Применение гексоксида мышьяка (as4o6) для лечения рака и фармацевтическая композиция

Применение гексоксида мышьяка (as4o6) для лечения рака и фармацевтическая композиция

Реферат

 

Изобретение относится к области медицины. Гексоксид мышьяка (As₄O₆) предлагается использовать в качестве противоракового лекарственного средства. Предлагается также фармацевтическая композиция на его основе. Гексоксид мышьяка (As₄O₆), природное химическое вещество, полученное из Sinsuk, более эффективен, поскольку после элиминации токсического свойства оказывает прямой цитотоксичный эффект на опухолевые клетки и ингибирует образование новых кровеносных сосудов опухолевых образований, что приводит к полному излечиванию злокачественных (раковых) опухолей. 2 с. и 5 з.п. ф-лы, 62 ил., 9 табл.

Область изобретения Изобретение относится к идентификации HD-2, природного химического вещества, которое было выделено и очищено из природного продукта, Sinsuk, как гексоксида мышьяка (Аs₄O₆), и к его терапевтической эффективности в качестве противоракового лекарственного средства и фармацевтической композиции и, более конкретно, к способам очистки природного химического вещества (гексоксида мышьяка, As₄O₆) из Sinsuk, с элиминацией токсичности, и новому противораковому действию As₄O₆ и его фармацевтической композиции посредством их прямой цитотоксичности и ингибирования нового развития кровеносных сосудов (ангиогенеза) в участках и вокруг участков опухоли.

Предпосылки изобретения В общем, в настоящее время доступны различные лекарственные средства для противораковой химиотерапии. Алкилирующие агенты, такие как цисплатин и циклофосфамид, проявляют их противораковое действие путем образования ковалентных связей с атомами азота нуклеотидов ДНК вследствие высокой электрофильной способности их активного сайта. Антиметаболиты, такие как 5-фторурацил, действуют посредством ингибирования ферментов, участвующих в биосинтезе нуклеиновых кислот, или посредством встраивания их самих в структуры ДНК или РНК. Некоторые антибиотики, такие как адриамицин, оказывают сильное действие на ДНК, ингибируя нормальную функцию ДНК, что приводит к ингибированию роста опухоли. Но все эти противораковые агенты воздействуют не только на патологические опухолевые клетки, но также на нормальные здоровые клетки, в частности на клетки костного мозга или эпителий кишечника, с высокой интенсивностью круговорота, что вызывает серьезные осложнения и токсичность, такие как миелосупрессия, алопеция, почечная недостаточность, тошнота и рвота, нейротоксичность и т.д.

С другой стороны, мышьяк был известен как сильнодействующий канцероген окружающей среды, часто поражающий кожу и легкие. Сообщается, что мышьяк связывается с сульфгидрильной структурой ферментов, инактивируя ферменты-мишени, с ингибированием реакций фосфорилирования и дефосфорилирования, которые являются жизненно важными для регуляции активностей ферментов, и индуцированием дефектов в хромосомах. Поэтому мышьяк исследовали до сих пор главным образом в токсикологическом аспекте в связи с этими сообщениями.

Однако в прошлом мышьяк использовали в качестве терапевтического агента как в Восточной, так и в Западной медицине. В частности, в традиционной Китайской медицине, в том числе Корейской медицине, соединения мышьяка прописывали в течение длительного времени для лечения некоторых смертельных болезней, например для уничтожения злой энергии. В старой медицинской литературе Кореи и Китая описывается, что мышьяк прописывали в качестве лекарственного средства под названием Eungwhang, на странице 1234 или под названием Bisang на странице 1237 TonEuiBoGam (NamSaDang), или Энциклопедии Восточной Медицины, где описано, что мышьяк прописывали только после снижения его токсичности вследствие его чрезвычайно высокой токсичности. Известно также, что мышьяк обладает обезвреживающей активностью против нескольких токсических веществ. Например, мышьяк использовали в преодолении choongak, или рвоты, и в уничтожении духов и энергии зла. В старой литературе Китайской медицины (BonChoKangMok (Энциклопедии лекарственных растений Китайской медицины), страницы 12-16 тома 9) описаны показания и фармакологические действия мышьяка (под названием whangoong), где сообщается, что мышьяк обладает действием очистки крови. Таким образом, мышьяк признавали в качестве активного лекарственного средства и использовали в течение длительного времени, но в Корее мышьяк считается потенциально вредным химикалием со свойствами тяжелых металлов и вследствие этого его применение является крайне ограниченным. Мышьяк обладает некоторыми свойствами тяжелых металлов, хотя он не принадлежит к группе тяжелых металлов и, следовательно, его избегали в приготовлении лекарственного средства. Контактирование с мышьяком приводит к анемии, лейкопении и дисфункции почки и печени, а хроническое экспонирование может иметь канцерогенный эффект.

