Сукцинимидные и малеимидные ингибиторы цитокинов, фармацевтическая композиция на их основе и способы ингибирования tnf

Сукцинимидные и малеимидные ингибиторы цитокинов, фармацевтическая композиция на их основе и способы ингибирования tnf

Реферат

 

Описываются новые сукцинимидные и малеимидные ингибиторы цитокинов общей формулы (1), где R¹ обозначает -СН₂-, -СН₂СО- или -СО-, R² и R³, взятые вместе, обозначают (i) этилен, незамещенный или замещенный алкилом, содержащим 1-10 атомов углерода, или фенилом, (ii) винилен, замещенный двумя заместителями, каждый из которых выбран независимо из группы, состоящей из алкила, содержащего от 1 до 10 атомов углерода, и фенила, или (iii) бивалентный циклоалкил, содержащий от 5 до 10 атомов углерода, незамещенный или замещенный одним или более заместителями, каждый из которых выбран независимо из группы, состоящей из: нитро, циано, трифторметила, карбэтокси, карбометокси, карбопропокси, ацетила, карбамоила, незамещенного или замещенного С₁-С₃алкилом, ацетокси, карбокси, гидрокси, амино, замещенного амино, алкила, содержащего от 1 до 10 атомов углерода, алкокси, содержащего от 1 до 10 атомов углерода, норборнила, фенила или галогена, R⁴ обозначает 3,4-двузамещенный фенил, замещенный одним или большим числом заместителей, выбранных, независимо друг от друга, из группы, состоящей из: нитро, циано, трифторметила, карбэтокси, карбометокси, карбопропокси, ацетила, карбамоила, ацетокси, карбокси, гидрокси, амино, замещенного амино, алкила, содержащего от 1 до 10 атомов углерода, алкокси, содержащего от 1 до 10 атомов углерода, циклоалкила или бициклоалкила, содержащего от 3 до 10 атомов углерода, циклоалкокси или бициклоалкокси, содержащего от 3 до 10 атомов углерода, фенила или галогена, и R⁵ обозначает -СН₂СОХ, где Х обозначает NH₂, ОН, NHR или OR₆, где R обозначает низший алкил и где R₆ обозначает алкил или бензил. Соединения формулы (1) могут применяться для ингибирования фосфодиэтерас, особенно ФДЭ III и ФДЭ IV, и при лечении болезненных состояний, опосредуемых ими. Описывается также фармацевтическая композиция на их основе и способы ингибирования TNF. 6 с. и 11 з.п. ф-лы, 1 табл.

Изобретение относится к способу снижения уровней TNF и ингибированию фосфодиэстеразы у млекопитающих, а также к соединениям и композициям, используемым для этого.

TNF, или фактор некроза опухолей , представляет собой цитокин, который высвобождается прежде всего моноядерными фагоцитами в ответ на различные иммуностимуляторы. При введении животным или человеку он вызывает воспаление, лихорадку, сердечно-сосудистые эффекты, кровотечение, коагуляцию и ответные реакции, характерные для острой фазы, сходные с наблюдаемыми при острых инфекциях и шоковых состояниях.

Избыточное или неконтролируемое образование TNF характерно для ряда болезненных состояний, которые включают эндотоксэмию и/или синдром токсического шока (Tracey et al., Nature 330, 662-664 (1987) and Hinshaw et al., Circ. Shock 30, 279-292 (1990)); кахексию (Dezube et al. Lancet, 335(8690), 662 (1990)); и синдром двойного респираторного стресса у взрослых (ARDS), при котором концентрации TNF, которые были определены в легочных аспиратах пациентов с ARDS, превышают 12000 пкг/мл (Millar et al., Lancet 2 (8665), 712-714 (1989)). Системная инфузия рекомбинантного TNF также приводит к изменениям, обычно наблюдаемым для ARDS (Ferrai-Baliviera et al. Arch. Surg. 124(12), 1400-1405 (1989)).

TNF, как оказалось, участвует в заболеваниях, сопровождающихся резорбцией костей, включая артриты, при которых было показано, что активация лейкоцитов продуцирует костно-резорбтивную активность, и данные позволяют предполагать, что TNF вносит вклад в эту активность (Bertolini et al. Nature 319, 516-518 (1986) и Jonson et al. Endocrinology 124(3), 1424-1427 (1989)). Было обнаружено, что TNF стимулирует резорбцию костной ткани и ингибирует образование костной ткани in vivo и in vitro посредством стимуляции образования и активации остеобластов в сочетании с ингибированием функции остеобластов. Хотя TNF участвует во многих костно-резорбционных заболеваниях, наиболее выраженной связью с заболеванием является связь между продуцированием TNF опухолевой тканью и тканью организма-хозяина и гиперкальцимией, ассоциированной с малигнизацией (Calci. Tissue Int. (US) 46(Suppl.), S3-10 (1990)). В заболеваниях, связанных с реакциями трансплантанта против организма-хозяина, повышенные уровни TNF в сыворотке связаны с основными осложнениями, сопровождающими пересадку костного мозга (Holier et al. Blood. 75(4), 1011-1016 (1990)).

