Производное карбоновой кислоты с конденсированными кольцами и фармацевтическая композиция на его основе

Производное карбоновой кислоты с конденсированными кольцами и фармацевтическая композиция на его основе

Реферат

 

Изобретение относится к производному карбоновой кислоты с конденсированными кольцами общей формулы (А), и его фармацевтически приемлемым солям, предназначенному для получения лекарственных средств, которые являются эффективными агонистами рецепторов ретиноевой кислоты. В вышеуказанном соединении формулы (А) символ обозначает простую или двойную связь; каждый из X, Y, Z, Р, Q, U, V и W обозначает -О-, -S- или группу формулы (а), в которой R^k (k = 1-8) обозначает водород, галоген, возможно замещенный низший алкил или подобную группу, и один из R⁷ и R⁸ обозначает группу формулы (b), в которой А и В независимо друг от друга являются возможно замещенным ароматическим углеводородным кольцом или ненасыщенным гетероциклическим кольцом; D обозначает возможно защищенную карбоксильную группу. Технический результат - новые соединения, обладающие агонистической активностью в отношении рецепторов ретиновой кислоты. 2 с. и 16.з.п. ф-лы, 2 табл.

Изобретение относится к производным карбоновых кислот с конденсированными кольцами и их фармацевтически приемлемым солям. Это изобретение, в частности, относится к новым производным карбоновых кислот с конденсированными кольцами, которые являются агонистами рецепторов ретиноевой кислоты (RAR), и к их фармацевтически приемлемым солям.

Ретиноевая кислота - это вещество, имеющее важное значение для роста и жизнедеятельности людей и других млекопитающих. Как известно, ретиноевая кислота является морфогенетическим фактором в онтогенезе и по-разному воздействует на дифференциацию и пролиферацию клеток взрослых субъектов. Например, известно, что эта кислота участвует в процессах ороговения, образования волос, функционирования сальных желез и других подобных функциях эпидермиса, в обмене веществ в костной ткане и хрящей соединительных тканей, в регулировании иммунных функций иммунной системы, в дифференциации нейронов нервной системы, в дифференциации и пролиферации клеток крови кроветворной системы, в липидном обмене, минеральном обмене, основном обмене и так далее. Физиологические действия ретиноевой кислоты осуществляются разными регуляторными механизмами через семейство рецепторов ретиноидов, находящихся в ядре клетки, например, путем регуляции экспрессии активаторов транскрипции, ферментов, таких как коллагеназа, активатор плазминогена ткани или тирозинкиназа, или регуляции образования цитокинов, таких как IL-6.

В настоящее время установлена взаимосвязь между вышеуказанными физиологическими действиями ретиноевой кислоты и разными заболеваниями. В частности, заслуживает внимания новый метод лечения некоторых видов рака, таких как острый промиелоцитарный лейкоз, в основе которого лежит дифференциация клеток под воздействием полностью транс-ретиноевой кислоты.

Однако применение ретиноевой кислоты вызывает определенные трудности, к которым относится, в частности, индукция Р450, являющегося печеночным метаболическим ферментом, вредные воздействия вследствие накопления этой кислоты в организме и другие проблемы. В связи с этим возникла необходимость в проведении научных исследований и создании новых соединений, родственных ретиноидам, которые можно использовать вместо ретиноевой кислоты в качестве профилактических и терапевтических средств для лечения разных болезней.

Задачей настоящего изобретения является создание новых соединений, родственных ретиноидам, которые могут быть использованы в качестве профилактических и терапевтических средств для лечения различных заболеваний.

Поставленная задача достигается использованием производных карбоновых кислот с конденсированными кольцами, которые будут описаны ниже, и это легло в основу данного изобретения.

