Новые производные бензоксазиндиона и лекарственный препарат на их основе

Новые производные бензоксазиндиона и лекарственный препарат на их основе

Реферат

 

Изобретение относится к новым производным бензоксазиндиона общей формулы (I), где R¹ означает Н или карбоксиалкил, R² представляет собой водород или алкил, а R³ представляет собой различные дериватизуемые из аминокислот, дипептидов и гидразонов кислотные группы, соответственно их коньюгаты с активными веществами, например остатками из ряда пенициллина. Предлагаемые соединения представляют собой гетероциклически защищенные производные катехола и эффективны по отношению к штаммам грам-отрицательных бактерий, в качестве сидерофоров. Также раскрыт лекарственный препарат на основе соединений формулы (I). 2 с. и 12 з.п. ф-лы, 2 табл.

Изобретение относится к новым производным бензоксазиндиона, а также к их конъюгатам с биологически активными веществами, например антибиотиками. Эти соединения эффективны в качестве сидерофоров у грам-отрицательных бактерий, т. е. они способны снабжать бактерии ионами железа, и в виде коньюгатов с активными веществами, например с антибиотиками (в качестве "сидерофорных конъюгатов-антибиотиков"), доставлять последние по транспортным путям железа в бактериальную клетку и таким образом улучшать, соответственно повышать их эффективность. Тем самым это должно способствовать снижению резистентности к антибиотикам, обусловленной неудовлетворительной пенетрацией. Соединения по изобретению представляют собой предварительные стадии образования хелатов с железом, соответственно гетероциклически защищенных катехольных соединений, т. е. они могут быть ферментативным путем преобразованы в соответствующие производные катехола. Тем самым они могут оказывать воздействие на биологический обмен веществ с участием железа и влиять различным образом на связанные с этим заболевания. Изобретение предназначено для фармацевтических исследований и применения в промышленном масштабе.

Производные бензоксазиндиона формулы I с указанными ниже заместителями до настоящего времени не были описаны в литературе. Эти соединения представляют собой в принципе ацилированные производные катехола, один ацильный компонент которых включен в бензоксазиновое кольцо.

Известно, что определенные катехольные структуры в природных сидерофорах в качестве структурных элементов, образующих железные комплексы, играют важную роль ("Iron Transport in Microbes, Plants and Animals", изд. Winkelmann G., van Helm D., Neilands J.B., V.Ch.-Verlagsgesellschaft Weinheim, 1987); примером может служить энтеробактин, сидерофор у E.coli и других штаммов бактерий, тример из N-(2,3-дигидроксибензоил)-L-серина. Мономер также в качестве сидерофора обладает эффективным действием (Hantke К. FEMS Microbiol. Lett. 62 (1990), 5).

N-(2,3-дигидроксибензоил)глицин был обнаружен в качестве сидерофора у B. subtilis (Ito Т., Neilands J.B. Journ. Amer. Soc. 80 (1958), 4645). Некоторые катехолзамещенные производные аминокислот уже были синтезированы, например, N-(2,3-дигидроксибензоил)-L-треонин (Kanai F., Kaneko Т., Morishima H. , Isshiki К. , Takita Т., Takeuchi Т., Umezawa H. Journ. Antibiot. 38 (1985), 39), N²,N⁶-биc(2,3-дигидpoкcибeнзoил)-L-лизин (Corbin J.L., Bulen W. A. Biochemistry, 8 (1969), 757; McKee J.A., Sharma S.K., Miller M.J. BioconjugateChem.,2(1991)281)иN²,N⁶-биc(2,3-дигидpoкcибeнзoил)лизил-N⁶-(2,3-дигидpoкcибeнзoил)лизин (Chimiak A., Neilands J.B. Structure and Bonding, 58 (1984), 89). Далее было установлено, что у различных штаммов бактерий определенные бензгидразоны глиоксиловой кислоты, производные оксаниловой кислоты и др. могут служить в качестве сидерофоров (Reissbrodt R., Heinisch L., Mollmann U., Rabsch W., Ulbricht H. BioMetals, 6 (1993), 155).

Различные катехольные соединения были получены путем сочетания с -лактамами, благодаря чему удалось достичь существенное повышение антибактериальной эффективности этих антибиотиков за счет их доставки по бактериальным транспортным путям железа в бактериальную клетку (например, Arisawa M., Sekine Y., Shimizu S., Takano H., Angehrn P., Then R.L. Antimicrob. Agents Chemother. 35 (1991), 653). Однако до настоящего времени ни одно из соединений такого типа не нашло по существу клинического применения. Для достижения этой цели необходимы дальнейшие поиски для получения новых синтетических сидерофоров, которые были бы способны образовывать конъюгаты с антибиотиками.

