Способ pcr-тестирования проб донорской крови

Способ pcr-тестирования проб донорской крови

Реферат

 

Изобретение относится к области медицины, в частности, описаны системы и способы, которые могут быть использованы для тестирования донорских материалов крови или плазмы в целях обнаружения конкретных донорских проб, инфицированных вирусом. Описан способ, в котором используются индивидуальные герметизированные и соединенные друг с другом контейнеры для сбора проб. Содержимое этих контейнеров объединяют в пулы, которые затем анализируют на присутствие вирусной инфекции с использованием высокочувствительного теста, такого, как РСR. Эти пулы тестируют с использованием алгоритма, согласно которому пробы от каждого донора отображаются в каждом элементе N-мерной матрицы или массива. Каждый элемент этой матрицы идентифицируется матричным идентификатором Х_rcs, где r, c и s - индексы размерности. От каждой пробы берут аликвоты и образуют подпул; каждый подпул содержит аликвоты проб, у которых один индекс размерности является фиксированным. Все подпулы подвергают одному циклу РСR-тестирования. Индексы размерности каждого положительного подпула оценивают математически в соответствии с "сокращением" по методу миноров, что позволяет однозначно идентифицировать один единственный элемент массива и тем самым однозначно идентифицировать одну единственную вирус-положительную пробу крови или плазмы от одного донора. Технический результат изображения - расширение арсенала средств донорской крови для переливания. 3 с. и 32 з.п. ф-лы, 18 ил.

Настоящая заявка является частичным продолжением заявки 08/683784, поданной 16 июля 1996, из которой была выделена заявка 08/419620, поданная 10 апреля 1995, содержание которой вводится в настоящее описание посредством ссылки.

В общих чертах, настоящее изобретение относится к системам и способам получения и анализа проб плазмы, взятых от доноров, для однозначной идентификации доноров, инфицированных вирусом. В частности, настоящее изобретение относится к устройству и способу создания индивидуальных, изолированных друг от друга и соединенных друг с другом контейнеров, содержащих пробы той же самой плазмы, которая содержится в материале, взятом от доноров. Настоящее изобретение также относится к устройству и способу для получения пулов из этих контейнеров в целях предварительного скрининга и тестирования этих пулов на присутствие вируса в соответствии с алгоритмом для идентификации отдельных проб, взятых от инфицированных доноров, с использованием наименьшего числа циклов тестирования.

Программы сбора донорской крови, плазмы и физиологических жидкостей являются первыми важными ступенями в производстве фармацевтических препаратов и препаратов крови, которые способствуют улучшению качества жизни и которые могут спасти жизни людей при различных травмах. Эти препараты используются для лечения иммунологических расстройств, для лечения гемофилии, а также для поддержания и сохранения объема крови при хирургических операциях и других способах лечения. Для терапевтического применения крови, плазмы и биологических жидкостей необходимо, чтобы материалы, полученные от доноров, по возможности, не были инфицированы вирусами. Обычно пробу для серологического теста, взятую от каждого отдельного донора крови, плазмы или другой жидкости, анализируют на различные антитела, которые вырабатываются в ответ на специфические вирусы, такие как гепатит С (HCV) и две формы вируса иммунодефицита человека (ВИЧ-1 и ВИЧ-2). Кроме того, проба для серологического теста может быть проанализирована на антигены, ассоциированные с конкретными вирусами, такими как вирус гепатита В (HBV), а также на антитела, вырабатываемые в ответ на присутствие этих вирусов. Если данная проба является сероположительной на присутствие либо специфических антител, либо антигенов, то эта донорская кровь не пригодна к дальнейшему использованию.

Тест на антигены некоторых вирусов, таких, как гепатит В, очевидно четко коррелирует с инфекционностью, тогда как тест на антитела такой корреляции не имеет.

Давно известно, что донор плазмы крови может быть в действительности инфицирован вирусом, однако тест на антитела к этому вирусу может оказаться сероотрицательным. Так, например, существует "окно" между временем заражения донора этим вирусом и моментом появления антител, вырабатываемых в ответ на этот вирус в организме донора. Период времени между первым появлением вируса в крови и присутствием обнаруживаемых антител, вырабатываемых в ответ на этот вирус, известен как период "окна". В случае ВИЧ, средний период "окна" составляет приблизительно 22 дня, тогда средний период "окна", оцененный для HCV, составляет приблизительно 98 дней. Поэтому тесты на обнаружение антител могут давать ложные результаты в отношении инфицирования донора в том случае, если они были осуществлены в этот промежуточный период "окна", то есть в период между инфицированным вирусом и продуцированием антител. Более того, даже в том случае, когда стандартный анализ на HBV проводили с помощью тестов как на антитела, так и на антигены, тестирование более чувствительными методами подтверждало присутствие вируса HBV в образцах, которые показали отрицательный результат в тесте на антиген HBV.