Церебральная малярия представляет собой летальный гиперострый неврологический синдром, связанный с высокими уровнями TNF в крови и является наиболее тяжелым осложнением, встречающимся у пациентов, страдающих малярией. Сывороточные уровни TNF непосредственно коррелируют с тяжестью заболевания и прогнозами в отношении пациентов, пораженных острой формой малярии (Grau et al., N. Engl. J. Med. 320(24), 1586-1591 (1989)).

TNF также играет роль в сфере хронических легочных воспалительных заболеваний. Отложение кремниевых частичек, приводящее к силикозу, заболеванию с прогрессирующим повреждением дыхательных путей, вызванным фиброзным процессом. Антитела к TNF полностью блокируют индуцированный кремнием фиброз легких у мышей (Pignet et al. Nature, 344:245-247 (1990)). Высокие уровни продуцирования TNF в сыворотке и в изолированных макрофагах были продемонстрированы на моделях животных с индуцированными кремнием и асбестом фиброзами (Bissonnette et al. Inflammation 13(3), 329-339 (1989)). Было обнаружено, что альвеолярные макрофаги больных легочным саркоидозом спонтанно выделяют значительные количества TNF по сравнению с макрофагами нормальных доноров (Baughman et al., J. Lab. Clin. Med. 115(1), 36-42 (1990)).

TNF участвует в воспалительных процессах, которые сопровождают реперфузию (реперфузионное повреждение), и являются главной причиной повреждения ткани после нарушения питания тканей кровью (Vedder et al., PNAS 87, 2643-2646 (1990)). TNF также изменяет свойства эндотелиальных клеток и обладает различными прокоагулянтными свойствами, такими как увеличение прокоагулянтной активности тканевого фактора и подавление пути биосинтеза антикоагулянтного белка C, а также обратная регуляция экспрессии тромбомодулина (Sherry et al., J. Cell Biol. 107, 1269-1277 (1988)). TNF обладает провоспалительной активностью, которая наряду с его ранним образованием (на начальной стадии воспалительного процесса) делает его подобным медиатору тканевого повреждения при некоторых серьезных нарушениях, включающих, не ограничиваясь ими, инфаркт миокарда, удар, циркуляторный шок. Особое значение может иметь индуцированная TNF экспрессия молекул адгезии, таких как молекула межклеточной адгезии (ICAM), молекула эндотелиальной адгезии лейкоцитов к клеткам эндотелия (ELAM) (Munro et al. Am. J. Path. 135(1), 121-132 (1989)). Более того, теперь известно, что TNF является мощным активатором ретровирусной репликации, включая активацию ВИЧ-1 (Duh et аl., Proc. Nat. Acad. Sci. 86, 5974-5978 (1989); Poll et al., Proc. Nat. Acad. Sci. 87, 782-785 (1990); Monto et al. Blood 79, 2670 (1990); Clouse et al., J. Immunol. 142, 431-438 (1989); Poll et al., AIDS Res. Hum. Retrovirus. 191-197 (1992)). СПИД является результатом инфицирования Т-лимфоцитов вирусом иммунодефицита человека (ВИЧ). Идентифицировано по крайней мере три вида штаммов ВИЧ, а именно, ВИЧ-1, ВИЧ-2 и БИЧ-3. В следствие ВИЧ-инфекции нарушается опосредованный Т-клетками иммунитет, и у инфицированных проявляются тяжелые оппортунистические инфекции и/или необычные новообразования. Проникновение ВИЧ внутрь Т-лимфоцита требует активации Т-лимфоцита. Другие вирусы, такие как ВИЧ-1 и ВИЧ-2 инфицируют Т-лимфоциты после активации Т-клеток, и экспрессия и/или репликация белков таких вирусов опосредуется или поддерживается активацией таких клеток. Если активированный Т-лимфоцит инфицируется ВИЧ, то такой лимфоцит должен продолжать оставаться в активированном состоянии, чтобы обеспечить экспрессию гена ВИЧ и/или репликацию ВИЧ. Цитокины, особенно TNF, участвуют в процессах экспрессии белка ВИЧ и/или репликации вируса, за счет того, что они играют роль в поддержании активного состояния Т-лимфоцитов. Следовательно, предотвращение, подавление или ингибирование синтеза цитокинов, особенно TNF, у ВИЧ-инфицированных пациентов приводит к ограничению активации Т-лимфоцитов, вызванной ВИЧ-инфекцией.

Моноциты, макрофаги и родственные клетки, такие как купферовские и глиальные клетки, также вовлечены в поддержание ВИЧ-инфекции. Эти клетки, как и Т-клетки, являются мишенями для вирусной репликации, уровень которой зависит от состояния активации клеток (Rosenberg et al. The Immunopathogenesis of HIV Infection, Advances in Immunology. 57(1989)). Показано, что цитокины, такие как TNF, активируют репликацию ВИЧ в моноцитах и/или макрофагах (Poli et al., Proc. Natl. Acad. Sci., 87, 782-784 (1990)), следовательно, предотвращение, подавление или ингибирование синтеза или активности цитокинов, имеет целью ограничения развития ВИЧ, как указано выше для Т-клеток. Дополнительные исследования позволили идентифицировать TNF как общий фактор активации ВИЧ in vitro и определили ясный механизм действия через ядерный регуляторный белок, обнаруженный в цитоплазме клеток (Osborn, et а1., PNAS 86, 2336-2340). Этот факт предполагает, что уменьшение синтеза TNF может иметь антивирусный эффект при ВИЧ-инфекциях путем снижения транскрипции и, как следствие, размножения вируса.