С другой стороны, сидерофоры в качестве хелатов с железом обладают потенциальной возможностью воздействовать на биологический обмен веществ с участием железа и тем самым оказывать различным образом влияние на связанные с этим заболевания. Так, в частности, сидерофор десферриоксамин В (десферал) с успехом применяется при заболеваниях, связанных с переносом железа (например, при талассемии). Производные бензоксазиндиона без заместителя в положении 8, не дериватизуемые из катехолов, например, 3-карбоксилметил-2,4-диоксобензоксазин, известны (см., например, Lespagnol A., Lespagnol Ch., Bernier J.L., Cazin J.C., Cazin M. Bull. Soc. Pharm. Lille 4, (1972), 179-185). Получение же производных бензоксазина из ацилоксибензоилхлорида и аминных компонентов при отщеплении НС1 и метанола до настоящего времени не было описано.

Изобретение предназначено для разработки новых производных бензоксазиндиона и их применения. Целью изобретения является получение соответствующих соединений, пригодных для доставки биологически активных веществ, например антибиотиков, по бактериальным транспортным путям железа в бактериальную клетку. Кроме того, с помощью этих соединений должны быть созданы новые предварительные стадии, соответственно пропрепараты для хелатов с железом, которые тем или иным образом могут оказывать влияние на биологический обмен веществ с участием железа и на связанные с этим заболевания. Включение катехольной структуры в гетероциклическую структуру бензоксазина должно обеспечить возможность получения соединений в их ацилированной форме, прежде всего их конъюгатов с антибиотиками, которые по сравнению со свободными катехолами обладали бы более совершенными фармакологическими свойствами и которые, соответственно, в качестве фармакологических форм переноса могли бы способствовать собственно пенетрации катехольных соединений.

В основу изобретения была положена задача получить новые производные бензоксазиндиона, предназначенные для применения в качестве сидерофоров, соответственно биологических хелатов с железом.

Согласно изобретению указанная задача решается с помощью новых производных бензоксазиндиона общей формулы I в которой R¹ представляет собой Н, СОалкил или СООалкил, R² представляет собой Н, алкил, галоген, а R³ представляет собой следующие заместители: а) R³ означает -Z-chr⁴-COR⁵, где Z представляет собой группу R⁴ означает Н, алкил, фенил либо замещенный фенил, прежде всего гидрокси- либо ацилоксифенил, или R⁴ означает (СН₂)_nСОХ, где Х означает ОА, где А представляет собой Н, алкил, ион щелочного металла либо ион аммония, соответственно замещенный ион аммония, или где Х представляет собой остаток активного вещества, прежде всего остаток антибиотика, связанный через ОН- либо NH-труппу, и где n означает 1-10, или R⁴ означает (CH₂)_n-Y, где Y представляет собой бензоксазиндионовый радикал формулы где R¹ и R² имеют указанные выше значения, а оба бензоксазиндионовых радикала могут быть идентичными или разными, и n может означать 1-10, и R⁵ означает ОА, где А имеет указанные выше значения, или R⁵ представляет собой остаток активного вещества, прежде всего остаток антибиотика, связанный через ОН- либо NH-группу, или R⁵ означает NH-chr⁸-COR⁹, где R⁸ представляет собой Н, алкил, фенил либо замещенный фенил, а R⁹ означает ОА, где А имеет указанные выше значения, или R⁹ представляет собой остаток активного вещества, прежде всего остаток антибиотика, связанный через ОН- либо NH-группу, или R⁵ представляет собой группу (эту же группу представляет собой R¹⁷), где Х и Y имеют указанные выше значения, n означает 1-10, и R⁶ означает Н, алкил, галоген, и R⁷ означает Н, ацил, а n означает 1-10 и m означает 1-2, или б) R³ означает chr⁴-COR⁵, где R⁴ и R⁵ имеют указанные выше значения, или в) R³ представляет собой группу (эту же группу представляет собой R¹⁸), где R¹⁰ и/или R¹¹ означают Н, алкил, фенил либо замещенный фенил, n означает 1-10, a COR⁹ и R¹² могут находиться во всех возможных положениях, R⁹ имеет указанные выше значения, а R¹² представляет собой Н, алкил, галоген, гидрокси, алкокси, бензоксазиндионовый радикал Y или R¹² представляет собой группу (эту же группу представляет собой R¹⁹), где R¹, R² имеют указанные выше значения, R¹⁴, R¹⁵ имеют те же значения, что и R¹, R², а n может означать 1-10, или г) R³ представляет собой группу (эту же группу представляет собой R²⁰), где R¹³ и COR⁹ могут находиться во всех возможных положениях, а R¹³ представляет собой Н, алкил, галоген, гидрокси, алкокси или бензоксазиндионовый радикал Y, и R⁹ имеет указанные выше значения, а р означает 0-2, или д) R³ представляет собой группу (эту же группу представляет собой R²¹) или R³ представляет собой группу (эту же группу представляет собой R²²), где R⁹ имеет указанные выше значения, а R¹⁶ представляет собой Н, алкил, фенил либо замещенный фенил, или е) R³ представляет собой остаток активного вещества, прежде всего остаток антибиотика, связанный через ОН- либо NH-группу.

