Пуриновые l-нуклеозиды, их аналоги и применение

Пуриновые l-нуклеозиды, их аналоги и применение

Реферат

 

Изобретение относится к производному пуринового L-нуклеозида формулы (I), где R₁, R₂', R₃' и R₄ - Н; R₂, R₃ и R₅ - ОН; Z₁ - N; Z₂ выбран из N и СН; Z₃ - из -NR-, -С(R)₂, -S-, где R, одинаковые или разные, выбраны из Н, Br, NH₂, алкила и алкенила; Z₄ выбран из -С=O, -NR-, -C(R)₂-, где R, одинаковые или разные, выбраны из Н и Br; Z₅ - N; Х выбран из Н, ОН, SH, -SNH₂, -S(O)NH₂, -S(O)₂NH₂; Y - из Н и NН₂; W - О, и когда Y представляет собой NH₂, тогда Z₃ не представляет собой -S-. Также описана фармацевтическая композиция, содержащая соединения по изобретению. Предложенные соединения и композиции на их основе обладают иммуномодулирующей активностью. 2 с. и 6 з. п. ф-лы, 7 ил.

Область изобретения Настоящая заявка относится к области L-нуклеозидов.

Предпосылки изобретения В последние несколько десятилетий значительные усилия были направлены на исследование возможных применений аналогов D-нуклеозидов в качестве противовирусных агентов. Некоторые из этих работ принесли результаты, и в настоящее время на рынок в качестве противовирусных лекарств поступило множество аналогов нуклеозидов, включая ингибиторы обратной транскриптазы ВИЧ (AZT, ddl, ddC, d4T и 3ТС).

Разнообразные аналоги пуриновых D-нуклеозидов были также исследованы в поисках иммуномодуляторов. Например, было показано, что аналоги гуанозина с заместителями в положении 7 и/или 8 стимулируют иммунную систему (обзоры см. в Weigle, W. O. CRC Crit. Rev. Immunol. 1987, 7, 285; Lin et al., J. Med. Chem. 1985, 28, 1194-1198; Reitz et al., J. Med. Chem. 1994, 37, 3561-3578, Michael et al., J. Med. Chem. 1993. 36, 3431-3436). Некоторые 3--D-рибофуранозилтиазоло[4,5-d]пиримидины также продемонстрировали значительную активность в отношении иммунных реакций, включая пролиферацию клеток селезенки мыши и активность in vivo против вируса Semliki Forest (Nagahara et al., J. Med. Chem 1990, 33, 407-415; Robins et al., патент США 5041426). В других исследованиях было показано, что 7-деазагуанозин и аналоги проявляют противовирусную активность у мышей против множества разных РНК-содержащих вирусов, хотя это соединение не проявляет противовирусных свойств в культуре клеток. 3-Деазагуаниновые нуклеозиды и нуклеотиды также продемонстрировали широкий спектр противовирусной активности против некоторых ДНК- и РНК-содержащих вирусов (Revankar et al., J. Med. Chem 1984, 27, 1389-1396). Определенные 7- и 9-деазагуаниновые С-нуклеозиды проявляют способность защищать мышей от летального инфицирования вирусом Semliki Forest (Girgis et al., J. Med. Chem. 1990, 33, 2750-2755). Определенные 6-сульфенамидные и 6-сульфинамидные пуриновые нуклеозиды продемонстрировали значительную противоопухолевую активность (Robins et al. Патент США 4328336). Некоторые пиримидо[5,4-D] пиримидиновые нуклеозиды были эффективны при лечении лимфомы L1210 у мышей BDF1 (Robins et al. Патент США 5041542), и было выдвинуто предположение, что противовирусная и противоопухолевая активность вышеуказанных нуклеозидов является результатом их роли в качестве иммуномодуляторов (Bonnet et al., J. Med. Chem. 1993, 36, 635-653).

Одна из возможных мишеней иммуномодуляции включает в себя стимуляцию или подавление Тh1- и Тh2-лимфокинов. Клетки типа I (Тh1) продуцируют интерлейкин 2 (IL-2), фактор некроза опухолей (TNF) и гамма-интерферон (INF) и они отвечают главным образом за клеточные иммунные реакции, такие как гиперчувствительность замедленного типа и противовирусный иммунитет. Клетки типа II (Тh2) продуцируют интерлейкины IL-4, IL-5, IL-6, IL-9, IL-10 и IL-13 и вовлечены главным образом в ассистирование гуморальным иммунным реакциям, таким как наблюдаемые при реакциях на аллергены, например, переключение изотипов антител IgE и IgG4 (Mosmann, 1989, Annu Rev Immunol, 7:145-173). Показано, что аналоги D-гуанозина производят разные эффекты на лимфокины IL-1, IL-6, INF и TNF (не прямо) in vitro (Goodman, 1988, Int J Immunopharmacol, 10, 579-88) и in vivo (Smee et al., 1991, Antiviral Res 15:229). Однако способность аналогов D-гуанозина, таких как 7-тио-8-оксогуанозин, модулировать цитокины типа I и типа II непосредственно в Т-клетках была слабая или не была описана.

