Определенные 5-алкил-2-ариламинофенилуксусные кислоты и их производные

Определенные 5-алкил-2-ариламинофенилуксусные кислоты и их производные

Реферат

 

Описаны определенные 5-алкил-2-ариламинофенилуксусные кислоты и их производные общей формулы I, где R обозначает метил, этил; R₁ обозначает хлор или фтор; R₂ обозначает водород или фтор; R₃ обозначает водород, фтор, хлор, метил, этил, метокси, этокси или гидрокси; R₄ обозначает водород или фтор и R₅ обозначает хлор, фтор, трифторметил или метил, или их фармацевтически приемлемые соли, либо их фармацевтически приемлемое пролекарство в виде сложного эфира, три способа их получения, соединения, а также фармацевтические композиции, обладающие способностью избирательного ингибирования циклооксигеназы-2, способы лечения связанных с циклооксигеназой-2 заболеваний у млекопитающих, а также способ избирательного ингибирования активности циклооксигеназы-2 у млекопитающих. 9 с. и 3 з.п. ф-лы, 2 табл.

Настоящее изобретение относится к 5-алкил-2-ариламинофенилуксусным кислотам и к их производным, как они определены в настоящем описании, которые являются особенно сильными и избирательными ингибиторами циклооксигеназы-2 (СОХ-2), к способам их получения, к фармацевтическим композициями, включающим эти соединения, к способам избирательного ингибирования активности СОХ-2 и к лечению у млекопитающих состояний, чувствительных к ингибированию СОХ-2, с помощью этих соединений или фармацевтических композиций, включающих соединения по изобретению.

Различные замещенные 2-ариламинофенилуксусные кислоты и их производные описаны, например, в J. Med. Chem. 33, 2358 (1990), в патентах US 3558690, US 3652762, US 4173577 и US 4548952, в DE 3445011 и в заявках WO 97/09977 и WO 96/00716 в качестве нестероидных противовоспалительных агентов и ингибиторов циклооксигеназы. Что касается 5-алкил-2-ариламинофенилуксусных кислот, то единственным известным из литературы примером является 5-метил-2-(2,6-диметиланилино)фенилуксусная кислота и ее натриевая соль (патент US 3558690), причем какие-либо данные о их биологической активности отсутствуют.

Нестероидные противовоспалительные агенты блокируют синтез простагландинов путем ингибирования фермента циклооксигеназы. Известно, что циклооксигеназа включает конститутивную изоформу (циклооксигеназа-1, СОХ-1) и индуцибельную изоформу (циклооксигеназа-2, СОХ-2). Вероятно, изоформа СОХ-1 отвечает за защитные полезные свойства простагландинов, например, в желудочно-кишечном тракте, в почке и т.д., в то время как индуцибельная изоформа СОХ-2, вероятно, отвечает за патологические состояния, связанные с простагландинами, такие как воспалительные состояния. Применение нестероидных противовоспалительных лекарств (НСПВЛ, в том числе диклофенака натрия, который представляет собой натриевую соль 2,6-дихлоранилинофенилуксусной кислоты) ограничено вследствие их токсичности в отношении желудочно-кишечного тракта, что в настоящее время связывают с ингибированием изоформы СОХ-1 циклооксигеназы. Установлено, что избирательное ингибирование индуцибельной изоформы СОХ-2 in vivo обусловливает противоспалительное и антиязвенное действие (Proc. Natl. Acad. Sci. (USA) 1994, 91: 3228-3232).

В настоящем изобретении предложены новые 5-алкилзамещенные 2- ариламинофенилуксусные кислоты и их производные, которые, как неожиданно было установлено при создании изобретения, ингибируют СОХ-2, но при этом не оказывают заметного ингибирующего действия в отношении СОХ-1. Таким образом, изобретение относится к новым нестероидным противовоспалительным агентам, которые, как неожиданно было установлено, лишены нежелательных побочных действий, обычно присущих классическим нестероидным противовоспалительным агентам, таким как побочные действия в отношении желудочно-кишечного тракта и почек.

Изобретение относится к соединениям формулы I где R обозначает метил или этил, R₁ обозначает хлор или фтор, R₂ обозначает водород или фтор, R₃ обозначает водород, фтор, хлор, метил, этил, метокси, этокси или гидрокси, R₄ обозначает водород или фтор, R₅ обозначает хлор, фтор, трифторметил или метил, к их фармацевтически приемлемым солям и к их фармацевтически приемлемым пролекарствам в виде сложных эфиров.