Настоящее изобретение относится к производным карбоновых кислот с конденсированными кольцами, выраженным формулой (А), или к их фармацевтически пригодным солям: { в которой кольца L и М конденсированы друг с другом; символ обозначает простую или двойную связь; Х обозначает группу -О- или -S-, либо группу формулы: (в которой R¹ обозначает водород, галоген, возможно замещенный низший алкил, возможно замещенный циклоалкил, возможно замещенный арил, возможно замещенный гетероарил, возможно замещенный низший алкокси, возможно замещенный арилокси, возможно замещенный гетероарилокси, возможно замещенный циклоалкилалкил, возможно замещенный арилалкил, возможно замещенный гетероарилалкил, возможно замещенный циклоалкилокси, возможно замещенный циклоалкилалкилокси, возможно замещенный арилалкилокси, возможно замещенный гетероарилалкилокси, возможно замещенный алкенил или возможно замещенный алкинил) и x является целым числом, равным 0 или 1; Y обозначает группу -О- или -S-, либо группу формулы: (в которой R² обозначает водород, галоген, возможно замещенный низший алкил, возможно замещенный циклоалкил, возможно замещенный арил, возможно замещенный гетероарил, возможно замещенный низший алкокси, возможно замещенный арилокси, возможно замещенный гетероарилокси, возможно замещенный циклоалкилалкил, возможно замещенный арилалкил, возможно замещенный гетероарилалкил, возможно замещенный циклоалкилокси, возможно замещенный циклоалкилалкилокси, возможно замещенный арилалкилокси, возможно замещенный гетероарилалкилокси, возможно замещенный алкенил или возможно замещенный алкинил) и y является целым числом, равным 0 или 1; Z обозначает группу -О- или -S-, либо группу формулы: (в которой R³ обозначает водород, галоген, возможно замещенный низший алкил, возможно замещенный циклоалкил, возможно замещенный арил, возможно замещенный гетероарил, возможно замещенный низший алкокси, возможно замещенный арилокси, возможно замещенный гетероарилокси, возможно замещенный циклоалкилалкил, возможно замещенный арилалкил, возможно замещенный гетероарилалкил, возможно замещенный циклоалкилокси, возможно замещенный циклоалкилалкилокси, возможно замещенный арилалкилокси, возможно замещенный гетероарилалкилокси, возможно замещенный алкенил или возможно замещенный алкинил) и z является целым числом, равным 0 или 1; Р обозначает группу -О- или -S-, либо группу формулы: (в которой R⁴ обозначает водород, галоген, возможно замещенный низший алкил, возможно замещенный циклоалкил, возможно замещенный арил, возможно замещенный гетероарил, возможно замещенный низший алкокси, возможно замещенный арилокси, возможно замещенный гетероарилокси, возможно замещенный циклоалкилалкил, возможно замещенный арилалкил, возможно замещенный гетероарилалкил, возможно замещенный циклоалкилокси, возможно замещенный циклоалкилалкилокси, возможно замещенный арилалкилокси, возможно замещенный гетероарилалкилокси, возможно замещенный алкенил или возможно замещенный алкинил) и p является целым числом, равным 0 или 1; Q обозначает группу -О- или -S-, либо группу формулы: (в которой R⁵ обозначает водород, галоген, возможно замещенный низший алкил, возможно замещенный циклоалкил, возможно замещенный арил, возможно замещенный гетероарил, возможно замещенный низший алкокси, возможно замещенный арилокси, возможно замещенный гетероарилокси, возможно замещенный циклоалкилалкил, возможно замещенный арилалкил, возможно замещенный гетероарилалкил, возможно замещенный циклоалкилокси, возможно замещенный циклоалкилалкилокси, возможно замещенный арилалкилокси, возможно замещенный гетероарилалкилокси, возможно замещенный алкенил или возможно замещенный алкинил) и q является целым числом, равным 0 или 1; U обозначает группу -О- или -S-, либо группу формулы: (в которой R⁶ обозначает водород, галоген, возможно замещенный низший алкил, возможно замещенный циклоалкил, возможно замещенный арил, возможно замещенный гетероарил, возможно замещенный низший алкокси, возможно замещенный арилокси, возможно замещенный гетероарилокси, возможно замещенный циклоалкилалкил, возможно замещенный арилалкил, возможно замещенный гетероарилалкил, возможно замещенный циклоалкилокси, возможно замещенный циклоалкилалкилокси, возможно замещенный арилалкилокси, возможно замещенный гетероарилалкилокси, возможно замещенный алкенил или возможно замещенный алкинил) и w является целым числом, равным 0 или 1; V обозначает группу -О- или -S-, либо группу формулы: [в которой R⁷ обозначает водород, галоген, возможно замещенный низший алкил, возможно замещенный циклоалкил, возможно замещенный арил, возможно замещенный гетероарил, возможно замещенный низший алкокси, возможно замещенный арилокси, возможно замещенный гетероарилокси, возможно замещенный циклоалкилалкил, возможно замещенный арилалкил, возможно замещенный гетероарилалкил, возможно замещенный циклоалкилокси, возможно замещенный циклоалкилалкилокси, возможно замещенный арилалкилокси, возможно замещенный гетероарилалкилокси, возможно замещенный алкенил, возможно замещенный алкинил или группу формулы: (в которой А и В независимо друг от друга обозначают возможно замещенное ароматическое углеводородное кольцо или возможно замещенный ненасыщенный гетероцикл, и D обозначает возможно защищенный карбоксил)] и v является целым числом, равным 0 или 1; и W обозначает группу -О- или -S-, либо группу формулы: [в которой R⁸ обозначает водород, галоген, возможно замещенный низший алкил, возможно замещенный циклоалкил, возможно замещенный арил, возможно замещенный гетероарил, возможно замещенный низший алкокси, возможно замещенный арилокси, возможно замещенный гетероарилокси, возможно замещенный циклоалкилалкил, возможно замещенный арилалкил, возможно замещенный гетероарилалкил, возможно замещенный циклоалкилокси, возможно замещенный циклоалкилалкилокси, возможно замещенный арилалкилокси, возможно замещенный гетероарилалкилокси, возможно замещенный алкенил, возможно замещенный алкинил или группу формулы: (в которой А и В независимо друг от друга обозначают возможно замещенное ароматическое углеводородное кольцо или возможно замещенный ненасыщенный гетероцикл и D обозначает возможно защищенный карбоксил)] и w является целым числом, равным 0 или 1; при условии, что символ в формуле: использованный в приведенных выше определениях X, Y, Z, Р, Q, U, V и W, обозначает простую или двойную связь; два смежных R¹, R², R³, R⁴, R⁵, R⁶, R⁷ и R⁸ вместе с атомами углерода, к которым они присоединены, могут образовывать содержащее гетероатом или замещенное кольцо; x, y, z и p должны удовлетворять отношению: 4x+y+z+p3, и u, v, w и q должны удовлетворять отношению: 4u+v+w+q3, и один из V и W является группой формулы: (в которой R^k' относится к R⁷ или R⁸), где R⁷ или R⁸ является группой формулы: (в которой А и В независимо друг от друга обозначают возможно замещенное ароматическое углеводородное кольцо или возможно замещенный ненасыщенный гетероцикл, и D обозначает возможно защищенный карбоксил), за исключением соединений формулы (А), в которой кольцо L является полностью насыщенным}.

