Амины для получения лекарственных средств, предназначенных для предотвращения пролиферации опухолевых клеток

Амины для получения лекарственных средств, предназначенных для предотвращения пролиферации опухолевых клеток

Реферат

 

Изобретение относится к медицине и касается применения цис-N-циклогексил-N-этил-[-3-(3-хлор-4-циклогексилфенил)- аллил]амина, или его фармацевтически приемлемой соли, или сольвата для получения фармкомпозиции для лечения заболеваний, вызванных пролиферацией опухолевых или раковых клеток, а также фармкомпозиции, предназначенной для лечения указанных заболеваний. Указанная композиция обладает повышенной антиопухолевой активностью. 2 с. и 4 з.п. ф-лы, 2 ил., 4 табл.

Настоящее изобретение относится к новому применению соединений, обладающих пригодным сродством к рецепторам, на которых фиксируется цис-N-циклогексил-N-этил-[3-(3-хлор-4-циклогексилфенил)аллил] амин, а также к новым соединениям, обладающим такими же свойствами.

Цис-N-циклогексил-N-этил-[3-(3-хлор-4- циклогексилфенил)аллил] амин, известный под кодовым названием СМ 31747 или SR 31747 и обозначаемый ниже как "SR 31747", описывается в европейском патенте 376850, в котором констатируется его иммуносупрессивная активность.

Обнаружено, что SR 31747 предотвращает пролиферацию раковых клеток и, следовательно, проявляет противоопухолевую активность.

Более того, было обнаружено, что SR 31747 обладает рецепторными участками в этих клетках.

Наконец, было обнаружено, что любой продукт, способный вытеснять меченый тритием SR 31747 из его рецепторов в опухолевых клетках, предотвращает пролиферацию клеток. В частности, установлено, что соединения, способные вытеснять меченый тритием SR 31747 (ниже называется как "³H-SR 31747") из его рецепторных участков, обладают антипролиферативной клеточной активностью.

Таким образом, согласно одному из аспектов настоящее изобретение относится к применению соединений, способных вытеснять меченый тритием цис-N-циклогексил-N-этил-[3-(3-хлор-4- циклогексилфенил)аллил]амин из его рецепторов, для получения фармацевтических композиций, предназначенных для оказания противодействия пролиферации клеток. Способность предусматриваемых для применения согласно настоящему изобретению соединений вытеснять меченый тритием SR 31747 из его рецепторов можно легко определять биохимическим путем с помощью ³H-SR 31747 и его фиксации в клетках.

Это определение можно осуществлять при использовании выбранных соответствующим образом опухолевых клеток, предпочтительно среди линий клеток, которые легко пролиферируют in vitro, как, например, клетки миелом человека, рака почки или легкого человека, или еще при использовании клеток рака молочной железы.

В целях возможности осуществления определений в стандартных условиях, позволяющих получать постоянные и воспроизводимые результаты, согласно контексту настоящего изобретения произвольно выбирают линию клеток опухоли молочной железы человека "MCF-7".

Также согласно контексту настоящего изобретения произвольно выбирают ³H-SR 31747, в котором тритий фиксирован на виниленовой связи, однако SR 31747 может быть маркирован любым образом, так как метка служит только для того, чтобы следить за вытеснением продукта из его рецепторов.

Определение способности вытеснять ³H-SR 31747 из его рецепторов, находящихся в клетках, особенно в случае линии клеток MCF-7, осуществляют путем проведения опытов по общему связыванию и специфическому связыванию.

Согласно настоящему изобретению любой продукт, который, подвергнутый предварительной вышеуказанной операции, способен вытеснять ³H-SR 31747 из его рецепторов, может быть использован для получения фармацевтических композиций против пролиферации клеток.

SR 31747, во-первых, способен вытеснять ³H-SR 31747 из его рецепторов и обладает высокой ингибирующей активностью в отношении пролиферации клеток.