В одном из вариантов в изобретении предлагаются, в частности, соединения формулы I, в которых R обозначает метил или этил, R₁ обозначает хлор или в которых фтор, R₂ обозначает водород, R₃ обозначает водород, фтор, хлор, метил или гидрокси, R₄ обозначает водород и R₅ обозначает хлор, фтор или метил, их фармацевтически приемлемые соли и их фармацевтически приемлемые пролекарства в виде сложных эфиров.

В предпочтительном варианте осуществления изобретения предлагаются соединения формулы I, в которых R обозначает метил или этил, R₁ обозначает фтор, R₂ обозначает водород, R₃ обозначает водород, фтор или гидрокси, R₄ обозначает водород и R₅ обозначает хлор, их фармацевтически приемлемые соли и их фармацевтически приемлемые пролекарства в виде сложных эфиров.

В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения предлагаются соединения формулы I, в которых R обозначает этил или метил, R₁ обозначает фтор, R₂ обозначает водород или фтор, R₃ обозначает водород, фтор, этокси или гидрокси, R₄ обозначает водород или фтор и R₅ обозначает хлор, фтор или метил, их фармацевтически приемлемые соли и их фармацевтически приемлемые пролекарства в виде сложных эфиров.

Также предпочтительными являются соединения формулы I, в которых R обозначает метил или этил, R₁ обозначает фтор, R₂-R₄ обозначают водород или фтор и R₅ обозначает хлор или фтор, их фармацевтически приемлемые соли и их фармацевтически приемлемые пролекарства в виде сложных эфиров.

В еще одном предпочтительном варианте осуществления изобретения предлагаются соединения формулы I, в которых R обозначает метил или этил, R₁ обозначает фтор, R₂ обозначает фтор, R₃ обозначает водород, этокси или гидрокси, R₄ обозначает фтор и R₅ обозначает фтор, их фармацевтически приемлемые соли и их фармацевтически приемлемые пролекарства в виде сложных эфиров.

В еще одном предпочтительном варианте осуществления изобретения предлагаются соединения формулы I, в которых R обозначает метил, R₁ обозначает фтор, R₂ обозначает водород, R₃ обозначает водород или фтор, R₄ обозначает водород и R₅ обозначает хлор, их фармацевтически приемлемые соли и их фармацевтически приемлемые пролекарства в виде сложных эфиров.

Особенно предпочтительными являются следующие соединения формулы I: (а) в которых R обозначает метил, R₁ обозначает фтор, R₂ обозначает водород, R₃ обозначает водород, R₄ обозначает водород и R₅ обозначает хлор, их фармацевтически приемлемые соли и их фармацевтически приемлемые пролекарства в виде сложных эфиров, (б) в которых R обозначает метил, R₁ обозначает фтор, R₂ обозначает водород, R₃ обозначает фтор, R₄ обозначает водород и R₅ обозначает хлор, их фармацевтически приемлемые соли и их фармацевтически приемлемые пролекарства в виде сложных эфиров, (в) в которых R обозначает этил, R₁ обозначает фтор, R₂ обозначает фтор, R₃ обозначает водород, R₄ обозначает фтор и R₅ обозначает фтор, их фармацевтически приемлемые соли и их фармацевтически приемлемые пролекарства в виде сложных эфиров, (г) в которых R обозначает этил, R₁ обозначает хлор, R₂ обозначает водород, R₃ обозначает хлор, R₄ обозначает водород и R₅ обозначает метил, их фармацевтически приемлемые соли и их фармацевтически приемлемые пролекарства в виде сложных эфиров.

В контексте настоящего описания основные понятия имеют следующие значения.

"Фармацевтически приемлемые пролекарства в виде сложных эфиров обозначают производные в виде сложных эфиров", которые обладают способностью превращаться путем сольволиза или в физиологических условиях в свободные карбоновые кислоты формулы I. Такие сложные эфиры представляют собой (низш. )алкиловые эфиры (такие как метиловый или этиловый эфиры), карбокси-(низш. )алкиловые эфиры, такие как карбоксиметиловый эфир, нитроокси-(низш. )алкиловые эфиры (такие как 4-нитроксибутиловый эфир) и т.п. Предпочтительными являются соединения формулы Iа где R и R₁-R₅ имеют значения, указанные выше для соединений формулы I, и их фармацевтически приемлемые соли.