Другим объектом настоящего изобретения являются лекарственные композиции, содержащие фармацевтически эффективное количество вышеуказанных производных карбоновых кислот с конденсированными кольцами, их фармацевтически приемлемых солей или гидратов солей и фармацевтически приемлемые наполнители.

Еще одним объектом настоящего изобретения являются агонисты рецепторов ретиноевой кислоты (RAR), которые представляют собой вышеуказанные производные карбоновых кислот с конденсированным кольцом, их фармацевтически приемлемые соли или гидраты солей.

Настоящее изобретение относится также к профилактическим и терапевтическим средствам, предназначенным для лечения болезней, в отношении которых эффективно действуют агонисты рецепторов ретиноевой кислоты.

Кроме того, объектом настоящего изобретения является способ профилактики и лечения болезней, в отношении которых эффективно действуют агонисты рецепторов ретиноевой кислоты, посредством введения нуждающемуся субъекту фармацевтически эффективного количества вышеуказанных производных карбоновых кислот с конденсированными кольцами, их фармацевтически приемлемых солей или гидратов солей, и применение вышеуказанных производных карбоновых кислот с конденсированными кольцами, их фармацевтически приемлемых солей или гидратов солей для получения лекарственных средств для лечения болезней, в отношении которых эффективно действуют агонисты рецепторов ретиноевой кислоты.

В приведенной выше формуле (А) термин "галоген" в определении R¹, R², R³, R⁴, R⁵, R⁶, R⁷ и R⁸ означает фтор, хлор, бром или иод.

Термин "низший алкил" в определении R¹, R², R³, R⁴, R⁵, R⁶, R⁷ и R⁸ означает алкильную группу с линейной или разветвленной цепью, имеющую 1-6 атомов углерода. Примерами такой группы являются метил этил, н-пропил, изопропил, н-бутил, изобутил, втор-бутил, трет-бутил, н-пентил, 1,2-диметилпропил, 1,1-диметилпропил, 2,2-диметилпропил, 2-этилпропил, н-гексил, 1,2-диметилбутил, 2,3-диметилбутил, 1,3-диметилбутил, 2,2-диметилбутил, 3,3-диметилбутил, 1,1-диэтилпропил, 2,2-диэтилпропил, 1,2-диэтилпропил, 1-этил-2-метилпропил, 1-метил-2-этилпропил и 1,1-диэтилэтил. Эти алкильные группы могут быть замещены одним-тремя атомами галогена, например атомами фтора, хлора, брома или иода. То есть вышеуказанная низшая алкильная группа с линейной или разветвленной цепью означает также трифторметил, дибромэтил и другие.

