боли исчезли. Рекомендована контрацепция препаратами гестагенного ряда или Депо-Провера. Положительный эффект от проведенного курса по схеме лечения эндометриоза подтверждает правильность диагноза, поставленного по заявляемому способу.

Указанным способом обследовано 20 пациентов, данные исследований приведены в таблице.

Итого: точность заявляемого способа - 80%, чувствительность заявляемого способа - 75%, специфичность заявляемого способа - 83%.

Преимущества заявляемого способа: 1. Высокая точность - 80%, чувствительность - 75%, специфичность - 83%.

2. Неинвазивность способа.

3. Простота забора материала, не требующего участия медицинского персонала.

4. Обследование женщин возможно в поликлинических условиях.

5. Специфика исследуемого материала (менструальная кровь) уменьшает риск влияния патологии других внутренних органов на информативность метода.

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ 1. Казанцева И. А. Патология митоза в опухолях человека//Новосибирск: Наука. -1981. -144 с.

2. Кулаков В.Н., Бакулева Л.П., Дамиров М.М., Саркисов С.Э., Слюсарь Н. Н. К вопросу о диагностике внутреннего эндометриоза//Акуш. и гин.- 1995.-N 1. - С. 38-40.

3. Куценко И.И., Ермолаенко Б.Г. Способ диагностики эндометриоза матки. Авт. свидетельство N 1751674// Изобретения. -1992. -28.-С. 181.

4. Куценко И.И. Морфологическая диагностика различных по активности форм эндометриоза матки с применением количественных методов// Архив патологии. -1997.-N 5.- С. 36-39.

5. Топчиева О. И., Прянишникова В.А., Жемкова З.П. Биопсии эндометрия. //- М.: Медицина. -1978 г.- С. 6-11.

6. Узденова З. X., Гаврилович Т.Б., Харзина P.M., Тищенко И.М. Особенности диагностики и лечения эндометриоза. Сборник трудов международного конгресса по эндометриозу с курсом эндоскопии. - Москва. -1996. -С. 142 и 143.

7. Baryshnikov A. Yu., Polosukhina E.R., Zabotina T.N., Lazareva N.I., Lukashina M.I., Shishkin Yu.V., Chinarjova I.V., Tenuta M.R., Metelitsa I.S. , Kadagidze Z.G. Fas (APO-1/CD95) antigen: new activation marker for evaluation of the immune status/Russian Journal of lmmunology. -1997.- V.2. -N 2. - P. 115-120.

8. Boyum A. Isolation of mononuclear cell and granulocytes from human blood and bone marrow// Scand.J.Clin.Lab.Invest.-1968.- V.21. -N 97. -P. 77.

9. Podack E.R. Execution and suicide: Cytotoxic lymphocytes enforce draconion laws throph separate molecular path ways//Curr. Opinion Immunol. -1995.- V.7.- N 1.-P. 11-16.

10. Zornig M., Greschiczek A., Kowalski M.B. Loss of Fas/APO-1 receptor accelerates lymphomagenesis in E mu L-MYC transgenic mice but not in animals infected with Mo Mu LV//Oncogene.-1995.- V.10- N 12.-P. 2397-2400.

Формула изобретения

Способ диагностики внутреннего эндометриоза путем исследования биологического материала, отличающийся тем, что в пробе менструальной крови определяют относительное содержание CD95+ лимфоцитов и при их показателях, равных 15% и менее диагностируют внутренний эндометриоз.

РИСУНКИ

Рисунок 1