В приведенных выше формулах, равно как и в последующем ацил представляет собой прежде всего прямоцепочечный либо разветвленный С₁-С₆алканоил или прямоцепочечный либо разветвленный С₁-С₆алкоксикарбонил; прямоцепочечный либо разветвленный алкил и прямоцепочечный либо разветвленный алкокси, включая также такие обозначения, как прямоцепочечный либо разветвленный алкоксикарбонил, которые представляют собой прежде всего прямоцепочечный либо разветвленный С₁-С₈алкил, соответственно С₁-С₈алкокси; замещенный фенил представляет собой фенил, замещенный прямоцепочечным либо разветвленным алкилом, галогеном, прежде всего Сl или F, прямоцепочечной либо разветвленной алкоксигруппой, гидроксильной группой, карбоксильной группой, прямоцепочечным либо разветвленным алкоксикарбонилом и галогензамещенным алкилом. Замещенный ион аммония представляет собой, например, ион аммония, замещенный одно- или многократно, например,от одно- до четырехкратно, алкилом. Ионом щелочного металла может быть, например, ион натрия либо калия.

Остаток активного вещества представляет собой, например, остаток любого приемлемого антибактериального активного вещества со свободной NH- или ОН-группой, причем этот остаток по этой NH- или ОН-группе может быть этерифицирован, соответственно амидирован соединением формулы I. Связь между катехольным производным и антибиотиком может осуществляться как непосредственно, так и с помощью обычных связующих групп, таких, например, как аминокарбоновые кислоты, гидроксикарбоновые кислоты, диамины или диолы. Под понятием антибиотик имеется в виду, например, соответствующий содержащий NH- или ОН-группу -лактам, такой, в частности, как цефалоспорин, например цефалексин, цефадроксил или клафоран, либо пенициллин, например ампициллин, амоксициллин или производное O-ациламоксициллина, либо производное тетрациклина, например аминодоксициклин, либо антибиотик типа аминогликозидов, макролидов, хинолонов или карбапенемов.

В случае асимметричных С-атомов соответствующие D- и L-формы, энантиомеры и диастереомеры, а также рацематы, соответственно смеси энантиомеров и диастереомеров также являются предметом настоящего изобретения.

Вышеназванные соединения могут быть представлены в виде свободных кислот, в виде их солей либо в виде легко расщепляемых, в частности в физиологических условиях, сложных эфиров.

Предлагаемые согласно изобретению соединения формулы I, где R⁵ или R⁹ означают ОН, получают реакцией конденсации 2,3-диацилоксибензоилхлорида с соответствующими аминными компонентами, например аминокислотами, дипептидами или аминобензойными кислотами, в растворе бикарбоната натрия согласно схеме 1 (см. в конце описания).

В ходе реакции СООалкильную группу в R¹ можно расщеплять гидролитически, вследствие чего могут образовываться соединения с R¹, представляющим собой Н. Эти соединения можно повторно ацилировать, например, до соединений, где R¹ представляет собой СОалкил.

Соединения формулы I, где R⁵ или R⁹ означает ОН, могут быть получены по тому же принципу также и согласно реакционной схеме 2 (см. в конце описания), а именно взаимодействием соответствующих амидопроизводных, например 2,3-дигидроксибензгидразонов, с алкиловыми эфирами хлормуравьиной кислоты в щелочной среде.

Предлагаемые соединения формулы I, где R³, R⁵, R⁹, соответственно Х представляют собой остаток активного вещества, например остаток антибиотика, получают, например, следующим путем: а) сначала из соединения формулы I, где А является Н, по обычным методам, например с помощью пентахлорида фосфора в тетрахлорметане, получают соответствующий хлорид, после чего последний подвергают взаимодействию с активным веществом либо антибиотиком, содержащим свободную ОН- или NH-группу и необязательно обычно используемую в этих целях связующую группу, как, например, остатки диаминокарбоновой кислоты, гидроксикарбоновой кислоты, соответственно диамина или диола, в соответствующем растворителе, например в тетрагидрофуране, или б) соединение формулы I, где А является Н, например, по методу смешанных ангидридов сначала подвергают взаимодействию с эфиром хлормуравьиной кислоты и третичным амином, например триэтиламином, а затем с соответствующим активным веществом, содержащим свободную NH- или ОН-группу и необязательно обычно используемую в этих целях связующую группу, как, например, остатки диаминокарбоновой кислоты, гидроксикарбоновой кислоты, соответственно диамина или диола, вместе с соответствующим третичным амином, например триэтиламином, в соответствующем растворителе, например, тетрагидрофуране.

Соединения формулы I с карбоксильной группой могут быть представлены в виде свободных кислот, в виде их солей либо в виде легко расщепляемых, прежде всего в физиологических условиях, сложных эфиров. Очистку соединений осуществляют по обычным, известным из уровня техники способам, например путем перекристаллизации или с помощью методов хроматографии.

Соединения формулы I по изобретению, и в частности соединения без остатка активных веществ, проявляют у различных штаммов грам-отрицательных бактерий сидерофорную эффективность. Благодаря этому эти соединения могут применяться в качестве факторов роста для определенных культур бактерий.