Термин "циклоалкил" в определении R¹, R², R³, R⁴, R⁵, R⁶, R⁷ и R⁸ означает группу с 3-8 атомами углерода, и примерами такой группы являются циклопропил, циклобутил, циклопентил, циклогексил, циклогептил и циклооктил.

Термин "низший алкокси" в определении R¹, R², R³, R⁴, R⁵, R⁶, R⁷ и R⁸ означает алкоксильную группу с линейной или разветвленной цепью, имеющую 1-6 атомов углерода. Примерами такой группы являются метокси, этокси, н-пропокси, изопропокси, н-бутокси, втор-бутокси, трет-бутокси, н-пентилокси, 1,2-диметилпропилокси, 1,1-диметилпропилокси, 2,2-диметилпропилокси, 2-этилпропилокси, н-гексилокси, 1,2-диметилбутилокси, 2,3-диметилбутилокси, 1,3-диметилбутилокси, 1-этил-2-метилпропилокси и 1-метил-2-этилпропилокси. Кроме того, эти алкоксильные группы могут быть замещены одним-тремя атомами галогена, такими как атомы фтора, хлора, брома или иода. То есть, вышеуказанная низшая алкоксильная группа означает также трифторметокси, дибромэтокси и другие.

Как указывалось выше, R¹, R², R³, R⁴, R⁵, R⁶, R⁷ и R⁸ могут обозначать возможно замещенный арил, и термин "арил" в этом случае означает фенил, 1-нафтил, 2-нафтил, антраценил или тому подобное.

Как указывалось выше, каждый из А и В может обозначать возможно замещенное ароматическое углеводородное кольцо, и термин "ароматическое углеводородное кольцо" в этом случае означает бензольное кольцо, нафталиновое кольцо, антраценовое кольцо или тому подобное.

Термин "возможно замещенный гетероарил" в определении R¹, R², R³, R⁴, R⁵, R⁶, R⁷ и R⁸ означает группу, полученную из моноциклического или конденсированного кольца с одним-четырьмя атомами серы, кислорода или азота. Примерами такой группы являются тиенил, фурил, бензотиенил, бензофуранил, изобензофуранил, пирролил, имидазолил, пиразолил, изотиазолил, изоксазолил, пиридил, пиразинил, пиримидинил, пиридазинил, индолизинил, изоиндолил, индолил, изохинолинил, хинолил, фталазинил, хиноксалинил, нафтиридинил, хиназолинил, акридинил и фуразанил.

Как указывалось выше, каждый из А и В может обозначать возможно замещенный гетероцикл, и термин "гетероцикл" в этом случае означает моноциклическое или конденсированное кольцо с одним-четырьмя атомами серы, кислорода и/или азота. Примерами такого кольца являются тиофеновое кольцо, фурановое кольцо, бензотиофеновое кольцо, бензофурановое кольцо, изобензофурановое кольцо, пиррольное кольцо, имидазольное кольцо, пиразольное кольцо, изотиазольное кольцо, изоксазольное кольцо, изоиндольное кольцо, индольное кольцо, изохинолиновое кольцо, хинолиновое кольцо, фталазиновое кольцо, хиноксалиновое кольцо, нафтиридиновое кольцо, хиназолиновое кольцо, акридиновое кольцо и фуразановое кольцо.

Как указывалось выше, R¹, R², R³, R⁴, R⁵, R⁶, R⁷ и R⁸ могут обозначать возможно замещенный арилалкил, и термин "арил" в этом случае имеет приведенные выше значения. Кроме того, термин "алкил" в этом случае имеет значения, указанные выше для низшего алкила.

Термин "возможно замещенный гетероарилалкил" в определении ¹, R², R³, R⁴, R⁵, R⁶, R⁷ и R⁸ означает группу, полученную путем присоединения вышеуказанной гетероарильной группы к любому атому углерода указанной алкильной группы.