Фармацевтически приемлемые соли представляют собой соли металлов, такие как соли щелочных металлов, например соли натрия, калия, магния или кальция, а также соли аммония, которые образуются, например, с аммиаком и моно- или диалкиламинами, такие как соли диэтиламмония, и с аминокислотами, такие как соли аргинина и гистидина.

(Низш. )алкильная группа содержит до 7 атомов углерода, предпочтительно 1-4 атома углерода и представляет собой, например, метил, этил, пропил или бутил, и она может быть с прямой или разветвленной цепью.

Соединения по настоящему изобретению наиболее эффективны в качестве избирательных ингибиторов циклооксигеназы СОХ-2 или могут быть превращены в результате метаболизма в соединения, которые наиболее эффективны в качестве избирательных ингибиторов циклооксигеназы СОХ-2.

Таким образом, они пригодны для лечения у млекопитающих нарушений, связанных с циклооксигеназой, включая воспаление, повышенную температуру, боль, остеоартрит, ревматоидный артрит, связанную с мигренью головную боль, нейродегенеративные заболевания (такие как рассеянный склероз), болезнь Альцгеймера, остеопороз, астму, волчанку и псориаз.

Соединения по изобретению также пригодны для лечения неоплазии, особенно неоплазии, при которой продуцируются простагландины или происходит экспрессия циклооксигеназ, включая как доброкачественные, так и злокачественные опухоли, новообразования и полипы. Соединения по изобретению могут применяться для лечения любой неоплазии, например такой, которая указана в международной заявке WO 98/16222, опубликованной 23 апреля 1998 г., в частности неоплазии, образовавшийся из эпителиальных клеток. В частности, соединения по изобретению пригодны для лечения рака печени, мочевого пузыря, панкреатической железы, яичника, предстательной железы, шейки матки, легкого и молочной железы, главным образом рака желудочно-кишечного тракта, например рака толстой кишки, и рака кожи, например рака и меланомы клеток простого сквамозного эпителия или базальных клеток.

Под термином "лечение" в контексте настоящего описания следует понимать как терапевтические, так и профилактические способы лечения, например в отношении лечения неоплазии - терапию, способствующую предупреждению начала клинического или доклинического проявления неоплазии или способствующую предупреждению начала развития злокачественных клеток либо прекращению или реверсии развития предраковых клеток в раковые, а также предупреждению или ингибированию развития неоплазии или метастазов. В этом контексте следует, в частности, отметить, что под объем настоящего изобретения подпадает применение соединений по изобретению для ингибирования или предупреждения развития рака кожи, например карциномы клеток простого сквамозного эпителия или базальных клеток, вызванной УФ облучением, например, в результате постоянного облучения солнечным светом.

Соединения по изобретению обладают активностью при указанных выше показаниях и при этом практически лишены нежелательного побочного действия, такого как образование язв желудочно-кишечного тракта, что характерно для обычных ингибиторов циклооксигеназы.

Соединения по изобретению также обладают способностью абсорбировать УФ излучение и пригодны для блокирования или абсорбции УФ излучения, например для лечения или предупреждения солнечного ожога, например в виде предохраняющих от солнечного ожога композиций.

Соединения по изобретению также могут применяться при глазных болезнях, что предусматривает лечение глазных болезней, в частности глазных воспалительных болезней, глазной боли, включая боль, связанную с хирургией глаза, такой как операции по поводу PRK или катаракты, глазной аллергии, фотофобии различной этиологии, повышенного внутриглазного давления при глаукоме), за счет ингибирования продуцирования протеина, связанного с реакцией трабекулярной сети на глюкокортикоиды (TIGR), и болезни, связанной с сухостью глаз.

Вышеуказанные свойства могут быть продемонстрированы с помощью опытов in vitro и in vivo преимущественно с использованием млекопитающих, например крыс, мышей, собак, обезьян и выделенных из них клеток или препаратов ферментов. Эти соединения могут применяться in vitro в форме растворов, например водных растворов, и in vivo главным образом орально, местно или парентерально, например внутривенно. Применяемая in vitro доза может варьироваться в диапазоне молярных концентраций примерно от 10^-5 до 10^-9. Применяемая in vivo доза в зависимости от пути введения может варьироваться в диапазоне примерно от 1 до 100 мг/кг.

Ингибирование циклооксигеназы определяют in vitro с помощью опытов на клетках по ингибированию как циклооксигеназы-1, так и циклооксигеназы-2.

