Новые композиции липидов и стабилизирующих материалов

Новые композиции липидов и стабилизирующих материалов

Реферат

 

Изобретение относится к диагностике. Описаны композиции, содержащие распределенные в водном носителе липид и вещество, способное стабилизировать композицию. Стабилизирующее вещество нековалентно связывается с липидом и присутствует в количестве, достаточном для покрытия липида, но недостаточном для увеличения вязкости композиции. Композиции особенно пригодны для использования при диагностике, включая ультразвуковую. Композиции могут представлять собой везикулярные композиции, такие как композиции, содержащие мицеллы и липосомы. Композиции проявляют повышенную стабильность. При их использовании уменьшается вероятность закупорки сосудов. 6 с. и 11 з.п.ф-лы, 3 табл.

Ссылка на родственные заявки Данная заявка является частично продолжением совместно рассматриваемую заявки на патент США 307305, поданной 16 сентября 1994 г., которая является частичным продолжением заявки на патент США 159687, поданной 30 ноября 1993 г., которая является частичным продолжением заявки на патент США 076239, поданной 11 июня 1993 г., которая является частичным продолжением заявки на патент США 717084, по которой в настоящее время выдан патент США 5228446 от 20 июня 1993 г., и заявки на патент США 716899, в настоящее время абандонированной, при этом обе заявки были поданы 18 июня 1991 г. и являются частичным продолжением заявки на патент США 569828, поданной 20 августа 1990 г., по которой в настоящее время выдан патент США 5088499 от 18 февраля 1992 г. и которая является частичным продолжением заявки на патент США 455707, поданной 22 декабря 1989 г., в настоящее время абандонированной.

Данная заявка является также частичным продолжением совместно рассматриваемой заявки на патент США 160232, поданной 30 ноября 1993, которая является частичным продолжением заявки на патент США 076250, поданной 11 июня 1993 г. , которая является частичным продолжением заявки на патент США 717084, по которой в настоящее время выдан патент США 5228446 от 20 июня 1993 г., и заявки на патент США 716899, в настоящее время абандонированной, при этом обе заявки были поданы 18 июня 1991 г. и являются частичным продолжением заявки на патент США 569828, поданной 20 августа 1990 г., по которой в настоящее время выдан патент США 5088499 от 18 февраля 1992 г. и которая является частичным продолжением заявки на патент США 455707, поданной 22 декабря 1989 г., в настоящее время абондонированной.

Каждая из указанных выше заявок включена в настоящее описание в качестве ссылки.

Область техники, к которой относится изобретение Настоящее изобретение относится к новым композициям на основе липидов и стабилизирующих веществ и их применению. В частности настоящее изобретение относится к новым композициям на основе липидов и стабилизирующих веществ и к их применению при введении биологически активных агентов.

Предпосылки создания изобретения Ультразвук лежит в основе дигностической техники визуализации изображения для изучения различных внутренних органов и тканей, например сосудистой сети, включая микрососудистые ткани. Ультразвук имеет ряд преимуществ перед другими методами диагностики. Например, диагностические методы ядерной медицины и методы с использованием рентгеновских лучей обычно связаны с облучением пациента ионизирующей электронной радиацией. Такая радиация может вызывать повреждение субклеточного материала, включая дезоксирибонуклеиновую кислоту (ДНК), рибонуклеиновую кислоту (РНК) и протеины. Ультразвук не относится к такому потенциально опасному излучению. Кроме того, ультразвуковой диагностический метод является относительно недорогим в сравнении с другими методами, включая компьютерную томографию (КТ) и ядерную магнитную томографию (ЯМТ), которые требуют сложного и дорогого оборудования.

Ультразвукая диагностика основана на воздействии на пациента звуковыми волнами. Звуковые волны ослабляются из-за поглощения тканями тела, проникают сквозь ткани или отражаются от них. Отражение звуковых волн от тканей, обычно обозначаемое как обратное рассеяние или отражающая способность, является физической основой формирования ультразвукового изображения. В этой связи необходимо отметить, что звуковые волны по-разному отражаются от различных тканей тела. Такое различие в отражении связано с рядом факторов, включая состав и плотность определенной обследуемой ткани. Метод ультразвуковой диагностики включает регистрацию дифференциально отраженных волн, обычно с помощью приемника, обладающего способностью детектировать звуковые волны с частотой от одного мегагерца (МГц) до десяти МГц. Зарегистрированные волны могут быть объединены в единое изображение, которое подвергается квантованию, а затем квантованные волны могут быть преобразованы в изображение исследуемой ткани.

