Ингибиторы протеазы серина

Ингибиторы протеазы серина

Реферат

 

Изобретение относится к соединениям формулы (I), где А, В, X, У и r имеют значения, представленные в описании, или их фармацевтически приемлемым солям, обладающим антитромбиновой активностью. Описаны также фармацевтическая композиция, обладающая антитромбиновой активностью, и соединения для изготовления фармацевтических композиций. 2 с. и 12 з. п. ф-лы, 1 табл.

Изобретение относится к ингибитору протеазы серина, имеющему алкиниламиновую боковую цепь, к содержащим его фармацевтическим композициям, а также к использованию указанного ингибитора для лечения и профилактики заболеваний связанных с тромбином.

Протеазы серина представляют собой ферменты, которые среди прочего играют важную роль в каскаде коагуляции крови. Членами этой группы являются, например, тромбин, трипсин, факторы VIIa, IXa, Ха, XIa, XIIa и протеин С.

Тромбин является протеазой серина, которая регулирует последнюю стадию в каскаде коагуляции. Главной функцией тромбина является расщепление фибриногена для генерирования мономеров фибрина, которые образуют нерастворимый гель путем поперечного сшивания. Кроме того, тромбин регулирует свое собственное продуцирование, активируя факторы V и VIII на ранних стадиях каскада. Он также оказывает важные воздействия на клеточном уровне, где он воздействует на специфичные рецепторы, вызывая агрегацию тромбоцитов, активацию клеток эндотелия и пролиферацию фибропласта. Таким образом, тромбин играет центральную регуляторную роль в гемостазе и образовании тромбов. Поскольку ингибиторы тромбина могут иметь широкий круг терапевтических применений, в этой области проводились интенсивные исследования.

При разработке синтетических ингибиторов протеаз серина и более конкретно тромбина возрос интерес к малым синтетическим пептидам, которые распознаются протеолитическими ферментами так же, как природные субстраты. В результате были получены новые пептидоподобные ингибиторы, такие как ингибиторы переходного состояния тромбина.

Не ослабевает поиск более эффективных и более селективных ингибиторов протеазы серина для того, чтобы получить ингибиторы, которые могут вводиться в меньших дозах и дают меньше побочных эффектов, и эти эффекты менее тяжелы. Кроме того, особое внимание уделяется биодоступности при оральном введении. Сильные внутривенные ингибиторы тромбина являются клинически эффективными при кратковременном введении, требуемом при лечении связанных с тромбином заболеваний. Однако особенно предупреждение связанных с тромбином заболеваний, таких как инфаркт миокарда, тромбоз и удар, требует продолжительной терапии, предпочтительно путем перорального введения антикоагулянта.

Большинство пептидоподобных ингибиторов тромбина, описанных в предшествующих публикациях, содержит боковую цепь аргинина. Ингибиторы тромбина могут также содержать боковую цепь лизина вместо аргинина как ингибитор N-Me- D-Cha-Pro-Lys-COOH и его производные, описанные Jones et al. , J. Enzyme Inhibition, 9 (1995), 43-60, и ингибиторы N-Me-D-Phe-Pro- Lys-X, где X представляет карбоксамид или карбоновую кислоту, описанные Lewis et al. , Thrombosis and Haemostasis, 74 (4) (1995), 1107-12. Кроме того, Brady et al. , Bioorganic & Medical Chemistry, 3 (1995), 1063-78 описывают D-Phe-Pro-Lys-2 кетоэфир. Другие ингибиторы тромбина описаны в WO 94/25051, где боковая цепь лизина или аргинина заменена аминоциклогексиловыми остатками. Недостатком известных ингибиторов тромбина, содержащих аргинин и лизин, является то, что они имеют низкую биодоступность при пероральном применении.