Испытания на сидерофорную эффективность согласно ДИН 58940 проводили с различными индикаторными мутантами бактерий, которые ввиду отсутствия собственных систем переноса железа не проявляли в условиях тестирования никакой тенденции к росту. После добавления испытуемых субстанций в качестве чужеродных сидерофоров можно констатировать, что это способствует росту. У индикаторных мутантов биосинтез соответствующих сидерофоров, таких, например, как пиовердин, пиохелин, энтеробактин, аэробактин, иерсиниабактин, или, например, биосинтез ароматических углеводородов блокирован или же отсутствуют рецепторы энтеробактина, пиохелина, соответственно пиовердина, а также другие важные компоненты для бактериального транспорта железа (например, мембранные белки Cir, Fiu, FepA, а также белок ТоnВ). Поэтому в условиях дефицита железа эти мутанты либо совсем не могут расти, либо расти с очень большим замедлением. Конкретно тестирование проводили на следующих индикаторных мутантах: Pseudomonas aeruginosa: PAO 6609, К407, E.coli: AB 2847, Salmonella typhimurium: enb-7, ТА 2700, Yersinia enterocolitica WAH 5030. В качестве контроля для штаммов Pseudomonas и Y. enterocolitica применяли ферриоксамин Е, для штаммов Salmonella - ферриоксамин G и энтеробактин, а для штаммов E. coli - феррихром. Испытуемые субстанции применяли в каждом случае в количестве 5 мкг/диск.

Зоны роста индикаторных мутантов (диаметр в мм), которые определяли в зависимости от воздействия соответствующих испытуемых субстанций, представлены в таблице 1.

Благодаря их свойствам как бактериальных сидерофоров соединения общей формулы I могут служить в качестве переносчиков, соответственно в качестве ускорителей пенетрации для антимикробных антибиотиков и других биологически активных веществ, иными словами, они способны в конъюгатах с антибиотиками или другими активными веществами доставлять эти последние по транспортным путям железа в клетку микроорганизмов и тем самым повышать их эффективность. Вследствие этого соединения общей формулы I, где R³, R⁵, R⁹, соответственно Х представляют собой остаток активного вещества, в частности -лактам, обладают антибактериальным действием, в том числе частично также по отношению к бактериям, резистентным к другим -лактамам, причем имеющееся сидерофорное действие бензоксазиндионового остатка перекрывается антибактериальной эффективностью всей молекулы. Для выявления антибактериальной эффективности проводили тест в микроразбавлениях, определяя таким путем согласно стандарту ДИН 58940 минимальные ингибирующие концентрации (МИК) на следующих штаммах бактерий: Pseudomonas aeruginosa SG 137, NCTC 10662, АТСС 27853, E.coli ATCC 25922, Klebsiella pneumoniae ATCC 10031, Stenotrophomonas maltophilia GN 12873 и Staphylococcus aureus SG 511. Результаты тестирования представлены в таблице 2. Согласно полученным данным испытывавшиеся соединения проявляют высокий антибактериальный эффект, частично превосходящий таковой сравнительных субстанций азлоциллина и ампициллина. Варьируя содержание железа в испытуемых средах и используя мутанты для транспорта железа, установили зависимость антибактериального действия от бактериального транспорта железа.

Соединения общей формулы I, в частности соединения без остатка активного вещества, а при наличии кислотных групп также их соли и расщепляемые в физиологических условиях сложные эфиры благодаря их свойствам как сидерофоров, соответственно хелатов с железом пригодны для применения в качестве лекарственных средств при заболеваниях, обусловленных нарушением обмена веществ с участием железа. Соединения общей формулы I, где R³, R⁵, R⁹, соответственно X представляют собой остаток активного вещества, например остаток антибиотика, с NH- или ОН-группой, а при наличии кислотных групп также их соли и расщепляемые в физиологических условиях сложные эфиры благодаря их антибактериальной эффективности могут применяться в качестве лекарственных средств против бактериальных инфекций у человека и полезных животных.

При названных заболеваниях соединения формулы I могут применяться либо индивидуально, либо в виде фармацевтических препаратов с физиологически приемлемыми, известными из уровня техники вспомогательными веществами или наполнителями, причем в принципе возможно применение всех обычных фармакологических форм.

ПРИМЕРЫ Пример 1 Получение (8-метоксикарбонилокси-2,4-диоксобензоксазин-3-ил)уксусной кислоты (формула I, где R¹ означает СООСН₃, R² означает Н, R³ означает СН₂СООН) Раствор из 2,75 г глицина в 175 мл 0,5М раствора гидрокарбоната натрия охлаждали в ультразвуковой бане до 0-5^oС. При перемешивании по каплям добавляли при 0-5^oС 10,5 г 2,3-ди-(метоксикарбонилокси)бензоилхлорида, растворенных в 20 мл абсолютного тетрагидрофурана. Образовавшийся по истечении 1 ч мутный раствор фильтровали и тетрагидрофуран отгоняли. Полученную субстанцию отфильтровывали через вакуум-фильтр и промывали небольшим количеством холодной воды. Для очистки субстанцию повторно растворяли в 0,5М растворе гидрокарбоната натрия, фильтровали и осаждали с помощью концентрированной соляной кислоты. В результате получили бесцветные кристаллы с температурой плавления 205-208^oС и с выходом 70% от теории.