В Западной медицине соединения мышьяка прописывали для лечения некоторых болезней, в том числе ревматизма, сифилиса, псориаза и т.д., и известно, что низкая доза соединения мышьяка оказывает благоприятное действие на физиологические функции организма человека, в том числе стимулирует гематопоэз, что согласуется с описаниями в старых литературных источниках Восточной медицины. Однако в современной медицине показания для соединения мышьяка стали очень ограниченными. С конца 19-го столетия до начала 20-го столетия соединение мышьяка испытывали для лечения лейкоза, а после 1950-х годов меларсопрол, органическое соединение мышьяка, которое прописывали для Африканского трипаносомоза (сонной болезни), является единственным применяемым соединением в настоящее время.

На основании этих фармакологических свойств мышьяка недавно были предприняты попытки разработки нового противоракового лекарственного средства, и в настоящее время некоторые исследования обнаруживают быстрый прогресс в этой области. После культурной революции Китай прилагал значительные усилия для исследования традиционной медицины с использованием научных инструментов Западной медицины. Они опубликовали сообщение в 1996 году, в сотрудничестве с французской исследовательской группой, что триоксид мышьяка (Аs₂O₃) обладал превосходным действием в лечении острого промиелоцитарного лейкоза. Исследователи Западной медицины были восхищены этим результатом, поскольку триоксид мышьяка был особенно эффективным в лечении пациентов с лейкозом, которые были резистентными к общепринятой химиотерапии, и с момента опубликования этой статьи большее число медицинских научных работников Западного полушария стали проявлять интерес к возможному противораковому действию соединений мышьяка. Под воздействием этих результатов были предприняты значительные попытки для интеграции традиционной Восточной медицины и современной молекулярной медицины посредством интерпретации результатов Восточной медицины, исходя из основного направления современной противораковой химиотерапии. Крайне важной является разработка новых химикалиев для получения эффективной противораковой активности без каких-либо серьезных побочных эффектов. Изобретение, описанное здесь, преуспело в выделении и очистке активного ингредиента путем обработки природного исходного содержащего мышьяк материала, который использовали в Восточной медицине, с использованием множественных процессов. Кроме того, клиническое исследование показало, что фармацевтическая композиция гексоксида мышьяка обнаруживает сильную противораковую эффективность без каких-либо видимых побочных эффектов.

Существо изобретения Таким образом, данное изобретение обеспечивает новое природное химическое вещество, гексоксид мышьяка (As₄O₆), полученное из Sinsuk, с элиминацией токсичности.

Другой задачей данного изобретения является выяснение механизма действия противораковой эффективности нового природного химического вещества, полученного из Sinsuk.

Другой задачей данного изобретения является описание применимости нового природного химического вещества для противораковой терапии и его фармацевтической композиции.

Для достижения приведенных выше целей данного изобретения фармацевтическая композиция для лечения рака содержит фармацевтически эффективное количество Аs₄O₆ в качестве активного ингредиента и фармацевтически приемлемый носитель.

Предпочтительно фармацевтическую композицию данного изобретения готовят в виде фармацевтической композиции для лечения злокачественной опухоли (рака) матки.

Альтернативно фармацевтическую композицию данного изобретения готовят в виде фармацевтической композиции для лечения злокачественной опухоли (рака) легкого.

Альтернативно фармацевтическую композицию данного изобретения готовят в виде фармацевтической композиции для лечения злокачественной опухоли (рака) верхнечелюстной (гайморовой) пазухи.

Альтернативно фармацевтическую композицию данного изобретения готовят в виде фармацевтической композиции для лечения злокачественной опухоли (рака) почки.

Альтернативно фармацевтическую композицию данного изобретения готовят в виде фармацевтической композиции для лечения злокачественной опухоли (рака) мочевого пузыря.

Для достижения этих преимуществ в соответствии с задачей данного изобретения, осуществленного в виде вариантов и широко описанного, сначала мы выделили и очистили природное химическое вещество, HD-2, повторяемым нагреванием Sinsuk, содержащим мышьяк, для элиминации токсичности, с последующим структурным анализом. Белое вещество, полученное согласно этой процедуре, испытывали на клонированных опухолевых клетках мышей и человека для оценки противораковой эффективности этого вещества и для выяснения, обусловлены ли противораковые эффекты некрозом опухолевых клеток по механизму апоптоза. Токсичность HD-2 после "острого" введения оценивали наблюдением клинических симптомов крыс после однократного перорального введения большой дозы, а токсичность HD-2 после "подострого" введения оценивали наблюдением клинических симптомов крыс после медленного перорального введения. Клональные опухолевые клетки, нацеленные на легкие, инъецировали внутривенно в мышей и HD-2 вводили перорально или внутривенным путем. После этого подсчитывали число метастатических опухолевых образований в легких для оценки ингибирующего действия этого вещества на метастазирование рака.