ВИЧ вирусная репликация латентного ВИЧ в линиях Т-клеток и макрофагов может быть индуцирована TNF (Folks et al., PNAS 86, 2365-2368 (1989)). Предлагается молекулярный механизм индуцирования вирусной активности посредством способности TNF активировать генный регуляторный белок (NFkB), обнаруженный в цитоплазме клеток, который вызывает репликацию ВИЧ посредством связывания с последовательностью вирусного регуляторного гена (LTR) (Osborn et аl. , PNAS 86, 2336-2340 (1989)). Предполагается, что TNF при СПИД-ассоциированной кахексии связан с повышенным уровнем TNF в сыворотке и высоким уровнем спонтанного продуцирования TNF моноцитами периферической крови пациентов (Wright et al., J. Immunol. 141(1). 99-104 (1988)).

TNF задействован различным образом в других вирусных инфекциях, таких как цитомегаловирус (CMV), вирус гриппа, аденовирус, и семейство вирусов герпеса, по причинам, сходным с упомянутыми.

Следовательно, предполагается, что предотвращение, подавление или ингибирование продукции или действия TNF (напр., в результате применения соединений данного изобретения) является мощной терапевтической стратегией при многих воспалительных, инфекционных, иммунологических или злокачественных заболеваниях. Они включают, но не ограничиваются ими, септический шок, сепсис, эндотоксический шок, гемодинамический шок и септический синдром, постишемическое реперфузионное повреждение, малярию, микобактериальную инфекцию, менингиты, псориазы, конгестивную сердечную недостаточность, фиброзное заболевание, кахексию, отторжение трансплантанта, рак, аутоиммуное заболевание, сопутствующие инфекции при СПИДе, ревматоидный артрит, ревматоидный спондилит, остеоартрит, другие артритные состояния, заболевание Крона (Crohn), язвенный колит, множественный склероз, системную эритематозную волчанку, ENL при проказе, радиационное повреждение, астму и гипертоксическое альвиолярное повреждение. Усилия, направленные на подавление эффектов TNF, варьируют от использования стероидов, таких как дексаметазон и преднизолон, до применения как поликлональных, так и моноклональных антител (Beutler et al. Science 234, 470-474 (1985); WO 92/11383). Ядерный фактор kB (NFkB) является плейотропным активатором транскрипции (Lenardo, et al. Cell 1989. 58, 227-29). Как активатор транскрипции NFkB участвует в ряде заболеваний и воспалительных процессов и предполагают, что он регулирует уровни цитокинов, включая TNF, но не ограничиваясь им, а также является активатором транскрипции ВИЧ (Dbaibo. et al. J. Biol. Chem. 1993. 17762-66; Duh et al. Proc. Natl. Acad. Sci. 1989, 86, 5974-78; Bachelerie et al. Nature 1991, 350, 709-12; Boswas, J. et al. Acquired Immune Deficiency Syndrom 1993, 6, 778-786; Suzuki et al. Biochem. And Biophys. Res. Comm. 1993, 193, 277-83; Suzuki et al. Biochem. And Biophys. Res Comm. 1992, 189, 1709-15; Suzuki et al. Biochem. Mol. Bio. Int. 1993, 31(4), 693-700; Shakhov al. 1990, 171. 35-47; and Staal et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1990, 87, 9943-47). Таким образом, ингибирование или активация NFkB связывания может регулировать транскрипцию гена(ов) цитокина, и, через такое модулирование и другие механизмы, может быть полезным в ингибировании множественных болезненных состояний. Соединения, заявленные в этом патенте, могут ингибировать действие NFkB в ядре, и, следовательно, являются полезными при лечении ряда заболеваний, включая, но не ограничиваясь ими, астму, ревматоидный артрит, ревматоидный спондилит, остеоартрит, другие артритные состояния, септический шок, сепсис, эндотоксический шок, реакцию трансплантанта против организма-хозяина, истощение, заболевание Крона (Crohn), язвенный колит, множественный склероз, системную эритематозную волчанку, ENL при проказе, ВИЧ, СПИД и сопутствующие инфекции при СПИДе.

Уровни TNF и NFkB влияют друг на друга посредством взаимной обратной связи. Как отмечено выше, соединения настоящего изобретения влияют на уровни как TNF, так и NFkB. Однако в настоящее время не известно, каким образом соединения настоящего изобретения регулируют уровни TNF, NFkB, или обоих.

Многие клеточные функции могут опосредоваться уровнями 3',5'-циклического аденозин монофосфата (цАМФ). Такие клеточные функции могут вносить вклад в воспалительные состояния и заболевания, включая астму, воспаление и другие (Lowe and Cheng, Drugs of the Future, 17(9), 799-807, 1992). Было продемонстрировано, что увеличение уровня цАМФ в лейкоцитах, находящихся в очаге воспаления, ингибирует их активацию и последующее высвобождение медиаторов воспаления. Повышенные уровни цАМФ приводят также к расслаблению гладкой мускулатуры дыхательных путей.