Пример 2 Получение (8-метоксикарбонилокси-2,4-диоксобензоксазин-3-ил)ацетилглицина (формула I, где R¹ означает СООСН₃, R означает Н, R³ означает CH₂CONHCH₂COOH) Соединение получили аналогично примеру 1 из глицилглицина и 2,3-ди-(метоксикарбонилокси)бензоилхлорида в водном растворе бикарбоната натрия. Таким путем получили бесцветные кристаллы с температурой плавления 195-198^oС после перекристаллизации из воды с выходом 70% от теории.

Пример 3 Получение (8-метоксикарбонилокси-2,4-диоксобензоксазин-3-ил)ацетил-L-аланина (формула I, где R¹ означает СООСН₃, R² означает Н, R³ означает СН₃СОNН-СH(СН₃)-СООН) Соединение получили аналогично примеру 1 из глицил-L-аланина и 2,3-ди-(метоксикарбонилокси)бензоилхлорида в водном растворе бикарбоната натрия. Таким путем получили бесцветные кристаллы с температурой плавления 180-185^oС после перекристаллизации из этилового эфира уксусной кислоты с выходом 70% от теории.

Ппимер 4 Получение (8-гидрокси-2,4-диоксобензоксазин-3-ил)ацетил-L-аланина (формула I, где R¹ означает Н, R² означает Н, R³ означает CH₂CONH-СН(СН₃)-СООН) Соединение получили из маточного раствора, образовавшегося при выделении (8-метоксикарбонилокси-2,4-диоксобензоксазин-3-ил)ацетил-L-аланина (продукт из примера 3), посредством препаративной ЖХВР (элюент: ацетонитрил/вода = 1/1 с 0,05% трифторуксусной кислоты). Таким путем получили бесцветные кристаллы с температурой плавления 203-204^oС после перекристаллизации из этилового эфира уксусной кислоты с выходом 20% от теории.

Пример 5 Получение (8-метоксикарбонилокси-2,4-диоксобензоксазин-3-ил)ацетил-L-лейцина (формула I, где R¹ означает СООСН₃, R² означает Н, R³ означает СН₂СОNН-СH(СООH)-СН₂СH(СН₃)₂) Соединение получили аналогично примеру 1 из глициллейцина и 2,3-ди-(метоксикарбонилокси)бензоилхлорида в водном растворе бикарбоната натрия. Выделение проводили немедленной экстракцией смеси, полученной после подкисления соляной кислотой, этиловым эфиром уксусной кислоты, многократной промывкой полученного таким путем раствора водой, сушкой сульфатом натрия и удалением растворителя под вакуумом. После препаративной ЖХВР (элюент: ацетонитрил/вода = 1/1 с 0,05% трифторуксусной кислоты) и перекристаллизации из воды получили бесцветные кристаллы с температурой плавления 179-181^oС с выходом 60% от теории.

Пример 6 Получение (8-гидрокси-2,4-диоксобензоксазин-3-ил)ацетил-L-лейцина (формула I, где R¹ означает Н, R² означает Н, R³ означает CH₂CONH-СН(СООН)-СН₂СН(СН₃)₂) Соединение выделили посредством препаративной ЖХВР (элюент: ацетонитрил/вода = 1/1 с 0,05% трифторуксусной кислоты) в качестве второго продукта из реакционной смеси, образовавшейся при получении (8-метоксикарбонилокси-2,4-диоксобензоксазин-3-ил)ацетил-L-лейцина (продукт из примера 5). После перекристаллизации из этилового эфира уксусной кислоты получили бесцветные кристаллы с температурой плавления 204-207^oС с выходом 25% от теории.

Пример 7 Получение 2-L-(8-метоксикарбонилокси-2,4-диоксобензоксазин-3-ил)пропионовой кислоты (формула I, где R¹ означает СООСН₃, R² означает Н, R³ означает СН(СН₃)-СООН) Соединение получили аналогично примеру 4 из L-аланина и 2,3-ди-(метоксикарбонилокси)бензоилхлорида в водном растворе бикарбоната натрия. После препаративной ЖХВР (элюент: ацетонитрил/вода = 2/3 с 0,05% трифторуксусной кислоты) получили бесцветное пенистое вещество с выходом 50% от теории.

Пример 8 Получение L-(8-метоксикарбонилокси-2,4-диоксобензоксазин-3-ил)фенилуксусной кислоты (формула I, где R¹ означает СООН₃, R² означает Н, R³ означает С₆Н₅-СН-СООН) Соединение получили аналогично примеру 4 из L-фенилаланина и 2,3-ди-(метоксикарбонилокси)бензоилхлорида в водном растворе бикарбоната натрия. После препаративной ЖХВР (элюент: ацетонитрил/вода = 1/1 с 0,05% трифторуксусной кислоты) и перекристаллизации из воды получили бесцветные кристаллы с температурой плавления 182-184^oС с выходом 50% от теории.