Подобным образом, клетки меланомы инокулировали интрадермально в мышей с последующим пероральным введением HD-2, после чего противораковый механизм HD-2 исследовали счетом числа новых кровеносных сосудов, образованных в опухолевых образованиях или около опухолевых образований. Рак индуцировали инъекцией канцерогена в мышей и ингибирующую опухоль эффективность измеряли в этих мышах после перорального введения HD-2. Мы также испытывали фармакологическую композицию, приготовленную смешиванием различных лекарственных растений Китайской медицины с гексоксидом мышьяка, которую вводили перорально раковым пациентам в терминальной стадии для оценки противораковой эффективности.

В соответствии с одним аспектом данное изобретение обеспечивает противораковый агент гексоксида мышьяка (Аs₄O₆) природного химического вещества и его фармацевтическую композицию, причем: 1) Мы выделили и очистили природное химическое вещество белого цвета, HD-2, повторяемым нагреванием Sinsuk, содержащего мышьяк, и вещество мышьяка с чистотой реактива, которые были затем подвергнуты структурному анализу, чтобы показать, что это вещество соответствует гексоксиду мышьяка, As₄O₆.

2) Природное химическое вещество, Аs₄O₆, полученное при помощи этой процедуры, добавляли в культуральные среды для выращивания клонированных опухолевых клеток мышей и человека для оценки противораковой эффективности этого вещества.

3) Противораковый механизм Аs₄O₆ исследовали для выяснения, обусловлена ли противораковая эффективность некрозом опухолевых клеток по механизму апоптоза.

4) Различные количества природного химического вещества, As₄O₆, вводили "острым" введением (в большом количестве) самцам и самкам крыс для испытания острой токсичности гексоксида путем наблюдения проявляющихся осложнений.

5) То же самое количество природного химического вещества, Аs₄O₆, вводили медленно перорально самцам и самкам крыс для испытания подострой токсичности этого изобретения путем наблюдения проявляющихся осложнений.

6) Клональные опухолевые клетки, нацеленные на легкие, инъецировали внутривенно в мышей и природное химическое вещество (Аs₄O₆) вводили перорально или внутривенно. После этого считали число метастатических опухолевых образований, появляющихся в легких, для оценки ингибирующего действия этого вещества на метастазирование рака.

7) Подобным образом, клетки злокачественной меланомы инокулировали интрадермально в мышей с последующим пероральным введением природного противоракового агента, Аs₄О₆. После этого механизм противоракового действия исследовали путем измерения размера опухолевых масс и счета числа вновь образованных кровеносных сосудов в опухолевых массах и вокруг опухолевых масс.

8) Канцероген инъецировали в мышей для индукции злокачественных опухолей и противораковые действия природного противоракового агента, Аs₄O₆, исследовали путем измерения частоты встречаемости опухолей и размера опухолей в печени и легком.

9) Мы приготовили также фармацевтическую композицию путем добавления различных лекарственных растений Восточной медицины к природному противораковому агенту, Аs₄O₆, в нескольких формах (таблетки, капсулы и раствора).

10) Таблетки, приготовленные, как описано выше, вводили перорально раковым пациентам в терминальной стадии, имеющим злокачественную опухоль (рак) матки, легкого, верхнечелюстной (гайморовой) пазухи, почки или мочевого пузыря, для оценки терапевтической эффективности Аs₄O₆. Размер опухолей и клинические течения болезни подвергали мониторингу с использованием компьютерной томографии (КТ) и диагностики с применением ядерного магнитного резонанса (ЯМР).

Должно быть понятно, что как предшествующее общее описание, так и последующее подробное описание являются примерными и приводимыми для объяснения и предназначены для обеспечения дополнительного объяснения заявленного изобретения.

Краткое описание прилагаемых чертежей Сопутствующие чертежи, которые включены для обеспечения дополнительного понимания изобретения, входят в это описание и составляют часть этого описания, иллюстрируют изобретение и вместе с описанием служат для объяснения принципов этих чертежей: Фиг. 1 показывает схематизированные процедуры выделения и химической очистки Sinsuk.