Первичным клеточным механизмом инактивации цАМФ является разложение цАМФ семейством изоферментов, относящимся к фосфодиэстеразам циклических нуклеотидов (ФДЭ) (Beavo and Reitsnyder, Trends in Pharm., 11, 150-155, 1990). Существует семь известных членов семейства ФДЭ. Известно, например, что подавление ФДЭ типа IV особенно эффективно как при подавлении высвобождения медиаторов воспаления, так и при расслаблении гладкой мускулатуры дыхательных путей (Verghese, et al., Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics, 272(3), 1313-1320, 1995). Таким образом, соединения, которые специфично ингибируют ФДЭ IV, будут демонстрировать желаемое подавление воспаления и расслабления гладкой мускулатуры дыхательных путей с минимальными нежелательными побочными эффектами, такими как сердечно-сосудистые и антитромбоцитарные. Используемые в настоящее время ингибиторы ФДЭ IV имеют недостаточную селективность действия при применении в приемлемых терапевтических дозах.

Соединения настоящего изобретения могут применяться для ингибирования фосфодиэстераз, особенно ФДЭ III и ФДЭ IV, и при лечении болезненных состояний, опосредуемых ими.

Подробное описание Настоящее изобретение основано на открытии, что класс неполипептидных имидов, более полно описанный здесь далее, проявляет способность ингибировать действие TNF. Настоящее изобретение относится к соединениям формулы в которой, R¹ представляет собой -CH₂-, -CH₂CO- или -CO-; R² и R³, взятые вместе, представляют собой: (i) незамещенный этилен, или замещенный одним или более алкилами, состоящими из 1-10 атомов углерода, или фенилом; (ii) винилен, замещенный двумя заместителями, каждый из которых выбран независимо от другого из группы, состоящей из алкила с углеродной цепью из 1-10 атомов и фенила; или (iii) двухвалентный циклоалкил или бициклический алкил с углеродной цепью из 5-10 атомов, незамещенный или замещенный одним или несколькими заместителями, каждый из которых выбран независимо от другого из группы, состоящей из: нитро, циано, трифторметила, карбэтокси, карбометокси, карбопропокси, ацетила, карбамоил, незамещенного или замещенного алкилом, состоящим из 1-3 атомов углерода, ацетокси, карбокси, гидрокси, амино, замещенной аминогруппы, алкила, состоящего из 1-10 атомов углерода, алкокси, состоящего из 1-10 атомов углерода, норборнила, фенила или галогена; R⁴ представляет: (i) незамещенный алкил с прямой или разветвленной цепью из 4-8 атомов углерода; (ii) циклоалкил, состоящий из 5-10 атомов углерода, незамещенный или замещенный одним или более заместителями, каждый из которых выбран независимо от другого из группы, состоящей из: нитро, циано, трифторметила, карбэтокси, карбометокси, карбопропокси, ацетила, карбамоила, ацетокси, карбокси, гидрокси, амино, замещенной аминогруппы, алкила, с прямой или циклической цепью, состоящего из 1-10 атомов углерода, алкокси, состоящего из 1-10 атомов углерода, фенила или галогена; (iii) фенил, замещенный одним или несколькими заместителями, каждый из которых выбран независимо от другого из группы, состоящей из: нитро, циано, трифторметила, карбэтокси, карбометокси, карбопропокси, ацетила, карбамоила, ацетокси, карбокси, гидрокси, амино, замещенной аминогруппы, алкила (состоящего из 1-10 атомов углерода), алкокси (состоящего из 1-10 атомов углерода), циклоалкила (состоящего из 3-10 атомов углерода), циклоалкокси (состоящего из 3-10 атомов углерода), фенила или галогена; или (iv) гетероцикл, состоящий из 4-10 атомов, включающий один или несколько гетероатомов, каждый из которых независимо выбран из N, О или S, например, пиридин и пирролидин, незамещенный или замещенный одним или несколькими заместителями, каждый из которых выбран независимо от другого из группы, состоящей из: нитро, циано, трифторметила, карбэтокси, карбометокси, карбопропокси, ацетила, карбамоила, ацетокси, карбокси, гидрокси, амино, замещенного амино, алкила, состоящего из 1-10 атомов углерода, алкокси, состоящего из 1-10 атомов углерода, фенила или галогена; R⁵ представляет -COX, -CN, -CH₂COX, алкил, состоящий из 1-5 атомов углерода, арил, - CH₂OR, -CH₂арил, CH₂OH, где X представляет NH₂, ОН, NHR, R или OR⁶, где R представляет низший алкил; и где R⁶ представляет алкил или бензил.

Термин алкил, используемый в настоящем документе, обозначает одновалентную насыщенную разветвленную или прямую углеводородную цепь. Если не оговорено иначе, эти цепи могут содержать от 1 до 18 атомов углерода. Представителями этих алкильных групп являются метил, этил, пропил, изопропил, бутил, изобутил, втор-бутил, трет-бутил, пентил, изопентил, неопентил, трет-пентил, гексил, изогексил, гептил, октил, нонил, децил, ундецил, додецил, тридецил, тетрадецил, пентадецил, гексадецил, гептадецил, октадецил и т.п. Под термином "низший" подразумевают, что алкильная группа содержит от 1 до 6 атомов углерода. Такое содержание углерода применимо к основному термину "алкан" и к производным терминам, таким, как "алкокси".