Опыты на клетках по выявлению активности ингибиторов циклооксигеназы основаны на том факте, что фермент циклооксигеназа (простагландин-Н-синтаза) катализирует скорость решающей стадии в пути синтеза простагландина из арахидоновой кислоты. В этой реакции участвуют два фермента: СОХ-1, представляющий собой конститутивную форму фермента, и СОХ-2, индуцирующийся в ответ на различные факторы роста и цитокины. Были выявлены клеточные линии, которые экспрессируют одну форму фермента, а именно, линия фибробластов кожи человека, у которой IL-1 (интерлейкин-1) может индуцировать синтез СОХ-2, и линия эпителиальных клеток почки 293, которая была стабильно трансфектирована с целью конститутивной экспрессии СОХ-1. Обе изоформы ответственны за метаболическое превращение арахидоновой кислоты в стабильный метаболит простагландин Е₂. Арахидоновая кислота может быть добавлена экзогенно с целью увеличить продуцирование до легко выявляемых уровней. Уровни простагландина Е₂ во внеклеточной среде определяют с помощью радиоиммунного анализа путем оценки активности фермента. С целью определения избирательной активности соединения сравнивают относительные активности каждой изоформы.

Ингибирование циклооксигеназы-1 (СОХ-1) и циклооксигеназы-2 (СОХ-2) in vitro определяют с помощью опытов на клетках с целью определения активности in vitro и избирательности в отношении ингибирования СОХ-2 с помощью радиоиммунного анализа простагландина Е₂. В опытах используют клетки, представляющие собой первичные фибробласты человека, индуцированные интерлейкином-1 с целью продуцирования СОХ-2, и линию эпителиальных клеток 293 почки человека, стабильно трансфектированную с целью конститутивной экспрессии СОХ-1. Клетки высевают в лунки планшетов, в которых проводят анализ. Фибробласты стимулируют к синтезу СОХ-2 обработкой в течение ночи IL-1, при этом клетки линии 293 не нуждаются в индуцировании. Обе клеточные линии предварительно обрабатывают в течение 15 мин при 37^oС соединениями с различной степенью разведения, а затем добавляют 40 мкМ арахидоновой кислоты в качестве экзогенного субстрата с целью продуцирования простагландина ₂ (PGE₂), количество которого оценивают в надосадочной жидкости с помощью радиоиммунного анализа. Для определения значений IC₅₀ соединения тестируют в 5 концентрациях, используя каждый раз по 4 повторности (наиболее высокая концентрация 30 мкМ), для каждой концентрации рассчитывают среднее значение ингибирования PGE₂ (по сравнению с клетками, не обработанными соединением), для всех экспериментов строят кривую зависимости среднего % ингибирования от десятичного логарифма (log) концентрации соединения и рассчитывают общее значение IC₅₀, используя аппроксимацию 4-параметрической логарифмической зависимостью.

Как правило, значения IС₅₀ соединений формулы I, определенные в опыте по ингибированию СОХ-2, близки примерно к 0,005 мкМ, в то время как значения IC₅₀, определенные в опыте по ингибированию СОХ-1, превышают 30 мкМ.

У репрезентативных соединений из примеров 6, 9 и 18 значения IC₅₀ в отношении ингибирования СОХ-2 составляют примерно 0,13, 0,25 и 0,007 мкМ соответственно, при этом они не вызывают никакого заметного ингибирования СОХ-1 в концентрации 30 мкМ.

Ингибирование продуцирования простагландина Е₂ с помощью СОХ-2 может быть определено in vivo с использованием в качестве модели крыс, которым в подкожный воздушный карман вводят липополисахарид (ЛПС) (см. "Advances in Inflammation Research", Raven Press, 1986 и J. Med. Chem. 396, 1846 (1996)).

Самок крыс линии Lewis подвергают анестезии и затем создают у них спинные воздушные карманы путем подкожной инъекции 10 мл воздуха через стерильный, снабженный фильтром шприц размером 0,45 мкм. Через 24 ч после этой процедуры в воздушные карманы инъецируют ЛПС (8 мкг/карман), суспендированный в стерильном забуференном фосфатом физиологическом растворе. Исследуемые соединения суспендируют в обогащенном кукурузном крахмале и вводят через желудочный зонд за 1 ч до инъекции ЛПС. Содержимое карманов собирают через 3 ч после инъекции ЛПС и путем ферментативного иммунного анализа оценивают уровни PGE₂, присутствующие в жидкостях карманов. Значения ЕD₅₀ в отношении ингибирования образования PGE₂ рассчитывают линейной регрессией по методу наименьших квадратов. У репрезентативных соединений из примеров 6, 9, 18 и 24 значения ED₅₀ находятся в диапазоне от примерно 0,2 мг/кг при введении перорально до примерно 0,6 мг/кг при введении перорально.