Фиг. 2 показывает 3-мерную модель структуры Sinsuk, определенную структурным анализом.

Фиг. 3 показывает временной ход противораковой эффективности Sinsuk (гексоксида мышьяка, Аs₄O₆) in vitro.

Фиг. 4 показывает результат электрофореза в агарозном геле, показывающий, что противораковое действие природного химического вещества, Аs₄O₆, обусловлено эффектом апоптоза.

Фиг. 5 показывает ингибирующее действие Аs₄O₆ на реваскуляризацию в опухолевом образовании.

Фиг. 6 показывает, что Аs₄O₆ уменьшает частоту появления гепатом, индуцированных канцерогеном (NDEA).

Фиг. 7 показывает, что Аs₄O₆ уменьшает частоту появления рака легкого, индуцированного канцерогеном (NDEA).

Фиг. 8 - скан КТ (компьютерной томографии), показывающий множественные опухолевые образования в матке.

Фиг. 9 - подобный скан КТ, что и на фиг. 8, показывающий множественный опухолевый рост в матке.

Фиг. 10 - скан КТ увеличенной матки вследствие инвазии опухолевых клеток в терминальной стадии карциномы матки.

Фиг. 11 - другой скан КТ того же самого пациента, взятый под другим углом.

Фиг. 12 - скан КТ матки в терминальной стадии карциномы матки, который показывает несколько воздушных затенений, отражающих перфорации на стенке матки. Это указывает на исчезновение опухолевого образования после введения Аs₄O₆.

Фиг. 13 - скан КТ пациента с карциномой матки в терминальной стадии, показывающий данные, сходные с данными на фиг. 12.

Фиг. 14 - скан КТ пациента с карциномой матки в терминальной стадии, показывающий данные, сходные с данными на фиг. 13.

Фиг. 15 - скан КТ пациента с карциномой матки в терминальной стадии, показывающий данные, сходные с данными на фиг. 14.

Фиг. 16 - скан ЯМР (ядерно-магнитной диагностики) матки, заполненной фекальным материалом, просачивающимся из прямой кишки через отверстие перфорации матки, которое образовалось после исчезновения ракового образования.

Фиг. 17 - изображение ЯМР, показывающее данные, подобные данным фиг. 16.

Фиг. 18 - изображение ЯМР матки после излечивания опухолевого образования.

Фиг. 19 - изображение ЯМР пациента с карциномой матки в терминальной стадии, показывающее данные, подобные данным на фиг. 18.

Фиг. 20 - изображение ЯМР пациента с раком легкого в терминальной стадии, показывающее заполнение плевральными жидкостями правой плевральной полости, вызванное раком правого легкого.

Фиг. 21 - скан КТ пациента с раком легкого в терминальной стадии, показывающий несимметричное опухолевое образование в правом легком.

Фиг. 22 - скан КТ пациента с раком легкого в терминальной стадии, показывающий увеличенные лимфатические узлы в средостении.

Фиг. 23 - скан КТ того же самого пациента, что и на фиг. 22.

Фиг. 24 - скан КТ того же самого пациента, что и на фиг. 23.

Фиг. 25 - скан КТ пациента с раком легкого в терминальной стадии, показывающий, что плевральная жидкость в правой плевральной полости начинает сокращаться в объеме после введения фармацевтической композиции Аs₄O₆.

Фиг. 26 - скан КТ пациента с раком легкого в терминальной стадии, показывающий, что плевральная жидкость в правой плевральной полости была полностью абсорбирована после введения фармацевтической композиции Аs₄O₆.

Фиг. 27 - скан КТ пациента с раком легкого в терминальной стадии, показывающий сокращение лимфатического узла до нормального размера после введения фармацевтической композиции Аs₄O₆.

Фиг. 28 - скан КТ, показывающий такие же данные, что и на фиг. 27.

Фиг. 29 - скан КТ, показывающий такие же данные, что и на фиг. 28.

Фиг. 30 - скан КТ, показывающий такие же данные, что и на фиг. 29.

Фиг. 31 - скан КТ пациента с раком, включающим в себя верхнечелюстную (гайморову) пазуху, в терминальной стадии, показывающий, что правая верхнечелюстная полость заполнена опухолевыми массами.

Фиг. 32 - скан КТ того же самого пациента, что и на фиг. 31, взятый при другом угле.

Фиг. 33 - скан КТ пациента с раком, включающим в себя верхнечелюстную (гайморову) пазуху, который был подвергнут лечению этого рака в больнице; Фиг. 34 - скан КТ того же самого пациента, что и на фиг. 33.