Заместителями вышеуказанных возможно замещенных арильных, гетероарильных, арилалкильных или гетероарилалкильных групп являются низшие алкильные группы с линейной и разветвленной цепью, такие как метил, этил, н-пропил и изопропил; низшие алкоксильные группы с линейной и разветвленной цепью, такие как метокси, этокси, н-пропокси и изопропокси; галогенсодержащие группы, такие как фтор, хлор, бром и иод; возможно замещенные арильные группы; возможно замещенные гетероарильные группы; возможно замещенные арилалкильные группы; возможно замещенные гетероарилалкильные группы; галогенсодержащие группы; гидрокси; гидроксиалкильные группы; алкоксиалкильные группы и тому подобные.

Как указывалось выше, D обозначает возможно защищенный карбоксил, и примерами защитных групп для этой карбоксильной группы являются низшие алкильные группы, такие как метил, этил и трет-бутил; возможно замещенные фенилированные низшие алкильные группы, такие как параметоксибензил, паранитробензил, 3,4-диметоксибензил, дифенилметил, тритил и фенэтил; галогенированные низшие алкильные группы, такие как 2,2,2-трихлорэтил и 2-иодэтил; низшие алканоилокси низшие алкильные группы, такие как пивалоилоксиметил, ацетоксиметил, пропионилоксиметил, бутирилоксиметил, валерилоксиметил, 1-ацетоксиэтил, 2-ацетоксиэтил, 1-пивалоилоксиэтил и 2-пивалоилоксиэтил; высшие алканоилокси низшие алкильные группы, такие как пальмитоилоксиэтил, гептадеканоилоксиметил и 1-пальмитоилоксиэтил; низшие алкоксикарбонилокси низшие алкильные группы, такие как метоксикарбонилоксиметил, 1-бутоксикарбонилоксиэтил и 1-(изопропоксикарбонилокси)этил; карбоксилированные низшие алкильные группы, такие как карбоксиметил и 2-карбоксиэтил; гетероарильные группы, такие как 3-фталидил; возможно замещенные бензоилокси низшие алкильные группы, такие как 4-глицилоксибензоилоксиметил; (замещенный диоксолен) низшие алкильные группы, такие как (5-метил-2-оксо-1,3-диоксолен-4-ил)метил; циклоалкилированные низшие алканоилокси низшие алкильные группы, такие как 1-циклогексилацетилоксиэтил; циклоалкилоксикарбонилокси низшие алкильные группы, такие как 1-циклогексилоксикарбонилоксиэтил; и возможно замещенные аминогруппы. То есть, термин "возможно защищенный карбоксил" означает карбоксил или группу, которая может быть расщеплена химическими способами или in vivo с получением карбоновой кислоты.

Примерами фармацевтически приемлемых солей по настоящему изобретению являются неорганические соли, такие как гидрохлориды, гидробромиды, сульфаты и фосфаты; соли органических кислот, такие как ацетаты, малеаты, тартраты, метансульфонаты, бензолсульфонаты и толуолсульфонаты; и соли аминокислот, такие как аспартаты и глутаматы.

В объем данного изобретения входят также оптические изомеры соединений по настоящему изобретению.

Соединения по настоящему изобретению можно легко получить известными способами или несколькими такими способами, используемыми в сочетании. Ниже приведен пример способа получения.

Способ получения 1 Соединения формулы (А), в которой А является пиррольным кольцом, можно получить следующим способом (см. схему I в конце описания).

(Стадия 1) На этой стадии получают аллиловый спирт (2) в результате взаимодействия альдегида (1) с металлорганическим реагентом известным способом.

Металлорганическими реагентами являются реактивы Гриньяра, литийорганические реагенты, цинкорганические реагенты, медьорганические комплексы и тому подобные. Хотя на этой стадии можно использовать любой инертный растворитель, предпочтение отдается эфирным растворителям, таким как простой эфир или тетрагидрофуран. Температура реакции может находиться в интервале от -78^oС до температуры кипения растворителя, предпочтительно от около -78^oС до 20^oС.

(Стадия 2) На этой стадии аллиловый спирт (2), полученный на стадии (1), окисляют в винилкетон (3) известным способом.

Хотя окисление можно осуществлять любым известным способом, предпочтение отдается использованию приемлемого оксиданта. Примерами оксиданта являются активированный диоксид марганца, хлорхромат пиридиния, дихромат пиридиния, реактив Десса-Мартина и реактив окисления Сверна. Хотя для окисления можно использовать любой инертный органический растворитель, предпочтение отдается дихлорметану, хлороформу или ацетону. Температура реакции может находиться в интервале от около -78^oС до температуры кипения растворителя, предпочтительно от около -78^oС до 20^oС.