Пример 9 Получение 4-[(8-метоксикарбонилокси-2,4-диоксобензоксазин-3-илимино)метил] бензойной кислоты (формула I, где R¹ означает СООСН₃, R² означает Н, R³ означает N = СН-С₆Н₄-СООН(р)) К раствору из 0,3 г 4-[(2,3-дигидроксибензоил)гидразонметил]бензойной кислоты в 2 мл 2н. натрового щелока и 3 мл воды при перемешивании добавляли при 0^oС 2 мл метилового эфира хлормуравьиной кислоты. Смесь перемешивали в течение 30 мин, после чего подкисляли соляной кислотой. Сырой продукт растворяли в горячем диметилформамиде, раствор фильтровали и продукт повторно осаждали с помощью воды. Последующую очистку проводили посредством препаративной ЖХВР (элюент: ацетонитрил/вода = 1/1 с 0,05% трифторуксусной кислоты). В результате получили бесцветные кристаллы с температурой плавления 232-234^oС.

Пример 10 Получение N-[(8-метоксикарбонилокси-2,4-диоксобензоксазин-3-ил)ацетил] ампициллина (формула I, где R¹ означает СООСН₃, R² означает Н, R³ означает СН₂-CO-R⁵, а R⁵ представляет собой N-ампициллино-) а) Получение (8-метоксикарбонилокси-2,4-диоксобензоксазин-3-ил)ацетилхлорида Смесь из 1,07 г (3 ммоля) 8-метоксикарбонилокси-2,4-диоксобензоксазин-3-илуксусной кислоты (субстанция 1) 1 г пентахлорида фосфора в 5 мл абсолютного тетрахлорметана осторожно нагревали до завершения образования НС1 (30 мин). Образовавшийся раствор фильтровали и фильтрат концентрировали. Остаток повторно растворяли в горячем тетрахлорметане, хлорангидрид осаждали безводным петролейным эфиром и сушили под вакуумом. Таким путем получили 0,81 г продукта (86% от теории) с температурой плавления 80-82^oС.

б) Раствор из 0,78 г натриевой соли ампициллина в 12 мл 80%-ного тетрагидрофурана охлаждали до -5^oС. Затем при перемешивании к раствору добавляли порциями 0,63 г 8-метоксикарбонилокси-2,4-диоксобензоксазин-3-илацетилхлорида. Смесь перемешивали в течение 1 ч при 0^oС и в течение 1 ч при 20^oС, после чего упаривали под вакуумом. Остаток смешивали с 50 мл воды и 50 мл этилового эфира уксусной кислоты. Затем слегка подкисляли (рН 3) 1М соляной кислотой и трижды промывали водным раствором хлорида натрия. Органическую фазу отделяли, сушили над сульфатом натрия и концентрировали до объема 20 мл. Остаток смешивали с петролейным эфиром, получив при этом 0,92 г (74% от теории) производного ампициллина в виде белого порошка.

Пример 11 Получение N-[(8-метоксикарбонилокси-2,4-диоксобензоксазин-3-ил)ацетил] амоксициллина (формула I, где R¹ означает СООСН₃, R² означает Н, R³ означает CH₂COR⁵, а R⁵ представляет собой N-амоксипиллино-) Раствор из 0,55 г амоксициллина в 8 мл 80%-ного тетрагидрофурана смешивали с 0,22 мл триэтиламина и охлаждали до -5^oС. Затем при перемешивании к раствору порциями добавляли 0,45 г (8-метоксикарбонилокси-2,4-диоксобензоксазин-3-ил)ацетилхлорида (получение согласно примеру 8). Смесь перемешивали в течение 1 ч при 0^oС и в течение 1 ч при 20^oС, после чего упаривали под вакуумом. Остаток смешивали с 40 мл воды и 40 мл этилового эфира уксусной кислоты. Затем слегка подкисляли (рН 3) 1М соляной кислотой, встряхивали и промывали водным раствором хлорида натрия до полного отсутствия кислоты. Отделенную органическую фазу сушили над сульфатом натрия, практически полностью упаривали и смешивали с петролейным эфиром. Таким путем получили производное амоксициллина в виде белого порошка с выходом 80% от теории.

