Новые конденсированные изохинолины в качестве лигандов для допаминовых рецепторов

Новые конденсированные изохинолины в качестве лигандов для допаминовых рецепторов

Реферат

 

Изобретение относится к области химии и медицины, конкретно к допаминовым рецепторным лигандам формулы (I), фармацевтическим составам таких соединений и к способу применения таких соединений для эффективного лечения пациентов, страдающих допаминсвязанной дисфункцией центральной или периферической нервной системы. 3 с. и 7 з.п. ф-лы, 6 ил., 2 табл.

Изобретение создано при поддержке правительства США и удостоено премии (grant) под N МН-42705, присвоенной Национальным Институтом Здоровья. Правительство США обладает определенными правами на изобретение.

Область изобретения Данное изобретение направлено на новые лиганды для допаминовых рецепторов. Более конкретно, данное изобретение относится к необязательно замещенным соединениям тетрагидро-1H-нафт[1,2,3-де]изохинолина и их применению в фармацевтических составах для лечения допаминсвязанной дисфункции центральной и периферической нервной системы.

Обоснование и краткое описание изобретения Допамин, нейротрансмиттер в центральной нервной системе, вовлечен в многочисленные неврологические расстройства. Например, выдвинута гипотеза, что избыточная стимуляция подгруппы допаминовых рецепторов может привести к шизофрении. Вдобавок, общепризнанно, что либо избыточная, либо недостаточная функциональная допаминергическая активность в центральной и/или периферической нервной системе может вызывать гипертензию, нарколепсию и другие поведенческие, неврологические, физиологические расстройства и нарушения движения, включающие болезнь Паркинсона, хроническое, прогрессирующее заболевание, характеризуемое неспособностью к контролю системы произвольных движений.

Допаминовые рецепторы традиционно подразделяются на два класса (D₁ и D₂), основанные на фармакологическом и функциональном признаке. D₁ рецепторы преимущественно распознают фенилтетрагидробензазепины и приводят к стимуляции ферментативной аденилатциклазы, тогда как D₂ рецепторы распознают бутирофеноны и бензамиды и отрицательно (или ничуть не) соединяются с аденилатциклазой. В настоящее время известно, что существует несколько подклассов допаминовых рецепторов и по меньшей мере пять генетических кодов для подклассов допаминовых рецепторов: D₁, D₂, D₃, D₄ и D₅. Однако, продолжает использоваться и традиционная классификация, по которой D₁-подобный класс включает D₁ (D_1A) и D₅ (D_1B) рецепторы, тогда как D₂-подобный класс состоит из D₂, D₃ и D₄ рецепторов.

Лекарственные средства для центральной нервной системы, обладающие сродством к допаминовым рецепторам, обычно классифицируются не только по их рецепторной селективности, но также по их агонистической (стимулирующей рецептор) или антагонистической (блокирующей рецептор) активности. Хотя физиологические активности, связанные с взаимодействием допамина с различными подклассами рецепторов, полностью не изучены, известно, что лиганды, обладающие селективностью в отношении конкретного подкласса рецепторов, должны давать более или менее прогнозируемые нейрофармацевтические результаты. Изучение пригодности селективных в отношении допаминового рецептора антагонистических и агонистических соединений даст возможность разработки экспериментов, позволяющих лучше понять разнообразные функциональные роли ₁ рецепторов, и приведет к новым способам лечения различных расстройств центральной и периферической нервной системы.

Первоначально изучения допаминовых рецепторов были сосредоточены на D₂ классе, однако, недавно стала очевидной решающая роль D₁ допаминового рецептора в функционировании нервной системы. Первоначально работа по селективным в отношении D₁ рецепторов лигандам была главным образом сосредоточена на молекулах одного химического класса, фенилтетрагидробензазепинах, таких как антагонист SCH23390 (1): Было найдено, что некоторые из фенилтетрагидробензазепинов служат D₁ рецепторными агонистами; однако, у агонистов, являющихся производными от этого класса [включающих, например, SKF38393 (+)-2], обычно полностью отсутствует собственная эффективность. Недавно было показано, что даже SKF 82958, который, как предполагалось, должен быть полным агонистом, не проявляет полной собственной эффективности в препаратах с пониженным рецепторным резервом. Разграничение между агонистами полной и частичной эффективности важно для исследователей в области медицины, ввиду того, что эти соединения оказывают различные воздействия на комплекс событий, опосредованных центральной нервной системой. Например, дигидрексидин и полный агонист, А-77636, обладают необычайным действием против болезни Паркинсона на модели МРТР-обработанной обезьяны, тогда как частичные агонисты не проявляют значительной активности. Недавно полученные результаты наводят на мысль, что полные и частичные агонисты различаются также по их воздействиям на другие комплексные нервные функции. Поэтому, исследователи направили свои усилия на разработку лигандов, являющихся полными агонистами, обладающими полной внутренней (прирожденной) эффективностью. Одним из таких соединений является дигидрексидин (3), гексагидробензо[a]фенантридин формулы: Структура дигидрексидина уникальна в отношении других D₁ агонистов, поскольку присоединена дополнительная циклическая система, придающая относительную жесткость молекуле. Исследования по моделированию молекулы дигидрексидина (3) показали, что соединение обладает ограниченным числом низких энергетических конформаций, в которых все ароматические циклы имеют относительное копланарное расположение. Последнее выяснение конфигурации активного энантиомера дигидрексидина (3) совпало с предсказанным на основе этой модели.