Фиг. 35 - скан КТ пациента с раком, включающим в себя верхнечелюстную (гайморову) пазуху, в терминальной стадии, показывающий, что раковые массы в правой носовой полости и верхнечелюстной пазухе были излечены после введения фармацевтической композиции Аs₄O₆.

Фиг. 36 - скан КТ, показывающий те же самые данные, что и на фиг. 35.

Фиг. 37 - скан КТ, показывающий те же самые данные, что и на фиг. 36.

Фиг. 38 - скан КТ, показывающий те же самые данные, что и на фиг. 37.

Фиг. 39 - IVP (внутривенная пиелограмма) пациента с раком почки в терминальной стадии, показывающая опухолевое образование, расположенное в левой почечной лоханке.

Фиг. 40 - IVP того же самого пациента, что и на фиг. 39.

Фиг. 41 - IVP пациента с раком почки в терминальной стадии, показывающая опухолевое образование, расположенное в левой почечной лоханке, растущее в направлении почечной артерии.

Фиг. 42 - сканы КТ, взятые при различных углах, обеих почек пациента с раком почек в терминальной стадии.

Фиг. 43 - сканы КТ пациента с карциномой почек в терминальной стадии, демонстрирующие те же самые данные, что и на фиг. 42.

Фиг. 44 - сканы КТ пациента с карциномой почек в терминальной стадии, демонстрирующие те же самые данные, что и на фиг. 43.

Фиг. 45 - скан КТ пациента с карциномой почек в терминальной стадии, показывающий сокращение ракового образования после введения фармацевтической композиции Аs₄O₆.

Фиг. 46 - скан КТ пациента с карциномой почек в терминальной стадии, демонстрирующий те же данные, что и на фиг. 45.

Фиг. 47 - скан КТ пациента с карциномой почек в терминальной стадии, демонстрирующий те же данные, что и на фиг. 46.

Фиг. 48 - скан КТ пациента с карциномой почек в терминальной стадии, демонстрирующий те же данные, что и на фиг. 47.

Фиг. 49 - скан КТ пациента с карциномой почек в терминальной стадии, показывающий заметное сокращение опухолевого образования в левой почке после введения фармацевтической композиции Аs₄O₆.

Фиг. 50 - скан КТ пациента с карциномой почек в терминальной стадии, показывающий дополнительное сокращение опухолевой массы, в сравнении с фиг. 49.

Фиг. 51 - скан КТ пациента с карциномой почек в терминальной стадии, показывающий, что белый затененный контрастный материал заполнил пространство, занимаемое прежде опухолевой массой в левой почке.

Фиг. 52 - скан КТ пациента с карциномой почек в терминальной стадии, показывающий крошечные опухолевые массы, оставшиеся в левой почке и в левой почечной лоханке.

Фиг. 53 - скан КТ пациента с раком мочевого пузыря в терминальной стадии, демонстрирующий опухолевые массы в темном затенении, расположенные в правом углу и на левой стенке мочевого пузыря.

Фиг. 54 - скан КТ, демонстрирующий те же самые данные, что и на фиг. 53.

Фиг. 55 - скан КТ пациента с раком мочевого пузыря в терминальной стадии, демонстрирующий те же самые данные, что и на фиг. 54, показывающий опухолевую массу в белом затенении на левой стенке мочевого пузыря.

Фиг. 56 - скан КТ, демонстрирующий те же самые данные, что и на фиг. 55.

Фиг. 57 - скан КТ пациента с раком мочевого пузыря в терминальной стадии, показывающий исчезновение опухолевых масс после введения фармацевтической композиции Аs₄O₆.

Фиг. 58 - скан КТ пациента с раком мочевого пузыря в терминальной стадии, обнаруживающий те же самые данные, что и на фиг. 57.

Фиг. 59 - скан КТ пациента с раком мочевого пузыря в терминальной стадии, показывающий, что после лечения мочевой пузырь имеет нормальный вид.

Фиг. 60 - скан КТ, демонстрирующий те же самые данные, что и на фиг. 59.

Фиг. 61 - скан КТ, демонстрирующий те же самые данные, что и на фиг. 60.

Фиг. 62 - скан КТ, демонстрирующий те же самые данные, что и на фиг. 61.

Подробное описание предпочтительного варианта Определения Данное изобретение обеспечивает противораковые композиции для лечения раковых заболеваний или опухолей млекопитающих, в частности человека, содержащие эффективное количество противоракового соединения, гексоксида мышьяка (Аs₄O₆), и фармацевтически приемлемый носитель.