Ингибирование in vivo продуцируемого под воздействием СОХ-1 тромбоксана В₂ (ТХВ₂) может быть оценено ех vivo в сыворотке крыс после орального введения соединения.

В целом эта методика состоит в том, что крысам не дают корм в течение ночи, вводят через желудочный зонд соединение в носителе, представляющем собой обогащенный кукурузный крахмал, и через некоторый промежуток времени, составляющий от 30 мин до 8 ч, умерщвляют введением углекислого газа путем ингаляции. Кровь собирают путем сердечной пункции в пробирки без антикоагулянта, дают образоваться сгустку и отделяют сыворотку путем центрифугирования. Сыворотку хранят в замороженном виде до последующего определения уровня тромбоксана В₂ радиоиммунным анализом. В каждом эксперименте используют следующие группы (5-6 крыс на группу): контрольную группу, обработанную носителем, и группы, обработанные либо разными дозами тестируемого соединения, либо обработанные в различные моменты времени. Данные, полученные для тромбоксана В₂, выражают в виде процента относительно уровней, обнаруженных в контрольной группе, обработанной только носителем. Репрезентативные соединения I(d), l(g), 3(a) и 6(а) вызывают менее чем 50%-ное ингибирование продуцирования тромбоксана В₂ в сыворотке при введении оральной дозы, которая в 50-150 раз выше значения ED₅₀, необходимого для ингибирования COX-2 in vivo.

Противовоспалительную активность определяют в опыте, в котором у крыс вызывают отек лапки с помощью каррагинана.

Крысам линии Sprague Dawley (весом 200-225 г) не дают корм в течение ночи, а затем вводят орально соединение, суспендированное в растворе обогащенного кукурузного крахмала. Через 1 ч в подподошвенную область левой задней лапы инъецируют 0,1 мл 1%-ного каррагинана в физиологическом растворе, что вызывает воспалительную реакцию. Через 3 ч после введения каррагинана крыс безболезненно умерщвляют и отрезают обе задние лапы по линии начала волосяной части лапы и взвешивают на электронных весах. Массу отека воспаленной лапы определяют вычитанием веса невоспаленной лапы (правой) из веса воспаленной лапы (левой). Процент ингибирования соединением определяют для каждого животного в виде процента увеличения веса лапы по сравнению со средним значением в контроле. Значения ЕD₃₀ определяют для каждой кривой зависимости реакции от дозы, используя для аппроксимации кривой следующую формулу: 100/1+тангенс угла наклона кривой (концентрация лекарства/ЕD₅₀).

Значения ЕD₃₀ рассчитывают как средние значения ЕD₃₀, полученные из независимых опытов по определению зависимости реакции от дозы.

Анализ переносимости желудком используют для оценки образования язв у крыс через 4 ч после орального введения тестируемого соединения. Этот опыт проводят следующим образом.

Крысам не дают корм в течение ночи, вводят через желудочный зонд соединение в носителе, представляющем собой обогащенный кукурузный крахмал, и через 4 ч умерщвляют введением углекислого газа путем ингаляции. Удаляют желудки и подсчитывают и оценивают общие повреждения желудка, получая общую длину повреждения на особь. В каждом эксперименте используют следующие группы (5-6 крыс на группу): контрольную группу, обработанную носителем, группы, обработанные тестируемым соединением, и группы, обработанные диклофенаком в качестве эталонного соединения.

Данные рассчитывают в виде среднего количества язв в группе, средней длины язв (мм) в группе и индекса изъязвления (ИИ).

ИИ = средняя длина язв в группе х встречаемость язв, где встречаемость язв представляет собой долю животных в группе с повреждениями (100%-ная встречаемость равна 1).

Репрезентативные соединения из примеров 6, 9, 18 и 24 практически не оказывают какого-либо ульцерогенного воздействия на желудок в дозе 100 мг/кг при введении перорально.

Переносимость кишечником может быть определена путем оценки воздействия на проницаемость кишечника. Отсутствие возрастания проницаемости свидетельствует о переносимости кишечником.