В отличие от других близко схожих, с высокой собственной активностью D₁ агонистов, таких как 3-замещенные аминометилизохроманы, дигидрексидин (3) обеспечивает полужесткий шаблон для создания модели допаминового лиганда. Существенные особенности этой модели включают присутствие трансоидной - фенилдопаминовой группы, экваториально ориентированную одну электронную пару на основном азотном атоме и близкую копланарность дополнительного фенильного кольца и кольца пирокатехина. Модель, основанная на дигидрексидине, имеет трансоидный - фенилдопаминовый радикал, тогда как допаминергические фенилтетрагидробензазепины обладают цисоидной - фенилдопаминовой конформацией. Модель, основанная на дигидрексидине, служит основой для создания дополнительных ₁ рецепторных агонистов. Разработка и синтез D₁ рецепторных агонистов, обладающих высокой собственной активностью, представляются важными для медицинского исследования в связи с потенциальной возможностью применения полных агонистов для лечения комплексных явлений, опосредованных центральной нервной системой, а также состояний, в которые вовлечены периферические допаминовые рецепторы. Например, композиции по данному изобретению потенциально применимы в качестве средств для понижения кровяного давления.

Одним из вариантов воплощения данного изобретения является новый класс допаминовых рецепторных агонистов общей формулы: их фармацевтически приемлемые соли и фармацевтические составы таких соединений. Настоящие соединения полезны при лечении пациентов, страдающих допаминсвязанной дисфункцией центральной нервной системы, а также лечении состояний, в которые вовлечены периферические допаминовые рецепторы, что подтверждается наблюдаемыми неврологическим, психологическим, физиологическим или поведенческим расстройствами.

Фиг. 1 иллюстрирует стадии химической реакции по схеме 1, превращение этил-о-толуата в 2-метил-2,3-дигидро-4-(1H)-изохинолон. Реагенты: a) NBS (N-бромсукцинимид), перекись бензоила, CCl₄, нагревание до температуры кипения с обратным холодильником; b) этиловый эфир саркозина HCl, K₂CO₃, ацетон; c) i. NaOEt, EtOH, нагревание до температуры кипения с обратным холодильником, ii. HCl, нагревание до температуры кипения с обратным холодильником.

Фиг. 2 иллюстрирует стадии химической реакции по схеме 2, превращения 2,3-диметокси-N, N'-диэтилбензамида в динапсолин. Реагенты: a) i. втор-бутиллитий, TMEDA, Et₂O, -78^oC, ii. Соединение 7, iii. TsOH, толуол, нагревание до температуры кипения с обратным холодильником; b) i. 1-хлорэтилхлорформиат, (CH₂Cl)₂, ii. CH₃OH; c) TsCl, Et₃N; d) H₂/Pd-C, HOAc; e) BH₃-THF; f) конц. H₂SO₄, от -40^oC до -5^oC; g) Na-Hg, CH₃OH, Na₂HPO₄; h) BBr₃, CH₂Cl₂.

Фиг. 3 выражает графически сродство динапсолина (треугольники), (+)-дигидрексидина (квадраты) и (+)-SCH23390 (закрашенные кружки) к стриальным D₁ рецепторам. Стриальные D₁ рецепторы крыс метят [³H]SCH23390 (1) и добавляют немеченый динапсолин, (+)-дигидрексидин или (+)-SCH23390 для определения специфического связывания каждого соединения с D₁ рецептором.

Фиг. 4 выражает графически способность динапсолина (4), (+)-дигидрексидина [(+)-3] и (+)-SKF38393 [(+)-2] к стимуляции аккумуляции cAMP в стерильных гомогенатах крыс относительно допамина.

Фиг. 5 выражает графически способность динапсолина (4), (+)-дигидрексидина [(+)-3] и (+)-SKF38393 [(+)-2] к стимуляции аккумуляции cAMP в C-6 клетках глиомы (выражающих D_1A рецепторы приматов) относительно допамина.

Фиг. 6 выражает графически сродство динапсолина (треугольники), (+)-дигидрексидина (квадраты) и (+)-SCH23390 (закрашенные кружки) к стриальным D₂ рецепторам. Стриальные D₂ рецепторы крыс метят [³H]SCH23390 и добавляют немеченый динапсолин, (+)дигидрексидин или (+)-SCH23390 для определения специфического связывания каждого соединения с D₂ рецептором.

Согласно данному изобретению предложено соединение общей формулы и его фармацевтически приемлемые соли, где R и R₅ обозначают водород или C₁-C₄ алкил; R₁ обозначает водород, C₁-C₄ алкил или феноксизащитную группу; X обозначает водород, галоген или группу формулы -OR₆, где R₆ обозначает водород, C₁-C₄ алкил или феноксизащитную группу, и R₂, R₃ и R₄ независимо выбирают из группы, включающей водород, C₁-C₄ алкил, фенил, галоид или группу -OR₁, где R₁ имеет принятые выше значения, и когда X обозначает группу формулы -OR₆, группы R₁ и R₆ вместе могут образовывать группу формулы -CH₂-.