Техника получения ультразвукового изображения обычно включает также использование контрастных агентов, которые применяют с целью улучшить качество и информативность изображения, получаемого с помощью ультразвука. Примеры контрастных агентов включают, например, суспензии твердых частиц, эмульгированные жидкие капельки, газонаполненные пузырьки [см., например, Hilmann и др. , патент США 4466442 и опубликованные международные заявки WO 92/17212 и WO 92/21382].

Качество ультразвукового изображения существенно улучшается при использовании контрастных агентов. Тем не менее необходимо дальнейшее улучшение, прежде всего в отношении изображений состояния сосудистой сети тканей, перфузированных для снабжения кровью. Соответственно имеется необходимость усовершенствования ультразвуковой техники, включая улучшение контрастных агентов, способных обеспечивать получение необходимых для медицины изображений сосудистой сети и связанных с ней органов.

Отражение звуковых волн от поверхности жидкость-газ чрезвычайно эффективно. Соответственно, пузырьки, включая газонаполненные, могут быть использованы в качестве контрастных агентов. Термин "пузырьки", используемый в данном описании, относится к везикулам, которые обычно характеризуются наличием одной или более мембран или оболочек, окружающих внутреннюю полость, наполненную газом или его предшественником. Примеры пузырьков включают липосомы, мицеллы и им подобные образования. Как более подробно описано ниже, эффективность пузырьков как контрастных агентов зависит от разных параметров, включая, например, размер и/или эластичность пузырька.

Касательно эффекта, связанного с размером пузырька, необходимо отметить следующее. Как известно специалистам в данной области техники, отраженный от пузырька сигнал является функцией его радиуса (r⁶) (рэлеевское рассеивание). Таким образом, рассеивающая способность пузырька диаметром 4 микрометра (мкм) в 64 раза превышает таковую для пузырька диаметром 2 мкм. В целом справедливо положение, что чем больше пузырек, тем больше величина отраженного им сигнала.

Однако размер пузырька ограничен диаметром капилляра, через который пузырек должен проходить. Очевидно, что контрастные агенты, которые включают пузырьки с диаметром более 10 мкм, могут представлять определенную опасность, поскольку они могут закупорить микрососуды. Соответственно предпочтительно, чтобы около 99% пузырьков в контрастном агенте имело диаметр менее 10 мкм. Средний диаметр пузырька также важен, и он должен быть более 1 мкм или предпочтительно более 2 мкм. Удельное среднее значение диаметра пузырьков должно составлять от 7 до 10 мкм.

Как отмечалось выше, важное значение имеет также эластичность пузырьков. Это связано с тем, что обладающие высокой эластичностью пузырьки могут при необходимости деформироваться и "проскальзывать" через капилляры, что уменьшает возможность их закупорки. Эффективность контрастного агента зависит также и от концентрации пузырьков. В целом чем выше концентрация пузырьков, тем больше отражающая способность контрастного агента.

Другой важной характеристикой, относящейся к эффективности пузырьков как контрастного агента, является стабильность пузырька. В контексте данного описания, в частности в отношении газонаполненных пузырьков, понятие "стабильность пузырька" относится к способности пузырьков сохранять заключенный внутри их объема газ после приложения внешнего давления, превышающего атмосферное давление. Эффективным контрастным агентом считаются пузырьки, которые обычно должны сохранять до 50% захваченного ими газа при воздействии давления в 300 милиметров (мм) ртутного столба (рт.ст.) в течение около одной минуты. Более эффективные пузырьки сохраняют 75% заключенного в них газа при воздействии давления 300 мм рт.ст. в течение одной минуты, а особо эффективные контрастные агенты способны удерживать до 90% заключенного в них газа при таком воздействии. Необходимо также, чтобы после снятия внешнего давления пузырек возвращался бы к своему исходному размеру. Это относится к такому обычно используемому понятию, как "эластичность пузырька".