Таким образом, сохраняется необходимость в новых L-нуклеозидных аналогах, включая новые пуриновые L-нуклеозидные аналоги. Имеется особая потребность в новых пуриновых L-нуклеозидах, которые обладают иммуномодулирующей активностью, и особенно в новых пуриновых L-нуклеозидах, которые модулируют Тh1- и Тh2-активность.

Настоящее изобретение направлено на новые соединения пуриновых L-нуклеозидов, их терапевтические применения и синтез.

По одному из аспектов данного изобретения предложены пуриновые L-нуклеозидные аналоги формулы I , (I) где R₁, R'₂, R'₃ и R₄ представляют собой Н; R₂, R₃ и R₅ представляют собой ОН; Z₁ представляет собой N; Z₂ выбран из группы, содержащей N и СН; Z₃ выбран из группы, содержащей -NR-, -C(R)₂-, -S-, где R, одинаковые или разные, выбраны из группы, содержащей Н, Вr, NH₂, алкил и алкенил; Z₄ выбран из группы, содержащей -С=О, -NR-, -C(R)₂-, где R, одинаковые или разные, выбраны из группы, содержащей Н и Вr; Z₅ представляет собой N; химическая связь между Z₃ и Z₄ выбрана из группы, содержащей С-С, С=С, C-N, C=N и C-S; химическая связь между Z₄ и Z₅ выбрана из группы, содержащей C-N, C=N и N-N; Х выбран из группы, содержащей Н, ОН, SH, -SNH₂, -S(О)NH₂, -S(O)₂NH₂; Y выбран из группы, содержащей Н и NH₂; W представляет собой О; и когда Y представляет собой NH₂, тогда Z₃ нe представляет собой -S-.

По другому аспекту данного изобретения фармацевтическая композиция включает в себя терапевтически эффективное количество соединения формулы I или его фармацевтически приемлемого эфира или соли в смеси по меньшей мере с одним фармацевтически приемлемым носителем.

По еще одному аспекту данного изобретения соединение в соответствии с формулами I применяют при лечении любого состояния, которое положительно реагирует на введение этого соединения, в соответствии с любым составом или протоколом, который приводит к достижению положительной реакции. Среди прочего предполагается, что соединения формулы I можно применять для лечения инфекции, инвазии (заражения паразитами), рака, опухоли или другой неоплазмы или аутоиммунного заболевания.

Фиг. 1-6 (схемы 1-6) изображают стадии химического синтеза, которые можно использовать, чтобы синтезировать соединения по настоящему изобретению. Схемы, относящиеся к синтезу определенной композиции, указаны в примерах, приведенных здесь далее.

Фиг. 7 представляет собой графическое изображение действия приведенных для примера аналогов L-гуанозина на Тh1 и Th2.

При использовании в данном описании нижеследующих терминов, они используются так, как определено ниже.

Термин "нуклеозид" относится к соединению, образованному любой пентозной или модифицированной пентозной группировкой, которая присоединена в определенном положении гетероцикла или в естественном положении пурина (положение 9) или пиримидина (положение 1) или в эквивалентном положении в аналоге.

Термин "нуклеотид" относится к фосфатному эфиру, замещающему нуклеозид в положении 5'.

Термин "гетероцикл" относится к моновалентному насыщенному или ненасыщенному карбоциклическому радикалу, имеющему по меньшей мере один гетероатом, такой как N, О или S, в кольце, каждое доступное положение которого могут возможно и независимо замещать гидрокси, оксо, амино, имино, низший алкил, бромо, хлоро и/или циано. В этот класс заместителей включены пурины, пиримидины.

Термин "пурин" относится к азотсодержащим бициклическим гетероциклам.

Термин "пиримидин" относится к азотсодержащим моноциклическим гетероциклам.

Термин "D-нуклеозиды" при использовании в настоящем изобретении описывает нуклеозидные соединения, которые имеют D-рибозную сахарную группировку (например, аденозин).

Термин "L-нуклеозиды" при использовании в настоящем изобретении описывает нуклеозидные соединения, которые имеют L-рибозную сахарную группировку.

Термин "L-конфигурация" используется в настоящем изобретении, чтобы описывать химическую конфигурацию рибофуранозильной группировки соединений, которая присоединена к нуклеиновым основаниям. L-конфигурация сахарной группировки соединений по данному изобретению отличается от D-конфигурации рибозных сахарных группировок нуклеозидов, встречающихся в природе, таких как цитидин, аденозин, тимидин, гуанозин и уридин.