Термин "C₁-C₄ алкил", как он использован здесь, обозначает разветвленные или линейные алкильные группы с 1-4 углеродными атомами, включающие, но не в порядке ограничения, метил, этил, пропил, изопропил, н-бутил, третбутил и циклопропилметил.

Термин "фармацевтически приемлемые соли" относится к солям, полученным применением органических или неорганических кислот, эти соли пригодны для применения людьми или низшими животными и при этом не вызывают нежелательной токсической, раздражающей, аллергической или тому подобной реакции. Кислоты, пригодные для образования фармацевтически приемлемых солей или биологически активных соединений, имеющих аминофункциональность, хорошо известны в соответствующей области. Соли могут быть получены in situ (на месте) во время окончательного выделения и очистки данных соединений или отдельно, при взаимодействии выделенных соединений в форме свободного основания с подходящей солеобразующей кислотой.

Термин "феноксизащитная группа", как он здесь использован, обозначает заместители на фенольном кислороде, предупреждающие нежелательные реакции и разложение во время синтеза, которые позднее могут быть удалены без воздействия на другие функциональные группы молекулы. Такие функциональные группы и способы их применения и удаления хорошо известны в соответствующей области. Они включают простые эфиры, такие как простые циклопропилметиловые, циклогексиловые, аллиловые эфиры и тому подобные; простые алкоксиалкиловые эфиры, такие как простые метоксиметиловые или метоксиэтоксиметиловые эфиры и тому подобные; простые алкилтиоалкиловые эфиры, такие как простые метилтиометиловые эфиры; простые тетрагидропираниловые эфиры; простые арилалкиловые эфиры, такие как простые бензиловые, 0-нитробензиловые, п-метоксибензиловые, 9-антрилметиловые, 4-пиколиловые эфиры и тому подобные; простые триалкил-силиловые эфиры, такие, как простые триметилсилиловые, триэтилсилиловые, третбутилдиметилсилиловые, трет-бутилдифенилсилиловые эфиры и тому подобные; сложные алкиловые или ариловые эфиры, такие как ацетаты, пропионаты, н-бутираты, изобутираты, триметилацетаты, бензоаты и тому подобные; карбонаты, такие, как метил, этил, 2,2,2-трихлорэтил, 2-триметилсилилэтил, бензил и тому подобные; и карбаматы, такие как метил, изобутил, фенил, бензил, диметил и тому подобные.

Термин "C₁-C₄ алкокси", как он здесь использован, обозначает разветвленные или линейные алкильные группы из 1-4 углеродных атомов, присоединенные через атом кислорода, включающие, но не в порядке ограничения, метокси, этокси, пропокси и трет-бутокси.

Далее, согласно другому варианту воплощения данного изобретения, настоящие соединения могут быть составлены в общепринятые лекарственные формы для применения в способах лечения пациентов, страдающих допаминсвязанной дисфункцией центральной или периферической нервной системы. Эффективные дозы данных соединений зависят от многих факторов, включающих требующие лечения симптомы, способ введения и общее состояние пациента. Например, для перорального введения установлены эффективные дозы данных соединений приблизительно в интервале от 0,1 до 50 мг/кг, более характерные составляют от 0,5 до 25 мг/кг. Эффективные парентеральные дозы могут составлять порядка от 0,01 до 5 мг/кг веса тела. В основном, лечебные схемы с применением соединений по данному изобретению включают введение около 1 - 500 мг соединений по данному изобретению в день раздельными дозами или единичной дозой.

Жидкие лекарственные формы для перорального применения могут включать фармацевтически приемлемые эмульсии, микроэмульсии, растворы, суспензии и сиропы, содержащие обычно используемые в данной области техники инертные разбавители, такие как вода. Такие композиции могут также включать адъюванты, такие как смачивающие средства, эмульгирующие и суспендирующие средства, подсластители и отдушки. Препараты для инъекций из соединений по данному изобретению могут быть составлены с применением известных в соответствующей области техники продуктов путем диспергирования или растворения эффективных доз соединения в парентерально приемлемом растворителе, таком как вода, или, более предпочтительно, в изотоническом растворе хлористого натрия. Парентеральные составы можно стерилизовать, используя известные в соответствующей области техники приемы микрофильтрации.

Соединения по данному изобретению могут также входить в состав твердых лекарственных форм для перорального введения, таких как капсулы, таблетки, порошки, пилюли и тому подобные. Обычно активное соединение смешивают с инертным разбавителем или носителем, таким как сахар или крахмал, и другими эксципиентами, подходящими для лекарственной формы. Таким образом, таблетируемые составы должны включать приемлемые смазывающие вещества, связывающие и/или разрыхлители. Необязательно порошкообразные композиции, содержащие активное соединение по данному изобретению и, например, носитель в виде сахара или крахмала, могут быть заполнены в желатиновые капсулы для перорального введения. Другие лекарственные формы соединений по данному изобретению могут быть составлены использованием известных в соответствующей области технических приемов в формы, адаптированные к специфическому способу введения.