Пузырьки, которые не обладают требуемой стабильностью, представляют собой слабые контрастные агенты. Если, например, пузырьки выделяют содержащийся в них газ в условиях in vivo, то их отражающая способность уменьшается. Аналогично этому размеры пузырьков с плохой эластичностью будут уменьшаться in vivo, что также приведет к уменьшению их отражающей способности.

Стабильность пузырьков, описанных в известной литературе, отражающей уровень техники, как правило, не соответствует требованиям для их применения в качестве контрастных агентов. Например, известны пузырьки, в том числе и газонаполенные липосомы, которые состоят из липоидальных стенок или мембран [см. , например, Ryan и др., патенты США 4900540 и 4544545; Tickner и др., патент США 4276885; Klaveness и др. , WO 93/13809; Schneider и др., ЕРО 0554213 и WO 91/15244]. Стабильность пузырьков, описанная в упомянутых выше ссылках, была низкой в условиях, когда раствор, в котором были суспендированы пузырьки, разбавляли, например, в условиях in vivo, при этом стенки или мембраны пузырьков становились тоньше, что приводило к повышенной вероятности их разрушения.

Были предприняты различные исследования для улучшения стабильности пузырьков. Такие исследования включали, например, попытки получить пузырьки, в которых мембраны или стенки состояли бы из материалов, укрепленных путем поперечного сшивания. Например, у Kleveness и др., WO 92/17212, описаны пузырьки, содержащие протеины, соединенные с помощью биоразлагаемых сшивающих агентов. Альтернативно этому мембраны пузырьков могут включать соединения, которые сами не являются протеинами, но которые также сшиты с помощью биосовместимых соединений [см. , например, Klaveness и др., WO 92/17436, WO 93/17718, WO 92/21382].

Известные из литературы способы стабилизации пузырьков, включая поперечное сшивание, имеют множество недостатков. Например, описанное выше поперечное сшивание обычно включает использование новых материалов, включая поперечносшитые протеины или другие соединения, для которых пути метабилических превращений неизвестны. Кроме того, поперечное сшивание требует проведения дополнительных химических стадий, включая выделение и очистку поперечно сшитых соединений. Более того, поперечное сшивание увеличивает жесткость мембран или стенок пузырьков. В результате пузырьки приобретают уменьшенную эластичность и, как следствие, пониженную способность к деформации при прохождении через капилляры, что в свою очередь повышает вероятность закупорки сосудов при использовании известных из уровня техники соединений, стабильность которых обеспечена путем поперечного сшивания.

Таким образом, очевидна необходимость в разработке новых и/или обладающих повышенной стабильностью контрастных агентов, а также способов их получения. Настоящее изобретение направлено на решение этой, а также и других важных задач.

Краткое описание изобретения Настоящее изобретение относится к стабилизации липидных композиций. В частности, один из объектов настоящего изобретения относится к липидной композиции, включающей распределенные в водном носителе липид и вещество, способное стабилизировать композицию. Стабилизирующее вещество нековалентно связано с липидом и присутствует в композиции в количестве, достаточном для покрытия липида, но недостаточном для увеличения вязкости композиции. Кроме того, липидная композиция может при необходимости включать газ и/или предшественники газов. Также при необходимости липидная композиция может содержать дополнительные биоактивные агенты.

Другим объектом изобретения является везикулярная композиция, включающая распределенные в водном носителе везикулы, состоящие из липидов, и вещество, которое способно стабилизировать композицию. Стабилизирующее вещество нековалентно связано с липидом и присутствует в композиции в количествах, которых достаточно для покрытия липида, но недостаточно для увеличения вязкости композиции. Везикулярная композиция при необходимости может дополнительно включать газ и/или предшественники газов. Также при необходимости везикулярная композиция может включать биоактивные агенты.

Еще одним объектом настоящего изобретения является состав для диагностики или терапевтического использования. Состав включает липид и вещество, способное стабилизировать композицию, в сочетании с биоактивными агентами. Стабилизирующее вещество нековалетно связано с липидом и присутствует в количествах, достаточных для покрытия липида, но недостаточных для увеличения вязкости композиции. Состав может при необходимости также включать газ и/или предшественники газов.