(Стадия 3) На этой стадии в результате взаимодействия винилкетона (3), полученного на стадии (2), и альдегида (4), полученного в соответствии со способом Стеттера и др., описанным в журнале Org. Synth. 65, 26, получают дикетон формулы (5).

Лучшие результаты можно получить, используя в качестве катализатора соль тиазолия. В этом случае предпочтительно используют основание, такое как триэтиламин, ацетат натрия и тому подобное. Кроме того, при осуществлении вышеуказанной реакции можно использовать такой растворитель, как метанол, этанол, N, N-диметилформамид или тому подобный. Температура реакции предпочтительно находится в интервале от около 60^oС до температуры кипения растворителя.

(Стадия 4) На этой стадии дикетон (5), полученный на стадии (3), превращают в пиррол формулы (6) известным способом.

Целевое соединение (6) можно получить, например, в результате взаимодействия дикетона (5) с солью аммония, такой как ацетат аммония, или первичным амином. В этом случае можно использовать спиртовой растворитель, такой как метанол, этанол или уксусная кислота. Температура реакции предпочтительно находится в интервале от 70^oС до температуры кипения растворителя.

(Стадия 5) На этой стадии пиррол (6), полученный на стадии (4), гидролизуют известным способом с получением конечного целевого соединения формулы (7). Лучшие результаты можно получить при использовании основания, в частности, водного раствора гидроксида лития, гидроксида натрия, гидроксида калия или тому подобного. Предпочтительными примерами растворителя для указанного гидролиза являются спирты, такие как метанол и этанол, и эфиры, такие как тетрагидрофуран. Температура реакции предпочтительно находится в интервале от около 20^oС до температуры кипения растворителя.

Схему II другого способа получения дикетона (5), используемого при осуществлении вышеуказанного способа получения 1, см. в конце описания.

Способ получения 1' Дикетон (5) можно также получить в результате взаимодействия винилкетона (8), полученного так же, как в способе 1, с альдегидом (1) в присутствии такого катализатора, как соль тиазолия, в соответствии со способом Стеттера и др. Лучшие результаты можно получить при использовании основания, такого как триэтиламин, ацетат натрия или тому подобный. При осуществлении этого способа используют растворители, которыми могут быть спирты, такие как метанол и этанол, N,N-диметилформамид и тому подобные. Температура реакции предпочтительно находится в интервале от около 60^oС до температуры кипения растворителя.

Ниже приведены примеры фармакологических экспериментов, иллюстрирующие эффективность настоящего изобретения.

Пример фармакологического эксперимента 1 Анализ связывания с рецепторами при использовании фракции ядерного экстракта клеток, содержащих перенесенные в них гены рецепторов ретиноевой кислоты -, - и --Гены рецепторов ретиноевой кислоты (RAR) человека были перенесены в клетки почки детеныша хомяка (ВНК) с получением клеток, постоянно экспрессирующих -, - и --белки RAR. Экспериментальная система для измерения специфического связывания полностью транс-ретиноевой кислоты с RAR создана путем использования фракции ядерного экстракта клеток. Способность каждого соединения связываться с рецепторами ретиноевой кислоты определяли путем измерения ингибирования специфического связывания. Кроме того, сравнивая способность соединений связываться с рецепторами ретиноевой кислоты, определяли избирательность каждого соединения в отношении разных RAR.

(1) Экспериментальный метод а) Получение фракции ядерного экстракта Вышеуказанные клетки ВНК (510⁸) с перенесенными в них генами RAR суспендировали в 15 мл раствора А (фосфат натрия (рН 7,4): 5 ммоль, монотиоглицерин: 10 ммоль, глицерин: 10% (в объемном отношении), фенилметилсульфонилфторид (PMSF): 1 ммоль, апротинин: 10 мкг/мл и лейпептин: 25 мкг/мл). Полученную суспензию гомогенизировали и центрифугировали, чтобы удалить образовавшийся супернатант. Полученный осадок суспендировали в 15 мл раствора В (трис-НСl (рН 8,5): 10 ммоль, монотиоглицерин: 10 ммоль, глицерин: 10% (в объемном отношении), фенилметилсульфонилфторид: 1 ммоль, апротинин: 10 мкг/мл, лейпептин: 25 мкг/мл и КСl: 0,4 моль). Полученную суспензию оставляли на один час для выстаивания при температуре 4^oС и подвергали ультрацентрифугированию со скоростью 100000 x градиент, при температуре 4^oС в течение одного часа. Полученный супернатант хранили до использования в виде фракции ядерного экстракта в замороженном состоянии при температуре -80^oС (Methods in Enzymology, 189, 248).