Одним из полученных согласно данному изобретению соединений является ()-8,9-дигидрокси-2,3,7,11b-тетрагидро-1H-нафто[1,2,3,-де]изохинолин, называемый ниже "динапсолин". Динапсолин синтезируют из 2-метил-2,3-дигидро-4(1H)-изохинолона по способу, описанному в основном на фиг. 1 и 2. Бромирование боковой цепи этил-о-толуата (5a) с помощью NBS в присутствии перекиси бензоила дает соединение 5b. Алкилирование этилового эфира саркозина соединением 5b дает соединение 6, которое после конденсации Dieckmann'a и последующего декарбоксилирования в ходе кислотного гидролиза дает соединение 7.

Как показано в схеме 2 (фиг. 2), ортонаправленная литизация 2,3-диметокси-N, N'-диэтилбензамида (8) с помощью втор-бутиллития/TMEDA в диэтиловом эфире при -78^oC, конденсация содержащих литий групп с соединением 7 и последующее нагревание до температуры кипения с обратным холодильником и с п-толуолсульфокислотой дают спиролактон 9 с умеренным выходом. N-Деметилирование соединения 9 с помощью 1-хлорэтилхлорформиата и последующий метанолиз промежуточного продукта дают соединение 10, которое при обработке п-толуолсульфонилхлоридом и триэтиламином дает соединение 11.

Предыдущие попытки синтеза соединения 11 непосредственной конденсацией 2-п-толуолсульфонил-2,3-дигидро-4(1H)-изохинолона с литиевым соединением 8 в ТГФ или диэтиловом эфире и последующей лактонизацией с кислотой дали только незначительное количество (< 5%) соединения 11. Энолизация 2-п-толуолсульфонил-2,3-дигидро-4(1H)-изохинолона в щелочной среде служит понятным объяснением низкого выхода.

Гидрогенолиз соединения 11 в ледяной уксусной кислоте в присутствии 10% палладия на углероде дает соединение 12, которое при восстановлении дибораном дает промежуточное соединение 13. Циклизация соединения 13 с помощью концентрированной серной кислоты при пониженной температуре приводит к соединению 14. N-Детозилирование соединения 14 с помощью Na/Hg в метаноле, содержащем динатрийгидрофосфатный буфер, дает соединение 15. Наконец, соединение 15 обрабатывают бортрибромидом для расщепления метилового эфира, что приводит к динапсолину (4) в виде его бромистоводородной соли.

Проведено сравнение пространственных структур низкоэнергетических конформаций (+)-транс-10,11 -дигидрокси-5,6,6a,7,8,12b- гексагидробензо[a] фенантридина [(+)-ди-гидрексидин] и 11bR-энантиомера динапсолина, являющегося гомохиральным в отношении (+)-дигидрексидина по 12bS хиральному центру. Легко заметить две основные структурные особенности. Во-первых, стерический объем, обеспечиваемый мостиковой группой C(7)-C(8)этано в дигидрексидине (3), удален. Во-вторых, угол подвешенного фенильного кольца по отношению к плоскости цикла пирокатехина слегка изменен. Это наиболее очевидно при рассмотрении передней плоскости, когда ароматический водород H(1) в дигидрексидине (3) выступает над циклом пирокатехина. Кроме того в динапсолине это положение используют, чтобы присоединить подвешенное фенильное кольцо через метиленовую группу к кольцу пирокатехина: это принуждает подвешенное фенильное кольцо изгибаться в направлении по часовой стрелке относительно дигидрексидина (3), если рассматривать в свете изложенного выше. Аминогруппы занимают аналогичные позиции, обеспечивая степень конформационной гибкости гетероцикла. Кроме того, обе молекулы могут представлять N-H вектор в экваториальной ориентации, что является характерным признаком фармакофора и является важным для D₁ рецепторных агонистов. В соответствии с этими наблюдениями фармакологические свойства этих двух молекул аналогичны.

Проведены эксперименты с целью определения связывания динапсолина в отношении D₁ рецепторов. Найдено, что динапсолин обладает почти идентичным по сравнению с дигидрексидином (3) сродством (K₁ = 5,9 нМ) к стриальным D₁ рецепторам крыс. Вдобавок, эксперименты по конкуренции с использованием немеченного SCH23390 (1) в качестве конкурента, показали, что динапсолин проявляет высокое конкурентное сродство, и ему соответствует менее глубокая кривая сравнения, что говорит об агонистических свойствах (см. фиг. 3). Агонистические свойства динапсолина в отношении D₁ рецепторов оценивают in vitro, измеряя способность динапсолина увеличивать продуцирование cAMP в полосатом теле крыс и в C-6-mD₁-клетках (см. приведенные ниже экспериментальные данные). Как в полосатом теле крыс, так и в C-6-mD₁-клетках динапсолин обладает полной агонистической активностью с EC₅₀ около 30 нМ в синтезах стимулирующих cAMP посредством D₁ рецепторов.

Таким образом, фармакологические данные приводят к выводу, что динапсолин обладает высоким сродством к допаминовым D₁ рецепторам, меченым [³H] SCH23390, что почти идентично сродству (+)-транс-10,11-дигидрокси-5,6,6a, 7,8,12b-гексагидробензо[a] фенантридина (дигидрексидина). Кроме того, ()-8,9-дигидрокси-2,3,7,11b-тетрагидро-1H-нафто[1,2,3-де] изохинолин (динапсолин), как в стриальных мембранах крыс, так и в клонированных выраженных D_1A рецепторах приматов, является полным агонистом по отношению к допамину, подобно дигидрексидину (3), но в отличие от частичного агониста (+)-SKF 38393 (см. фиг. 4 и 5: (+)-SKF 38393 = (+)-2; ()-транс-10,11-дигидрокси-5,6,6a, 7,8,12b- гексагидробензо[a]фенантридин = ()-3 и ()-8,9-дигидрокси-2,3,7,11b-тетрагидро-1H-нафто[1,2,3-де]изохинолин = 4).