В частности, предметом настоящего изобретения является применение соединения, способного вытеснять меченый тритием цис-N- циклогексил-N-этил-[3-(3-хлор-4-циклогексилфенил)аллил]амин из его рецепторов, выбираемого из группы, состоящей из: а) аминов формулы (I) в которой R₁ означает атом водорода или атом галогена; R₂ означает циклогексил; R₃ означает циклоалкил с 3-6 атомами углерода; R₄ означает атом водорода, алкил с 1-6 атомами углерода или циклоалкил с 3-6 атомами углерода; А означает группу, выбираемую среди следующих групп: -CO-CH₂-, -CH(C1)-CH₂-, -CH(OH)-CH₂-, -CH₂-CH₂, -CH=CH-, -CC-; б) фармацевтически приемлемых солей присоединения аминов формулы (I); в) аминов формулы (II) в которой A_a означает группу, выбираемую среди следующих групп: -CO-CH₂-, -CH(OH)-CH₂-, -CH=CH-, -CC-; R_1a означает водород или галоген; R_2a означает циклогексил; г) фармацевтически приемлемых солей присоединения кислот аминов формулы II; д) аминов формулы (III) в которой R_1b означает атом водорода или атом галогена; R_2b означает циклогексил; R_3b означает атом водорода или алкильную группу с 1-3 атомами углерода; R_4b означает алкильную группу с 1-3 атомами углерода, одинаковую или отличающуюся от алкильной группы в значении радикала R_3b; R_3b и R_4b, рассматриваемые вместе, могут образовывать вместе с атомом азота, с которым они связаны, 5-7-членную гетероциклическую группу, выбираемую среди пиперидино-, морфолино- и пирролидиногруппы; A_b означает группу -CH₂CH₂- или -CH=CH-; е) фармацевтически приемлемых солей присоединения кислот аминов формулы (III); ж) аминов формулы (IV) в которой Ar₁ означает фенильную, нафтильную, замещенную фенильную или замещенную нафтильную группу; n означает целое число, включая числа от 1 до 4; RB означает алкильную группу, и в этом случае A_с означает простую связь; и RA и RC, одинаковые или разные, независимо друг от друга означают атом водорода или группу, выбираемую среди атомов галогена, алкила, замещенного одним или несколькими атомами галогена алкила и алкоксила; или RB и RC вместе образуют мостик -(CH₂)_p-, где p означает 0, 1 или 2, и в этом случае RA означает гидроксильную или алкоксильную группу, находящуюся в положении 5 содержащего ее ароматического цикла, или RA означает атом водорода или галогена в любом положении ароматического цикла; или RB и RC вместе образуют мостик -CH=, и связь, которой он связан с ароматическим циклом, является простой связью, и в этом случае А_с означает метиленовую группу, a RA означает атом водорода, гидроксильную или алкоксильную группу, находящуюся в положении 5 содержащего ее ароматического цикла; или RB и RC вместе образуют связь и тогда А_с означает группу формулы причем карбонил связан с кислородом и соседняя связь А_с с содержащим боковую цепь атомом углерода является двойной связью, и в этом случае RA означает атом водорода или гидроксильную или алкоксильную группу; когда RB означает алкильную группу, каждый из X и Y означает атом водорода или вместе с содержащим их атомом углерода они образуют группу С=O, и RD означает атом водорода или алкильную группу; когда RB и RC образуют мостик, каждый из X и Y означает атом водорода и RD, который существует только тогда, когда все связи несущего его атома углерода являются простыми связями, означает атом водорода; при условии, что - термины "алкил" и "алкоксил" означают линейные или разветвленные насыщенные группы с 1-6 атомами углерода; - термин "замещенный", относящийся к фенильному и нафтильному заместителям, означает, что они могут быть замещены 1-3 группами, выбираемыми среди гидроксила, алкила, замещенного одним или несколькими атомами галогена алкила, алкоксила и галогена; 3) фармацевтически приемлемых солей и сольватов аминов формулы (IV); и) аминов формулы (V) в которой Ar₂ и Ar₃, одинаковые или разные, независимо друг от друга означают фенильную группу, или нафтил или фенил, замещенный 1-3 группами, выбираемыми среди гидроксила, (C₁-C₆) - алкила, алкоксила, галогена и алкила, и замещенного одним или несколькими атомами галогена алкила; каждый из X' и Y' означает атом водорода или вместе они образуют оксогруппу; RE означает (C₁-C₆)-алкильную группу; их изомеров в индивидуальной форме или в виде смеси; к) фармацевтически приемлемых солей и сольватов аминов формулы (V); л) аминов формулы (VI) в которой R_3c означает водород или (С₁-С₃)-алкил; R_1c и R_2c, одинаковые или разные, выбирают среди водорода, гидроксила, (С₁-С₃)-алкила, (С₁-С₃)-алкоксила, галогена и цианогруппы; V₁ и V₂ вместе образуют двойную связь, связанную с атомом кислорода или с гидроксиминогруппой N-OH, или они соединены в этилендиоксигруппу - O-CH₂-CH₂-O-; A_d означает валентную связь, атом кислорода, метиленовую группу или же этиленовую группу; m' означает нуль, 1 или 2; n' означает целое число от 1 до 5; м) фармацевтически приемлемых солей присоединения кислот аминов формулы (VI); н) аминов формулы VII в которой m'' и n'' означают 1 или 2; Cy означает (C₃-C₇) - циклоалкил; Ar₄ означает арил или гетероарил, выбираемый среди фенила, нафтила и тиенила, возможно моно- до тризамещенного галогеном, трифторметилом, (С₁-С₃)-алкилом, (C₁-С₃)- алкоксилом; о) фармацевтически приемлемых солей присоединения кислот аминов формулы (VII); п) аминов формулы (VIII) в которой один из L и L' означает водород, а другой выбирают среди водорода, фтора, хлора или нитрогруппы, или каждый из обоих L и L' означает атом хлора; Z означает: (i) группу структуры (1) в которой G₁ означает (С₁-C₆)-алкил или (C₃-C₇)-циклоалкил; G₂ означает (C₁-C₆)-алкил, (C₃-C₆) -циклоалкил-(C₁-C₃)-алкил, (C₃-C₇)-циклоалкил; фенильный, бензильный, фенетильный радикал, возможно замещенный в бензольной группе радикала галогеном, метоксигруппой или нитрогруппой; или же G₁ и G₂ вместе с атомом азота, с которым они связаны, образуют содержащий один атом азота насыщенный, имеющий мостиковую или спиро- структуру, гетероцикл с 5-10 атомами углерода; морфолиногруппу; пиперазиногруппу, незамещенную или замещенную в положении 4 (C₁- C₄)-алкилом, фенильным, бензильным или фенетильным радикалом, причем бензольная группа может быть замещена галогеном, метоксигруппой или нитрогруппой; группу, выбираемую среди 4-фенил- 1,2,3,6-тетрагидропиридин-1-ильного радикала, 4-фенилпиперидиногруппы, 4-бензилпиперидиногруппы, 4-фенетилпиперидиногруппы, причем фенильная группа вышеуказанных радикалов может быть не замещена или замещена галогеном, метоксигруппой или нитрогруппой; (ii) группу структуры (2) в которой G₃ означает водород или гидроксил; G₄ означает водород; или G₃ и G₄ вместе образуют одну или две связи так, что вместе с атомами углерода, с которыми они связаны, они образуют виниленовую группу или этиниленовую группу; G₅ означает группу, выбираемую среди фенильного, бензильного, фенетильного радикалов, причем бензольная группа вышеуказанных радикалов может быть не замещена или замещена атомом галогена, метоксигруппой или нитрогруппой; G₆ означает гидроксильную группу или водород; G₆ и G₇ означают водород или могут образовывать связь; или G₅ и G₆ вместе образуют н- пентиленовую группу; (iii) группу структуры (3) в которой G₃ и G₄ имеют вышеуказанные значения; Alk означает (С₁-C₆)- алкил или (C₃-C₆)-алкенил; G₈ означает 1-адамантил, (C₃-C₇)- циклоалкил, (C₃-C₇)-циклоалкил-(C₁-C₃) -алкил или группу, выбираемую среди фенильного, бензильного, 2-фенетильного радикалов, причем бензольная группа вышеуказанных радикалов может быть не замещена или замещена галогеном, метоксигруппой или нитрогруппой; или Alk и G₈, одинаковые или разные, означают (C₄-C₆)-алкильную группу; причем G₈ не означает (C₃-C₆) -циклоалкил, когда L означает водород или атом фтора или хлора, L' означает водород и Alk означает (C₁-C₆) -алкил; р) фармацевтически приемлемых солей и сольватов аминов формулы (VIII).