Термин "С-нуклеозиды" используется в данном описании, чтобы обозначать тип связи, которая образована между рибозной сахарной группировкой и гетероциклическим основанием. В С-нуклеозидах эта связь идет от положения С-1 рибозной сахарной группировки к углероду гетероциклического основания. Связь, которая образуется в N-нуклеозидах, относится к типу углерод-углерод.

Термин "N-нуклеозиды" используется в данном описании, чтобы обозначать тип связи, которая образована между рибозной сахарной группировкой и гетероциклическим основанием. В N-нуклеозидах эта связь идет от положения С-1 рибозной сахарной группировки к азоту гетероциклического основания. Связь, которая образуется в N-нуклеозидах, относится к типу углерод-азот.

Термин "защитная группа" относится к химической группе, которая присоединена к атому кислорода или азота, чтобы предотвращать его дальнейшее реагирование в ходе дериватизации других группировок в молекуле, где расположен этот углерод или азот. Специалистам по органическому синтезу известно широкое разнообразие защитный групп для кислорода и азота.

Термин "низший алкил" относится к метилу, этилу, н-пропилу, изопропилу, н-бутилу, трет-бутилу, изобутилу или н-гексилу. Этот термин также применим к циклическим, разветвленным или простым цепям, содержащим от одного до шести атомов углерода.

Термин "арил" относится к моновалентному ненасыщенному ароматическому карбоциклическому радикалу, имеющему одно кольцо (например, фенил) или два конденсированных кольца (например, нафтил), которые могут быть возможно замещены гидроксилом, низшим алкилом, хлоро и/или циано.

Термин "гетероцикл" относится к моновалентному насыщенному или ненасыщенному карбоциклическому радикалу, имеющему по меньшей мере один гетероатом, такой как N, О, S, Se или Р, в кольце, каждое доступное положение которого могут возможно и независимо замещать или не замещать, например, гидрокси, оксо, амино, имино, низший алкил, бромо, хлоро и/или циано.

Термин "моноциклический" относится к моновалентному насыщенному карбоциклическому радикалу, имеющему по меньшей мере один гетероатом, такой как О, N, S, Se или Р, в кольце, каждое доступное положение которого могут возможно и независимо замещать сахарная группировка или любые другие группы, как то, бромо, хлоро и/или циано, так что эта моноциклическая кольцевая система в конечном счете ароматизируется [например, тимидин, 1-(2'-деокси--D-эритро-пентофуранозил)-тимин].

Термин "иммуномодуляторы" относится к природным или синтетическим продуктам, способным модифицировать нормальную или нарушенную иммунную систему посредством стимуляции или подавления.

Термин "эффективное количество" относится к количеству соединения формулы (I), которое восстанавливает иммунную функцию до нормальных уровней или усиливает иммунную функцию сверх нормальных уровней, чтобы ликвидировать инфекцию.

Соединения формул I и от I-A до I-Е могут иметь по несколько центров асимметрии. Соответственно, их можно получать в любой оптически активной форме или в виде рацемической смеси. Объем данного изобретения, как оно описано и заявлено, охватывает индивидуальные оптические изомеры и их нерацемические смеси, а также рацемические формы соединений формулы I.

Термин "" или "" указывает специфическую стереохимическую конфигурацию заместителя при асимметричном атоме углерода в химической структуре, как она выведена. Соединения, описанные здесь, все находятся в L-фуранозильной конфигурации.

Термин "энантиомеры" относится к паре стереоизомеров, которые представляют собой несовместимые зеркальные образы друг друга. Смесь пары энантиомеров в соотношении 1:1 является "рацемической" смесью.

Термин "изомеры" относится к разным соединениям, имеющим одну формулу. "Стереоизомеры" представляют собой изомеры, которые различаются только пространственным расположением атомов.

"Фармацевтически приемлемые соли" могут быть любыми солями, образованными неорганическими или органическими кислотами или основаниями.

Соединения Соединения по настоящему изобретению в общем описаны формулой I. Однако имеется несколько подгрупп таких соединений, которые представляют особый интерес, включая соединения, соответствующие нижеприведенным формулам от I-A до I-Е.

Соединения формулы I-A представляют собой 8-замещенные L-гуанозиновые аналоги, имеющие структуру в соответствии с формулой: где R₂, R₃ и R₅ представляют собой ОН; Z₂ выбран из группы, содержащей N и СН; Z₄ выбран из группы, содержащей -С=О, -NR-, -C(R)₂-, где R, одинаковые или разные, выбраны из группы, содержащей Н и Вr; и Y выбран из группы, содержащей Н и NH₂.