На основании общей модели D₁ фармакофора следует ожидать, что как сродство, так и собственная активность рацемического динапсолина (и его замещенных аналогов) принадлежит только одному из его энантиомеров - 11bR абсолютной конфигурации (и его гомохиральным аналогам). Можно рассчитывать, что разделение рацемата с применением общепризнанных технических приемов разделения приведет к одному изомеру динапсолина с приблизительно удвоенным относительно рацемата D₁ сродством, что сделает его сродство к D₁ рецептору аналогичным (+)-транс-10,11- дигидрокси- 5,6,6a,7,8,12b-гексагидробензо [a] фенантридину.

Как показывают фиг. 3 и таблица 1, динапсолин обладает большим сродством к D₂-подобным рецепторам, чем дигидрексидин, ожидалось, что он будет в известной степени селективным к D₁, а не D₂-подобным рецепторам. Однако, определено, что дигидрексидин проявляет только приблизительно десятикратную D₁: D₂ селективность. Вдобавок, дигидрексидин хотя и обладает ожидаемой допамин-агонистической активностью, обладает также необычным свойством, называемым здесь "функциональной селективностью". В частности, в крысах (in vivo или in vitro) дигидрексидин действует как агонист D₂-подобных рецепторов, локализованных постсинаптически, но как антагонист D₂-подобных рецепторов, локализованных пре-синаптически. Предполагается, что это обусловлено различиями в лиганд-рецептор-G-протеиновом комплексе, локализованном пост-синаптически иначе, чем пре- синаптически, что определено по наличию специфических G-протеинов в данной клеточной среде.

Показано, что эти D₂-свойства дигидрексидина присущи тому же энантиомеру, (т.е., 6aR, 12bS), который служит высоко родственным полным агонистом в отношении D₁ рецептора. На этом основании можно было предположить, что как D₁, так и D₂ свойства динапсолина также сосредоточены в гомохиральном энантиомере. Оптические изомеры динапсолина и соответствующие аналоги представляют собой важные средства для изучения явления "функциональной селективности".

Ранее сообщалось, что дигидрексидин оказывает действие против болезни Паркинсона в МРТР модели болезни Паркинсона, прогнозируется, что и динапсолин должен обладать аналогичным воздействием. Следовательно, динапсолин и его производные имеют потенциальную клиническую применимость при болезни Паркинсона и других состояниях, где стимуляция допаминовых рецепторов может оказывать терапевтическое действие. Вдобавок, сообщается, что соответствующие модификации дигидрексидина дают аналоги, которые могут служить мишенью для специфических групп в популяции класса допаминовых рецепторов. Аналогичные подходы к динапсолину должны привести к соединениям с новой рецепторной селективностью подкласса и/или функциональными профилями.

Что касается следующих описанных экспериментальных способов, температуры плавления определяют прибором для измерения точки плавления Thomas-Hoover'a и не корректируют.

¹H-ЯМР-спектры регистрируют с помощью ЯМР-спектрометра Varian VXR 500S (500 мГц) и химические сдвиги приводят в величинах (м.д.) относительно ТМС (тетраметилсилана). ИК-спектр регистрируют в таблетках KBr или в жидкой пленке с помощью Percin Elmer 1600 серийного FTIR-спектрометра. Химический ионизационный масс-спектр (CIMS) регистрируют на Finnigan 4000 квадрупольном масс-спектрометре. CI-спектр высокого разрешения регистрируют на Kratos MS50 спектрометре. Данные по элементному анализу получены в микроаналитической лаборатории Purdue University, West Lafayette, IN.

ТГФ перегоняют с натрий-бензофеноном в атмосфере азота непосредственно перед применением; 1,2-дихлорэтан перегоняют с пятиокисью фосфора перед применением.

Пример 1.

Получение 2-метил-2,3-дигидро-4(1H)-изохинолона Этил 2-бромметилбензоат (5b) Раствор этил-о-толуата (41,2 г, 0,25 моль) в четыреххлористом углероде (200 мл) добавляют по каплям к перемешиваемой смеси перекиси бензоила (100 мг), четыреххлористого углерода (200 мл) и NBS (44,5 г, 0,25 моль) при 0^oC. Смесь нагревают до температуры кипения с обратным холодильником 3,5 часа в атмосфере азота и оставляют охлаждаться до комнатной температуры в течение ночи. Осажденный сукцинимид удаляют фильтрацией и плотный осадок на фильтре промывают четыреххлористым углеродом. Объединенные фильтраты промывают последовательно 2 н. NaOH (100 мл) и водой (2 х 100 мл) и раствор сушат над безводным MgSO₄, фильтруют (Целит) и упаривают в вакууме, получая продукт в виде масла. Сушка в глубоком вакууме в течение ночи дает 60,5 г (99%) сырого соединения 5b: ¹H-ЯМР продукта показывает наличие около 15% непрореагировавшего исходного вещества. Поскольку смесь нелегко разделить хроматографически или вакуумной перегонкой, ее используют в следующей стадии без дополнительной очистки: ¹H-ЯМР (CDCl₃) 1,43 (т, J = 7 Гц, 3H, CH₂CH₃), 4,41 (кв, J = 7 Гц, 2H, CH₂CH₃), 4,96 (с, 1H, CH₂Br), 7,24 (м, 1H, ArH), 7,38 (м, 1H, ArH), 7,48 (м, 2H, ArH).