Соединения, применение которых заявлено согласно настоящему изобретению, частично описаны в литературе.

В частности, амины формулы (1) и их фармацевтически приемлемые соли описываются в европейском патенте 376850; вышеуказанные амины могут быть получены, как проиллюстрировано в этом документе, и выделены в форме основания, солей и/или сольватов. Амины формулы (II) и их фармацевтически приемлемые соли описываются в европейском патенте 461986; вышеуказанные амины могут быть получены, как проиллюстрировано в этом документе, и выделены в форме основания, солей и/или сольватов. Амины формулы (III) и их фармацевтически приемлемые соли описываются в патенте Франции 2249659; эти амины могут быть получены, как проиллюстрировано в этом документе, и выделены в форме основания, солей и/или сольватов. Амины формулы (IV) и их фармацевтически приемлемые соли описываются в европейском патенте 702010; эти амины могут быть получены, как проиллюстрировано в этом документе, и выделены в форме основания, солей и/или сольватов. Амины формулы (V) и их фармацевтически приемлемые соли описываются в европейском патенте 707004; вышеуказанные амины могут быть получены, как проиллюстрировано в этом документе, и выделены в форме основания, солей и/или сольватов. Амины формулы (VI) и их фармацевтически приемлемые соли описываются в европейском патенте 581677; указанные амины могут быть получены, как проиллюстрировано в этом документе, и выделены в форме основания, солей и/или сольватов. Амины формулы (VII) и их фармацевтически приемлемые соли описываются в международной заявке 95/15948; указанные амины могут быть получены, как проиллюстрировано в этом документе, и выделены в форме основания, солей и/или сольватов.