Один из методов тестирования донорских проб, которые прошли тесты на соответствующие антитела и антигены для гарантии отсутствия в них зарождающейся вирусной инфекции, предусматривает проведение анализа донорского материала с помощью полимеразной цепной реакции (PCR). Метод с использованием PCR представляет собой в высокой степени чувствительный метод обнаружения присутствия в биологическом материале специфических ДНК- или РНК-последовательностей, родственных рассматриваемому вирусу, путем амплификации вирусного генома. Поскольку PCR-тест направлен на обнаружение присутствия главного компонента самого вируса, то его присутствие у донора может быть обнаружено почти сразу после инфицирования. Поэтому в данном случае теоретически не существует какого-либо промежуточного периода "окна", во время которого тест может давать ложный результат, указывающий на отсутствие инфекции. Соответствующее описание методики и практического применения PCR-аналиэа можно найти в патенте США 5176995, и это описание вводится в настоящее описание посредством ссылки.

Однако PCR-тест является очень дорогостоящим методом, и поскольку общее число доноров включает в себя относительно небольшое число PCR-положительных доноров, то отдельное тестирование каждого донора не является экономически выгодным или экономически целесообразным. Поэтому необходимо разработать эффективный и экономически выгодный способ анализа большого числа донорской крови или плазмы для исключения необходимости анализа проб от отдельных доноров, имеющих вирусную инфекцию на уровне, превышающем предварительно установленный уровень.

Один из способов тестирования плазмы от большого числа доноров заключается в сборе пула плазмы от ряда отдельных доноров. Затем этот пул (то есть собранный материал) подвергают PCR-анализу, и материал от отдельных доноров, составляющий этот пул, либо сохраняют, либо удаляют в зависимости от результатов PCR-теста. При уменьшении числа PCR-тестов и связанных с ними материальных затрат этот метод приводит к значительной потере существенной части донорского материала, не содержащего вируса. Поскольку причиной, приводящей к получению PCR-положительного пула, может являться лишь один донор, инфицированный вирусом на уровне, превышающем заранее установленный уровень, то все остальные доноры, от которых были получены пробы, содержащиеся в этом пуле, могут быть каждый в отдельности PCR-отрицательными. Этот результат является в высокой степени вероятным, учитывая, что во всей группе доноров присутствует относительно небольшое число PCR-положительных доноров. В стандартном методе сбора кровяного депо, в случае получения PCR-положительного результата, весь донорский материал, составляющий этот пул, выбрасывают, включая и материал, полученный от тех доноров, которые являются PCR-отрицательными.

Кроме того, часто донорскую плазму замораживают сразу после ее получения. Если пробы от отдельных доноров плазмы необходимо объединить в пул, то каждую из таких донорских проб необходимо оттаивать, брать от этой донорской пробы аликвоту крови или плазмы, а затем этот донорский материал должен быть снова заморожен для хранения. Проведение множественных циклов замораживания-оттаивания может неблагоприятно повлиять на выделение нужной РНК или ДНК, а также белков, содержащихся в плазме и, тем самым, негативно отразиться на всем PCR-тесте. Кроме того, каждый раз когда аликвоту плазмы от отдельного донора берут для создания пула, то этот донорский материал подвергают инфекции, вносимой как из окружающего пространства, так и из устройства, используемого для взятия аликвот. Более того, если донорский материал содержит вирус, то он может инфицировать другие донорские материалы. Во избежание внесения вирусной инфекции в донорский материал, который не содержит того или иного вируса, устройство для взятия образцов должно быть либо стерилизовано после каждого отдельного использования, либо оно должно быть использовано для взятия только одной аликвоты от одного отдельного донора, а для взятия аликвоты от другого отдельного донора должно быть использовано другое устройство, которое предназначено для взятия проб. Любой из этих методов является в высокой степени дорогостоящим и занимает исключительно много времени.

В соответствии с этим необходимо разработать способ и систему для получения проб крови и плазмы от множества доноров так, чтобы эти конкретные пробы можно было объединить в пул, не инфицируя при этом остальные пробы. Желательно также, чтобы этот способ и система позволяли быстро и эффективно получать указанные пулы без внесения инфекции лаборантом при клиническом исследовании, или без внесения инфекции из окружающей среды при лабораторных исследованиях.

Кроме того, желательно, чтобы способ и система осуществления такого эффективного и экономически рационального анализа донорской крови или плазмы позволяла однозначно идентифицировать лишь только PCR-положительных доноров с использованием, по возможности, наименьшего числа циклов тестирования.

Поэтому настоящее изобретение относится к экономически рациональному и эффективному способу получения и анализа проб крови или плазмы, взятых от множества доноров в целях однозначной идентификации доноров, инфицированных вирусом, а также к системам и устройствам для практического осуществления этого способа.

Способ настоящего изобретения позволяет получать значительно более безопасные препараты крови и плазмы, поскольку они могут быть легко протестированы на содержание вирусной инфекции непосредственно в исходном материале крови или плазмы. В высокой степени эффективные и экономически рациональные тесты могут быть осуществлены сразу, и инфицированные доноры могут быть выявлены в любое время, даже если это исследование проводится в период "окна инфекционности".