Другим объектом настоящего изобретения является способ приготовления стабилизированной липидной композиции. Способ включает совместное объединение липида и стабилизирующего вещества, которое нековалентно связывается с липидом. Стабилизирующее вещество связывается с липидом в тех количествах, которые необходимы для покрытия липида, но недостаточны для повышения вязкости композиции.

Еще один объект настоящего изобретения относится к способу приготовления состава для диагностического или терапевтического использования. Способ включает совместное объединение биоактивного агента и композиции, включающей липид и стабилизирующее вещество, которое нековалентно связывается с липидом. Стабилизирующее вещество присутствут в композиции в количествах, которых необходимо для покрытия липида, но недостаточно для повышения вязкости композиции.

Другой объект настоящего изобретения относится к стабилизированной липидной композиции, которая приготовлена путем объединения липида и стабилизирующего вещества, которое нековалентно связывается с липидом. Стабилизирующее вещество объединяется с липидом в количествах, которых необходимо для покрытия липида, но недостаточно для повышения вязкости композиции.

Еще один объект настоящего изобретения относится к стабилизирующему составу для терапевтического и диагностического использования. Состав приготовлен путем объединения биоактивного агента и композиции, состоящей из липида и вещества, способного стабилизировать состав. Стабилизирующее вещество нековалентно связано с липидом и присутствут в количествах, которых необходимо для покрытия липида, но недостаточно для повышения вязкости состава.

Другим объектом настоящего изобретения является способ получения изображения внутренних органов пациента. Способ включает (I) введение пациенту липидной композиции, содержащей распределенные в среде водного носителя липид, газ или предшественник газа, и вещество, способное стабилизировать композицию, при этом стабилизирующее вещество нековалентно связано с липидом и присутствут в количествах, которых необходимо для покрытия липида, но недостаточно для повышения вязкости композиции; и (II) сканирование пациента с использованием ультразвука с получением визуального изображения внутренних органов.

Объектом настоящего изобретения является далее еще один способ получения изображения внутренних органов пациента. Способ включает (I) введение пациенту везикулярной композиции, включающей распределенные в среде водного носителя везикулы, состоящие из липида, газа или предшественника газа и вещества, способного стабилизировать композицию, при этом стабилизирующее вещество нековалентно связано с липидом и присутствут в количествах, которых необходимо для покрытия липида, но недостаточно для повышения вязкости композиции; и (II) сканирование пациента с использованием ультразвука с получением визуального изображения внутренних органов пациента.

Еще один объект настоящего изобретения относится к способу диагностики патологических изменений тканей у пациента. Способ включает (I) введение пациенту липидной композиции, которая содержит распределенные в среде водного носителя липид, газ или предшественник газа и вещество, способное стабилизировать композицию, при этом стабилизирующее вещество нековалентно связано с липидом и присутствут в количествах, которых необходимо для покрытия липида, но недостаточно для повышения вязкости композиции; и (II) сканирование пациента с использованием ультразвука с получением визуального изображения патологических изменений тканей у пациента.

Еще один объект настоящего изобретения относится к способу диагностики патологических изменений тканей у пациента. Способ включает (I) введение пациенту везикулярной композиции, которая содержит распределенные в водном носителе везикулы, состоящие из липида, газа или предшественника газа и вещества, способного стабилизировать композицию, при этом стабилизирующее вещество нековалентно связано с липидом и присутствует в количествах, которых достаточно для покрытия липида, но недостаточно для повышения вязкости композиции; и (II) сканирование пациента с использованием ультразвука для получения визуального изображения патологических изменений тканей у пациента.

Настоящее изобретение относится также к способу доставки биоактивных агентов в условиях in vivo в терапевтических целях. Способ включает введение пациенту терапевтически эффективного количества состава, содержащего в комбинации с биоактивным агентом липидную композицию, которая состоит из липида и вещества, стабилизирующего композицию. Стабилизирующее вещество нековалентно связано с липидом и присутствут в количествах, которых. достаточно для покрытия липида, но недостаточно для повышения вязкости композиции.

Эти и другие объекты настоящего изобретения более подробно представлены ниже в описании и формуле изобретения.