Соединения групп (n) и (p), представляющие особый интерес, являются новыми и составляют следующий аспект изобретения.

Таким образом, изобретение также относится к новым соединениям, которые вытесняют ³H-SR 31747 из его рецепторов и обладают значительными антипролиферативными свойствами, и к содержащим их фармацевтическим композициям.

Более конкретно, объектом изобретения является амин, выбираемый среди следующих соединений: (А) соединение формулы (VIII) в которой один из L и L' означает водород, а другой выбирают среди водорода, фтора, хлора или нитрогруппы, или же оба L и L' означают атом хлора; Z означает: (i) группу структуры (1) в которой G₁ означает (C₁-C₆-алкил или (C₃-C₇)-циклоалкил; G₂ означает (C₁-C₆)-алкил, (C₃-C₆)-циклоалкил-(C₁-C₃)-алкил, (С₃-C₇)-циклоалкил; фенильный, бензильный, фенетильный радикал, возможно замещенный в бензольной группе галогеном, метоксигруппой- или нитрогруппой; или же G₁ и G₂ вместе с атомом азота, с которым они связаны, образуют содержащий один атом азота насыщенный, имеющий мостиковую или спиро-структуру гетероцикл с 5-10 атомами углерода; морфолиногруппу; пиперазиногруппу, незамещенную или замещенную в положении 4 (C₁- C₄)-алкилом, фенильным, бензильным или фенетильным радикалом, причем бензольная группа может быть замещена галогеном, метоксигруппой или нитрогруппой; группу, выбираемую среди 4-фенил- 1,2,3,6-тетрагидропиридин-1-ильного радикала, 4-фенилпиперидиногруппы, 4-бензилпиперидиногруппы, 4-фенетилпиперидиногруппы, причем фенильная группа вышеуказанных групп может быть не замещена или замещена галогеном, метоксигруппой или нитрогруппой; (ii) группу структуры (2) в которой G₃ означает водород или гидроксил; G₄ означает водород; или G₃ и G₄ вместе образуют одну или две связи так, что вместе с атомами углерода, с которыми они связаны, они образуют виниленовую группу или этиниленовую группу; G₅ означает группу, выбираемую среди фенильного, бензильного, фенетильного радикалов, причем бензольная группа вышеуказанных радикалов может быть не замещена или замещена атомом галогена, метоксигруппой или нитрогруппой; G₆ означает гидроксильную группу или водород; G₆ и G₇ означают водород или могут образовывать связь; или же G₅ и G₆ вместе образуют н- пентиленовую группу; причем G₆ означает гидроксильную группу и G₅ и G₇ могут образовывать связь только тогда, когда G₅ имеет другое значение, чем возможно замещенный бензил или фенетил; (iii) группу структуры (3) в которой G₃ и G₄ имеют вышеуказанные значения; Alk означает (C₁-C₆)- алкил или (C₃-C₆)-алкенил; G₈ означает 1-адамантил, (C₃-C₇) - циклоалкил, (C₃-C₇)-циклоалкил-(C₁-C₃)-алкил или группу, выбираемую среди фенильного, бензильного, 2-фенилэтильного радикалов, причем бензольная группа вышеуказанных радикалов может быть не замещена или замещена галогеном, метоксигруппой или нитрогруппой; или же Alk и G₈, одинаковые или разные, означают (C₄-C₆)-алкильную группу; причем G₈ не означает (C₃-C₆) - циклоалкил, когда L означает водород или атом фтора или хлора, L' означает водород и Alk означает (C₁-C₆)-алкил; (Б) фармацевтически приемлемые соли и сольваты соединений формулы (VIII).

В этих новых соединениях формулы (VIII) галогеном предпочтительно является хлор или фтор, причем один из L и L' означает водород, а другой является фтором, хлором или нитрогруппой, или же L и L' являются одинаковыми и означают водород или хлор. Эти соединения являются особенно предпочтительными.