b) Анализ связывания с рецепторами В каждую лунку 96-луночного планшета, изготовленного из полипропилена, вводили 180 мкл вышеуказанной фракции и 10 мкл разбавленного раствора полностью транс-ретиноевой кислоты или испытуемого соединения, а затем добавляли 10 мкл 10 нмолей ³H-полностью транс-ретиноевой кислоты. Планшет оставляли на 16 часов для выстаивания при температуре 4^oС. К полученной реакционной смеси добавляли раствор, содержащий 3% угля и 0,3% декстрана, и центрифугировали, чтобы удалить свободную ³H-полностью транс-ретиноевую кислоту. С помощью сцинтилляционного счетчика определяли радиоактивность полученного супернатанта. Специфическое связывание для каждого RAR определяли следующим образом: за неспецифическое связывание принимали радиоактивность, обнаруженную при 500-кратном добавлении полностью транс-ретиноевой кислоты, величину которой вычитали из определенной выше радиоактивности. Описанные ниже соединения ингибировали связывание ³H-полностью транс-ретиноевой кислоты в зависимости от концентрации.

(2) Результаты эксперимента Концентрацию, при которой связывание ³H-полностью транс-ретиноевой кислоты для каждого рецептора ингибировано на 50%, то есть IC50 высчитывали исходя из специфического связывания для рецепторов ретиноевой кислоты. Значения относительной активности, приведенные в таблице 1, высчитаны с учетом того, что величина IC50 полностью транс-ретиноевой кислоты принята равной 1.

Пример фармакологического эксперимента 2 Измерение активирующей транскрипцию активности у рецепторов ретиноевой кислоты Экспрессирующие векторы RAR человека и секреторные генные векторы алкалинфосфатазы (векторы PLAP), интегрированные в обратном направлении компетентной последовательности, экспрессия которой ингибирована в результате связывания с рецепторами ретиноевой кислоты в зависимости от лиганда, временно переносили в клетки COS-1 (клетки почки африканской зеленой мартышки), после чего векторы PLAP, которые получали в зависимости от лиганда и секретировали в культуральную среду, анализировали химиолюминесцентным методом с целью определения активирующей транскрипцию активности каждого соединения. Помимо этого, определяли избирательность каждого соединения в отношении рецепторов ретиноевой кислоты, для чего сравнивали активирующую транскрипцию активность соединения у разных рецепторов.

(1) Экспериментальный метод В 60 мм чашку для культивирования помещали 2,510⁴ клеток COS-1. Через четыре дня в эти клетки переносили методом липофексии по 4 мкг -, - и -экспрессирующих векторов RAR и векторов PLAP. Еще через один день полученные клетки выделяли и помещали на 96-луночный культуральный планшет в количестве 210⁴ в каждую лунку. Спустя четыре часа клетки переносили в среду, содержащую обработанную углем фетальную телячью сыворотку, и добавляли разбавленный раствор полностью транс-ретиноевой кислоты или испытуемого соединения. По истечении 36 часов супернатант удаляли и полученные пробы обрабатывали в течение 10 минут при температуре 65^oС, чтобы подавить неспецифическую активность. 15 мкл Каждой пробы смешивали с 60 мкл 28 мкмолей натрий-карбонатного буфера (рН 10) и добавляли 75 мкл субстрата Smilight (фирменное наименование, продукт фирмы Sumitomo Metal Industries, Ltd., субстрат для химиолюминесценции). Полученную смесь подвергали взаимодействию при температуре 37^oС в течение 30 минут, после чего определяли интенсивность люминесценции. Описанные ниже соединения вызывали транскрипционную активность рецепторов ретиноевой кислоты в зависимости от концентрации.

(2) Результаты эксперимента Транскрипционную активность, индуцируемую 1 мкмолем полностью транс-ретиноевой кислоты, принимали за 100% и для каждого соединения высчитывали концентрацию, при которой достигалось ингибирование 30% этой активности, то есть ED30. В таблице 2 приведены значения относительной активности соединений для каждого рецептора, высчитанные с учетом того, что величина ED30 полностью транс-ретиноевой кислоты принята равной 1.