Соединения формулы I-Б представляют собой 7-замещенные 8-оксо-L-гуанозиновые аналоги, имеющие структуру в соответствии с формулой: , (I-Б) где R₂, R₃ и R₅ представляют собой ОН; Z₂ выбран из группы, содержащей N и СН; Z₃ представляет собой -NR-, где R, одинаковые или разные, выбраны из группы, содержащей Н, Вr, NH₂, алкил и алкенил; Z₄ представляет собой -С=О; химическая связь между Z₃ и Z₄ представляет собой C-N; и Y выбран из группы, содержащей Н и NH₂.

Соединения формулы I-В представляют собой 7-деаза-7,8-моно- или дизамещенные L-гуанозиновые аналоги, имеющие структуру в соответствии с формулой: где R₂, R₃ и R₅ представляют собой ОН; Z₂ выбран из группы, содержащей N и СН; Z₃ представляет собой -C(R)₂-, где R, одинаковые или разные, выбраны из группы, содержащей Н, Br, NH₂, алкил и алкенил; Z₄ представляет собой -C(R)₂-, где R, одинаковые или разные, выбраны из группы, содержащей Н и Br; химическая связь между Z₃ и Z₄ представляет собой С=С; и Y выбран из группы, содержащей Н и NH₂.

Соединения формулы I-Г представляют собой 7-деаза-8-аза-7-замещенные L-гуанозиновые аналоги, имеющие структуру в соответствии с формулой: где R₂, R₃ и R₅ представляют собой ОН; Z₂ выбран из группы, содержащей N и СН; Z₃ представляет собой -C(R)₂-, где R, одинаковые или разные, выбраны из группы, содержащей Н, Вr, NH₂, алкил и алкенил; и Y выбран из группы, содержащей Н и NH₂.

Соединения формулы I-Д представляют собой тиазоло[4,5-d]пиримидиновые L-нуклеозиды, имеющие структуру в соответствии с формулой: где R₂, R₃ и R₅ представляют собой ОН; Z₂ выбран из группы, содержащей N и СН; Z₃ представляет собой -S-; Z₄ представляет собой -С=О; химическая связь между Z₃ и Z₄ представляет собой C-S; и Y выбран из группы, содержащей Н и NH₂.

Соединения формулы I-Е представляют собой -L-пуриновые нуклеозиды, имеющие структуру в соответствии с формулой: где R₂, R₃ и R₅ представляют собой ОН; Z₂ выбран из группы, содержащей N и СН; Z₃ представляет собой -C(R)₂-, где R, одинаковые или разные, выбраны из группы, содержащей Н, Вr, NH₂, алкил и алкенил; Z₅ представляет собой N; и Y выбран из группы, содержащей Н и NH₂.

Применения Предполагается, что соединения формул I, I-А, I-Б, I-В, I-Г, I-Д и I-Е, соединения по настоящему изобретению, будут применяться для лечения разнообразных состояний и, фактически, любого состояния, которое будет положительно реагировать на введение одного или более чем одного из этих соединений. Среди прочего в особенности предполагается, что соединения по данному изобретению можно применять для лечения инфекции, инвазии, рака или опухоли или аутоиммунного заболевания.

Предполагается, что инфекции, которые можно лечить соединениями по настоящему изобретению, включают в себя вызываемые респираторно-синтициальным вирусом (RSV), вирусом гепатита В (HBV), вирусом гепатита С (HCV), вирусами простого герпеса типа 1 и 2, генитального герпеса, генетического кератита, герпетического энцефалита, опоясывающего лишая, вирусом иммунодефицита человека (HIV), вирусом гриппа А, хантавирусом (геморрагическая лихорадка), вирусом папилломы человека (HPV), вирусом кори, а также грибками.

Предполагается, что инвазии, которые можно лечить соединениями по данному изобретению, включают в себя протозойные инвазии, а также заражения гельминтами и другими паразитами.

Предполагается, что рак и опухоли, которые можно лечить, включают в себя вызываемые каким-либо вирусом, а эффект может включать в себя ингибирование трансформации инфицированных вирусом клеток в неопластическое состояние, ингибирование распространения вирусов от трансформированных клеток к другим, нормальным, клеткам и/или остановку роста трансформированных вирусом клеток.

Предполагается, что аутоиммунные и другие болезни, которые можно лечить, включают в себя артрит, псориаз, кишечное заболевание, юношеский диабет, волчанку, рассеянный склероз, подагру и подагрический артрит, ревматоидный артрит, отторжение трансплантата, аллергию и астму.