Подробное описание изобретения Термины, использованные выше и применяемые далее в описании, имеют следующие значения, если не указано иное.

"Липид" относится к синтетическому или природному амфипатическому соединению, которое состоит из гидрофильного и гидрофобного компонентов. Липиды включают, например, жирные кислоты, нейтральные жиры, фосфатиды, гликолипиды, алифатические спирты и воск, терпены и стероиды.

"Липидная композиция" относится к композиции, которая включает смесь липидных соединений. Примеры липидных композиций могут включать суспензии, эмульсии и везикулярные композиции.

"Липидный состав" относится к композиции, включающей липидное соединение и биоактивный агент.

"Везикула" относится к сферическим образованиям, характеризующимся наличием у них внутреннего объема. Везикулы предпочтительно формируются из липидов, включая различные липиды, представленные в описании настоящего изобретения. В конкретной везикуле липиды могут находиться в форме монослоя или бислоя, и эти моно- или бислойные липиды могут в свою очередь формировать один или более моно- или бислоев. В случае когда присутствует более одного моно- или бислоя, моно- или бислои расположены концентрично. Липидные везикулы по изобретению представляют собой такие образования, которые обычно относят к липосомам, мицеллам, пузырькам, микропузырькам, микросферам и другим им подобным образованиям. Таким образом, липиды могут быть использованы для создания моноламеллярной везикулы (состоящей из одного моно- или бислоя), олиголамеллярной везикулы (содержащей два или около трех монослоев или бислоев) или мультиламеллярной везикулы (состоящей из более чем трех монослоев или бислоев). Внутренний объем везикул может быть заполнен жидкостью, включая, например, водную среду, газом, предшественником газа и/или твердым или растворенным материалом, включая, например, биоактивный агент, если это целесообразно.

"Везикулярная композиция" относится к композиции, которая включает везикулы, состоящие из липидов.

"Везикулярный состав" относится к композиции, состоящей из везикул и биоактивного агента.

Термин "липосомы" относится обычно к сферическим кластерам или агрегатам амфипатических соединений, включающим липидные соединения, как правило, в форме одного или более концентрических замкнутых слоев, например бислоев. Они также могут обозначаться в описании как липидные везикулы.

"Пациент" относится к животным, включая млекопитающих, предпочтительно к людям.

"Биоактивный агент" относится к соединению, которое используют в целях диагностики или лечения, например в способах диагностики заболевания у пациента и/или в способах лечения заболевания пациента. В контексте данного описания "биоактивный агент" относится также к соединению, которое способно вызвать биологический эффект в условиях in vitro и/или in vivo. Биоактивный агент может быть нейтральным, положительно или отрицательно заряженным. Примеры приемлемых биоактивных агентов включают диагностические агенты, фармацевтические препараты, лекарства, синтетические органические молекулы, протеины, пептиды, витамины, стероиды и генетический материал, включая нуклеозиды, нуклеотиды и полинуклеотиды.

"Диагностический агент" относится к любому агенту, который используют в способах диагностики заболевания у пациента. Примеры диагностических агентов могут включать контрастные вещества для использования в диагностических методах, связанных с ультразвуковой, ядерной магнитной резонансной визуализацией изображения или компьютерной томографией пациента.

"Генетический материал" относится обычно к нуклеотидам и полинуклеотидам, включая дезоксирибонуклеиновую кислоту (ДНК) и рибонуклеиновую кислоту (РНК). Генетический материал может быть получен методами синтетической химии, общеизвестными специалистам в данной области техники, или с использованием рекомбинантной методики либо сочетанием этих двух подходов. Молекулы ДНК и РНК могут также включать нуклеотиды неприродного происхождения и могут иметь однонитевую или двунитевую форму. "Генетический материал" относится также к смысловым и антисмысловым ДНК и РНК, которые в свою очередь являются нуклеотидными последовательностями, комплиментарными к специфическим последовательностям нуклеотидов в ДНК и/или РНК.

"Фармацевтические препараты" или "лекарства" относятся к любому лечебному или профилактическому агенту, который используется для воздействия (включая предотвращение, диагностику, облегчение состояния или лечение) на болезнь, недуг, поражение или ранение пациента. Используемые в терапевтических целях протеины, полипептиды и полинуклеотиды включены в общее понятие термина фармацевтические препараты и лекарства.