Этиловый эфир N-(2-карбоэтокси)саркозина (6).

К смеси гидрохлорида этилового эфира саркозина (32,2 г, 0,21 моль), карбоната калия (325 меш; 86,9 г, 0,63 моль) и ацетона (800 мл) добавляют раствор соединения 5b (60,7 г, полученное из 0,25 моль этил-0-толуата; 85% превращение в соединение 6; рассчитано 0,21 моль) в ацетоне (100 мл) при комнатной температуре в атмосфере азота. Смесь перемешивают при нагревании до температуры кипения с обратным холодильником 2 часа и затем оставляют при комнатной температуре на 20 часов. Твердый продукт удаляют фильтрацией (Целит) и остаток промывают ацетоном. Фильтраты объединяют и упаривают при пониженном давлении, получая масло. Масло растворяют в 250 мл 3 н. HCl и промывают диэтиловым эфиром. Водный слой подщелачивают водным NaHCO₃ и экстрагируют диэтиловым эфиром (3 х 250 мл). Упаривание раствора диэтилового эфира дает масло, которое перегоняют в вакууме, получая 45,33 г (77%) соединения 6: т. кип. 140-142^oC (0,5 мм Hg) [т.кип. 182-183^oC (10 мм Hg)]; ¹H-ЯМР (CDCl₃) 1,24 (т, 3H, J = 7,1 Гц, CH₃), 1,36 (т, 3H, J = 7,1 Гц, CH₃), 2,35 (с, 3H, NCH₃), 3,27 (с, 2H, CH₂Ar), 4,00 (с, 2H, NCH₂), 4,14 (кв, 2H, J = 7,1 Гц, CH₂CH₃), 4,32 (кв, 2H, J = 7,1 Гц, CH₂CH₃), 7,28 (т, 1H, J = 7,4 Гц, ArH), 7,42 (т, 1H, J = 7,6 Гц, ArH), 7,52 (д, 1H, J = 7,8 Гц, ArH), 7,74 (д, 1H, J = 7,7 Гц, ArH).

2-Метил-2,3-дигидро-4(1H)изохинолон (7). Свеже нарезанный натрий (10,9 г, 0,47 г-атом) добавляют к абсолютному этанолу (110 мл) в атмосфере азота и реакционную смесь нагревают до температуры кипения с обратным холодильником. После исчезновения металлического натрия к реакционной смеси медленно добавляют раствор соединения 6 (35,9 г, 0,128 моль) в сухом толуоле (160 мл). Затем реакционную смесь нагревают до температуры кипения с обратным холодильником и этанол отделяют азеотропно с помощью насадки Дина-Старка. После охлаждения растворитель упаривают при пониженном давлении. Образовавшийся желтый полутвердый остаток растворяют в смеси воды (50 мл), 98% этанола (60 мл) и концентрированной HCl (240 мл) и нагревают до температуры кипения с обратным холодильником 26 часов. После охлаждения смесь концентрируют в вакууме и осторожно подщелачивают твердым NaHCO₃. Щелочной раствор экстрагируют эфиром, сушат (MgSO₄) и упаривают до масла, которое перегоняют, получая соединение 7 (17,11 г, 83%): т.кип. 130-132^oC (5 мм Hg) [т. кип. 81-83^oC (0,4 мм Hg); т. пл. (HCl) 250^oC]; ИК (неразбавл.) 1694 (C=O) см^-1; ¹H-ЯМР (CDCl₃) 2,48 (с, 3H, CH₃), 3,31 (с, 2H, CH₃), 3,74 (с, 2H, CH₂), 7,22 (д, 1H, J = 7,7 Гц, ArH), 7,34 (т, 1H, J = 7,9 Гц, ArH), 7,50 (т, 1H, J = 7,5 Гц, ArH), 8,02 (д, 1H, J = 7,9 Гц, ArH).

Синтез 8,9-дигидрокси-2,3,7,11b-тетрагидро-1H-нафто[1,2,3-де]изохинолина К раствору 2,3-диметокси-N,N'-диэтилбензамида (соединение 8) (14,94 г, 63 ммоль) в диэтиловом эфире (1400 мл) при -78^oC в атмосфере азота добавляют последовательно, по каплям, N,N,N',N'-тетраметилендиамин (TMEDA, 9,45 мл, 63 ммоль) и втор-бутиллитий (53,3 мл, 69 ммоль, 1,3 М раствор в гексане) через каучуковую септу с помощью шприца. Через 1 час к гетерогенной смеси добавляют свеже перегнанное соединение 7 (10,1 г, 62,7 ммоль). Убирают охлаждающую баню и реакционной смеси дают нагреться до комнатной температуры за 9 часов. Затем добавляют насыщенный раствор NH₄Cl (400 мл) и смесь перемешивают 15 минут. Эфирный слой отделяют и водный слой экстрагируют дихлорметаном (4 х 100 мл). Органические слои объединяют, сушат (MgSO₄) и упаривают до коричневого масла. Масло растворяют в толуоле (500 мл) и нагревают до температуры кипения с обратным холодильником в течение 8 часов с 3,0 г п-толуолсульфокислоты, охлаждают и концентрируют в вакууме. Остаток растворяют в дихлорметане, промывают разбавленным водным NaHCO₃, водой и затем сушат (Na₂SO₄), фильтруют и упаривают, получая смолистый остаток. При растирании с этилацетат-гексаном (50:50) осаждается твердый продукт.