Было найдено, что ингибиторы протеазы серина и в особенности ингибиторы тромбина, Ха и VIIa, имеющие алкиниламиновую боковую цепь формулы (I) в которой А представляет H, необязательно замещенный D, L--гидроксиацетил, R¹, R¹-O-C (О)-, R¹-C (О)-, R¹-SO₂-, R¹OOC- (chr²)_m-SO₂-, R²OOC-(chr²)_m, H₂NCO-(chr²)_m- или N-защитную группу, где R¹ выбран из групп (C_1-12) алкил, (C_2-12) алкенил, (C_2-12) алкинил и (С_3-8)циклоалкил, которые могут быть необязательно замещены (С_3-8)циклоалкилом, (С_1-6)алкокси, оксо, OH, COOH, CF₃ или галогеном, и из (C_6-14) арил, (C_7-15) аралкил и (C_8-16) аралкенил, арильные группы которых могут быть необязательно замещены (С_1-6)алкилом, (С_3-8)-циклоалкилом, (C_1-6) алкокси, OH, COOH, CF₃ или галогеном; каждая группа R² независимо представляет H или имеет те же значения, что и R¹; m равно 1, 2 или 3; В представляет собой связь, аминокислоту формулы -NH- CH[(CH₂)_pС(O)OH] -С(O)- или ее производный эфир, причем p является 0, 1, 2 или 3, -N((C_1-12) алкил)-CH₂-СО-, -N ((C_2-12) алкенил) - CH₂-CO-, -N ((C_2-12)алкинил)-CH₂-СО-, -N-(бензил)-CH₂-СО-, D-1-Tiq, D-3-Tiq, D-Atc, Aic, D-1-Piq, D-3-Piq или L- или D-аминокислоту, имеющую гидрофобную, основную или нейтральную боковую цепь, причем аминокислота может быть необязательно замещена N-(C_1-6)-алкилом; или А и В вместе представляют радикал R³R⁴-chr⁵-C(О)-, в котором R³ и R⁴ независимо представляют R¹, R¹-O-C(О)-, R¹-С(О)-, R¹-SO₂-, R²OOC-(chr²)_m -SO₂-, R²OOC-(chr²)_m, H₂NCO- (chr²)_m- или N-защитную группу, или один из R³ и R⁴ соединен с R₅, образуя 5- или 6-членное кольцо вместе с "N-C", с которым они связаны, причем кольцо может быть конденсировано с алифатическим или ароматическим 6-членным кольцом; и R⁵ представляет гидрофобную основную или нейтральную боковую цепь; X представляет L-аминокислоту с гидрофобной боковой цепью, серин, треонин, циклическую аминокислоту, необязательно содержащую дополнительный гетероатом, выбранный из N, О или S, и необязательно замещенную (С_1-6)-алкилом, (С_1-6)алкокси, бензилокси или оксо, или X представляет -NR²-CH₂-C(О) - или фрагмент или в котором n равняется 2, 3 или 4, и W представляет CH или N; Y представляет H, -CHF₂, -CF₃, -CO-NH-(С_1-6)-алкилен-С₆H₅, - COOR⁶, причем R⁶ представляет H или (С_1-6)алкил, -CONR⁷R⁸, где R⁷ и R⁸ независимо представляют H или (C_1-6) алкил, или R⁷ и R⁸ вместе представляют (С_3-6)-алкилен, или Y представляет гетероцикл, выбранный из 2-тиазола, 2-тиазолина, 2-бензотиазола, 2-оксазола, 2-оксазолина и 2-бензоксазола, причем гетероциклы могут быть необязательно замещены (C_1-6)-алкилом, (С_1-6)- алкокси, бензилокси или оксо; и r равняется 0, 1, 2 или 3; или их пролекарство, или их фармацевтически приемлемая соль являются сильными и эффективными ингибиторами. Кроме того, некоторые из соединений по изобретению показывают хорошую биодоступность при пероральном введении.

Вещества по настоящему изобретению используются для лечения и профилактики вызываемых тромбином или связанных с тромбином заболеваний. Они включают ряд тромботических и протромботических состояний, в которых активирован коагуляционный каскад, что включает, но не ограничивается этим, глубокий тромбоз вен, легочную эмболию, тромбофлебит, закупорку артерий в результате тромбоза или эмболии, откупорку артерий во время или после пластической хирургии сосудов или тромболиза, рестеноз после повреждения артерий или инвазивных кардиологических процедур, послеоперационные венозные тромбоз или эмболию, острый или хронический атеросклероз, удар, инфаркт миокарда, рак и метастазы, и нейродегенеративные расстройства. Вещества по изобретению могут быть также использованы как антикоагулянты в экстракорпоральных потоках кровообращения, которые необходимы при диализе и хирургии. Вещества по изобретению могут быть также использованы как антикоагулянты in vitro.

Предпочтительные соединения по изобретению имеют формулу I, в которой X представляет L-аминокислоту с гидрофобной боковой цепью, серин, треонин или -NR²-CH₂-C(О)-.

Другими предпочтительными соединениями формулы I являются те, где А является таким, как определено ранее; В представляет собой связь, аминокислоту формулы -NH-СH[(CH₂)_pС(O)OH] -С(O)- или ее производный эфир, причем p равняется 0, 1, 2 или 3, -N((С_1-6)-алкил)-CH₂-СО-, -N((C_2-6) алкенил)-CH₂-СО-, -N-(бензил)-CH₂-СО-, D-1-Tiq, D-3-Tiq, D-Atc, Aic, D-1-Piq, D-3-Piq или D-аминокислоту, имеющую гидрофобную боковую цепь, причем аминокислота может быть необязательно замещена N-(C_1-6) алкилом; или А и В вместе представляют остаток R³R⁴N-chr⁵-C(О)-; и X представляет циклическую аминокислоту, необязательно содержащую дополнительный гетероатом, выбранный из N, О или S, и необязательно замещенную (C_1-6)-алкилом, (C_1-6)-алкокси, бензилокси или оксо, или X представляет -NR²-CH₂-C(О) - или фрагмент или Более предпочтительными являются соединения формулы I, в которых А представляет H, 2-гидрокси-3-циклогексилпропионил-, 9-гидроксифлуорен-9-карбоксил, R¹, R¹-SO₂-, R²OOC-(chr²)_m-SO₂-, R²OOC-(chr²)_m-, H₂NCO-(chr²)_m- или N-защитную группу, где R¹ выбран из групп (C_1-12) алкил, (C_2-12)алкенил, (C_6-14)арил, (C_7-15)аралкил и (С_8-16)аралкенил; каждая группа R² независимо представляет H или имеет те же значения, что и R¹, В представляет собой связь, D-1-Tiq, D-3-Tiq, D-Atc, Aic, D-1-Piq, D-3-Piq или D-аминокислоту, имеющую гидрофобную боковую цепь, где аминокислота может быть необязательно замещена N-(C_1-6) алкилом; или А и В вместе представляют остаток R³R⁴N-chr⁵-C(О)-; Y представляет - CO-NH-(C_1-6) алкилен-C₆H₅, -COOR⁶, -CONR⁷R⁸ или Y представляет гетероцикл, выбранный из 2-тиазола, 2-тиазолина, 2-бензотиазола, 2-оксазола, 2-оксазолина и 2-бензоксазола.