Термин циклоалкил (или циклический алкил), используемый в этом документе, обозначает моновалентные насыщенные циклические или бициклические углеводородные цепи. Если не оговорено иначе, такие цепи могут содержать от 1 до 18 атомов углерода. Представителями таких циклоалкильных групп являются циклопропил, циклобутил, циклопентил, циклогексил, циклогептил, циклооктил, циклононил, циклодецил, циклоундецил, циклододецил, циклотридецил, циклотетрадецил, циклопентадецил, циклогексадецил, циклогептадецил, циклооктадецил, циклические терпены, и т.п. Циклоалкильные группы, определяемые как "низшие", содержат от 3 до 6 атомов углерода. Такое содержание углерода применимо к основному термину "циклоалкан", и к производным терминам, таким, как "циклоалкокси". Термин замещенный амино, используемый в данном документе, обозначает одновалентный амин с одним или двумя заместителями, выбранными независимо друг от друга из группы, состоящей из: нитро, циано, трифторметила, карбэтокси, карбометокси, карбопропокси, ацетила, карбамоила, ацетокси, карбокси, гидрокси, амино, алкила из 1-10 атомов углерода или фенила.

Типичные соединения данного изобретения включают: Метил 3-сукцинимидил-(3,4-диметоксифенил) пропионат, Метил 3-сукцинимидил-(3-этокси-4-метоксифенил) пропионат, Метил 3-сукцинимидил-(3-циклопентокси-4-метоксифенил)-пропионат, Этил 3-сукцинимидил-(3,4-диэтоксифенил) пропионат, Метил 3-сукцинимидил-(4-метоксифенил)пропионат, Метил 3-(цис-1,2,5,6-тетрагидрофталимидо)-3-(3,4-диметоксифенил) пропионат, 3- (цис-1,2,5,6-тетрагидрофталимидо)-3-(3,4-диметоксифенил)-пропионамид, Метил 3-(цис-1,2,5,6-тетрагидрофталимидо)-3-(3,4-этоксифенил)-пропионат, Этил 3-(цис-гексагидрофталимидо)-3-(3,4-этоксифенил) пропионат, Пропил 3-(цис-гексагидрофталимидо)-3-(3,4-цианофенил)-пропионат, Этил 3-(4'-амино-цис-гексагидрофталимидо)-3-(3,4-диметоксифенил) пропионат, 3-(4'-Амино-цис-гексагидрофталимидо)-3-(3,4-диметоксифенил)-пропионитрил, Этил 3-малеимидо-3-(3,4-диэтоксифенил)пропионат, 3-Малеимидо-3-(3,4-диэтоксифенил) пропионамид, Метил 3-(4-амино-3,4,5,6-тетрагидрофталимидо)-3-(3,4-диметоксифенил) пропионат, Метил 3-(3-амино-3,4,5,6-тетрагидрофталимидо)-3-(3,4-диэтоксифенил) пропионат, Метил 3-(3,4,5,6-тетрагидрофталимидо)-3-(4-метоксифенил)-пропионат Метил 3-(3-амино-3,4,5,6-тетрагидрофталимидо)-3-(3,4-дигидроксифенил) пропионат, и 3-(3-Амино-3,4,5,6-тетрагидрофталимидо)-3-(3-гидроксифенил)- пропионитрил.

Первый предпочтительный подкласс относится к соединениям, в которых R⁴ представляет арил, a R⁵ представляет CH₂CO₂CH₃, CN, CH₂CONH₂.

Соединения могут использоваться под наблюдением квалифицированных специалистов, чтобы снизить нежелательные эффекты TNF. Соединения могут быть введены млекопитающим, нуждающимся в лечении, перорально, ректально или парентерально, сами по себе, или в сочетании с другими терапевтическими агентами, включая антибиотики, стероиды и т.д. Оральные дозированные формы включают таблетки, капсулы, драже и подобным образом формованные под давлением готовые лекарственные формы. Изотонические солевые растворы, содержащие 20-100 миллиграмм/миллилитр могут использоваться для парентерального введения, которое включает внутримышечное, интратекальное, внутривенное и внутриартериальное введение. Ректальное введение может осуществляться посредством применения свечей, составленных из подходящего носителя, такого, как кокосовое масло.

Режим доз должен отдельно подбираться для определенного назначения, возраста, веса, общего физического состояния больного и желаемого эффекта, но обычно дозы составляют от 1 до 500 миллиграмм/день по необходимости при однократном или многократном применении в течение дня. Обычно начальная лекарственная доза берется равной дозе, которая эффективно препятствует активности TNF посредством соединений настоящего изобретения при других болезненных состояниях. У пациентов, принимающих препараты, необходимо регулярно определять количество Т-клеток и соотношение Т4/Т8 и/или проводить измерение viremia (виремии), а именно, уровни обратной транскриптазы или вирусных белков и/или развитие цитокин-опосредованных осложнений, связанных с заболеваниями, такими как кахексия или дегенерация мышц. Если при приеме обычной лекарственной дозы не наблюдается эффекта, то количество вводимого агента, препятствующего активности цитокина, увеличивают, например, на 50% в неделю.

Соединения настоящего изобретения могут также использоваться для наружного применения при лечении или профилактики поверхностных болезненных состояний опосредованных или обостренных избыточной продукцией TNF, таких как вирусные инфекции, например, вызываемые вирусом герпеса или вирусные конъюнктивиты и др.