Перекристаллизация из этилацетат-гексана дает 12,75 г (63%) соединения 9 (2',3'-дигидро-4,5-диметокси-2'-метилспиро[изобензофуран- 1(3H)-4'(1'H)изохинолин]-3-он): т. пл. 193-194^oC; ИК (KBr) 1752 см^-1 (C=O); ¹H-ЯМР (CDCl₃) 2,47 (с, 3H, NCH₃), 2,88 (д, 1H, J = 11,6 Гц), 3,02 (д, 1H, J = 11,7 Гц), 3,76 (д, 1H, J = 15,0 Гц), 3,79 (д, 1H, J = 15,1 Гц), 3,90 (с, 3H, OCH₃), 4,17 (с, 3H, OCH₃), 6,83 (д, 1H, J = 8,4 Гц, ArH), 7,03 (д, 1H, J = 8,2 Гц, ArH), 7,11 (м, 3H, ArH), 7,22 (м, 1H, ArH); МС (Cl) m/z 326 (100); Анал. (C₁₉H₁₉NO₄) C, H, N.

2', 3'-Дигидро-4,5- диметокси-спиро [изобензофуран- 1(3H),4'(1'H) изохинолин]-3-он (10).

1-Хлор-этилхлорформиат (5,1 мл, 46,3 ммоль) добавляют по каплям к суспензии соединения 9 (6,21 r, 19,2 ммоль) в 100 мл 1,2-дихлорэтана при 0^oC в атмосфере азота. Смесь перемешивают в атмосфере азота в течение 15 минут при 0^oC и затем нагревают до температуры кипения с обратным холодильником в течение 8 часов. Смеси дают охладиться и концентрируют при пониженном давлении. К смеси добавляют 75 мл метанола и реакционную смесь нагревают до температуры кипения с обратным холодильником в течение ночи. После охлаждения растворитель упаривают при пониженном давлении, получая хлористоводородную соль соединения 10 с почти количественным выходом. Продукт достаточно чистый для того, чтобы его можно было использовать в следующей стадии без дополнительной очистки: т.пл. (HCl) 220-222^oC; т.пл. (основание) 208-210^oC; ИК (CH₂Cl₂, основание) 1754 см^-1 (C=O); ¹H-ЯМР (CDCl₃, основание) 3,18 (д, 1H, J = 13,5 Гц), 3,30 (д, 1H, J = 13,5 Гц), 3,84 (с, 3H, OCH₃), 3,96 (с, 3H, OCH₃), 4,02 (с, 2H, CH₂N), 6,67 (д, 1H, J = 7,5 Гц, ArH), 7,12 (м, 2H, ArH), 7,19 (д, 1H, J = 7,5 Гц, ArH), 7,26 (т, 1H, J = 7,5 Гц, ArH), 7,41 (д, 1H, J = 8,5 Гц, ArH); МС (Cl) m/z 312 (100); HRCIMS рассчитан. для C₁₈H₁₇NO₄: 312,1236; Найдено 312,1198; анал. (C₁₈H₁₇NO₄) H, N; C: рассчитано 69,44; найдено, 68,01.

2', 3'-Дигидро-4,5- диметокси-2'-п-толуолсульфонилспиро [изобензофуран- 1(3H),4'(1'H)изохинолин] -3-он (11) 7 мл триэтиламина добавляют по каплям к смеси п-толуолсульфонилхлорида (3,6 г, 18,9 ммоль), соединения 10 (в виде HCl-соли, полученной из 19,2 ммоль соединения 9) и хлороформа (100 мл) при 0^oC в атмосфере азота. После завершения добавления ледяную баню убирают и реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 1 часа. Затем реакционную смесь подкисливают 100 мл охлажденной водной 0,1 н. HCl, экстрагируют дихлорметаном (2 х 100 мл) и органический экстракт сушат (MgSO₄), фильтруют и упаривают в вакууме, получая вязкую жидкость, которая при растирании с этилацетат-гексаном при ^oC дает твердый продукт. Перекристаллизация из этилацетат-гексана дает 8,74 г (97%, всего из расчета на соединение 9) соединения 11: т. пл. 208-210^oC; ИК (KBr) 1767 см^-1 (C=O); ¹H-ЯМР (CDCl₃) 2,43 (с, 1H, CH₃), 3,22 (д, 1H, J = 11 Гц), 3,88 (д, 1H, J = 11 Гц), 3,90 (с, 3H, OCH₃), 3,96 (д, 1H, J = 15 Гц), 4,17 (с, 3H, OCH₃), 4,81 (д, 1H, J = 15 Гц), 6,97 (д, 1H, J = 7,7 Гц, ArH), 7,16 (м, 3H, ArH), 7,26 (м, 1H, ArH), 7,38 (д, 2H, J = 8 Гц, ArH), 7,72 (д, 2H, J = 8 Гц, ArH); МС (Cl) m/z 466 (100); анал. (C₂₅H₂₃NO₆S) C, H, N.