Особо предпочтительными являются те соединения, где А представляет H, R¹-SO₂- или R²OOC- (chr²)_m-; В представляет связь, D-1-Tiq, D-3-Tiq, D-Atc, Aic, D-1-Piq, D-3-Piq или D-аминокислоту, имеющую гидрофобную боковую цепь, или А и В вместе представляют радикал R³R⁴N-chr⁵-C(О)-, в котором по меньшей мере один из R³ и R⁴ представляет R²OOC- (chr²)_m- или R¹-SO₂-, а другой независимо представляет (C_1-12)алкил, (C_2-12)алкенил, (C_2-12)алкинил, (С_3-8)-циклоалкил, (C_7-15)-аралкил, R¹-SO₂- или R²OOC-(chr²)_m-, и R⁵ представляет гидрофобную боковую цепь; Y представляет -CO-NH-(C_1-6)-алкилен-C₆H₅, -COOR⁶, где R⁶ представляет H или (C_1-3)алкил, - CONR⁷R⁸, R⁷ и R⁸ независимо представляют H или (C_1-3)алкил, или R⁷ и R⁸ вместе представляют (С_3-5) алкилен, или Y представляет гетероцикл, выбранный из 2-тиазола, 2-бензотиазола, 2-оксазола или 2-бензоксазола.

Когда А представляет R²OOC-(chr²)_m-, В предпочтительно представляет D-аминокислоту, имеющую гидрофобную боковую цепь; или А и В вместе представляют радикал R³R⁴N- chr⁵-C(О)-, где по меньшей мере один из R³ и R⁴ представляет R²OOC-(chr²)_m-, а другой независимо представляет (С_1-12)алкил, (C_2-6)алкенил, (С_3-8)-циклоалкил, бензил, R¹-SO₂- или R²OOC- (chr²)_m-; и X представляет 2-азетидинкарбоновую кислоту, пролин, пипеколиновую кислоту, 4-тиазолидинкарбоновую кислоту, 3,4-дегидропролин, 2-октагидроиндолкарбоновую кислоту или - [N-(С_3-8)циклоалкил] -CH₂-С(О)-. Более предпочтительными являются соединения, в которых А есть HOOC-СH₂-; В есть D-Phe, D-Cha, D- Coa, D-Dpa, p-C1-D-Phe, p-OMe-D-Phe, p-OEt-D-Phe, D-Nle, м-Cl-D-Phe, 3,4-ди-ОМе-O-Pbe, D-Chg; или А и В вместе представляют радикал R³R⁴N-chr⁵-C(О)-, где по меньшей мере один из R³ и R⁴ представляет HOOC-CH₂- и другой независимо представляет (С_1-4)алкил, (С_1-4)алкил-SO₂- или HOOC-СH₂, и R⁵ представляет (С_3-8)циклоалкил, (С_3-8)циклоалкил-(C_1-4)алкил, фенил, бензил, необязательно замещенный хлором или (С_1-4)алкокси. Особенно предпочтительны те соединения, в которых Y представляет гетероцикл, выбранный из 2-тиазола, 2-бензотиазола, 2-оксазола или 2-бензоксазола.

Если А представляет R¹-SO₂-, В предпочтительно представляет связь, D-1-Tiq, D-3-Tiq, D-Atc, Aic, D-l-Piq, D-3-Piq или D-аминокислоту, имеющую гидрофобную боковую цепь; или А и В вместе представляют остаток R³R⁴N-chr⁵-C(О)-, в котором по меньшей мере один из R³ и R⁴ представляет R¹-SO₂- и другой независимо представляет (С_1-12)алкил или R¹-SO₂-; Х представляет 2-азетидинкарбоновую кислоту, пролин, пипеколиновую кислоту, 4-тиазолидинкарбоновую кислоту, 3,4- дегидропролин, 2-октагидроиндолкарбоновую кислоту, -[N-циклопентил] -CH₂-С(O)- или фрагмент или Более предпочтительными являются те соединения, в которых А представляет этил-SO₂- или бензил-SO₂-; В представляет связь, D-Phe, D-Cha, D-Coa, D-Dpa, p-Cl-D-Phe, p-OMe-D-Phe, p-OEt-D-Phe, D-Nle, м-Cl-D-Phe, 3,4-ди-ОМе-D-Phe, D-Chg; или А и В вместе представляют радикал R³R⁴N-chr⁵-С(О)-, где по меньшей мере один из R³ и R⁴ представляет этил-SO₂- или бензил-SO₂-, а другой независимо представляет (С_1-12)алкил или R¹-SO₂- и R⁵ представляет (С_3-8)циклоалкил, (С_3-8)циклoaлкил (C_1-4)aлкил, фенил, бензил, дифенилметинил, причем группы необязательно замещены хлором или (С_1-4)алкокси. Наиболее предпочтительными являются те соединения, в которых Y представляет -CO-NH-CH₂-C₆H₅, -CO-NH-CH₂CH₂-С₆H₅ или -CONR⁷R⁸, где R⁷ и R⁸ независимо представляют H или (C_1-3) алкил, или R⁷ и R⁸ вместе являются (С_3-5)алкиленом, или Y представляет гетероцикл, выбранный из 2-тиазола, 2-бензотиазола, 2-оксазола или 2-бензоксазола.