Другие предположительные применения соединений по настоящему изобретению включают в себя применение в качестве промежуточных соединений химического синтеза других нуклеозидных и нуклеотидных аналогов, которые в свою очередь полезны в качестве терапевтических агентов или для других целей.

По еще одному аспекту способ лечения млекопитающего включает в себя введение терапевтически и/или профилактически эффективного количества фармацевтического препарата, содержащего соединение по настоящему изобретению. В этом аспекте эффект может относиться к модуляции некоторой части иммунной системы млекопитающего, особенно к модуляции профилей Тh1- и Тh2-лимфокинов. Когда происходит модуляция Th1- и Тh2-лимфокинов, предполагается, что такая модуляция может включать в себя стимуляцию как Тh1, так и Th2, подавление как Тh1, так и Th2, стимуляцию одного, либо Тh1, либо Th2 и подавление другого или бимодальную модуляцию, при которой одно воздействие на уровни Тh1/Th2 (такое как генерализованное подавление) происходит при низкой концентрации, тогда как другое воздействие (такое как стимуляция одного, либо Тh1, либо Th2, и подавление другого) происходит при более высокой концентрации.

Вообще, наиболее предпочтительными применениями по настоящему изобретению являются такие, при которых активные соединения соответственно менее цитотоксичны для клеток хозяина, не являющихся клетками-мишенями, и соответственно более активны в отношении мишени. В этом отношении преимущество может состоять в том, что L-нуклеозиды могут быть более стабильными, чем D-нуклеозиды, что может приводить к лучшей фармакокинетике. Этого результата можно достичь, потому что L-нуклеозиды могут не распознаваться ферментами и поэтому могут иметь более длительные периоды полужизни.

Предполагается, что соединения по настоящему изобретению можно будет вводить в любом подходящем фармацевтическом составе и по любому подходящему протоколу. Так, введение может происходить перорально, парентерально (включая методики подкожной, внутривенной, внутримышечной, интрастернальной инъекции или вливания), с помощью ингаляционного аэрозоля, или ректальным или местным образом и так далее, а также в составах стандартной дозировки, содержащих общепринятые нетоксичные фармацевтически приемлемые носители, адъюванты и растворители для введения.

Например, можно предполагать, что соединения по настоящему изобретению можно приготавливать в виде состава в смеси с фармацевтически приемлемым носителем. Например, соединения по настоящему изобретению можно вводить перорально в виде фармакологически приемлемых солей. Поскольку соединения по настоящему изобретению по большей части растворимы в воде, их можно вводить внутривенно в физиологическом солевом растворе (например, забуференном до рН около 7,2-7,5). Для этой цели можно использовать общепринятые буферы, такие как фосфаты, бикарбонаты или цитраты. Разумеется, специалист может модифицировать эти составы в соответствии с требованиями, чтобы получать многочисленные составы для определенного пути введения без того, чтобы делать композиции по настоящему изобретению нестабильными или нарушать их терапевтическую активность. В частности, модификацию данных соединений с целью сделать их более растворимыми в воде или другом растворителе для введения, можно, например, легко осуществить путем минимальных модификаций (образование соли, этерификация и т.д.), что вполне находится в пределах навыков, обычных для данной области. Также не выходя за пределы навыков, обычных для данной области, можно модифицировать пути введения и режимы дозировки определенного соединения, чтобы контролировать фармакокинетику данных соединений для получения максимально полезного эффекта у пациентов.

В определенных фармацевтических лекарственных формах предпочтительны про-лекарственные формы соединений, особенно такие, которые включают в себя ацилированные (ацетилированные и другие) производные, пиридиновые эфиры и различные солевые формы данных соединений. Специалист в данной области может определить, как с легкостью модифицировать данные соединения до про-лекарственных форм, чтобы способствовать доставке активных соединений в целевые участки организма-хозяина или пациента. При наличии навыков, обычных в данной области, можно пользоваться преимуществами благоприятных фармакокинетических параметров про-лекарственных форм, в случаях их применимости, для доставки данных соединений в целевые участки в организме-хозяине или в пациенте, чтобы максимизировать желаемые эффекты соединения.

В дополнение, соединения па данному изобретению можно вводить отдельно или в комбинации с другими агентами для лечения вышеуказанных инфекций или состояний. Способы комбинированной терапии по данному изобретению включают в себя введение по меньшей мере одного соединения по настоящему изобретению или функционального производного такого соединения и по меньшей мере одного другого фармацевтически активного ингредиента. Активный(е) ингиредиент(ы) и фармацевтически активные агенты можно вводить по отдельности или совместно и при введении по отдельности это может происходить одновременно или порознь в любом порядке. Количество активных(ого) ингредиентов(а) и фармацевтически активных(ого) агентов(а) и относительный временной порядок введения выбирают, чтобы достичь желаемого комбинированного терапевтического эффекта. Комбинированная терапия предпочтительно включает в себя введение одного соединения по настоящему изобретению или физиологически активного производного этого соединения и одного из агентов, упомянутых здесь ниже.