В применении здесь "противораковое соединение" представляет собой гексоксид мышьяка (Аs₄O₆). Гексоксид мышьяка выделен и очищен из Sinsuk. Противораковый агент обычно смешан с фармацевтически приемлемым носителем. Этот носитель может быть в виде твердого вещества или в виде жидкости и этот тип обычно выбирают на основе используемого типа введения. Аs₄O₆ подробно описан ниже.

В применении здесь "рак" обозначает все типы раковых заболеваний или неоплазмы или опухолей, обнаруженных в млекопитающих.

В применении здесь термин "содержащий" обозначает различные компоненты, которые могут быть вместе использованы в фармацевтической композиции этого изобретения.

В применении здесь "фармацевтически приемлемый компонент" является компонентом, который пригоден для использования для людей без неуместных неблагоприятных побочных эффектов (таких как токсичность, раздражение и аллергическая реакция).

В применении здесь "фармацевтический носитель" обозначает фармацевтически приемлемый носитель, суспендирующий агент или наполнитель для доставки противоракового соединения в животное или человека. Этот носитель может быть жидким или твердым и его выбирают с учетом планируемого способа введения.

В одном предпочтительном варианте данного изобретения эта композиция содержит смесь гексоксида мышьяка и ингредиентов восточной медицины в качестве фармацевтически приемлемого носителя. Предпочтительным способом обработки композиций данного изобретения для глотания является смешивание и размалывание всех ингредиентов в виде сухих порошков. Индивидуальные ингредиенты получают из источников, указанных ниже. Затем сухую порошкообразную смесь обрабатывают далее в форму пилюль или прессованных таблеток и т.д. Желательный порошок получают размалыванием всех ингредиентов в подходящем количестве в подходящей мельнице до тонкоизмельченного порошка.

Ингредиенты восточной медицины в соответствии с данным изобретением описаны в Восточной Медицинской Священной книге (Doneibogam). В применении в этом описании (и в формуле изобретения) "ингредиенты восточной медицины" в соответствии с данным изобретением определены далее следующим образом: Sinsuk, известный также как Beesang в восточной медицине, является природным минералом, токсичным для человека, главным компонентом которого является Аs₄O₆.

Hodongroo (Hodongjoo) является затвердевшей смолой дерева Populus diversifolia Schrenk. Она образуется при нахождении смолы вышеуказанного дерева в земле в течение продолжительного времени.

Chunsangap является скутумом (щитом) животного Manis pentadactyla L., принадлежащего к роду Manidae.

Baekchool является корневым побегом растения Atractyloades macrocephale Koidz.

Woowhang является камнем в желчном пузыре или желчном протоке желтой коровы, Bos taurus domesticus Gmelin, принадлежащей к семейству Bovidae.

Sahyang является экскрецией, секретируемой самцом кабарги, Moschus moschiferus L., принадлежащей к семейству Cervidae.

Shingok, известный также как Shingook в восточной медицине, является медицинскими дрожжами, которые ферментируют твердое вещество, изготовленное из смесей порошкообразных зерен пшеницы и некоторых лекарственных растений.

Моrуо является оболочкой Ostrea gigas Thunberg, принадлежащего к семейству Ostrediae. Его основными компонентами являются СаСО₃, СаРO₄, СаSO₄ и кератин.

Yongnyehyang является высушенной смолой, полученной из дерева Dryobalanops aromatica Gaertn.

Yoohyang является высушенной смолой, полученной из дерева Boswellia neglecta M.

Molryak является высушенной смолой, полученной из дерева Commiphora myrrha, принадлежащего к семейству Burseraceae.

Backbongryung является плодовым телом Poria cocos (Schw.) Wolf., принадлежащим к семейству Ployporaceae.

Sangbaekpi, известный также как корень или кора шелковицы, является корнями или корой (поверхность которых необязательно удалена) Morus alba L. или других близкородственных деревьев, принадлежащих к семейству Moraceae. Их сушат и измельчают в порошок.

Galgeun является высушенным препаратом корней Pueraria thunbergiana.

Macheehyun является высушенным препаратом лекарственного растения Portulaca oleracea L., принадлежащим к семейству Portulacaceae.

Omeeja является плодом, полученным от Schizandra chinensis (Turcz.) Baill., принадлежащего к семейству Magnoliaceae.

Hyulgal, известный также как Kiringal в восточной медицине, является высушенной смолой, полученной из дерева Epipremnum pinnatum, принадлежащего к семейству Аrасеае.

Seokko является CaSO₄.H₂O, который известен также как гипс.

Boongsa является боратом натрия (Na₂B₄O₇.10Н₂O) и должен быть очищен до фармацевтически приемлемой формы для использования.