Hаиболее предпочтительно r в соединениях формулы I равняется 1.

N-защитная группа, как она определена при определении остатка А, является любой N-защитной группой, применяемой для пептидов. Подходящие N- защитные группы можно найти в Т. W. Green and P. G. M. Wuts: Protective Groops in Organic Synthesis, Second Edition (Wiley, NY, 1991) и в The Peptides, Analysis, Synthesis, Biology, Vol. 3, E. Gross and J. Meienhofer, Eds. (Academic Press, New York, 1981).

Термин "необязательно замещенный D, L--гидроксиацетил" означает группу формулы HO-CR^aR^b-C(О)-, в которой R^a и R^b независимо представляют H, гидрофобную боковую цепь, R^a и R^b вместе образуют 5- или 6-членное кольцо, которое необязательно конденсировано с одним или двумя алифатическими или ароматическими 6-членными кольцами, и 5- или 6-членное кольцо состоит из атомов углерода и необязательно одного гетероатома, выбранного из N, О и S. Предпочтительными D, L--гидроксиацетильными группами являются 2-гидрокси-3-циклогексилпропионил- и 9-гидроксифлуорен-9- карбоксил.

Термин (С_1-12)алкил означает разветвленную или неразветвленную алкильную группу, имеющую от 1 до 12 атомов углерода, такую как метил, этил, трет-бутил, изопентил, гептил, додецил и т. п. Предпочтительными алкильными группами являются (С_1-6)алкилгруппы, имеющие 1-6 атомов углерода. Более предпочтительными являются (C_1-4) алкилгруппы. Более предпочтительными в определении R⁶, R⁷ и R⁸ являются (C_1-3) алкилгруппы, имеющие 1-3 атома углерода, такие как метил, этил, изопропил.

Группа (С_2-12)алкенил представляет разветвленную или неразветвленную ненасыщенную углеводородную группу, имеющую от 2 до 12 атомов углерода. Предпочтительными являются (С_2-6)алкенилгруппы. Примерами являются этенил, пропенил, аллил, и т. п.

Термин (C_1-6) алкилен означает разветвленную или неразветвленную алкиленовую группу, имеющую от 1 до 6 атомов углерода, такую как -(CH₂)_m, где m имеет значения от 1 до 6, - CH(CH₃)-, -CH(CH₃)-(CH₂)- и т. д. Предпочтительными алкиленовыми группами в определении Y являются этилен и метилен.

Группа (C_1-12) алкинил представляет разветвленную или неразветвленную углеводородную группу, содержащую тройную связь и имеющую от 2 до 12 атомов углерода. Предпочтительными являются (С_2-6)алкинилгруппы, такие как этинил и пропинил.

Группа (С_6-14)арил представляет ароматическую группу из 6-14 атомов углерода. Арильная группа может, кроме того, содержать один или несколько гетероатомов, таких как N, S или О. Примерами арильных групп являются фенил, нафтил, (изо)хинолил, инданил и т. п. Наиболее предпочтительной является фенильная группа.

Группы (C_7-15)аралкил и (C_8-16)аралкенил являются, соответственно, алкильными и алкенильными группами, замещенными одной или несколькими арильными группами, с общим числом атомов углерода соответственно от 7 до 15 или от 8 до 16.

Термин (C_1-6) алкокси означает алкоксигруппу, имеющую 1-6 атомов углерода, алкильная часть которой может иметь значения, определенные выше.

Термин (С_3-8)циклоалкил означает циклоалкильную группу, имеющую 3-8 атомов углерода, а именно циклопропил, циклобутил, циклопентил, циклогексил, циклогептил или циклооктил. Предпочтительными циклоалкильными группами являются циклопентил и циклогексил.

Термин "галоген" означает фтор, хлор, бром или йод.

Термин "производный эфир" означает любое подходящее эфирное производное, предпочтительно (С_1-4)алкиловые эфиры, такие как метиловый, этиловый или трет-бутиловый эфиры.

Термины 1- и 3-Tiq обозначают соответственно 1,2,3,4-тетрагидроизохинолин-1- или -3-карбоновую кислоту; 1- и 3-Piq представляют, соответственно, 1- и 3-карбоксипергидро-изохинолин; Atc представляет 2-аминотетралин-2-карбоновую кислоту; Aic представляет аминоинданкарбоновую кислоту; Phe представляет фенилаланин; Cha представляет циклогексилаланин; Dpa представляет дифенилаланин; Coa представляет циклооктилаланин; Chg представляет циклогексилглицин; N1e представляет норлейцин; Asp представляет аспарагиновую кислоту.

Термин "гидрофобная боковая цепь" означает (С_1-12)алкил, необязательно замещенный одним или несколькими (С_3-8)циклоалкилгруппами или (C_6-14) арилгруппами (которые могут содержать гетероатом, например азот), такими как циклогексил, циклооктил, фенил, пиридинил, нафтил, тетрагидронафтил и т. п. , причем гидрофобная боковая цепь может необязательно быть замещена заместителями, такими как галоген, трифторметил, низший алкил (например, метил или этил), низший алкокси (например, метокси), фенилокси, бензилокси, и т. п.

В этих определениях термин "замещенный" означает замещенный одним или несколькими заместителями.