3,4-Диметокси-6-[(2-п-толуолсульфонил-1,2,3,4- тетрагидроизохинолин)-4-ил]бензойная кислота (12).

Раствор соединения 11 (2,56 г, 5,51 моль) в ледяной уксусной кислоте (250 мл) с 10% палладием на активированном углероде (6,30 г) встряхивают на гидрогенизаторе Парра при избыточном давлении 50 фунт/кв. дюйм (17,58 кг/см²; см. стр. 18 ориг., строка 4) в течение 48 часов при комнатной температуре. Катализатор удаляют фильтрацией и растворитель упаривают, получая 2,55 г (99%) соединения 12, обладающего чистотой, достаточной для использования в следующей стадии. Аналитический образец перекристаллизовывают из этанол-воды: т. пл. 182-184^oC; ИК (KBr) 1717 см^-1 (COOH); ¹H-ЯМР (ДМСО-d₆) 2,35 (с, 3H, CH₃), 3,12 (м, 1H), 3,51 (дд, 1H, J = 5, 11,5 Гц), 3,71 (с, 6H, OCH₃), 4,10 (м, 1H, Ar₂CH), 4,23 (с, 2H, ArCH₂N), 6,52 (д, 1H, J = 7,5 Гц, ArH), 6,78 (д, 1H, J = 7,5 Гц, ArH), 6,90 (м, 1H, ArH), 7,07 (т, 1H, J = 8 Гц, ArH), 7,14 (т, 1H, J = 6,5 Гц, ArH), 7,20 (д, 1H, J = 7,5 Гц, ArH), 7,38 (д, 2H, J = 8 Гц, ArH), 7,63 (д, 2H, J = 8,5 Гц, ArH), МС (Cl) m/z 468 (16), 450 (63), 296 (100); HRCIMS рассчитан. для C₂₅H₂₅NO₆S: 468,1481; найдено 468,1467; анал. (C₂₅H₂₅NO₆S) C, H, N.

2-N-п-толуолсульфонил-4-(2-гидроксиметил-3,4-диметоксифенил)-1,2,3,4- тетрагидроизохинолин (13).

К раствору соединения 12 (1,4 г, 2,99 ммоль) в сухом тетрагидрофуране (30 мл) добавляют 1,0 М борантетрагидрофурана (8 мл) при 0^oC в атмосфере азота. По завершении добавления смесь перемешивают при нагревании до температуры кипения с обратным холодильником в течение ночи. Добавляют дополнительно диборан (4 мл) и продолжают перемешивание еще 30 минут. После охлаждения и упаривания при пониженном давлении, осторожно добавляют метанол и растворитель удаляют при пониженном давлении. Процедуру повторяют трижды, чтобы гарантировать завершение метанолиза промежуточного боранового комплекса. Упаривание растворителя дает 1,10 г (81%) сырого соединения 13. Аналитические образцы чистят флэш хроматографией (силикагель, EtOAc/гексан) с последующей перекристаллизацией из этилацетат/гексана: т. пл. 162-164^oC; ¹H-ЯМР (CDCl₃) 2,38 (с, 3H, CH₃), 3,18 (дд, 1H, J = 7,5, 11,9 Гц), 3,67 (дд, 1H, J = 4,5, 11,8 Гц), 3,81 (с, 3H, OCH₃), 3,85 (с, 3H, OCH₃), 4,27 (д, 1H, J = 15 Гц), 4,40 (д, 1H, J = 15 Гц), 4,57 (т, 1H, J = 6 Гц, CHAr₂), 4,71 (с, 2H, CH₂OH), 6,58 (д, 1H, J = 8,5 Гц, ArH), 6,74 (д, 1H, J = 8,6 Гц, ArH), 6,84 (д, 1H, J = 7,7 Гц, ArH), 7,08 (т, 2H, J = 7,6 Гц, ArH), 7,14 (т, 1H, J = 6,6 Гц, ArH), 7,27 (д, 2H, J = 8 Гц, ArH), 7,65 (д, 2H, J = 8 Гц, ArH); МС (Cl) m/z 454 (2,57), 436 (100); анал. (C₂₅H₂₇NO₅S) C, H, N.

8,9-Диметокси-2-п- толуолсульфонил-2,3,7,11b- тетрагидро-1H- нафт [1,2,3-де]изохинолин (14).

Порошкообразное соединение 13 (427 мг, 0,98 ммоль) добавляют за несколько порций к 50 мл охлажденной концентрированной серной кислоты (50 мл) при -40^oC в атмосфере азота при энергичном механическом перемешивании. После добавления реакционную смесь нагревают до -5^oC в течение 2 часов и затем выливают на колотый лед (450 г) и оставляют перемешиваться в течение 1 часа. Продукт экстрагируют дихлорметаном (2 х 150 мл), промывают водой (2 х 150 мл), сушат (MgSO₄), фильтруют и упаривают, получая масло, которое при растирании с диэтиловым эфиром при 0^oC дает соединение 14 (353 мг, 82%) в виде белого твердого продукта, который использую