Особенно предпочтительными соединениями являются соединения формулы (VIII), в которой Z означает: (i') группу структуры (1') в которой G'₁ означает (С₁-С₆)-алкил или (C₃-C₇) - циклоалкил; G'₂ означает (С₁-C₆)-алкил, (C₃-C₇) -циклоалкил-(С₁-C₃)-алкил, (C₃-C₇)-циклоалкил или группу, выбираемую среди фенильного, бензильного, 2-фенилэтильного радикалов, причем бензольная группа вышеуказанных радикалов может быть не замещена или замещена галогеном, метоксигруппой или нитрогруппой; или же G'₁ и G'₂ вместе с атомом азота, с которым они связаны, образуют морфолиногруппу, пирролидиногруппу, пиперидиногруппу, гексагидроазепиногруппу или группу, выбираемую среди 4-фенил-1,2,3,6-тетрагидропиридин-1-ильного радикала, 4- фенилпиперидиногруппы, 4-бензилпиперидиногруппы, 4-фенетилпиперидиногруппы, причем фенильная группа вышеуказанных групп может быть не замещена или замещена галогеном, метоксигруппой или нитрогруппой; (ii') группу структуры (2') в которой G'₃ и G'₄ означают водород или вместе образуют связь в конфигурации транс или, предпочтительно, цис; G'₆ и G'₇ означают водород; и G'₅ означает фенил или бензил; или же G'₅ и G'₆ вместе образуют 1,5-пентиленовую группу; (iii') группу структуры (3') в которой G'₃ и G'₄ имеют вышеуказанные значения; Alk'' означает (C₁-C₆)-алкил; G'₈ означает 1-адамантильную, фенильную, бензильную или 2-фенилэтильную группу; или же Alk'' и G'₈ являются одинаковыми и каждый означает (C₄-C₆)-алкильную группу; и их фармацевтически приемлемые соли и сольваты.

Эти новые соединения формулы (VIII) могут быть получены способом, заключающимся в том, что: - либо функциональное производное циклопропанкарбоновой кислоты формулы (IX) в которой L и L' имеют вышеуказанные значения, вводят во взаимодействие с амином формулы (X) в которой G₁ и G₂ имеют вышеуказанные значения, и затем таким образом полученный амид формулы (XI) подвергают восстановлению для выделения аминов формулы (VIII), в которой Z означает группу структуры (1), в форме свободных оснований или их фармацевтически приемлемых солей; - либо соединение формулы (XII) в которой L и L' имеют вышеуказанные значения, вводят во взаимодействие с формальдегидом и амином, выбираемым среди аминов формул (XIII) и (XIV) и, в случае необходимости, таким образом полученный продукт формулы (VIII), в которой Z означает группу структуры (2) или (3), где G₃ и G₄ вместе образуют две связи так, что с атомами углерода, с которыми они связаны, они образуют этиниленовую группу, подвергают гидрированию с помощью двух или одного моля водорода, чтобы выделить соответствующее соединение формулы (VIII), в которой Z означает группу структуры (2) или (3), где соответственно оба G₃ и G₄ означают атом водорода или вместе с двумя атомами углерода, с которыми они связаны, образуют виниленовую группу; или, в случае необходимости, таким образом полученный продукт формулы (VIII), в которой Z представляет собой группу структуры (2), где G₅ означает фенил, G₆ означает гидроксил и G₇ означает водород, подвергают дегидратации с целью выделения соединения формулы (VIII), в которой Z представляет собой группу структуры (2), где G₅ означает фенил и G₆ и G₇ вместе образуют связь, причем вышеуказанные соединения могут быть выделены в форме свободного основания или одной из их фармацевтически приемлемых солей или одного из их фармацевтически приемлемых сольватов; - либо ацетофенон формулы (XV) в которой L и L' имеют вышеуказанные значения, вводят во взаимодействие с формальдегидом и амином вышеуказанной формулы (XIII) или (XIV), затем таким образом полученный продукт формулы (XVI) в которой L и L' имеют вышеуказанные значения и Z' означает группу структуры (2') или (3') где Alk'', G'₅, G'₆, G'₇ и G'₈ имеют вышеуказанные значения, подвергают реакции восстановления кетогруппы для выделения соответствующего соединения формулы (VIII), в которой Z представляет собой группу структуры (2) или (3), где G₃ означает гидроксил и G₄ означает водород, после чего, в случае необходимости, таким образом полученный продукт формулы (VIII), в которой Z представляет собой группу структуры (2), где G₅ означает фенил, G₆ означает гидроксил и G₇ означает водород, подвергают дегидратации для выделения соединения формулы (VIII), в которой Z представляет собой группу структуры (2), где G₅ означает фенил и G₆ и G₇ вместе образуют связь; причем вышеуказанные соединения могут быть выделены в форме свободного основания или одной из его фармацевтически приемлемых солей и, в случае необходимости, свободные основания формулы (VIII) превращают в их фармацевтически приемлемые соли.