Аминокислоты, имеющие основную боковую цепь, представляют, например, аргинин и лизин, предпочтительно аргинин, но не ограничены этим. Термин "аминокислоты, имеющие нейтральную боковую цепь" относятся к таким аминокислотам как метионинсульфон и т. п.

Циклические аминокислоты представляют, например, 2-азетидинкарбоновую кислоту, пролин, пипеколиновую кислоту, 1-амино-1-карбокси-(С_3-8)циклоалкан (предпочтительно C₄, C₅ или С₆), 4-пиперидинкарбоновую кислоту, 4-тиазолидин-карбоновую кислоту, 3,4-дегидропролин, азапролин, 2-октагидроиндол-карбоновую кислоту и т. п. Предпочтительными являются 2-азетидинкарбоновая кислота, пролин, пипеколиновая кислота, 4-тиазолидинкарбоновая кислота, 3,4-дегидропролин и 2- октагидроиндолкарбоновая кислота.

Термин "пролекарство" означает соединение, в котором алкиниламино боковая цепь соединения формулы I защищена, например, гидрокси, (С_1-6)алкокси или (С_1-6)алкоксикарбонильной группой.

Изобретение, кроме того, защищает способ получения соединения формулы I, включающий сочетание подходящих защищенных аминокислот или аналогов аминокислот с последующим удалением защитных групп.

Соединения формулы I могут быть получены обычным для таких соединений способом. Модифицированная аминокислота, имеющая алкиниламино боковую цепь вводятся способом, подобным известным методам для других аминокислот.

Для этой цели подходящие производные аминокислот или пептиды с защищенным N в -положении (и с защищенной боковой цепью, если имеется реакционноспособная боковая цепь) активируют и вводят в реакцию сочетания с подходящими производными аминокислот или пептидами с защищенным карбоксилом либо в растворе, либо на твердом носителе. Защиту -аминогрупп обычно осуществляют уретановыми группами, такими как лабильные под действием кислот третбутилоксикарбонильная (Boc) группа, бензилокси-карбонильная (Z) группа и их замещенные аналоги или лабильная под действием оснований 9-флоренилметилоксикарбонильная (Fmoc) группа. Z группа может быть также удалена каталитическим гидрирированием. Другие подходящие аминозащитные группы включают Nps, Bmv, Врос, Msc и др. Хороший обзор аминозащитных групп дан в The Peptides, Analysis, Synthesis, Biology, Vol. 3, E. Gross and J. Meienhofer, Eds. (Academic Press, New York, 1981). Защиту карбоксильных групп осуществляют путем образования сложных эфиров, например эфиров, лабильных под действием оснований, подобных метиловым или этиловым эфирам, или эфиров, лабильных под действием кислот, подобных трет-бутиловым эфирам, или эфиров, лабильных при гидрогенолизе, подобных бензиловым эфирам. Защита алкиниламиновой боковой цепи может быть осуществлена при использовании вышеупомянутых групп. Активация карбоксильной группы подходящих защищенных аминокислот или пептидов может осуществляться азидом, смешанным ангидридом, активным эфиром или карбодиимидным методом, особенно с добавлением каталитических и подавляющих рацемизацию соединений, таких как 1-гидроксибензотриазол, N- гидроксисукцинимид, 3-гидрокси-4-оксо-3, 4-дигидро-1,2,3- бензотриазин, N-гидрокси-5-норборнен-2,3-дикарбоксимид, что описано в The Peptides, Analysis, Synthesis, Biology (см. выше) и Pure and Applied Chem. 59(3), 331-344 (1987).

Соединения по изобретению, которые могут быть в форме свободного основания, могут быть выделены из реакционной смеси в форме фармацевтически приемлемой соли. Фармацевтически приемлемые соли могут быть также получены путем реакции свободного основания формулы I с органической или неорганической кислотой, такой как хлористый водород, бромистый водород, йодистый водород, серная кислота, фосфорная кислота, уксусная кислота, пропионовая кислота, гликолевая кислота, малеиновая кислота, малоновая кислота, метансульфоновая кислота, фумаровая кислота, янтарная кислота, щавелевая кислота, лимонная кислота, бензойная кислота и аскорбиновая кислота.

Соединения по изобретению могут иметь один или несколько хиральных атомов углерода и могут поэтому быть получены в виде чистого энантиомера, или в виде смеси энантиомеров, или в виде смеси, содержащей диастереомеры. Способы получения чистых энантиомеров хорошо известны в практике, например кристаллизация солей, полученных из оптически активных кислот и рацемической смеси, или хроматография с использованием хиральных колонок. Для диастереомеров могут быть использованы колонки с прямой фазой или с обращенной фазой.

Соединения по изобретению могут вводиться энтерально или парентерально, и для человека предпочтительно в суточной дозе 0,001-100 мг на кг веса тела, предпочтительно 0,01-10 мг на кг веса тела. Эти соединения в смеси с фармацевтически приемлемыми вспомогательными веществами, описанными, например, в стандартной ссылке на Gennaro et al. Remington's Pharmaceutical Sciences (18th ed. Mack Publishing Company, 1990, см. в особенности Part 8: Pharmaceutical Preparations and Their Manufacture) могут быть спрессованы в твердые стандартные дозировки, такие как пилюли, таблетки, или могут быть превращены в капсулы или свечи. Посредством фармацевтически пригодных жидкостей соединения могут быть также применены в форме раствора, суспензии, эмульсии, например, для использования как препарат для инъекций или как спрей, например для использования в виде носового спрея.