Примеры таких дополнительных терапевтических агентов включают в себя агенты, которые эффективны для модулирования иммунной системы или связанных состояний, такие как AZT, 3ТС, аналоги 8-замещенного гуанозина, 2',3'-дидеоксинуклеозиды, интерлейкин II, интерфероны, такие как -интерферон, тукаресол, левамизол, изопринозин и циклолигнаны. Определенные соединения по настоящему изобретению могут быть эффективными для усиления биологической активности определенных агентов по настоящему изобретению путем снижения метаболизма или инактивации других соединений и как таковые они подлежат введению совместно с последними для достижения этого желаемого эффекта.

Что касается дозировки, то обычному специалисту в данной области понятно, что терапевтически эффективное количество варьирует в зависимости от инфекции или состояния, которые подлежат лечению, от тяжести заболевания, от применяемого режима лечения, от фармакокинетики используемого агента, также как от пациента (животного или человека), который подлежит лечению. Эффективные дозировки могут быть в пределах от 1 мг/кг веса тела или меньше до 25 мг/кг веса тела или больше. В общем, терапевтически эффективное количество данного соединения в лекарственной форме обычно находится в пределах от чуть меньше примерно 1 мг/кг до примерно 25 мг/кг веса пациента, в зависимости от используемого соединения, состояния или инфекции, которое лечится, и пути введения. Такие пределы дозировки обычно создают эффективные концентрации активного компонента в крови, находящиеся в диапазоне от примерно 0,04 до примерно 100 мкг/с³ крови пациента. Однако предполагается, что будет разработан эффективный режим, предусматривающий введение небольшого количества с последующим увеличением количества до тех пор, пока либо побочные эффекты не станут чрезмерно нежелательными, либо не будет достигнут желаемый эффект.

Введение активного соединения можно варьировать в диапазоне от непрерывного (внутривенная капельница) до нескольких пероральных введений в день (например, 4 раза в день), и оно может включать в себя пероральное, местное, парентеральное, внутримышечное, внутривенное, подкожное, чрезкожное (что может включать в себя применение агента, способствующего проникновению), трансбуккальное и суппозиторное введение, наряду с другими путями введения.

Для приготовления фармацевтических композиций по настоящему изобретению терапевтически эффективное количество одного или более чем одного соединения по настоящему изобретению предпочтительно смешивать до однородности с фармацевтически приемлемым носителем в соответствии с общепринятыми фармацевтическими методиками для смешивания, чтобы получить дозу. Носитель может принимать широкое разнообразие форм в зависимости от формы препарата, желательной для ведения, например перорального или парентерального. При приготовлении фармацевтических композиций в пероральной лекарственной форме можно использовать любую из обычных фармацевтических сред. Так, для жидких пероральных препаратов, таких как суспензии, эликсиры и растворы, можно использовать подходящие носители и добавки, включая воду, гликоли, масла, спирты, корригенты, консерванты, красители и тому подобное. Для твердых пероральных препаратов, таких как порошки, таблетки, капсулы, и для твердых препаратов, таких как суппозитории, можно использовать подходящие носители и добавки, включая крахмалы, сахарные носители, такие как декстроза, маннит, лактоза и родственные носители, разбавители, гранулирующие агенты, смазывающие вещества, связывающие вещества, разрыхлители и тому подобное. При желании таблетки или капсулы можно с помощью стандартных методик покрывать энтеросолюбильной оболочкой или изготавливать как препараты для непрерывного высвобождения.

Составы для парентерального введения обычно включают в себя стерильную воду или водный раствор хлорида натрия, хотя можно включать в него другие ингредиенты, в том числе такие, которые помогают диспергированию. Разумеется, когда надо использовать стерильную воду и поддерживать ее стерильность, композиции и носители также надо стерилизовать. Также можно готовить инъецируемые суспензии, в каковом случае можно применять подходящие жидкие носители, суспендирующие агенты и тому подобное.