Взаимодействие функционального производного кислоты формулы (IX) с амином формулы (X) осуществляют по классическим методикам для получения амидов. В качестве функционального производного кислоты формулы (IX) можно использовать любое, обычно применяемое в химии пептидов соединение, как, например, хлорангидрид, ангидрид или смешанный ангидрид, например, с моноэтиловым эфиром карбоновой кислоты (получаемый путем взаимодействия кислоты формулы (IX) с этилхлорформиатом), активированным сложным эфиром или активированным амидом. Когда в качестве функционального производного используют хлорангидрид или ангидрид, может быть предпочтительным работать в присутствии третичного амина, как, например, триэтиламина.

Восстановление соединения формулы (XI) также можно проводить в классических условиях превращения амида в амин, используя в качестве восстановителя гидрид металла, такой как литийалюминийгидрид или боран. Взаимодействие между ацетиленовыми производными формулы (XII) или ацетофенонами формулы (XV) и аминами формул (XIII) и (XIV) в присутствии формальдегида проводят в классических условиях реакции Манниха.

Восстановление соединений формулы (VIII), в которой Z представляет собой одну из групп структуры (2) или (3), где ₃ и G₄ образуют две связи, осуществляют путем гидрирования с помощью одного моля водорода для получения соединений формулы (VIII) (Z представляет собой группу структуры (2) или (3), где G₃ + G₄ образуют связь цис-конфигурации) или с помощью двух молей водорода для получения насыщенных соединений.

Восстановление соединения формулы (XVI) для получения соединений формулы (VIII), в которой Z представляет собой одну из групп структуры (2) или (3), где G₃ означает гидроксил и G₄ означает водород, осуществляют классическими способами. Когда хотят получить гидроксильное соединение со специфической конфигурацией у хирального атома углерода, можно использовать стереоспецифический восстановитель.

Когда гидроксилированное производное затем должно быть дегидратировано для получения соединения формулы (VIII), в которой Z представляет собой одну из групп структуры (2) или (3), где G₃ и G₄ образуют связь, пространственная конфигурация не играет никакой роли и восстановление соединения формулы (XVI) может быть осуществлено, например, с помощью боргидрида натрия.

Возможную дегидратацию соединения формулы (VIII), в которой Z представляет собой одну из групп структуры (2) или (3), где G₃ означает гидроксил и G₄ означает водород, осуществляют путем нагревания в присутствии агентов или устройств, которые благоприятствуют удалению и/или улавливанию воды, например, используя насадку Дина-Старка.

Таким образом полученное насыщенное соединение формулы (VIII) имеет транс-конфигурацию. Это соединение в свою очередь может быть гидрировано для получения амина формулы (VIII), в которой Z представляет собой одну из групп структуры (2) или (3), где G₃ и G₄ означают водород.

Исходные кислоты формулы (IX) и их функциональные производные, так же как амиды формулы (XI), являются новыми продуктами, которые могут быть получены из 4-(4-циклогексил-3,5-L-L'-фенил)-4-оксобутановой кислоты.

Более конкретно, кислоты формулы (IX) получают путем восстановления кетогруппы 4- (4- циклогексил-3,5-L-L'-фенил)-4-оксобутановой кислоты (где L и L' имеют вышеуказанные значения) для получения 4-(4-циклогексил- 3,5-L-L'-фенил)-4-гидроксибутановой кислоты, которую превращают в ее лактон. Этот последний хлорируют и превращают в сложный эфир 4-хлор-4-(4-циклогексил-3,5-L-L'-фенил) бутановой кислоты, который в свою очередь путем циклизации дает циклопропанкарбоновую кислоту формулы (IX).

4-(4-Циклогексил-3,5-L-L'-фенил)-4- оксобутановые кислоты (где L и L' имеют вышеуказанные значения) получают следующим образом: - когда L и L' означают водород, согласно методике N.P. Buu-Hoi и др. Bull. Soc. Chim. France, 127 (1944); - когда L означает водород, а L' означает хлор, согласно методике F. Krausz и др., Arzneim.-Forsh., 24, 1364-1367 (1974); BE 750233; - когда L означает водород, а L' означает нитрогруппу, согласно методике BE 750233; - когда L и L' означают хлор, согласно методике F. Krausz и др., Arzneim.-Forsh., 24, 1364-1367 (1974); - когда L означает водород, а L' означает фтор, путем каталитического гидрирования 3-(4-циклогексил-3-фтор)бензоилакриловой кислоты, в свою очередь описанной в патенте Японии 75770/71 и патенте ФРГ 2103749.