Использованный для этой цели метод представляет собой модификацию метода, описанного Davis и др., Pharm. Res. 1994, 11: 1652-1656, и основан на том факте, что экскреция введенной орально ⁵¹Сr-ЭДТК, маркера проницаемости тонкого кишечника, увеличивается под воздействием НСПВЛ. Группам крыс (12 особей/группу) вводят однократную оральную дозу тестируемого соединения или носителя путем зондирования желудка. Немедленно после обработки соединением каждой крысе путем зондирования желудка вводят ⁵¹Сr-ЭДТК (5 мкКи/особь). Крыс помещают в отдельные клетки для измерения обмена веществ и дают пищу и воду по желанию. Мочу собирают в течение 24 ч. Через 24 ч после введения Cr-ЭДТК крыс умерщвляют. Для количественной оценки воздействия соединения на проницаемость кишечника измеренное количество ⁵¹ Сr-ЭДТК, выведенной с мочой, у обработанных соединением крыс сравнивают с количеством ⁵¹Сr-ЭДТК, выведенной с мочой, у крыс, обработанных носителем. Относительную проницаемость определяют, рассчитывая активность, присутствующую в каждом образце мочи, в виде процента от введенной дозы после коррекции на фоновый уровень излучения.

Репрезентативные соединения из примеров 6, 9, 18 и 24 не оказывают воздействия или оказывают лишь незначительное воздействие на проницаемость кишечника в дозе 30 мг/кг при введении перорально.

Аналгезирующее действие соединений по изобретению определяют, используя хорошо известный тест Рендалла-Селитто (Randall-Selitto). Согласно тесту Рендалла-Селитто по определению давления на лапу антиноцицепцию (аналгезирующее действие) в воспаленной ткани оценивают путем сравнения порогового давления на воспаленную лапу крысы после орального введения тестируемого лекарства и порогового давления на воспаленную лапу крыс, которым вводят орально носитель, т.е. кукурузный крахмал.

Группам из 10 самцов крыс линии Wistar весом 40-50 г не дают корм в течение ночи до опыта. Гипералгезию индуцируют путем инъекции 0,1 мл 20%-ной суспензии пивных дрожжей с помощью иглы номер 26 в подподошвенную область правой задней лапы. В левую лапу инъекцию не делают и ее используют в качестве контрольной лапы для определения гипералгезии. Носитель (обогащенная 3%-ная суспензия кукурузного крахмала) в дозе 10 мл/кг, эталонное соединение (диклофенак используют в каждом эксперименте в такой же дозе, что и тестируемые соединения) и тестируемые соединения в различных дозах, суспендированные в носителе, вводят в дозе 10 мл/кг орально через 2 ч после инъекции дрожжей. Пороговое давление, при котором происходит отдергивание лапы, оценивают количественно с помощью аналгезиметра типа Basile через 1 ч после орального введения тестируемых соединений.

Ноцицептивный порог определяют как силу в граммах, при которой крыса отдергивает лапу или издает звуки. И издание звуков, и отдергивание лапы считаются ответной реакцией.

Данные анализируют, сравнивая средний порог чувствительности к боли в обработанной носителем, т.е. кукурузным крахмалом, группе, в которую входят как крысы с воспаленными лапами, так и с невоспаленными лапами, с порогом чувствительности отдельных крыс, обработанных лекарством. Отдельных крыс в группах, обработанных лекарством, и группу, представляющую собой положительный контроль (обработка диклофенаком), называют "реактантами", если индивидуальный порог чувствительности к боли в каждой лапе превышает среднее значение порога в контрольной группе на два стандартных отклонения от среднего значения. Средние значения порогов чувствительности к боли воспаленной лапы в контрольной группе сравнивают с индивидуальными порогами чувствительности к боли воспаленной лапы в группе, обработанной тестируемым лекарством. Среднее значение порогового давления в контрольной группе с невоспаленными лапами сравнивают с индивидуальными значениями порогового давления в тестируемых группах. Результаты выражают в виде количества реактантов в каждой тестируемой группе (n=10) с воспаленными и невоспаленными лапами. Проценты рассчитывают делением количества реактантов на общее количество крыс, взятых для оценки каждого соединения.

Все репрезентативные соединения из примеров 6, 9, 18 и 24 увеличивают порог чувствительности к боли в воспаленной лапе при введении орально в дозе 10 мг/кг. Эти соединения избирательного увеличивают порог чувствительности к боли в воспаленной лапе и не увеличивают порог чувствительности к боли в невоспаленной лапе, что свидетельствует об их периферическом механизме действия.

Антиартритное действие соединений по изобретению может быть выявлено с помощью хорошо известного теста на крысах с индуцированным адъювантом хроническим артритом. Офтальмическое действие может быть продемонстрировано с использованием методов, хорошо известных в данной области.

