Противоаллергический препарат

Противоаллергический препарат

Реферат

 

Изобретение относится к области медицины и касается препарата для лечения аллергических заболеваний. Изобретение заключается в том, что противоаллергический препарат на основе хинуклидил-3-дифенилкарбинола гидрохлорида дополнительно содержит 1,3-диметилксантин при определенном соотношении компонентов. Изобретение обеспечивает снижение токсичности используемых веществ и комбинированный препарат обладает преимущественным лечебным эффектом по сравнению с известными доступными противоаллергическими средствами, в том числе препаратами на основе отдельно взятых субстанций. 3 табл.

Изобретение относится к области медицины и может быть использовано в качестве лекарственного средства для лечения аллергических заболеваний.

Наиболее массово и длительно используются в противоаллергической терапии H1-антигистаминные препараты (1): димедрол, супрастин, пириламин, пипольфен, кетотифен и другие. Обладая достаточно высокой лечебной эффективностью упомянутые антагонисты H1-рецепторов гистамина вызывают ряд побочных нежелательных эффектов, которые часто ограничивают их применение. Кроме того, для препаратов этого класса характерно снижение терапевтической эффективности (тахифилаксия) при длительном их использовании.

Известно в лечебной практике применение препаратов (2), оказывающих тормозящее действие на аллергическую активацию клеток и секрецию из них медиаторов аллергии путем воздействия на внутриклеточные процессы регуляции клеточных функций за счет изменения уровня накопления внутриклеточных "месенджеров" (передатчиков). Примером таких препаратов являются производные ксантина, которые обладают антифосфодиэстеразным действием, вызывают повышение внутриклеточного содержания циклического 3,5-аденозинмонофосфата (цАМФ), что приводит к торможению медиаторов аллергии. Однако эти препараты не оказывают заметного действия на активацию гистамина, играющего важнейшую роль в развитии всех известных внешних проявлений аллергического процесса, а потому недостаточно эффективны при лечении ряда аллергических заболеваний. Кроме того, препараты на основе производных ксантина обладают достаточно высокой токсичностью, что также не способствует их массовому использованию для лечения аллергии.

Поскольку аллергическая реакция представляет собой сложный по клеточной организации процесс, включающий множество механизмов активации секреции различных медиаторов аллергии, обеспечение возможности воздействия на несколько факторов аллергической реакции является одним из путей совершенствования методов лечения аллергических болезней, в том числе повышения эффективности фармакологического лечения за счет создания полифункциональных препаратов.

Направленный поиск в этом направлении и создание принципиально новых химических соединений, обладающих полифункциональным действием (3) наиболее желательно, но является процессом длительным, сложным и дорогостоящим, а потому решение этой задачи на основе комбинаций экономически приемлимых, доступных и высокоэффективных препаратов наиболее осуществимо в настоящих условиях.

Из известных H1-противогистаминных средств по технической сущности и по оказываемому действию ближайшим к настоящему изобретению является фенкарол - противоаллергический препарат (4), включающий хинуклидил-3-дифенилкарбинола гидрохлорид -С₂₀Н₂₃NO НС1 (ХДФК). Известный препарат обладает выраженной антигистаминной активностью за счет высокой избирательности блокады Н1-рецепторов гистамина и не оказывает нежелательных побочных действий (седативного, снотворного эффектов, действия на сердечно-сосудистую систему, на желудочно-кишечный тракт, на зрение, на мочевыводящую систему и пр.), характерных для упомянутых выше H1-противогистаминных лекарственных препаратов.

Однако терапевтическая эффективность известного препарата, как и любого противогистаминного средства, ограничена его свойством подавлять лишь действие гистамина. Кроме того, ХДФК оказывает влияние не только на аллергическую реакцию, но и вызывает антипролиферативный эффект, что значительно снижает его противоаллергическое действие.

Таким образом, технический результат, получаемый от реализации описываемого изобретения состоит в создании на основе доступных и обладающих низкой стоимостью исходных компонент нового, полифункционального, высокоэффективного противоаллергического препарата.

Указанный технический результат достигается тем, что противоаллергический препарат, включающий хинуклидил-3-дифенилкарбинола гидрохлорид, дополнительно содержит 1,3-диметилксантин при массовом соотношении компонентов: хинуклидил-3-дифенилкарбинола гидрохлорид: 1,3-диметилксантин 12:4.