Для изготовления дозированных единиц, например таблеток, предполагается использовать обычные добавки, такие как наполнители, красители, полимерные связующие и тому подобное. В общем, может быть использована любая фармацевтически приемлемая добавка, которая не нарушает функцию активного соединения.

Подходящие носители, с которыми могут вводиться композиции, включают лактозу, крахмал, производные целлюлозы и т. п. , или их смеси, используемые в подходящих количествах.

Изобретение дополнительно поясняется нижеследующими примерами.

ПРИМЕРЫ Термин "лизининил" в сочетаниях -Лизининил [COCO] -OH, -лизининил-ОМе и -лизининил-(2-тиазолил) означает остаток следующей формулы: где Y = COOH, OCH₃ и 2-тиазолил соответственно; Azt = 2-азетидинкарбоновая кислота; Boc = трет-бутилоксикарбонил; Cbz = бензилоксикарбонил; Bzl = бензил.

ПРИМЕР 1 HOOC-CH₂-D-Cha-Pro-лизининил-(2-тиазолил) (a) 1-амино-4-хлор-2-бутингидрохлорид 1,4-дихлор-2-бутин (73,8 г) растворяли в хлороформе (600 мл). Добавляли гексамин (84,0 г) и реакционную смесь нагревали при кипячении с обратным холодильником в течение 2,5 ч и затем выдерживали на холоду при 5^oC в течение 24 часов. Гексаминовый комплекс (220 г) отфильтровывали. Раствор комплекса в этаноле (1 л) перемешивали в течение 24 часов при комнатной температуре с концентрированной соляной кислотой (180 мл). Выпавший в осадок хлористый аммоний отфильтровывали и фильтрат концентрировали при пониженном давлении до тех пор, пока не начиналась кристаллизация. После этого добавлением диэтилового эфира осаждали гидрохлорид 1-амино-4- хлор-бутина. Перекристаллизацией из смеси этанол/эфир получали 1-амино-4-хлор-2-бутин-гидрохлорид (59,75 г).

ТСХ: R_f = 0,60, силикагель, дихлорметан/метанол/вода 70/30/5 (по объему).

(b) 1 -ацетиламино-4-хлор-2-бутин 1-амино-4-хлор-2- бутингидрохлорид (59,75 г) растворяли в 10% водном растворе ацетата натрия (335 мл). Добавляли этилацетат (500 мл), и при комнатной температуре вводили по каплям уксусный ангидрид (70 мл). 25% водный раствор ацетата натрия добавляли до pH 5 и раствор перемешивали в течение 30 мин при комнатной температуре. Этилацетатный слой отделяли и водный слой дважды экстрагировали этилацетатом. Объединенные органические слои промывали водой, рассолом и сушили над сульфатом натрия, фильтровали и выпаривали под вакуумом, получая 1-ацетиламино-4-хлор-2-бутин в виде желтого сиропа (58,8 г).

ТСХ: R_f = 0,99, силикагель, дихлорметан/метанол/вода 70/30/5 (по объему).

(с) Диэтиловый эфир ацетамидо(4-ацетамидо-2-бутинил)-малоновой кислоты К холодному (0^oC) раствору гидрида натрия (60% дисперсия в минеральном масле, 3,48 г) в диоксане (70 мл) добавляли по каплям абсолютный этанол (70 мл). Смеси давали нагреться до комнатной температуры и по каплям добавляли раствор диэтилацетамидомалоната (20,5 г) в диоксане (70 мл). Добавляли йодистый натрий (9,07 г) и при комнатной температуре по каплям вводили раствор 1-ацетиламино- 4-хлор-2- бутина (11 г) в диоксане (140 мл). После добавления еще 100 мл этанола смесь кипятили с обратным холодильником в течение 2,5 ч. Реакционную смесь охлаждали и образовавшийся осадок отфильтровывали. Очистка с использованием хроматографии на силикагеле (элюент: этилацетат/метанол, 9/1 по объему) дала диэтиловый эфир ацетамидо-(4-ацетамидо-2-бутинил)малоновой кислоты (15,9 г).

ТСХ: R_f = 0,25, силикагель, этилацетат.

(d) Дигидрохлорид 2,6-диамино-4-гексиноевой кислоты (H-лизинин дигидрохлорид) Диэтиловый эфир ацетамидо(4-ацетамидо-2- бутинил)малоновой кислоты (7,64 г) растворяли в смеси уксусной кислоты (140 мл) и 6 М раствора соляной кислоты (290 мл) и нагревали в течение ночи при 95^oC. Смесь концентрировали под вакуумом. Остаток кристаллизовали из смеси этанол/вода, получая дигидрохлорид 2,6-диамино-4-гексиноевой кислоты в виде кристаллического порошка (4,0 г).