Соединения формулы I могут быть получены, например, (а) сочетанием соединения формулы II или На где R имеет указанные выше значения, R_a обозначает (низш.)алкил, предпочтительно изопропил и R₆ и R₇ обозначают (низш.)алкил или R₆ и R₇ вместе с атомом азота обозначают пиперидино, пирролидино или морфолино, с соединением формулы III где R₁, R₂, R₃, R₄ и R₅ имеют указанные выше значения, в присутствии меди и йодида меди с получением соединения формулы IV или IVa и гидролизом образовавшегося соединения формулы IV или IVa с получением соединения формулы I, или (б) для соединений, в которых R обозначает этил, конденсацией соединения формулы V где R₁-R₇ имеют указанные выше значения, с реакционноспособным функционально активным производным уксусной кислоты, таким как ацетилхлорид, по реакции ацилирования Фриделя-Крафтса с получением соединения формулы VI где R₁-R₇ имеют указанные выше значения, которое в свою очередь подвергают гидрогенолизу, а затем гидролизуют с получением соединения формулы I, в котором R обозначает этил, или (в) гидролизом лактама формулы VII где R и R₁-R₅ имеют указанные выше значения, в присутствии сильного основания и при необходимости осуществлением в вышеуказанных процессах временной защиты любых препятствующих реакции реакционноспособных групп с последующим выделением образовавшегося соединения по изобретению и при необходимости превращением любого образовавшегося соединения в другое соединение по изобретению и/или при необходимости превращением свободной карбоновой кислоты по изобретению в ее фармацевтически приемлемое производное в виде сложного эфира и/или при необходимости превращением образовавшейся свободной кислоты в соль или образовавшейся соли в свободную кислоту или в другую соль.

В исходных и в промежуточных продуктах, которые подвергают превращению в соединения по изобретению приведенным в настоящем описании способом, присутствующие функционально активные группы, такие как амино-, гидрокси- и карбоксильные группы, необязательно защищают общепринятыми защитными группами, известными в области препаративной органической химии. Защищенные гидрокиси-, амино- и карбоксильные группы представляют собой группы, которые могут быть превращены в мягких условиях в свободные амино-, гидрокси- и карбоксильные группы без вступления в другие нежелательные побочные реакции. Например, гидроксизащитные группы предпочтительно представляют собой бензильные или замещенные бензильные группы.

Получение соединений формулы IV согласно варианту (а) осуществляют в условиях модифицированной реакции конденсации Ульмана с получением диариламинов, например, в присутствии порошкообразной меди и йодида меди (I) и карбоната калия, в инертном растворителе с высокой температурой кипения, таком как нитробензол, толуол, ксилол или N-метилпирролидон, при повышенной температуре, например при температуре в диапазоне 100-200^oС, предпочтительно при температуре дефлегмации, согласно общей методике, описанной у F. Nohara, Chem. Abstr. 94. 15402 (1951), и у Moser и др., J. Med. Chem. 33, 2358 (1990).

Промежуточные продукты формулы IV, в которых R₁ или R₅ обозначает метил или этил, могут быть получены из промежуточных продуктов формулы IV, в которых R₁ или R₅ обозначают бром, взаимодействием тетраметилолова или тетраэтилолова в условиях реакции Хека, т.е. в присутствии соли палладия (такой как Pd(OAc)₂ или Pd(Cl₂), триарилфосфина (такого как три(ортотолил)фосфина) и основания (такого как триэтиламин, ацетат натрия) в полярном растворителе, таком как диметилформамид.

Гидролиз образовавшихся орто-анилинофенилацетамидов формулы IV осуществляют в водном гидроксиде щелочного металла, например в 6н. NaOH, в присутствии спирта (например этанола, пропанола, бутанола) при повышенной температуре, такой как температура дефлегмации реакционной смеси.

Гидролиз сложных эфиров формулы IVa осуществляют по известным в данной области методам, например в щелочных условиях, как описано выше для соединений формулы IV, или в альтернативном варианте в кислых условиях, например с использованием метансульфоновой кислоты.

Исходные продукты формулы II или IIа обычно являются известными или могут быть получены по методам, известным в данной области, например по приведенным у F. Nohara в описании к заявке JP 78/96434 (1978).