1,3-диметилксантин - C₇H₈N₄O₂ (ДMK) относится к группе метилксантинов и в самостоятельном применении в качестве лекарственного препарата "теофиллин", оказывает сосудорасширяющее, бронхолитическое и противоаллергическое действие, которое объясняется разнообразием его фармакологических активностей, проявляющихся на клеточном и молекулярном уровнях. Так, помимо антифосфодиэстеразной активности, ДМК вмешивается в пурэнергическую систему, блокируя действие аденозина, усиливает апоптоз (в том числе клеток, участвующих в аллергическом воспалении). В результате противоаллергическое действие ДМК может быть связано с комплексом эффектов: с торможением секреции гистамина из тучных клеток и базофилов, с торможением респираторного взрыва в эозинофилах, с некоторым угнетением синтеза простагландинов и дегрануляции эозимнофилов, торможением пролиферации Т-лимфоцитов и продукции интерлейкина-2.

Комбинированный препарат в соответствии с настоящим изобретением превосходит по антианафилактической активности, бронхолитическому и антиэксудативному действию каждую отдельно взятую субстанцию, а также обладает более низкой токсичностью. Описываемый препарат имеет преимущества в способности торможения секреции медиаторов из клеток-мишеней аллергии - базофилов. Кроме того, впервые обнаружена способность ДМК существенно снижать антипролиферативный эффект ХДФК, что дополнительно свидетельствует о преимуществах комбинированного препарата.

Действие комбинированного препарата обусловлено влиянием на аллергический процесс как путем блокирования H1-рецепторов гистамина, так и посредством торможения функции клеток-мишеней и предотовращения тем самым секреции из них разнообразных медиаторов аллергии.

Противоаллергический препарат (теофен) согласно изобретению может быть приготовлен путем смешивания порошкообразных ХДФК и ДМК в соотношении 12:4 с добавлением, в зависимости от вида лекарственной формы, вспомогательных веществ, которые выбирают из группы носителей, консервирующих веществ и/или вкусовых добавок. Например, для приготовления препарата в виде таблеток можно использовать такие вспомогательные вещества, как крахмал, различные сахара, фосфаты кальция.

Таблетки получают белого или белого с желтоватым оттенком цвета.

Препарат мало растворим в воде и может быть растворен в растворах кислот, например, кислоты хлористоводородной, а также щелочей.

Примером применения описываемого препарата являются таблетки в составе, г: 1,3-Диметилксантин - 0,1 Хинуклидил-3-дифенилкарбинола гидрохлорида - 0,025 Крахмал кукурузный - 0,111 Сахар молочный - 0,0621 Кальция стеарат - 0,003 Биологическая активность описываемого препарата изучалась по сравнению с препаратами фенкарол и теофиллин.

В приведенных ниже примерах показаны методики проведения и результаты испытаний свойств описываемого антиаллергического препарата.

Пример 1. Исследование противоаллергического действия препарата.

А. Модель активной анафилаксии in vivo.

Исследование проводили на активносенсибилизированных крысах обоего пола массой 180200 грамм при пероральном введении препарата за 2 часа до введения разрешающей дозы антигена. Оценка эффективности анафилактической реакции осуществлялась путем плетизмометрической регистрации прирощения объема стопы задней лапы крыс.

Антиген-индуцированный отек лапы крыс выбран в качестве основной модели, как наиболее полно отражающий все стадии развития аллергической реакции в целостном организме.

Установлено, что средняя эффективная антиэксудативная доза комбинированного препарата согласно изобретению, т.е. доза, подавляющая отек лапы у крыс на 50% (ЭД₅₀), значительно ниже каждого из его составляющих при раздельном их применении, что свидетельствует о его преимущественной антиаллергической активности.

Результаты исследований представлены в таблице 1(1).

Б. Модель пассивной анафилаксии in vivo.

Исследования проводились на сенсибилизированных внутрикожно крысах-самцах массой 300350 г путем перорального введения "теофена" в расчете 30, 60 и 90 мкг/кг за 11,5 часа до разрешающей инъекции аллергена. Оценка эффективности препарата осуществлялась путем определения выраженности пассивной кожной анафилаксии (ПКА) при сравнении средних значений логарифмов реципрокных титров по интенсивности ПКА согласно критерию Fox.