Таким образом, кислоты формулы (IX) могут быть получены способом, согласно которому: - 4-оксобутановую кислоту формулы (XVII) в которой L и L' имеют вышеуказанные значения, восстанавливают с помощью боргидрида щелочного металла; - таким образом полученную 4-гидроксибутановую кислоту формулы (XVIII) циклизуют путем нагревания при удалении выделяющейся воды; - таким образом полученный лактон формулы (XIX) обрабатывают с помощью тионилхлорида, выделяя в (C₁-C₄) алканоле, сложный эфир формулы (XX) в которой Alk' означает (C₁-C₄)-алкил; - таким образом полученное соединение формулы (XX) циклизуют путем нагревания в присутствии трет-бутилата калия и выделяют циклопропанкарбоновую кислоту формулы (IX).

Кислоты формулы (IX), их соли, их функциональные производные, особенно хлорангидрид, ангидрид и смешанный ангидрид с моно- (C₁-C₄) -алкиловым эфиром карбоновой кислоты, а также амиды формулы (XI) являются новыми продуктами, которые составляют следующий аспект настоящего изобретения.

Таким образом, настоящее изобретение также относится к соединению формулы (XXI) в которой L и L' имеют вышеуказанные значения и W означает гидроксильную группу или группу структуры -NG₁G₂, где G₁ означает (C₁-C₆)-алкил или (C₃-C₇)-циклоалкил; G₂ означает (C₁-C₆)-алкил, (C₃-C₇)-циклоалкил, (С₃-С₆)-циклоалкил- (C₁-С₃)-алкил; фенильный, бензильный, фенетильный радикал, возможно замещенный в бензольной группе радикала галогеном, метоксигруппой или нитрогруппой; или же G₁ и G₂ вместе с атомом азота, с которым они связаны, образуют содержащий один атом азота насыщенный, имеющий мостиковую или спиро-структуру, гетероцикл с 5-10 атомами углерода; морфолиногруппу, пиперазиногруппу, незамещенную или замещенную в положении 4 (C₁-C₄)-алкилом, фенильным, бензильным или фенетильным радикалом, причем бензольная группа может быть замещена галогеном, метоксигруппой или нитрогруппой; группу, выбираемую среди 4-фенил-1,2,3,6- тетрагидропиридин-1-ильного радикала, 4- фенилпиперидиногруппы, 4- бензилпиперидиногруппы, 4- фенетилпиперидиногруппы, причем фенильные группы вышеуказанных радикалов могут быть не замещены или замещены галогеном, метоксигруппой или нитрогруппой; а также к солям щелочных металлов, к солям со вторичными и третичными аминами и к функциональным производным кислоты формулы (XXI), где W означает гидроксильную группу.

Среди солей щелочных металлов соединений формулы (XXI), где W означает гидроксильную группу, особенно предпочтительной является натриевая соль (W = ONa), тогда как среди солей со вторичными или третичными аминами особенно предпочтительными являются соли триметиламина [W = ^-N⁺(CH₃)₃] и триэтиламина [W = O^-N⁺(С₂H₅)₃] . Среди функциональных производных кислоты формулы (XXI), где W означает гидроксильную группу, особенно предпочтительными являются галоидангидриды, в особенности хлорангидрид (W= хлор), ангидрид, смешанные ангидриды с карбоновой или сульфоновой кислотой, в особенности таковые с моно-(C₁-C₄)-алкиловым эфиром карбоновой кислоты (W = O-COOAlk', где Alk' означает (С₁-С₄)-алкил, предпочтительно этил) или с п-толуолсульфокислотой, и особенно предпочтительны активированные сложные эфиры.

Особенно предпочтительны соединения формулы (XXI), в которой галогеном предпочтительно является хлор или фтор, один из L и L' означает водород, а другой означает фтор, хлор или нитрогруппу, или же L и L' являются одинаковыми и означают водород или хлор. Среди этих последних предпочтительными являются такие соединения, в которых, в формуле (XXI), W означает -OH, - ONa, O^-N⁺(C₂H₅)₃, Cl, O-COOAlk' [причем Alk' означает (C₁-C₄)-алкил] или -NG₁G₂. Согласно биохимическим и фармакологическим исследованиям экспозиция соединений согласно изобретению в среде с нормальными клетками в условиях, которые препятствуют пролиферации раковых клеток, показала, что соединения не действуют на такие критерии, как целостность клеточных структур и клеточных функций или сохранение жизнеспособности. Таким образом, эти соединения обладают большой специфичностью по отношению к опухолевым клеткам. Противоопухолевую активность определяли на нескольких линиях человеческих опухолевых клеток in vitro и in vivo у мыши. Все используемые клетки происходят из международной коллекции типовых культур АТСС. Клетки MCF-7 используют для осуществления опытов на связывание.