(е) Вос-лизининил (Cbz) -OH Пентагидрат сульфата меди (II) (287 мг) добавляли к раствору дигидрохлорида 2, 6-диамино-4-гексиноевой кислоты (500 мг) в 17 мл смеси диоксан/вода (3/2 по объему) и pH доводили до 9 добавлением 2 М раствора гидроокиси натрия. При комнатной температуре добавляли по каплям N-(бензилоксикарбонилокси)сукцинимид (573 мг) в диоксане (10 мл) и вместе с ним 2 М раствор гидроокиси натрия для поддержания pH около 9-9,5. После того как добавление закончилось, реакционную смесь оставляли на ночь при перемешивании при комнатной температуре. Смесь фильтровали и полученный таким образом осадок суспендировали в диоксане (20 мл). Добавляли ди-третбутилдикарбонат (500 мг) и pH доводили до 12-13 добавлением 4 М раствора гидроокиси натрия. Реакционную смесь оставляли на ночь при перемешивании при комнатной температуре. Смесь фильтровали и фильтрат разбавляли водой. Добавляли 4 М раствор соляной кислоты до pH 2 и водный слой дважды экстрагировали дихлорметаном. Объединенные органические фазы промывали водой и сушили над сульфатом натрия, растворитель удаляли выпариванием, получая Вос- лизининил(Cbz)-OH (540 мг).

ТСХ: R_f = 0,70, силикагель, этилацетат/пиридин/уксусная кислота/вода 63/20/6/11 (по объему).

(f) Вос-лизининил (Cbz) -NMeOMe Гидрохлорид N, O- диметилгидроксиламина (363 мг) и [2-(1H-бензотриазол-1-ил) -1,1,3,3-тетраметилуронийтетрафторборат] (1,2 г) добавляли к раствору Вос-лизининил (Cbz)-OH (1,4 г) в дихлорметане (50 мл), и pH доводили до 9-10 добавлением N, N-диизопропилэтиламина. Реакционную смесь перемешивали в течение 1 ч при комнатной температуре. Смесь промывали последовательно холодным 2 М раствором соляной кислоты, водой, 5% водным раствором гидрокарбоната натрия и водой. Органический слой сушили над сульфатом натрия, фильтровали и выпаривали. Остаток очищали хроматографией на окиси кремния (элюент: этилацетат/гептан 3/2 по объему), получая Вос- лизинил(Cbz)-NMeOMe (1,37 г).

ТСХ: R_f = 0,70, силикагель, этилацетат/гептан 4/1 (по объему).

(g) Вос-лизининил (Cbz)-(2-тиазолил) Раствор 2-бромтиазола (1,78 г) в диэтиловом эфире (10 мл) добавляли по каплям при перемешивании к холодному (-78^oC) раствору н-бутиллития (10,9 ммоль) в диэтиловом эфире (10,9 мл). После перемешивания раствора в течение 30 мин при -78^oC медленно добавляли раствор Boc-лизинил(Cbz)-NMeOMe (1,37 г) в сухом тетрагидрофуране (15 мл). Смесь перемешивали при -78^oC в течение 1 ч, затем добавляли 5% водный раствор гидрокарбоната натрия. Смеси давали нагреться до комнатной температуры и слои разделяли. Водный слой экстрагировали диэтиловым эфиром. Объединенные органические слои промывали водой, сушили над сульфатом натрия, фильтровали и выпаривали. Остаток очищали хроматографией на окиси кремния (элюент: этилацетат/гептан, 1/1 по объему), получая Вос- лизининил(Cbz)-(2-тиазолил) (1,21 г).

ТСХ: R_f = 0,72, силикагель, этилацетат/гептан 3/1 (по объему).

(h) H-лирининил (Cbz)-(2-тиазолил)TFA Вос-лизининил(Cbz)-(2-тиазолил) (1,21 г) растворяли в смеси трифторуксусная кислота (TFA)/дихлорметан (15 мл; 1/1 по объему) и перемешивали в течение 1 ч при комнатной температуре. После удаления растворителя выпариванием сырой амин выделяли с количественным выходом в виде желтого масла и напрямую использовали для получения N-Boc-N- (трет-бутилоксикарбонилметил) -D-Cha-Pro-лизининил (Cbz) -(2-тиазолила).

ТСХ: R_f = 0,25, силикагель, этилацетат/пиридин/уксусная кислота/вода 63/20/6/11 (по объему).

(i) H-D-Cha-OMeHCl К холодному (-20^oC) и сухому метанолу (195 мл) добавляли по каплям тионилхлорид (28 мл). Добавляли H-D-Cha-OHHCl (40 г) и реакционную смесь нагревали при кипячении с обратным холодильником в течение 5 ч. Смесь концентрировали под вакуумом и совместно выпаривали с метанолом (3 раза). Остаток кристаллизовали из смеси метанол/диэтиловый эфир, получая H-D-Cha-OMeHCl в виде белого кристаллического порошка (40,9 г).

ТСХ: R_f = 0,66, силикагель, н-бутанол/уксусная кислота/вода 10/1/3 (по объему).

(j) N-(трет-бутилоксикарбонилметил)-D-Cha-OMe Трет-бутилбромацетат (36 г) добавляли при перемешивании к раствору H-D-Cha-OMeHCl (40,9 г) в 400 мл ацетонитрила. Величину pH смеси доводили до 8,5 N, N-диизопропилэтиламином. Смесь перемешивали в течение 16 часов при комнатной температуре и выпаривали под вакуумом. Остаток растворяли в дихлорметане, раствор промывали водой, сушили над сульфатом натрия и выпаривали под вакуумом. Хроматография на силикагеле смесью гептан/этилацетат 9/1 (по объему) дает 64 г N-(трет- бутилоксикарбонилметил) -D-Cha-OMe.

ТСХ: R_f = 0,25, силикагель, этилацетат/гептан 1/1 (по объему).