Hansooseok является минералом, называемым ангидритом. В восточной медицине его называют "Eungsooseok" или "Jakseok".

Красный обработанный паром панакс (женьшень) является корнем Panax ginseng, обработанным проведением через горячую воду.

Далее будут описаны подробно предпочтительные варианты данного изобретения, примеры которых иллюстрируются сопутствующими чертежами.

ПРИМЕР 1: Выделение и очистка природного химического вещества HD-2 Смесь 10 г Sinsuk и 10 мл этанола (С₂Н₅OН) нагревали в течение 1 часа и затем охлаждали до комнатной температуры в течение 1 часа. Добавляли другой объем 10 мл этанола к охлажденному Sinsuk и последовательное нагревание и охлаждение повторяли несколько раз. Продукт этой процедуры промывали в 20 мл дистиллированной воды с 10-минутным перемешиванием и качанием в течение 10 минут и к нему добавляли 2 мл дистиллированной воды. Спустя 1 минуту осадки собирали декантированием. Этот процесс собирания повторяли три раза. После хранения промытых осадков при -40^oС в течение 24 часов осадки размораживали и выливали на фильтровальную бумагу и сушили при комнатной температуре. 9 г белого вещества получали в качестве очищенного конечного продукта.

Это белое вещество дополнительно очищали для детоксикации. Соль помещали в фарфоровую чашку, сделанную из каолина, и нагревали для удаления водного компонента. После охлаждения при комнатной температуре это белое вещество помещали на поверхность соли и плотно накрывали фильтровальной бумагой и нагревали на протяжении 1 часа. После охлаждения при комнатной температуре белое вещество собирали. Этот процесс повторяли более 2 раз. В конце концов получали 2 г белого вещества, которое было названо HD-2 (см. фиг. 1).

ПРИМЕР 2: Структурный анализ природного химического вещества HD-2 Белое вещество, полученное в ПРИМЕРЕ 1, было отослано в Корейский институт науки и технологии для структурного анализа, где его идентифицировали как вещество с эмпирической формулой As₄O₆ с 3-мерной структурой, показанной на фиг. 2. Физические и химические параметры As₄O₆ суммированы в табл. 1. Атомные координаты (10⁴) и параметры эквивалентного изотропного смещения (А²10³) представлены в табл. 2, длины связей (А) и углы между связями (градусы) - в табл. 3 и параметры анизотропного смещения - в табл. 4.

ПРИМЕР 3: Противораковое действие HP-2 на клонированных опухолевых клетках in vitro Природное химическое вещество, полученное в ПРИМЕРЕ 1, оценивали на противораковую эффективность испытанием прямой цитотоксичности на клонированных опухолевых клетках in vitro. Цисплатин использовали в качестве контрольного лекарственного средства.

Эксперимент 1: Противораковое действие HD-2 на клонированных опухолевых клетках мышей и человека Клонированные опухолевые клетки лейкоза Р388, лейкоза L1210, лимфомы L5178Y, карциномы ободочной кишки Соlоn26-М3.1 и меланомы B16-BL6, из мышей, и лейкоза К562, рака печени HEP-G2, рака молочной железы Hs578T, аденокарциномы AN-3-CA, карциномы ободочной кишки DLD и эпителиоидной карциномы HeLa, из человека, культивировали в культуральных средах EMM, DMEM или RPMI-1640, содержащих 7,5% фетальную телячью сыворотку (ФТС), как описано в руководстве АТСС. После высевания клонированных опухолевых клеток в тест-лунки при плотности 110⁴/100 мкл различные концентрации HD-2 и цисплатина добавляли для испытания цитотоксичности двух веществ. Опухолевые клетки в тест-лунках инкубировали в термостате с 5% СO₂ при 37^oС в течение 2 дней. Противораковая эффективность двух веществ выражена в виде концентрации тест-вещества, требующейся для ингибирования роста опухолевых клеток на 50% (ED₅₀, 50% эффективная доза), в сравнении с ростом контрольных опухолевых клеток, где не добавляли ни HD-2, ни цисплатин. Результаты (суммированные в табл. 5) показывают, что прямая цитотоксичность HD-2, измеренная при 48 часах инкубирования, была в 5030 (среднее стандартное отклонение) раз выше, чем цитотоксичность цисплатина.