Мембраны готовят следующим образом: 10⁹ клеток MCF-7 гомогенизируют в течение 10 секунд в аппарате Polytron в 10 мл буфера Hepes , pH = 7,4, содержащего: 210 ммоль D-маннита, 70 ммоль сахарозы, 1 ммоль этилендиаминтетрауксусной кислоты, 0,3 ммоль фенилметилсульфонилфторида. Гомогенат центрифугируют при ускорении 650 g в течение 15 минут, затем супернатант отбирают и центрифугируют в течение 1 часа при ускорении 100 000 g. Осадок после центрифугирования вновь суспендируют в буфере Трис-HCI, pH 7,4, до концентрации 1 мг/мл и хранят при температуре -70^oC.

Полное связывание осуществляют в пробирке емкостью 5 мл, в которую вводят: - 50 мкл суспензии мембран, содержащей 10-50 мкг протеинов; - 175 мкл 50 мМ буфера Трис, pH 7,4; - 25 мкл 20 нМ ³H-SR 31747 в 50 мМ буфера Трис, pH 7,4, + 0,1% бычьего сывороточного альбумина.

Неспецифическое связывание осуществляют путем добавления 25 мкл 10^-5 М SR 31747 в описанном выше растворе (конечный объем 250 мкл), затем путем инкубации в течение 30 минут при температуре 25^oC. Свободные и связанные фракции разделяют, внося 200 мкл в колонку с 1 мл Sephadex LH 20, затем подсчитывают радиоактивность в случае первых двух миллилитров, получаемых путем элюирования колонки с помощью 50 мМ буфера Трис, pH 7,4.

Используемые согласно изобретению соединения и новые соединения показывают активности при ИК₅₀ от 10^-10 до 10^-6 моль.

Из других используемых клеток культивируют, обычно в среде RPMI, к которой добавлено 10% фетальной телячьей сыворотки, следующие линии клеток: миелом человека U266 и RPMI 8226; карциномы почки человека 293; карциномы легкого человека А549; карциномы молочной железы человека MCF-7; MCF-7 лимфоцитарной лейкемии человека.

Противоопухолевую активность определяют колориметрическим методом, используя МТТ { 3-(4,5- диметилтиазол-2,5-дифенил) тетразолийбромид}, как описывается Mosmann Т., Journ. of Imm. Methods, 65, 55 (1983).

Этот колориметрический количественный анализ позволяет количественно определять противоопухолевую активность раствора, содержащего используемое согласно изобретению соединение.

Согласно используемому протоколу исследования производят посев суспендированных клеток (таких как клетки миелом) по 2,105 клеток/мл на лунку емкостью 1 мл в определенной среде. Посев адгезивных клеток (таких как клетки MCF- 7) производят по 5,104 клеток/мл на лунку емкостью 1 мл в среде RPMI + 0,5% фетальной телячьей сыворотки в течение ночи. На следующий день клеточный покров промывают два раза и заменяют определенной средой. Определенная среда соответствует следующей среде: RPMI + 10 мкг/мл инсулина + 10 мкг/мл человеческого трансферрина.

Для осуществления этого опыта клетки выдерживают в присутствии раствора, содержащего используемое соединение, в течение 5 дней, затем в культуральную среду добавляют МТТ.

Выбираемое время, составляющее 5 дней, соответствует оптимальному времени воздействия. После культивирования в течение 5 дней определяют пролиферацию клеток с помощью вышеописанного теста. Измеряют оптическую плотность при 570 нм. Синее окрашивание появляется в лунках, где клетки еще жизнеспособны. Интенсивность окрашивания пропорциональна количеству живых клеток.

Полученные результаты представлены в таблице А.

Из таблицы следует, что даже низкие концентрации, такие как 1 нмоль - 1 мкмоль, являются достаточными для того, чтобы индуцировать прекращение роста на 50%, и этого воздействия достигают в случае всех исследуемых опухолевых клеток.

Установленный in vitro эффект ингибирования линии клеток MCF-7 изучали in vivo у "голой" мыши путем интраперитонеального введения в дозах от 3 до 100 мг/кг на модели согласно Neri С. и др., Cancer Research, 50, 5892-5897 (1990); и согласно Berebbi M., и др. Oncogene, 505-509 (1990).

Также осуществляют другое исследование, чтобы определить воздействие SR-31747 на рост in vitro и in vivo эпителиальных опухолевых клеток молочной железы и простаты.

Изучение заключается в оценке потенциального противоопухолевого воздействия SR 31747 на рост разновидности линий карциноматозных эпителиальных клеток молочной железы. Исследование осуществляют in vitro на культурах клеток, а также in vivo после инокуляции линий опухо