(к) N-(трет-бутилоксикарбонилметил)-N-Boc-D-Cha-OMe Величину pH раствора N- (трет-бутилоксикарбонилметил) -D-Cha-OMe (64 г) и ди-трет- бутилдикарбоната (40,3 г) в N. N-диметилформамиде (500 мл) доводили до 8,5 N. N-диизопропилэтиламином. Смесь перемешивали в течение 16 часов при комнатной температуре. Растворитель удаляли под вакуумом. К остатку добавляли дихлорметан и воду. Органический слой отделяли, промывали холодной 1N соляной кислотой, водой, 5% гидрокарбонатом натрия и водой. Органический слой сушили над сульфатом натрия и фильтрат выпаривали до аморфного твердого N- (трет-бутилоксикарбонилметил)-N-Вос-D-Cha-ОМе с выходом 59,6 г.

ТСХ: R_f = 0,50, силикагель, этилацетат/гептан 1/1 (по объему).

(l) N-(трет-бутилоксикарбонилметил)-N-Boc-D-Cha-OH Раствор N- (трет-бутилоксикарбонилметил)-N-Boc-D-Cha-OMe (59,6 г) в 900 мл смеси диоксан/вода 9/1 (по объему) обрабатывали избытком 6N гидроокиси натрия для поддержания pH на уровне 12 в течение 6 часов при комнатной температуре. После подкисления смесь выливали в воду и экстрагировали дихлорметаном. Органический слой промывали водой и сушили над сульфатом натрия. Фильтрат упаривали, получая 54 г N-(трет-бутилоксикарбонилметил) -N-Boc-D-Cha-OH.

ТСХ: R_f = 0,60, силикагель, дихлорметан/метанол 9/1 (по объему).

(m) N-(трет-бутилоксикарбонилметил)-N-Boc-D-Cha-Osu Раствор N- (трет- бутилоксикарбонилметил)-N-Boc-D-Cha-OH (12,5 г) в 200 мл ацетонитрила вводили в реакцию с N-гидроксисукцинимидом (4,1 г) и 1-(3-диметиламинопропил)-3-этилкарбодиимидгидрохлоридом (6,84 г), оставляя смесь на ночь при комнатной температуре. Реакционную смесь выпаривали до сухого остатка и остаток растворяли в этилацетате. Органическую фазу промывали водой, сушили над сульфатом натрия и концентрировали, получая активный эфир, который напрямую использовали на следующей стадии.

(n) N- (трет- бутилоксикарбонилметил) -N-Boc-D-Cha-Pro-OH H-Pro-OHHCl (7,5 г) растворяли в 100 мл воды. Величину pH раствора доводили до 8 1N раствором гидроокиси натрия, после чего вводили по каплям растворенный в 100 мл N, N-диметилформамида N- (трет-бутилоксикарбонилметил)-N-Boc-D-Cha-Osu. Реакцию проводили при перемешивании, оставляя смесь на ночь при комнатной температуре при pH 8. Реакционную смесь охлаждали и pH доводили до 2 1N соляной кислотой. Водный слой экстрагировали этилацетатом. Органическую фазу промывали водой, сушили над сульфатом натрия и выпаривали под вакуумом. Очистка на силикагеле с использованием градиента этилацетат /метанол 9/1 -> 1/1 (по объему) давала 11,0 г целевого дипептида.

ТСХ: R_f = 0,81, силикагель, этилацетат/пиридин/уксусная кислота/вода 163/20/6/11 (по объему).

(о) N-Boc-N-(трет- бутилоксикарбонилметил)-D-Cha-Pro-лизининил(Cbz)-(2-тиазолил N-Boc-N- (трет-бутилоксикарбонилметил)-D-Cha-Pro-OH (1, 31 г) растворяли в сухом /диметилформамиде (15 мл). После добавления триэтиламина (750 мкл) реакционную смесь помещали под азот и охлаждали до -15^oC. После этого добавляли изобутилхлороформиат (352 мкл) и смесь оставляли перемешиваться в течение 15 мин при - 15^oC. H-L-лизининил (Cbz)-(2-тиазолил) TFA (1,15 г) растворяли в сухом /диметилформамиде (10 мл) и добавляли по каплям к холодному раствору смешанного ангидрида, поддерживая pH на уровне 8,5 добавлением триэтиламина. Реакционную смесь перемешивали в течение 30 мин при -15^oC. Реакционную смесь выпаривали до сухого остатка. Остаток растворяли в этилацетате и промывали последовательно водой, 5% водным раствором гидрокарбоната натрия, водой и рассолом, сушили над сульфатом натрия и концентрировали под вакуумом. Остаток очищали хроматографией на окиси кремния (элюент: дихлорметан/метанол 95/5 по объему), получая N-Boc-M- (трет-бутилоксикарбонилметил) - D-Cha-Pro-лизининил (Cbz) - (2-тиазолил) (1,77 г).

(p) HOOC-CH₂-D-Cha-Pro-лизининил-(2-тиазолил) N-Boc-N- (трет- бутилоксикарбонилметил)-D-Cha-Pro-лизининил (Cbz)-(2-тиазолил) (1,77 г) обрабатывали смесью трифторуксусная кислота/тиоанизол 10/1 по объему (20 мл) в течение 4 часов при комнатной температуре. Реакционную смесь концентрировали под вакуумом и остаток растворяли в воде. Водную фазу обильно промывали диэтиловым эфиром. Водный слой напрямую подавали на препаративную ЖХВР, колонка Supelcosil LC-18-BD, используя