Результаты тестирования Тесты in vitro проводили с девятью L-гуанозиновыми соединениями, результаты описаны ниже. Этими девятью соединениями были следующие: 17316 8-меркапто-L-гуанозин 17317 2-амино-9--L-рибофуранозилпурин-6-сульфенамид 17318 2-амино-9--L-рибофуранозилпурин-6-сульфинамид 17319 2-амино-9--L-рибофуранозилпурин-6-сульфонамид 17320 7-деаза-8-аза--L-гуанозин 17321 7-деаза-8-аза-7-амино--L-гуанозин 17322 7-деаза-8-аза-7-бром--L-гуанозин 17323 5-амино-3--L-рибофуранозилтиазоло[4,5-d]пиримидин-2,7(6Н)-дион 34 17324 8-аллилокси--L-гуанозин Мононуклеарные клетки периферической крови (МКПК) выделяли из светлого слоя после центрифугирования 60 мл крови здоровых доноров в градиенте плотности Ficoll-Hypaque. Затем из МКПК выделяли Т-клетки, используя Lymphokwik, реагент для выделения лимфоцитов, специфичный для Т-клеток (LK-25T, One Lambda, Canoga Park CA). Затем полученные при среднем выходе 40-6010⁶ Т-клетки инкубировали в течение ночи при 37^oC в 20-30 мл среды RPMI-AP5 (среда RPMI-1640, ICN, Costa Mesa, Ca), содержащей 20 мМ буфер HEPES (рН 7,4), 5% аутологичной плазмы, 1% L-глутамина, 1% пенициллина/стрептомицина и 0,05% 2-меркаптоэтанола для удаления любых примесных прилипающих клеток. Во всех экспериментах промывали Т-клетки средой RPMI-AP5, а затем высевали их на микротитровальные планшеты с 96 лунками при концентрации клеток 110⁶ клеток/мл.

Эти Т-клетки активировали добавлением 500 нг иономицина и 10 нг 12-миристата, 13-ацетата форбола (МАФ) (Calbiochem, La Jolla, Ca) и инкубировали в течение 48-72 ч при 37^oС. Т-клетки, активированные иономицином и МАФ, обрабатывали тестируемым L-гуанозином в концентрации 0,5-50 мкМ или контрольным противовирусным интерфероном-альфа (Accurate, Westbury, NY) в концентрации 250-10000 ед./мл немедленно после активации и еще раз через 24 ч. Т-клетки с каждого планшета использовали для анализа методом иммунофлюоресценции, а супернатант использовали для определения внеклеточных цитокинов. После активации 900 мкл супернатанта от клеток с каждого микропланшета переносили на другой микропланшет для анализа продукции произведенных клетками цитокинов. Клетки затем использовали для иммунофлюоресцентного анализа уровней внутриклеточных цитокинов и экспрессии рецепторов к цитокинам.

Концентрации произведенных клетками цитокинов определяли в супернатантах от клеток с каждого микропланшета. Вызванные активацией изменения уровней интерлейкина-2 (IL-2) определяли с использованием имеющихся в продаже наборов для твердофазного иммуноферментного анализа (R&D systems Quantikine kit, Minneapolis, MN) или биологическим методом с использованием зависимой от IL-2 клеточной линии CTLL-2 (АТСС, Rockville, MD). Вызванные активацией изменения уровней интерлейкина-4 (IL-4), фактора некроза опухолей (TNF), интерлейкина-8 (IL-8) (R&D systems Quantikine kit, Minneapolis, MN) и интерферона-гамма (INF-) (Endogen, Cambridge, MA) определяли с использованием наборов для иммуноферментного анализа ELISA. Все результаты иммуноферментного анализа выражали в пг/мл, а результаты биологического определения с CTLL-2 выражали в импульсах в минуту, что отражало зависимое от IL-2 включение ³H-тимидина (ICN, Costa Mesa, CA) клетками CTLL-2.

Результаты для каждого из девяти L-гуанозиновых аналогов по уровням IL-2, TNF,INF-, IL-4 и IL-5 представлены на фиг. 7.

Синтез Соединения по настоящему изобретению можно производить в соответствии со способами синтеза, сведения о каждом из которых могут быть легко получены обычными специалистами в данной области. В общем, соединения по настоящему изобретению синтезируют конденсацией подходящего нуклеозидного основания с необходимым сахарным синтоном с получением защищенного L-нуклеозида, что при дальнейших манипуляциях и снятии защиты с защищенных гидроксильных групп сахара в конечном счете дает нуклеозидный аналог, имеющий желаемую рибофуранозильную группировку в L-конфигурации.

Схема 1 показывает синтез определенных 7- и 8-замещенных L-гуанозиновых аналогов L-рибозу 1 метилировали по С-1 и полученный продукт 2 бензоилировали с получением соединения 3, которое превращали в 4 обработкой уксусным ангидридом в присутствии серной кислоты. Взаимодействие 4 и силилированного N²-ацетилгуанина в присутствии триметилсилилтрифлата дало соединение 5 в соответствии с обычно используемой процедурой (Vorbruggen et al. Chem. Ber., 1981, 14, 1234). 5 превращали в 6 с помощью аммиака в метаноле. Бромирование 5 дало 8-бром-производное 7, которое превращали в 8-аллилокси-производное 8 обработкой аллиловым спиртом и гидридом натрия. 8 нагревали в смеси воды с метанолом, что приводило к получению 7-аллил-8-оксо-производного 9, которое гидрогенизировали с получением 7-пропил-8-оксо-L-гуанозина 10.