Пример 12 Получение N-[(8-метоксикарбонилокси-2,4-диоксобензоксазин-3-ил)ацетилглицил] ампициллина (формула I, где R¹ означает СООСН₃, R² означает Н, R³ означает CH₂-CONH-CH₂-COR⁵, a R⁵ представляет собой N-ампициллино-) 0,352 г (8-метоксикарбонилокси-2,4-диоксобензоксазин-3-ил)ацетилглицина (получение см. пример 2), 140 мкл триэтиламина и каталитическое количество диметиламинопиридина растворяли в 5 мл абсолютного тетрагидрофурана и раствор при -20^oС и при перемешивании смешивали с 126 мкл изобутилового эфира хлормуравьиной кислоты. Смесь перемешивали в течение 30 мин при -20^oС, после чего добавляли 0,357 г натриевой соли ампициллина в 5 мл 80%-ного тетрагидрофурана. Затем перемешивали в течение 1 ч при -20^oС и в течение 1 ч при +20^oС, после чего упаривали под вакуумом. Остаток смешивали с этиловым эфиром уксусной кислоты и водой и осторожно подкисляли 1M соляной кислотой. Органическую фазу отделяли, трижды промывали раствором хлорида натрия, сушили над сульфатом натрия и частично упаривали. Добавлением петролейного эфира осаждали производное ампициллина, которое очищали посредством препаративной ЖХВР (элюент: ацетонитрил/вода = 1/1 с 0,05% трифторуксусной кислоты).

Пример 13 Получение N-[(8-метоксикарбонилокси-2,4-диоксобензоксазин-3-ил)ацетил-L-аланил] ампициллина (формула I, где R¹ означает СООСН₃, R² означает Н, R³ означает СН₂-СОNH-СH(СН₃)СОR⁵, а R⁵ представляет собой N-ампициллино-) Получение соединения осуществляли аналогично примеру 12 из (8-метоксикарбонилокси-2,4-диоксобензоксазин-3-ил)ацетил-L-аланина (получение см. пример 3) и натриевой соли ампициллина. Очистку проводили посредством препаративной ЖХВР (элюент: ацетонитрил/вода = 1/1 с 0,05% трифторуксусной кислоты), получив таким путем бесцветное твердое вещество с выходом 65% от теории.

Пример 14 Получение N-[(8-метоксикарбонилокси-2,4-диоксобензоксазин-3-ил)ацетил-L-лейцил] ампициллина (формула I, где R¹ означает СООСН₃, R² означает Н, R³ означает CH₂-CONH-CH(COR⁵)-CH₂CH(CH₃)₂, а R⁵ представляет собой N-ампициллино-) Соединение получили аналогично примеру 12 из (8-метоксикарбонилокси-2,4-диоксобензоксазин-3-ил)ацетил-L-лейцина (получение см. пример 5) и натриевой соли ампициллина. Очистку проводили посредством препаративной ЖХВР (элюент: ацетонитрил/вода = 2/3 с 0,05% трифторуксусной кислоты), получив при этом бесцветное твердое вещество с выходом 60% от теории.

Пример 15 Получение N-[(8-метоксикарбонилокси-2,4-диоксобензоксазин-3-ил)ацетил] -O-н-пропиониламоксициллина (формула I, где R¹ означает СООСН₃, R² означает Н, R³ означает CH₂COR⁵, a R⁵ представляет собой N-(О-н-пропионил)амоксициллино-) 0,385 г N-[(8-метоксикарбонилокси-2,4-диоксобензоксазин-3-ил)ацетил] амоксициллина (получение см. пример 11) растворяли в 25 мл тетрагидрофурана и раствор охлаждали до -78^oС. При перемешивании добавляли сначала 0,34 мл триэтиламина, а затем 0,16 мл пропионилхлорида. Реакционную смесь перемешивали в течение 30 мин при -60^oС и в течение 1 ч при 20^o С. Затем упаривали под вакуумом и остаток смешивали с водой и этиловым эфиром уксусной кислоты. После подкисления 1М соляной кислотой (рН 3) промывали водным раствором хлорида натрия до полного отсутствия кислоты. Отделенную органическую фазу сушили над сульфатом натрия, практически полностью упаривали и смешивали с петролейным эфиром. Таким путем получили производное амоксициллина в виде белого порошка с выходом 40% от теории.

Пример 16 Получение 4-(8-метоксикарбонилокси-2,4-диоксобензоксазин-3-ил)бензойной кислоты (формула I, где R¹ означает СООСН₃, R² означает Н, R³ означает С₆H₄-СООH(р)) Соединение получили аналогично примеру 1 из 4-аминобензойной кислоты и 2,3-ди-(метоксикарбонилокси)бензоилхлорида в водном растворе гидрокарбоната натрия. После перекристаллизации из этилового эфира уксусной кислоты получили бесцветные кристаллы с температурой плавления 236-240^oС с выходом 80% от теории.

Пример 17 Получение 2L,6-бис(8-метоксикарбонилокси-2,4-диоксо-1,3-бензоксазин-3-ил)гексановой кислоты (формула I, где R¹ означает СООСН₃, R² означает Н, R³ означает chr⁴-COOH, a R⁴ означает (CH₂)₄Y) Соединение получили аналогично примеру 5 из L-лизина и 2 мол. эквивалентов 2,3-ди-(метоксикарбонилокси)бензоилхлорида в водном растворе гидрокарбоната натрия в виде бесцветного пенистого вещества.