Эксперимент 2: Противораковое действие HD-2 в фибробластных клетках 3Т3 Для дополнительного исследования цитотоксичности каждого вещества на клонированных опухолевых клетках фибробластные клетки ЗТЗ культивировали в тест-лунках, как описано в эксперименте 1. После высевания фибробластных клеток ЗТЗ в тест-лунки при плотности 110⁴/100 мкл различные концентрации HD-2 и цисплатина добавляли для испытания временного хода (2, 4 и 6 часов после добавления) цитотоксичности, которую измеряли по способу ХТТ. Как показано на фиг. 3, цисплатин не обнаруживал какого-либо цитотоксического действия вплоть до 24 часов после добавления, но HD-2 продемонстрировал цитотоксическое действие, начиная с 4 часов после добавления. ED₅₀ HD-2 были 1,10 мкг/мл и 0,21 мкг/мл при 4 и 6 часах после добавления, соответственно, что предполагает, что HD-2 обнаруживал ингибирующее действие на рост опухолей от начала этой фазы. При стадии 34 часа обработки наблюдали также действие на морфологию. В группе цисплатина в это время наблюдали частичный некроз опухолевых клеток или замедление роста опухолей. В противоположность этому, в группе HD-2 наблюдали полный некроз опухолевых клеток, вызывающий очевидные изменения в морфологии опухолей (такие как разрыв клеточных стенок), которые приводят к потере адгезивности раковых клеток. Это показывает, что прямое убивающее действие HD-2 проявляется в пределах короткого периода времени введения, в сравнении с действием общепринятых химиотерапевтических агентов, таких как цисплатин. ED₅₀ HD-2 после 34 часов введения была 60 нг/мл, но ED₅₀ цисплатина не могла быть определена, хотя частичное ингибирование роста опухолей наблюдали после 24 часов введения. В конце этого эксперимента (48 часов после введения) ED₅₀ были 30 нг/мл и 8 мкг/мл для HD-2 и цисплатина соответственно. Таким образом, цитотоксичность HD-2 приблизительно в 270 раз выше цитотоксичности цисплатина.

ПРИМЕР 4: Механизм цитотоксического действия HD-2 Цитотоксичность HD-2 исследовали дополнительно для выяснения, связано ли это действие с некрозом опухолевых клеток по механизму апоптоза.

Клетки HL-60 высевали при плотности 210⁴ клеток/мл и адекватную концентрацию HD-2 растворяли в культуральной среде, после чего цисплатин добавляли к позитивной контрольной группе и культуральную среду без цисплатина добавляли к негативной контрольной группе. Клетки центрифугировали после 24-часовой инкубации и осажденные клетки промывали физиологическим буферным раствором (ЗФР) и опять инкубировали в буферном растворе (500 мМ Трис-Сl (рН 9,0), 20 мМ ЭДТА, 10 мМ NaCl, 1% ДСН и 500 мг/мл протеиназы К) при 50^oС в течение 24 часов. Общую ДНК выделяли с использованием фенольной экстракции клеточного лизата, полученного этой обработкой, и наносили на пластинку с агарозным гелем для электрофореза. Как показано на фиг. 4, ДНК-сегментацию наблюдали при ~ 180 п.н., что является типичным результатом апоптоза, при концентрациях 2,5-25 мкг/мл HD-2.

ПРИМЕР 5: Острая токсичность HD-2 Острую токсичность перорального введения HD-2 оценивали в соответствии с критериями оценки токсичности, описанными в Article 96-8 of Notice on Food and Drug Safety (April 16, 1994). Для экспериментов с животными использовали крыс (Sprague-Dawley). Доза однократного перорального введения была в диапазоне от 0,4 до 1,25 г/кг веса тела для самцов крыс и от 0,4 до 0,625 г/кг веса тела для самок крыс. Общее состояние животных, токсические симптомы и смертность измеряли каждый час в течение начальных 6 часов после однократного введения и один раз в день после этого в течение 14 дней. Вес тела измеряли перед началом исследования, через 7 дней после введения и при аутопсии. Погибших крыс исследовали для нахождения причины смерти при аутопсии. В конце исследования всех живых крыс убивали передозировкой эфирной анестезии и основные органы исследовали на патологию невооруженным глазом. С максимальной дозой у самцов крыс (1,25 г/кг веса тела) смертность достигала 100% во время периода исследования. С высокой дозой у самцов крыс (0,85 г/кг веса тела) смертность была 60% и со средней дозой (0,8 г/кг веса тела) смертность была 10%. В случае самок крыс смертность была 100% в группе с максимальной дозой (0,625 г/кг веса тела), 80% в группе с высокой дозой (0,62 г/кг веса тела) и 40% в группе со средней дозой (0,58 г/кг веса тела). Клинические симптомы в пределах 3 дней перорального введения находились в диапазоне от зависимой от дозы депрессии до одышки. Некоторые крысы, проявляющие эти клинические симптомы, погибали, но другие восст