"Стабилизирующее вещество" относится к веществу, которое является биосовместимым и которое способно вызывать формирование везикул и липидных композиций. В контексте данного описания "стабилизирующее вещество" относится также к веществу, которое является биосовместимым и которое способно улучшить стабильность везикул. В определенных предпочтительных вариантах стабилизирующее вещество представляет собой полимер. В контексте данного описания понятие "полимер" относится к молекулам, образованным путем химического объединения двух или более повторяющихся звеньев. Соответственно в понятие "полимер" включаются, например, димеры, тримеры и олигомеры. В других определенных предпочтительных вариантах стабилизирующее вещество включает неполимерный материал, в том числе, например, мономерные молекулы. Понятие "стабилизирующее вещество" включает также присутствие биоактивных агентов. Стабилизирущее вещество может быть нейтральным или положительно или отрицательно заряженным. Предпочтительным среди нейтральных стабилизирующих веществ являются полярные соединения.

"Стабильность везикул" относится к способности газонаполненных везикул удерживать захваченный ими газ после воздействия на них давления около 300 мм рт. ст. в течение около одной минуты. Стабильность везикул измеряется в процентах (%), представляя собой соотношение между количеством газа, которое было исходно заключено в везикуле и которое осталось в ней после снятия давления. Понятие стабильность везикул включает также представление об "эластичности везикул", т. е. способности везикул возвращаться к исходному размеру после снятия давления.

"Вязкость" относится к внутреннему трению жидкости, которое определяют с использованием стандартных приборов для измерения вязкости, например, вискозиметра.

"Увелечение вязкости" относится к повышению вязкости на величину, превышающую примерно 20%.

"Нековалентная связь" относится к межмолекулярному взаимодействию между двумя или более отдельными молекулами без образования ковалентной связи. Межмолекулярное взаимодействие зависит от многих параметров, включая, например, полярность взаимодействующих молекул, заряд (положительный или отрицательный), если он возникает у взаимодействующих молекул, и т.п. Нековалентная связь предпочтительно относится к ионному взаимодействию, диполь-дипольному взаимодействию, силам ван-дер-Ваальса и их сочетаниям.

"Ионное взаимодействие" относится к межмолекулярному взаимодействию между двумя или более молекулами, каждая из которых заряжена положительно или отрицательно. Таким образом, "ионное взаимодействие" относится, например, к притяжению между первой положительно заряженной молекулой и второй отрицательно заряженной молекулой. Примеры ионных взаимодействий включают, например, притяжение между отрицательно заряженным стабилизирующим веществом, например генетическим материалом, и положительно заряженным липидом, например такой катиноной формой липида, как бромид лауроилтриметиламмония.

"Диполь-дипольное взаимодействие" обычно относится к притяжению, которое возникает между двумя или более полярными молекулами. Например, "диполь-дипольное взаимодействие" относится к притяжению положительного заряженного конца первой полярной молекулы к отрицательно заряженному концу второй полярной молекулы. В качестве примера диполь-дипольного взаимодействия может быть рассмотрено притяжение между электроположительной полярной группировкой ("головкой"), например, "головкой" холина в молекуле фосфатидилхолина и электроотрицательным атомом, например таким гетероатомом, как кислород, азот или сера, который присутствует в стабилизирующем веществе, например полисахариде. "Диполь-дипольное взаимодействие" относится также к внутримолекулярной водородной связи, в которой атом водорода служит мостиком между электроотрицательными атомами отдельных молекул, к одной из которых атом водорода присоединен ковалентной связью, а со второй связан электростатическими силами.

"Силы ван-дер-Ваальса" относятся к силам взаимодействия между неполярными молекулами, и эти силы рассчитываются по правилам квантовой механики. Силы ван-дер-Ваальса обычно связывают со взаимодействием дипольных моментов, которые индуцируются соседними молекулами и связаны с изменением плотности распределения электронов.