Пример 18 Получение натриевой соли N-[4-(8-метоксикарбонилокси-2,4-диоксо-1,3-бензоксазин-3-ил)бензоил] ампициллина (формула I, где R¹ означает СООСН₃, R² означает Н, R³ идентичен R²⁰, где R¹³ означает Н, COR⁹ в положении 4, а R⁹ представляет собой N-ампициллино (Na-соль), р равно 0) а) Получение 4-(8-метоксикарбонилокси-2,4-диоксо-1,3-бензоксазин-3-ил)бензоилхлорида Соединение получили аналогично субстанции 10а) из субстанции 16 и пентахлорида фосфора в тетрахлорметане. Таким путем получили бесцветное масло с выходом 65% от теории.

б) Получение N-[4-(8-метоксикарбонилокси-2,4-диоксо-1,3-бензоксазин-3-ил)бензоил]ампициллина Соединение получили аналогично субстанции 10б) из 4-(8-метоксикарбонилокси-2,4-диоксо-1,3-бензоксазин-3-ил)бензоилхлорида и натриевой соли ампициллина. Таким путем получили белый порошок с выходом 85% от теории.

в) Натриевая соль: Раствор из 0,25 г N-[4-(8-метоксикарбонилокси-2,4-диоксо-1,3-бензоксазин-3-ил)бензоил] ампициллина в этиловом эфире уксусной кислоты при охлаждении льдом и перемешивании смешивали с раствором из 0,083 г 2-этилгексаноата натрия в этиловом эфире уксусной кислоты. После осаждения продукта с помощью петролейного эфира отфильтровывали. Очистку проводили посредством препаративной ЖХВР (элюент: ацетонитрил/вода). При этом получили белый порошок с выходом 0,202 г (79% от теории).

Пример 19 Получение 4-(8-метоксикарбонилокси-2,4-диоксо-1,3-бензоксазин-3-илметил)бензойной кислоты (формула I, где R¹ означает СООСН₃, R² означает Н, R³ идентичен R²⁰, где R¹³ означает Н, COR⁹ в положении 4, а R⁹ означает ОН, р равно 1) Соединение получили аналогично субстанции 5 из 4-(аминометил)бензойной кислоты и 2,3-ди-(метоксикарбонилокси)бензоилхлорида в водном растворе гидрокарбоната натрия. После перекристаллизации из этилового эфира уксусной кислоты получили бесцветные кристаллы с температурой плавления 220-222^oС с выходом 65% от теории.

Пример 20 Получение натриевой соли N-[4-(8-метоксикарбонилокси-2,4-диоксо-1,3-бензоксазин-3-илметил)бензоил] ампициллина (формула I, где R¹ означает СООСН₃, R² означает Н, R³ идентичен R²⁰, где R¹³ означает Н, COR⁹ в положении 4, а R⁹ представляет собой N-ампициллино (Na-соль), р равно 1) а) Получение 4-(8-метоксикарбонилокси-2,4-диоксо-1,3-бензоксазин-3-илметил)бензоилхлорида Соединение получили аналогично субстанции 10а) из субстанции 19 и пентахлорида фосфора в тетрахлорметане. Таким путем получили бесцветное масло с выходом 95% от теории.

б) Получение N-[4-(8-метоксикарбонилокси-2,4-диоксо-1,3-бензоксазин-3-илметил)бензоил] ампициллина Соединение получили аналогично субстанции 10б) из 4-(8-метоксикарбонилокси-2,4-диоксо-1,3-бензоксазин-3-илметил)бензоилхлорида и натриевой соли ампициллина. Таким путем получили белый порошок с выходом 80% от теории.

в) Натриевая соль: Получение осуществляли аналогично субстанции 18 из N-[4-(8-метоксикарбонилокси-2,4-диоксо-1,3-бензоксазин-3-илметил)бензоил] ампициллина и 2-этилгексаноата натрия в этиловом эфире уксусной кислоты. Таким путем получили белый порошок с выходом 60% от теории.

Пример 21 Получение 3,5-бис(8-метоксикарбонилокси-2,4-диоксо-1,3-бензоксазин-3-ил)бензойной кислоты (формула I, где R¹ означает СООСН₃, R² означает Н, R³ идентичен R²⁰, где R¹³ означает Y в положении 3, COR⁹ в положении 5, а R⁹ означает ОН, р равно 0, R² имеет значения, указанные выше) Соединение получили аналогично субстанции 5 из 3,5-диаминобензойной кислоты и 2 мол. эквивалентов 2,3-ди-(метоксикарбонилокси)бензоилхлорида в водном растворе гидрокарбоната натрия. После перекристаллизации из этилового эфира уксусной кислоты получили бесцветные кристаллы с температурой плавления 164-166^oС с выходом 65% от теории.

Пример 22 Получение натриевой соли N-[3,5-бис(8-метоксикарбонилокси-2,4-диоксо-1,3-бензоксазин-3-ил)бензоил]ампициллина (формула I, где R¹ означает СООСН₃, R² означает Н, R³ идентичен R²⁰, где R¹³