Схема 2 показывает синтез N²-ацетил-3-деаза-L-гуанозина. 3-Деазагуанозин 11 (Cook et at. J. Med. Chem. 1976, 27, 1389) обрабатывали уксусным ангидридом в пиридине с получением N²-ацетил-3-деазагуанина 12, который силилировали и сочетали с 1-ацетил-2,3,5-O-трибензоил-L-рибозой с получением соединения 13. Удаление бензоильной группы с помощью аммиака в метаноле дало N²-ацетил-3-деаза-L-гуанозин 14.

Схема 3 показывает синтез 6-меркапто-L-гуанозина и его производных. N²-Ацетил-2', 3', 5'-О-трибензоил--L-гуанозин 5 обработкой пентасульфидом фосфора (Fox et al., J. Am. Chem. Soc. 1958, 80, 1669) превращали в 6-меркапто-производное 15, с которого снимали защиту с получением 6-меркапто--L-гуанозина 16. Сульфенамидное производное 17 получали в реакции 16 с NH₂-Cl, генерируемым in situ. Сульфенамид 17 окисляли с помощью МСРВА (4-(2-метил-4-хлорфенокси)-масляной кислоты) до сульфинамида 18 и сульфонамида 19, контролируя количество реагента (Revankar et al., J. Med. Chem. 1990, 33, 121).

Схема 4 показывает синтез 1--L-рибофуранозилпиразоло[3,4-d]пиримидин-4(5Н)-она и производных. Имеющийся в продаже 4-гидроксипиразоло[3,4-d]пиримидин 20 сочетали с защищенной L-рибозой, получая защищенный нуклеозид 21, с которого снимали защиту с получением 1--L-рибофуранозилпиразоло[3,4-d]пиримидин-4(5Н)-она 22. Аналогичным образом 3-бром-4-гидроксипиразоло[3,4-d]пиримидин 23 (Cottam et al., J. Med. Chem. 1984, 27, 1119) сочетали с L-рибозой, получая защищенный нуклеозид 24, с которого снимали защиту с получением 3-бром-1--L-рибофуранозилпиразоло[3,4-d] пиримидин-4(5Н)-она 25. Обработка 24 аммиаком в присутствии меди и хлорида меди при 100^oС дала 3-амино-производное 26.

Схема 5 показывает синтез 8-аза-7-деаза-L-гуанозиновых аналогов. 3,6-Дибромпиразоло[3,4-d]пиримидин-4(5Н)-он 27 (Petrie III et al., J. Med. Chem. 1985, 28, 1010) сочетали с защищенной L-рибозой с получением нуклеозида 28, который обрабатывали аммиаком с получением 8-аза-3-бром-7-деаза--L-гуанозина 29. Обработка 28 аммиаком при 120^oС дала 3-амино-производное 30. Гидрогенизирование 29 над Pd/C дало 8-аза-7-деаза--L-гуанозин 31.

Схема 6 показывает синтез 5-амино-3--L-рибофуранозилтиазоло[4,5-d]пиримидин-2,7(6Н)-диона и его аналогов. 5-Аминотиазоло[4,5-d]пиримидин-2,7(3H, 6Н)-дион 32 (Baker et al., J. Chem. Soc. С 1970, 2478) сочетали с незащищенной рибозой, получая нуклеозид 33, с которого снимали защиту с получением 5-амино-3--L-рибофуранозилтиазоло[4,5-d] пиримидин-2,7(6Н)-диона 34. Соединение 33 можно защитить нитроэтоксифенильной группой, а затем обработать бутилнитритом и фтористым водородом в пиридине с получением фторпроизводного 35. Обработка 33 трет-бутилнитритом (Nagahara et al., J. Med. Chem. 1990, 33, 407) в тетрагидрофуране может заменить аминогруппу водородом с получением 36.

3-Деаза-L-гуанозина может быть получен посредством силилирования метил-5-цианометилимидазол-4-карбоксилата и его взаимодействия с 1-О-ацетил-2', 3',5'-О-трибензоил-L-рибофуранозой 4, с последующей циклизацией и бромированием.

Соединения, описанные в схемах 1-6, представляют собой -L-гуанозиновые аналоги. Соответствующие -L-аналоги можно получить аналогичным образом, но используя L-рибозу, имеющую другие защитные группы. 1-Ацетил-2,3,5-О-трибензоил-L-рибофуранозу в качестве реагента можно заменит