Результаты, приведенные в таблице 2, подтверждают достоверное снижение степени интенсивности ПКА при введении препарата "теофен" по сравнению с контролем.

Пример 2. Изучение бронхолитической активности.

Исследования проводились на наркотизированных морских свинках при внутривенном введении гистамина (10 мкг/кг). Повышение тонуса бронхиальной мускулатуры регистрировали по методу Konzett, Rossler в модификации М.Э. Каминки. Исследуемые препараты вводили за 3 минуты до инъекции гистамина. О бронхолитической активности препаратов судили по их способности снижать величину бронхоспазма, индуцированного гистамином.

Полученные результаты свидетельствуют о потенциировании бронхолитического действия описываемого препарата.

Результаты исследований представлены в таблице 1 (II).

Пример 3. Изучение антиэксудативной активности.

Исследования проводились по методу оценки индуцированной гистамином офтальмореакции на беспородных морских свинках обоего пола массой 250350 г. Отек конъюктивы осуществляли инстилляцией двух капель 2% раствора гистамина дигидрохлорида. Исследуемые препараты вводили перорально в виде водной суспензии за 1 час до инсталляции гистамина.

О действии препарата судили по состоянию гиперемии слизистой оболочки века.

Приведенные в таблице 1 (III), результаты исследований показывают преимущественное антиэксудативное действие описываемого комбинированного препарата "теофен".

Пример 4.

Оценка воздействия препарата на уровень внутриклеточного содержания цАМФ.

Проведено сравнительное изучение влияния описываемого препарата на стимулированный аденозином подъем уровня цАМФ в лимфоцитах. Конечная концентрация аденозина в пробах составляла 0,1 мкМ, что соответствует физиологической концентрации пурина в крови. Оценка содержания цАМФ в лимфоцитах проводилась посредством радиолигандного метода. Концентрация клеток в суспензии составляла 3 млн/мл среды 199, содержащей 10 мМ HEPES. Клетки инкубировали при температуре 37^oС. Исследуемые препараты вносили в объеме, не превышающем 50 мкл. По окончании клетки разрушали нагреванием при температуре 90^oС в течение 2 минут, центрифугировали при 3000 g в течение 5 минут и отбирали 200 мкл супернатанта для анализа содержания цАМФ. Концентрацию циклического нуклеотида выражали в пмоль/10⁷ клеток достоверная ошибка среднего при уровне значимости р<0,05 по результатам 78 независимых опытов.

Результаты исследований приведены в таблице 1(IV).

Исследования действия описываемого препарата показали достоверное увеличение вызванного аденозином подъема уровня внутриклеточного цАМФ в лимфоцитах, по сравнению с отдельно взятыми компонентами.

Пример 5. Изучение действия препарата на эффекторную фазу аллергии.

Исследования действия препарата проводились по реакции высвобождения гистамина из базофилов периферической крови человека in vitro.

Были использованы образцы периферической крови здоровых доноров и больных в возрасте от 18 до 47 лет с повышенной чувствительностью к пыльце злаковых трав и деревьев.

Для определения действия препарата на вызванную аллергеном реакцию высвобождения гистамина взвесь клеток инкубировали без или в присутствии испытуемых агентов в течение 40 мин при температуре 37^oC. Далее к образцам добавляли аллерген и инкубацию продлевали еще на 40 мин. Содержание гистамина определяли микроспектрофлуорометрическим методом в осадочных порциях клеток без предварительной экстракции гистамина. С целью исключения влияния индивидуальных различий в степени аллергического высвобождения гистамина из базофилов, результаты опытов выражали в процентах к максимальному высвобождению гистамина в данном испытании на базофилах данного больного.

Проведенные исследования показали, что ХДФК в концентрации 10 мкМ и ДМК в концентрации до 100 мкМ статистически достоверно не оказывали влияния на секрецию гистамина, вызванную аллергеном в концентрации 0,l PNU/ml. Воздействие описываемого комбинированного препарата вызывало при той же концентрации аллергена торможение аллергического высвобождения гистамина примерно вдвое превышающее торможение у контрольной группы, а для достижения аналогичного эффекта при раздельном применении требовалась в пять раз большая концентрация ХДФК.

Результаты испытаний представлены в таблице 3, которая иллюстрирует выраженное потенцирование торможения субмаксимального аллергического высвобождения гистамина при испытаниях in vitro.