Соединения также могут быть использованы в ветеринарном лечении млекопитающих, отличных от человека, при необходимости предотвращения или ингибирования продукции TNF. TNF - опосредованные заболевания у животных, при которых такое лечение применяется терапевтически или профилактически, включают болезненные состояния такие, как описаны выше, но особенно вирусные инфекции. Примеры таких инфекций включают вирус кошачьего иммунодефицита, вирус лошадиной инфекционной анемии, вирус козлиного артрита, вирус visna и вирус maedi, так же как и другие лентивирусы.

Некоторые из этих соединений обладают хиральным центром и могут существовать в виде оптических изомеров. И рацематы этих изомеров, и индивидуальные изомеры, а также диастереомеры, в случае наличия двух хиральных центров, находятся в сфере настоящего изобретения. Рацематы могут использоваться как таковые, или могут быть разделены на индивидуальные изомеры механически с помощью хроматографии на хиральном сорбенте. Альтернативно, индивидуальные изомеры могут быть получены в хиральной форме или химически выделены из смеси путем образования солей с хиральной кислотой, такой как индивидуальные энантиомеры 10-камфорсульфоновой кислоты, камфорная кислота, -бромкамфорная кислота, метоксиуксусная кислота, винная кислота, диацетилвинная кислота, яблочная кислота, пирролидин-5-карбоксильная кислота и подобные им, с последующим выделением одного или обоих из оснований, образовавшихся в результате разложения соли, необязательно повторяя процесс, чтобы получить тот или другой, или оба, без существенной примеси другого, т.е. в форме, имеющей оптическую чистоту >95%.

Предотвращение или ингибирование продукции TNF можно удобно контролировать, используя методы, известные в этой области. Например, определение ингибирования TNF в LPS-стимулированных РВМС проводят следующим образом: Выделение РВМС: РВМС получают от нормальных доноров путем центрифугирования в градиенте плотности Фиколл-Хипак (Ficoll-Hypaque). Культуру клеток выращивают в RPMI, дополненной 10% АВ+ сывороткой, 2 мМ L-глутамином, 100 ед./мл пенициллина и 100 мкг/мл стрептомицина.

Суспензии РВМС: Препараты растворяют в ДМСО (Sigma Chemical), последующие разведения выполняют дополненной RPMI. Конечная концентрация ДМСО в присутствии или отсутствии препарата в суспензии РВМС составляла 0,25 вес.%. Препараты тестировали в полулогарифмических разведениях, начиная с 50 мкг/мл. Препараты добавляли к РВМС (10⁶ клеток/мл) в 96-луночных планшетах за 1 час до добавления LPS.

Стимуляция клеток: РВМС (10⁶ клеток/мл) в присутствии или отсутствии препарата стимулировали с помощью 1 мкг/мл LPS из Salmonella minnesota R595 (List Biological Labs, Campbell, CA). Затем клетки инкубировали при 37^oC в течение 18-20 часов. Далее супернатанты собирали и анализировали на уровне TNF немедленно, или замораживали при -70^oC (но не более, чем на 4 дня) перед анализом.

Определение цитокина: Концентрацию TNF в супернатанте определяли с помощью наборов ELISA для человеческого TNF (ENDOGEN, Boston, МА) в соответствии с инструкциями производителя.

Соединения могут быть получены с помощью методов, которые обычно применяются при получении имидов. Общая схема реакции иллюстрируется с помощью формул (см. в конце описания).

Последующие примеры будут служить для более глубокого освещения природы этого изобретения, но не должны рассматриваться, как ограничивающие его объем, который определяется исключительно прилагающейся формулой изобретения.

Пример 1 N-[1-(3,4-диметоксифенил)-2-карбометоксиметан]-3- карбоксипропионамид К суспензии янтарного ангидрида (0,50 грамм, 5,0 ммоль) и гидрохлорида метил 3-амино-3-(3,4-диметоксифенил)пропионата (1,38 грамм, 5,0 ммоль) в метиленхлориде (20 мл) добавляют триэтиламин (0,75 мл, 5,4 ммоль), через 3-4 минуты смесь становится гомогенной. Раствор перемешивают при комнатной температуре в течение 1,5 часов. Протекание реакции контролируют с помощью ТСХ (5% метанол/метиленхлорид, УФ, I₂), продукт и исходное вещество имеют сходные значения R_f, но исходное вещество окрашивается йодом в темно-желтый цвет. Раствор последовательно промывают водным раствором 5 н. соляной кислоты (15 мл) и водой (10 мл). Полученный органический слой сушат над сульфатом магния и концентрируют в вакууме, получая 1,2 грамма продукта (70%) в виде белой пены: ¹H ЯМР (CDCl₃) 7,04-6,89 (м, 1H), 6,88-6,72 (м, 3H), 5,93-5,25 (м, 1H), 3,85 (с, 3H), 3,84 (с, 3H), 3,63 (с, 3H), 3,01-2,71 (м, 2H), 2,76-2,39 (м, 4H); ¹³C ЯМР (CDCl₃) 176,2, 171,8, 171,4, 149,0, 148,5, 132,8, 118,2, 111,2, 109,9, 55,9, 55,8, 51,9, 48,6, 39,8, 30,7, 29,5.