Термин "в сочетании с" относится к встраиванию биоактивного агента в липидную композицию в соответствии с настоящим изобретением. Биоактивный агент может сочетаться с липидной композицией любым возможным способом. Например, когда липидная композиция представлена в виде везикулярной композиции, биоактивный агент может быть заключен внутри объема везикулы. Биоактивный агент может быть также интегрирован с слоем(ями) или стенкой(ами) везикулы, например, путем распределения между молекулами липидов, которые содержатся внутри везикулярного слоя(ев) или стенки(ок). Кроме того, можно отметить, что биоактивный агент может располагаться на поверхности везикулы. В этом случае биоактивный агент может вступать в химическое взаимодействие на поверхности везикулы, оставаясь при этом по существу в адгезированном состоянии. Такое взаимодействие может принять форму, например, нековалентной связи. В определенных вариантах такое взаимодействие может приводить к стабилизации везикулы.

Термины "покрытие" и "осуществлять покрытие" относятся к взаимодействию стабилизирующих веществ с липидами и/или везикулами и включают нековалентные взаимодействия.

Настоящее изобретение направлено, в частности, на стабилизацию липидной композиции. Липидная композиция включает распределенные в водном носителе липиды и вещество, способное обеспечивать стабилизацию композиции. Стабилизирующее вещество нековалентно связывается с липидом и присутствует в композиции в количестве, достаточном для покрытия липида, но недостаточном для увеличения вязкости композиции.

Неожиданно было обнаружено, что в сочетании с липидными соединениями предлагаемые стабилизирующие вещества способны вызывать образование везикул. Кроме того, оказалось неожиданным, что стабилизирующие вещества способны улучшить также стабильность образованных везикул. В отличие от известного уровня техники в области стабилизации липидных композиций предлагаемые способы и композиции содержат стабилизирующие вещества, которые нековалентно связываются с липидами. Таким образом, согласно изобретению предлагается простой и эффективный способ стабилизации липидных композиций, прежде всего везикулярных композиций.

В предлагаемых композициях могут использоваться разнообразные липидные соединения. Предпочтительными липидными соединениями являются те, которые в сочетании с предлагаемыми стабилизирующими веществами имеют тенденцию образовывать везикулы. Приемлемые липиды включают, например, фосфолипиды, такие как фосфатидилхолины как с насыщенными, так и с ненасыщенными остатками жирных кислот, включая диолеоилфосфатидилхолин; димиристоилфосфатидилхолин; дипальмитоилфосфатидилхолин; дистеароилфосфатидилхолин; фосфатидилэтаноламины, такие как дипальмитоилфосфатидилэтаноламин, диолеоилфосфатидилэтаноламин, N-сукцинилдиолеоилфосфатидилэтаноламин и 1-гексадецил-2-пальмитоилглицерофосфоэтаноламин; фосфатидилсерин; фосфатидилглицерин; сфинголипиды; гликолипиды, такие как ганглиозид GM1; глюколипиды; сульфатиды; гликосфинголипиды; фосфатидовые кислоты, такие как дипальмитолилфосфатидовая кислота; пальмитиновая кислота; стеариновая кислота; арахидоновая кислота; олеиновая кислота; липиды, несущие полимеры, такие как полиэтиленгликоль или поливинилпирро-лидон; холестерин и гемисукцинат холестерина; 12-(((7'-диэтиламинокумарин-3-ил)карбонил)метиламино) октадекановая кислота; N-[12-(((7'-диэтиламино-кумарин-3-ил)карбонил)метиламино)октадеканоил] -2-аминопальмитиновая кислота; холестерин-4'-триметиламинобутаноат; 1,2-диолеоил-sn-глицерин; 1,2-дипальмитоил-sn-3-сукцинилглицерин; 1,3-дипальмитоил-2-сукцинилглицерин; и пальмитоилгомоцистеин.

Приемлемые липидные соединения включают также липиды, используемые для создания смешанных мицеллярных систем, такие как бромид лаурилтриметиламмония; бромид цетилтриметиламмония; бромид миристилтриметиламмония; хлорид алкилдиметилбензиламмония (где алкил представляет собой, например, С₁₂-, С₁₄- или С₁₅алкил); бромид/хлорид бензилдиметилдодециламмония; бромид/хдорид бензилдиметилгексадециламмония; бромид/хлорид бензилдиметилтетрадециламмония; бромид/хлорид цетилдиметилэтиламмония и бромид/хлорид цетилпиридиния.