Так, например, 5-метил- или 5-этилантраниловую кислоту превращают и производные орто-диазония с последующей обработкой йодидом щелочного металла в кислоте (например, в сульфоновой кислоте) с получением 5-алкил-2-йодбензойной кислоты. Путем восстановления с получением соответствующего бензилового спирта (например, в присутствии диборана), превращения этого спирта сначала в бромид, а затем в нитрил, гидролиза этого нитрила с получением уксусной кислоты и ее превращения в N,N-диалкиламид согласно известным в данной области методам получают исходный продукт формулы II. В альтернативном варианте исходные продукты формулы II, в которых R обозначает этил, могут быть получены по реакции Фриделя-Крафтса ацилированием оксиндола, например ацетилхлоридом, в присутствии хлорида алюминия, восстановлением образовавшегося кетона путем, например каталитического гидрогенолиза, с последующим гидролитическим расщеплением образовавшегося 5-этилоксиндола с получением 5-этил-2-аминофенилуксусной кислоты. Диазотизацией в присутствии, например, йодида калия, получают 5-этил-2-йодфенилуксусную кислоту, которую превращают в амид формулы II. Эфиры формулы IIа получают из соответствующих кислот согласно известным в данной области методам получения сложных эфиров.

Анилины формулы III либо являются известными в данной области, либо их получают по методам, хорошо известным в данной области, либо по методам, приведенным в настоящем описании.

Получение 5-этилзамещенных соединений согласно варианту (б) осуществляют в условиях реакции ацилирования Фриделя-Крафтса, например в присутствии хлорида алюминия в инертном растворителе, таком как 1,2-дихлорэтан, с последующим гидрогенолизом, например с использованием в качестве катализатора палладия на древесном угле, предпочтительно с использованием в качестве растворителя уксусной кислоты, при комнатной температуре и при давлении примерно 3 атм.

Исходные продукты формулы V обычно получают согласно описанному выше варианту (а), но используя в качестве исходного продукта амид формулы II, в котором R обозначает водород, например согласно методу, описанному в J. Med. Chem. 33, 2358(1990).

Получать соединения по изобретению согласно способу (в) можно в условиях, хорошо известных в данной области для гидролитического расщепления лактамов, предпочтительно с использованием сильного водного основания, такого как водный гидроксид натрия, необязательно в органическом смешивающемся с водой растворителе, таком как метанол, при повышенной температуре в диапазоне примерно от 50 до 100^o С, как это в общем виде представлено в патенте US 3558690.

Исходные продукты, представляющие собой оксиндолы, получают N-ацилированием диариламина формулы VIII где R и R₁-R₅ имеют указанные выше значения, с галоацетилхлоридом, предпочтительно с хлорацетилхлоридом, предпочтительно при повышенной температуре, например близкой к 100^oС, с получением соединения формулы IX где R и R₁-R₅ имеют указанные выше значения. Циклизацию соединения формулы IX осуществляют в условиях реакции алкилирования Фриделя-Крафтса в инертном растворителе, таком как дихлорбензол, в присутствии катализаторов Фриделя-Крафтса, например хлорида алюминия и дихлорида этилалюминя, при повышенной температуре, например при 120-175^oС.

Диариламины формулы VIII могут быть получены путем реакции конденсации Ульмана согласно приведенному в настоящем описании способу или с помощью других методов, известных в данной области, например по реакции сочетания Бухвальда.

Так, например, диариламины формулы VIII, в которых R₁, R₂, R₄ и R₅ обозначают фтор, a R₃ обозначает водород, могут быть получены взаимодействием соответствующего анилина (4-этил- или 4-метиланилина) с пентафторбензолом в присутствии сильного основания, такого как амид лития или н-бутиллития, как это в общем виде представлено в J. Fluorine Chemistry 5, 323 (1975).

Эфиры карбоновых кислот формулы I получают конденсацией карбоновой кислоты в форме соли или в присутствии основания с галогенидом (бромидом или хлоридом), соответствующим участвующему в реакции этерификации спирту (такому как бензилхлорацетат), по методам, хорошо известным в данной области, например в полярном растворителе, таком как диметилформамид, и при необходимости с дополнительной модификацией образовавшегося продукта.

Так, например, если продукт этерификации сам является сложным эфиром, он может быть превращен в карбоновую кислоту, например гидрогенолизом образовавшегося бензилового эфира. Если продукт этерификации сам является галогенидом, то он может быть, например, превращен в нитроорксипроизводное взаимодействием, например, с нитратом серебра.

Например, соединения формулы Iа предпочтительно получают конденсацией соли карбоновой кислоты приведенной выше формулы I с соединением формулы Х-СН₂СООR_a, где Х обозначает уходящую группу, a R_a обозначает карбоксизащитную