Метил 3-сукцинимидил (3,4-диметоксифенил)пропионат Смесь N-[1-(3,4-диметоксифенил)-2-карбометоксиметан] -3-карбоксипропионамида (0,61 грамм, 1,8 ммоль) и ацетата натрия (0,07 грамм, 0,9 ммоль) в уксусном ангидриде (8 мл) нагревают с обратным холодильником в течение 30 минут. Протекание реакции контролируют с помощью ТСХ (10% метанол/метиленхлорид, УФ) и фиксируют ее полное завершение через 30 минут. Реакционную смесь охлаждают до комнатной температуры, помещают в воду со льдом (50 мл) и перемешивают 15 минут. Смесь экстрагируют в эфир (25 мл) и последовательно промывают насыщенным водным раствором бикарбоната натрия (25 мл), хлорида натрия (10 мл), бикарбоната натрия (25 мл) и хлорида натрия (10 мл). Эфирный слой сушат над сульфатом магния и концентрируют в вакууме, получая 0,36 грамма сырого продукта в виде коричневого масла. Сырой продукт очищают методом флэш-хроматографии (силикагель, 10% этилацетат/метиленхлорид), получая 0,23 грамма (40%) продукта в виде масла, которое при последующем охлаждении превращается в твердое белое вещество; ¹H ЯМР (CDCl₃) 7,18-7,01 (м, 2H), 6,90-6,74 (м, 1H), 5,68-5,54 (м, 1H), 3,88 (c, 3H), 3,86 (c, 3H), 3,83-3,62 (м, 1H), 3,66 (c, 3H), 3,22-3,04 (м, 1H); ¹³C ЯМР (CDCl₃) 177,1, 171,1, 148,9, 148,8, 130,5, 120,5, 111,3, 110,9, 55,9, 55,8, 51,9, 51,4, 34,8, 27,9; Аналитически найденная формула C₁₆H₁₉NO₆. Теория: C, 59,81; H, 5,96; N, 4,36, Обнаружено: C, 60,00; H, 5,98; N, 4,26.

Пример 2 Метил 3-(цис-1,2,5,6-гетрагидрофталимидо)-3-(3,4-диметоксифенил) пропионат Перемешиваемую под током азота смесь цис-1,2,5,6-тетрагидрофталевого ангидрида (0,76 грамм, 5,0 ммоль), гидрохлорида метил 3-амино-3-(3,4-диметоксифенил)пропионата (1,38 грамм, 5,0 ммоль), и ацетата натрия (0,41 грамм, 5,0 ммоль) в 20 мл уксусной кислоты нагревают с обратным холодильником в течение 20 часов. Охлажденную реакционную смесь концентрируют в вакууме и остаток разбавляют 25 мл метиленхлорида и затем порциями добавляют 25 мл насыщенного раствора бикарбоната натрия; полученную смесь перемешивают в течение 30 мин. Органическую фазу отделяют, сушат над сульфатом натрия и концентрируют в вакууме с получением сырого продукта в виде масла. Сырой продукт очищают флэш-хроматографией (силикагель, 1/9 этилацетат/гексан) с получением 0,85 грамма (46%) 3-(цис-1,2,5,6-тетрагидрофталимидо)-3-(3,4-диметоксифенил)пропионата в виде твердого вещества: т.пл. 100-101,5^oC; Спектр ¹H ЯМР (CDCl₃/TMC) 7,00 (м, 2H), 5,83 (м, 2H), 5,77 (дд, J = 10,0, 5,9 Гц, 1H, CH), 3,85 (с, 6H, 2 OCH₃), 3,62 (дд, J = 10,0, 16,4 Гц, 1H), 3,64 (с, 3H, OCH₃), 3,10 (дд, J = 16,4, 5,9 Гц, 1H), 3,00 (м, 2H), 2,62-2,45 (м, 2H), 2,30-2,22 (м, 2H); ¹³C ЯМР (CDCl₃/TMC) 180,0, 179,7, 170,3, 148,8, 130,6, 127,6, 127,5, 120,1, 111,0, 110,8, 55,8, 55,8, 51,8, 51,4, 38,8, 35,3, 23,5, 23,4; TCX (1/9 EtOAc/гексан, УФ) R_f = 0,34. Аналитически найденная формула C₂₀H₂₃NO₆. Теория: C, 64,33; H, 6,21; N, 3,75, Обнаружено: C, 64,29; H, 6,19; N, 3,68.