Приведенные выше примеры фармакологических экспериментов показывают, что производные карбоновых кислот формулы (А) или их фармацевтически приемлемые соли являются агонистами рецепторов ретиноевой кислоты. Поэтому соединения по настоящему изобретению представляют собой полезные профилактические и терапевтические средства, предназначенные для лечения болезней, в отношении которых эффективно действуют агонисты рецепторов ретиноевой кислоты, то есть разных аномалий ороговения и кожных болезней, таких как ксеродермия, псориаз, экзематозное поражение суставов, угри или лейкоплакия; разных видов алопеции, таких как очаговая алопеция, себорейная алопеция или алопеция вследствие кахексии; разных остеопорозов и нарушений остеогенеза, таких как пост климактерический остеопороз, старческий остеопороз, стероидный остеопороз, идиопатический остеопороз, диабетическое нарушение остеогенеза, ревматоидное нарушение остеогенеза или почечное нарушение остеогенеза; болезней костей и суставов, таких как эктопический гиперостоз, остеоартрит или периартрит плечевого сустава; аутоиммунных заболеваний, таких как хронический ревматоидный артрит, рассеянный склероз, системная люпоидная эритема, болезнь Бехчета, грибовидный микоз, системная склеродермия, внезапная тромбоцитопеническая пурпура, миастения, дерматомиозит или узелковый артериосклероз; разных видов лейкоза, таких как острый промиелоцитарный лейкоз, острый миелоцитарный лейкоз или хронический лейкоз; отторжения трансплантата при трансплантации органов; реакции "трансплантат против хозяина" при пересадке костного мозга или стволовых клеток; нефропатии, в частности, нефропатического синдрома; гломерулонефрита; злокачественной лимфомы, в частности, грибовидного микоза; плоскоклеточного рака, в частности, плоскоклеточного рака головы и шеи; твердой карциномы, в частности, рака мочевого пузыря, рака легкого, рака пищевода, рака головы и шеи, рака толстой кишки, рака предстательной железы или рака поджелудочной железы; воспалительных и аллергических заболеваний, таких как атопический дерматит или астма; иммунологической недостаточности и трудноизлечимых инфекционных болезней, таких как иммунодефицит, инфекционные болезни, вызываемые вирусом цитомегалии вследствие ослабления иммунной системы, внутриутробными инфекциями или условно-патогенными микроорганизмами; гипертиреоза; гиперкальциемии; разных фиброзов, таких как пневмофиброз, фиброз печени или цирроз печени; атеросклероза и рестеноза после операции по восстановлению кровообращения; других доброкачественных видов гиперплазии, таких как внутриматочная гиперплазия, гипертрофия предстательной железы, пролиферативная витреоретинопатия и дисплазия; заболеваний, связанных с обменом веществ и переносом липидов, таких как гиперлипемия; диабетов; ран; синдрома сухого глаза; кожных поражений под воздействием солнечных лучей и болезней, эффективно излечиваемых путем стимуляции апоптоза.

Соединения по настоящему изобретению являются нетоксичными и совершенно безопасными веществами, что также делает их весьма полезными.

Соединения по настоящему изобретению можно вводить нуждающимся субъектам разными способами. В частности, их можно вводить перорально в качестве профилактических или терапевтических средств в виде таблеток, порошков, гранул, капсул, сиропов и тому подобных, либо их можно вводить парентерально в виде суппозиториев, инъекций, наружных препаратов или капель.

Хотя доза соединений в значительной степени зависит от характера заболевания, тяжести симптомов, промежутка времени между внезапным приступом и первым введением, возраста, пола, чувствительности субъекта и тому подобного, эти соединения можно вводить взрослому субъекту в количестве от около 0,03 до 1000 мг, предпочтительно от 0,1 до 500 мг, более предпочтительно от 0,1 до 100 мг в день в виде нескольких доз.

Когда соединение вводят путем инъекций, его доза обычно составляет от около 1 до 3000 мкг/кг, предпочтительно от около 3 до 1000 мкг/кг.

Соединения по настоящему изобретению можно вводить в состав фармацевтических препаратов, используя для этой цели известные наполнители.

В частности, твердый фармацевтический препарат для перорального введения по настоящему изобретению можно получить путем смешивания наполнителя, связывающего вещества, дезинтегратора, смазывающего веществам красителя, модификатора лекарственных веществ, антиоксиданта и подобных веществ с основным лекарственным средством и формования из полученной смеси таблеток, таблеток с покрытием, гранул, порошков, капсул или тому подобного в соответствии с известными способами.

Примерами наполнителей являются лактоза, кукурузный крахмал, сахароза, глюкоза, сорбит, кристаллическая целлюлоза и диоксид кремния.

Примерами связывающих веществ являются поливиниловый спирт, поливиниловый эфир, этилцеллюлоза, метилцеллюлоза, ара