Пример 6. Изучение влияния препарата на пролиферацию.

Исследования проводили путем оценки пролиферативной активности лимфоцитов периферической крови больных атопией. С этой целью из периферической крови больных атопией выделяли мононуклеарные клетки посредством центрифугирования на одноступенчатом градиенте плотности фиколлверграфина (1080 г/см). В качестве коагулянта использовали 2,7% раствор этилендиаминотетраацетата натрия в соотношении 1 мл на 10 мл крови. Выделенные и отмытые буферным раствором мононуклеарные клетки культивировали в среде RPMI 1640, содержащей 10% сыворотки эмбриона коровы, 5 мМ HEPES, 20 мМ глютамина и 100 Ед/мл гентамицина. К клеткам добавляли фитогемагглютинин (ФГА, Sigma) в конечной концентрации 1,5х10 мкг/мл и испытуемые препараты. Культивирование осуществляли в атмосфере с повышенной влажностью и содержанием в воздухе CO₂ в течение 2 часов. Результат оценивали по включению Н³тимидина, внесенного за 4 часа до окончания инкубации.

В результате исследования влияния исследуемых препаратов на вызванную митогеном пролиферативную реакцию установлено, что: - уровень пролиферации мононуклеарных клеток при действии ХДФК в концентрациях 10^-3 М, 10^- М и ДМК в концентрациях 10^-4 М составлял, соответственно, 2680 имп/мин, 4750 имп/мин и 4950 имп/мин, что свидетельствует о практически полном подавлении пролиферативного ответа иммунокомпетентных клеток, - в концентрациях 10^-5 М соединения ХДФК и ДМК не оказывали заметного влияния на пролиферацию, - уровень пролиферации при действии комбинированного препарата "теофен" составил 29570+3200 имп/мин, что указывает на ослабление антипролиферативного эффекта самостоятельно применяемых ХДФК и ДМК.

Пример 7. Испытание острой токсичности.

Острая токсичность комбинированного препарата оценивалась на 4 группах беспородных белых мышей массой 18-20 г. Препарат вводили Per os по 0,3 мл водной взвеси из расчета препарата 100, 200, 400, 800 мг/кг. На каждую дозу препарата приходилось 5 животных. Наблюдение над животными и учет их гибели проводили в течение 14 дней. Гибель животных происходила в течение только первых двух суток после введения препарата. Особенностей в состоянии выживших животных не наблюдалось. Воспроизводимость полученных результатов проверена на повторном аналогично проведенном с интевалом 10 дней эксперименте на беспородных белых мышах-самцах при введении доз теофена - 200, 300, 600, и 900 мг/кг.

ЛД₅₀ рассчитывали по формуле Кербера.

Полученные результаты представлены в таблице 1 (IV).

Установлено, что токсичность комбинированного препарата снижается по сравнению с каждой отдельно взятой субстанцией и составляет 455 мг/кг, что позволяет отнести его к классу умеренно или мало токсичных препаратов. Причем в сочетании с ХДФК наблюдается резкое снижение токсичности ДМК.

Таким образом, описываемый комбинированный препарат, обладая полифункциональным действием, превосходит по основным показателям, определяющим антиаллергические свойства препарата, его компоненты при самостоятельном их применении и является при этом менее токсичным, что позволяет рекомендовать его для лечения с большей эффективностью для широкого круга аллергических заболеваний.

Источники информации 1. Зарудий Ф.С., Гистамин и противогистаминные средства, г. Уфа, 244с.

2. ЕР, заявка 344586, кл. МКИ А 61 К 31/71, oп. 1989.

3. Авторское свидетельство СССР 1100875, МКИ С 07 D 473/08, oп. 1986 г.

4. Машковский и др., "Фенкарол и его применение в терапии аллергических заболеваний", ж. Клиническая медицина, 1978 г., 11, с. 22-28.

Формула изобретения

Противоаллергический препарат, включающий хинуклидил-3-дифенилкарбинол гидрохлорид, отличающийся тем, что он дополнительно содержит 1,3-диметилксантин при массовом соотношении компонентов - хинуклидил-3-дифенилкарбинола гидрохлорид : 1,3-диметилксантин = 1-2: 4.

РИСУНКИ

Рисунок 1