Приемлемые липиды для использования в имеющихся композициях также включают липиды, несущие заряд, например, анионные или катионные липиды. Примеры катионных липидов могут включать, например, хлорид N- [1-2,3-диолеоилокси)пропил]-N,N,N-триметиламмония (ДОТМА), диолеоилокси-3-(триметиламмоний)пропан (ДОТПА) и 1,2-диолеоилокси-е-(4'-триметиламмоний) бутаноил-sn-глицерин.

В дополнение к описанным выше липидным соединениям или вместо них представленные липидные композиции могут включать алифатические карбоновые кислоты, например жирные кислоты. Предпочтительно жирные кислоты должны иметь от 5 до 22 атомов углерода в алифатической цепи, которая может быть линейной или разветвленной. Примерами насыщенных жирных кислот являются (изо)лауриновая, (изо)миристиновая, (изо)пальмитиновая и (изо)стеариновая кислоты. В качестве примеров ненасыщенных жирных кислот можно назвать лауролеиновую, физетериновую, миристолеиновую, пальмитолеиновую, петрозелиновую и олеиновую кислоту. Приемлемые жирные кисоты могут также включать, например, жирные кислоты, в которых алифатическая группа представлена изопреноидной или пренильной группами. Кроме того, углеводы, содержащие полимерные участки, также могут быть использованы в представленных композициях липидов. Углеводы, содержащие липиды, описаны, например, в патенте США 4310505, который полностью включен в настоящее описание в качестве ссылки.

Другие липидные соединения, применяемые в представленных липидных композициях в дополнение к приведенным выше примерам, рассмотрены в приведенном ниже описании. При выборе липидов для создания липидных композиций предпочтительно исходить из необходимости проводить оптимизацию требуемых свойств таких композиций, включая стабильность сыворотки и время жизни плазмы крови. Выбор приемлемых липидов для приготовления липидных композиций в дополнение к приведенным выше примерам липидов известен специалистам в данной области техники, основываясь на материалах настоящего изобретения.

Концентрация липидов в представленных липидных композициях может варьироваться и зависит от различных факторов, включая, например, природу конкретных липидов и стабилизирующих веществ, которые применяются в композициях. Неожиданно было обнаружено, что благодаря включению стабилизирующих веществ по изобретению везикулы образуются при существенно более низких концентрациях липидов. Это является большим преимуществом, поскольку уменьшается количество липидных соединений, которые вводятся пациенту. Кроме того, снижаются затраты, связанные с производством представленных липидных композиций, поскольку уменьшается количество необходимых используемых исходных материалов, таких как липиды. В случае таких везикулярных композиций, как липосомы и мицеллы, было обнаружено, что стабильные везикулы образуются даже в том случае, когда они содержат только один бислой или монослой. В общем случае концентрация липидов в представленных липидных композициях находится в пределах от около 0,001 до около 200 мг/мл, при этом предпочтительным является диапазон концентраций от около 0,01 до около 20 мг/мл. Более предпочтительной можно считать концентрацию липидов в диапазоне от около 0,05 до около 10 мг/мл, а концентрации от около 0,1 до около 5 мг/мл являются наиболее предпочтительными.

В соответствии с настоящим изобретением липидные композиции содержат также стабилизирующие вещества. Неожиданно было обнаружено, что стабилизирующие вещества, определение которых приведено выше, способны вызывать образование везикул в липидной композиции. Таким образом, при объединении стабилизирующих веществ с липидными соединениями в соответствии со способом по изобретению липидные соединения претерпевали заданную агрегацию и образовывали везикулы. Как отмечалось ранее, концентрация везикул представляется важной в отношении эффективности контрастного материала, основанного на везикулах. При объединении с липидными соединениями представленные стабилизирующие вещества вызывают формирование везикул в концентрациях, соответствующих эффективным концентрациям контрастных агентов. Предпочтительно, чтобы представленные стабилизирующие вещества вызывали в липидных композициях образование везикул в концентрациях более примерно 1х10⁸ везикул/мл. Более предпочтительно, когда представле