Пример 3 Метил 3-(цис-гексагидрофталимидо)-3-(3,4-диметоксифенил)-пропионат

Перемешиваемую под током азота смесь 1,2,5,6-гексагидрофталевого ангидрида (0,77 грамм, 5,0 ммоль), гидрохлорида метил 3-амино-3-(3,4-диметоксифенил)пропионата (1,38 грамм, 5,0 ммоль) и ацетата натрия (0,40 грамм, 4,9 ммоль) в 20 мл уксусной кислоты нагревают с обратным холодильником 20 часов. Охлажденную реакционную смесь концентрируют в вакууме и остаток разбавляют 25 мл метиленхлорида и затем порциями добавляют 25 мл насыщенного раствора бикарбоната натрия; полученную смесь перемешивают в течение 30 мин. Органическую фазу отделяют, сушат над сульфатом натрия и концентрируют в вакууме с получением сырого продукта в виде масла. Сырой продукт очищают флэш-хроматографией (силикагель, 1/9 этилацетат/гексан), получая 0,72 граммов (38%) метил 3-(цис-гексагидрофталимидо)-3-(3,4- диметоксифенил)пропионата в виде твердого вещества (воска) не совсем белого цвета: т.пл. 92,5-95^oC; Спектр ¹H ЯМР (CDCl₃/TMC) 7,02 (м, 2H, Ar), 6,65 (м, 1H, Ar), 5,56 (дд, J = 5,5, 10,5 Гц, 1H, CHN), 3,86 (2с, 6H, 2 OCH₃), 3,74 (дд, J = 16,5, 10,5 Гц, 1H), 3,66 (с, 3H, OCH₃), 3,08 (дд, J = 5,5, 16,5 Гц, 1H, CHCO), 2,77 (м, 2H, мостиковый Hs), 1,87-1,55 (м, 4H), 1,5-1,2 (м, 4H); ¹³C ЯМР (CDCl₃/TMC) 179,5, 179,4, 171,1, 148,9, 148,8, 130,9, 120,1, 111,0, 110,9, 55,9, 55,8, 51,8, 51,0, 39,6, 35,2, 23,6, 23,5, 21,6; TCX (1/9 EtOAc/гексаны, УФ) R_f = 0,36, Аналитически найденная формула C₂₀H₂₅NO₆. Теория: C, 63,99; H, 6,71; N, 3,73, Обнаружено: C, 63,89; H, 6,81; N, 3,61.

Пример 4 Метил N-(малеиновая кислота)-3-амино-3-(3',4'- диметоксифенил)-пропионат.

К перемешиваемой суспензии гидрохлорида метил-3-амино-3-(3',4'-диметоксифенил)пропионата (1,38 грамм, 5,00 ммоль) и малеинового ангидрида (0,49 грамм, 5,0 ммоль) в метиленхлориде (20 мл) добавляют 0,75 мл триэтиламина (5,4 ммоль). Через 1 час реакционную смесь промывают 0,5 н. соляной кислотой (15 мл) и водой (10 мл). Органический слой сушат сульфатом натрия и концентрируют, получая 1,59 граммов (94%) продукта в виде белой пены: Спектр ¹H ЯМР (ДМСО-d₆, 250 МГц) 14,27 (шир.с, 1H), 9,35 (д, J = 8,3 Гц, 1H), 7,05-6,80 (м, 3H), 6,38 (д, J = 12,4, 1H), 6,26 (д, J = 12,3 Гц, 1H), 5,23 (м, 1H), 3,76 (с, 3H), 3,73 (с, 3H), 3,57 (с, 3H), 2,85 (м, 2H); ¹³C ЯМР (ДМСО-d₆, 250 МГц) 170,4, 165,9, 164,2, 148,7, 148,2, 133,2, 132,4, 131,3, 118,6, 111,6, 110,6, 55,5, 51,5, 49,7.

Метил 3-малеимидо-3-(3,4-диметоксифенил) пропионат.

Смесь метил N-(малеиновая кислота)-3-амино-3-(3', 4'-диметоксифенил)пропионата (1,0 грамм, 1,5 ммоль) и ацетата натрия (1,48 ммоль) в 75 мл уксусного ангидрида перемешивают при комнатной температуре 2 часа, затем нагревают с обратным холодильником 20 мин. Охлажденную (10^oC) реакционную смесь помещают в воду со льдом (50 мл), перемешивают 15 минут и затем экстрагируют 50 мл диэтилового эфира. Эфирный слой сушат над сульфатом натрия и концентрируют в вакууме, получая светло-коричневое масло, которое очищают флэш-хроматографией (1/1 этилацетат/гексан, силикагель), получая 0,47 г (50%) продукта в виде воска: т.пл. 75-76^oC: Спектр ¹H ЯМР (DMCO-d₆, 250 МГц) 7,02 (м, 2H, Ar), 6,80 (м, 1H, Ar), 6,64 (с, 2H, винил), 3,87 (с, 3H), 3,85 (с, 3H), 3,7-3,58 (м, 4H, CH, CO₂CH₃), 3,12 (дд, J = 5,8, 16,5 Гц, 1H); ¹³C ЯМР (ДМСО-d₆, 250 МГц) 170,9, 170,5, 149,0, 148,9, 134,0, 131,0, 120,1, 111,0, 110,9, 55,9, 55,8, 51,9, 50,7, 35,9. Аналитически найденная формула C₁₆H₁₇N₁O₆. Теория: C, 60,18; H, 5,37; N, 4,39, Обнаружено: C, 60,18; H, 5,40; N, 4,32, Пример 5.

Метил 3-(3,4,5,6-тетрагидрофталимидо)-3-(3,4-диметоксифенил)-пропионат.

К перемешиваемой суспензии 3,4,5,6-тетрагидрофталевого ангидрида (0,38 грамм, 2,5 ммоль) и гидрохлорида метил 3-амино-3-(3,4-диметоксифенил)пропионата (0,69 грамм, 2,5 ммоль) в уксусной кислоте (10 мл) добавляют ацетат натрия (0,21 г, 2,5 ммоль). Суспензию нагревают с обратным холодильником под током азота в течение ночи. Уксусную кислоту удаляют в вакууме, получая в результате оранжевое масло, которое помещают в воду (5 мл) и pH доводят до 7, с помощью насыщенного раствора бикарбоната натрия. Полученную смесь экстрагируют мети