В одном из вариантов настоящего изобретения этот способ включает в себя стадии получения донорской крови или плазмы в контейнере-сборнике. Этот контейнер соединен с гибким сегментом-сборником, который сообщается с внутренней частью контейнера. Этот сегмент-сборник наполняется кровью или плазмой, поступающей из контейнера-сборника, и часть этого сегмента-сборника герметично запаивается с обоих концов. Эта герметично запаянная часть сегмента-сборника отделяется от контейнера, и, либо до, либо после удаления этой герметично запаянной части сегмента-сборника, вдоль длины этого сегмента-сборника, между его двумя запаянными концами, создают множество герметичных перемычек на определенном расстоянии друг от друга. Эти части сегмента в интервалах между соседними герметичными перемычками образуют емкости, где каждая такая емкость содержит пробу плазмы или крови и где каждая такая емкость, находящаяся в промежутках между герметичными перемычками, имеет объем, достаточный для проведения запланированных тестов.

В более конкретном варианте осуществления настоящего изобретения плазму от отдельного донора собирают в сосуд-сборник, который снабжен тест-контейнером, соединенным с этим сосудом посредством сегмента гибкой полой трубки. После заполнения этого сосуда донорской плазмой этот сосуд с плазмой наклоняют так, чтобы плазма поступала в тест-контейнер и в гибкий сегмент трубки, наполняя тем самым этот сегмент трубки. Этот сегмент трубки герметично запаивают вдоль его длины с образованием перемычек на определенном расстоянии друг от друга, при этом части этого сегмента трубки в интервалах между указанными герметичными перемычками образуют пакеты, каждый из которых содержит пробу донорской плазмы. Этот сегмент трубки, который превращается в серию пакетов, затем отсоединяют от сосуда для сбора плазмы и замораживают до проведения анализов.

В другом аспекте осуществления настоящего изобретения этот сегмент полой трубки содержит серию соединенных друг с другом Y-образных элементов, включая элемент для ввода, расположенный на одной ветви Y, где каждая из боковых ветвей конкретного Y-элемента, которая не включает элемент для ввода, соединена с основанием следующего Y-элемента в данной цепи с помощью гибкого пластикового сегмента трубки. Вдоль длины каждого сегмента гибкой пластиковой трубки имеются созданные на определенном расстоянии друг от друга герметичные перемычки, которые разделяют эти Y-элементы.

В другом предпочтительном варианте настоящего изобретения устройство для создания множества перемычек, образуемых путем термосварки вдоль длины сегмента трубки, наполненного донорской кровью или плазмой, содержит первую и вторую плиты для сварки, расположенные напротив друг друга. Вдоль длины каждой плиты для сварки имеется множество расположенных на расстоянии друг от друга выступающих частей, чередующихся с впадинами. Выступающие части и впадины на первой плите совпадают с соответствующими выступающими частями и впадинами на второй плите. Расположенные напротив друг друга плиты для сварки движутся вместе по сегменту пластиковой трубки, наполненной донорской кровью или плазмой, и создают герметичные перемычки на участках этого сегмента трубки путем зажатия этого сегмента между выступами указанных плит с образованием камер, ограниченных расположенными напротив друг друга впадинами. Эти полученные путем термосварки перемычки ограничивают множество отдельных и расположенных друг за другом камер, где каждая камера сформирована каждой из таких смыкающихся пар впадин, которые определяют конфигурацию этих камер в виде пакета.

В частности, устройство для формирования путем термосварки множества перемычек, расположенных вдоль длины сегмента трубки, наполненной донорской кровью или плазмой, имеет такую конфигурацию, что оно после модификации может быть установлено в коммерчески доступном устройстве для термосварки.

В еще одном варианте осуществления изобретения система для сбора и получения проб в целях проведения тестов включает в себя контейнер для сбора плазмы и полые пластиковые трубки, соединенные с этим контейнером, каждая из которых состоит из пластика и содержит индексы кода, впечатанные в пластик. Эти индексы кода расположены вдоль главной оси сегмента трубки, и этот код повторяется через определенное расстояние так, что этот сегмент трубки, по всей своей длине, может быть снабжен множеством расположенных на определенном расстоянии друг от друга герметичных перемычек, которые образуют, таким образом, пакеты, ограниченные этими перемычками. Интервалы между индексами кода соответствуют интервалам пакетов так, чтобы каждый пакет содержал по крайней мере один цикл кода.

Для начала процедуры тестирования в соответствии со способом настоящего изобретения от каждой группы сегментов-трубок, соответствующих множеству проб плазмы, взятых от отдельных доноров, удаляют первый пакет. Часть содержимого каждого такого первого пакета удаляют, и из этих частей содержимого образуют пул в контейнере.

В типичном варианте осуществления изобретения первый пул тестируют на присутствие вируса. Если тест этого первого пула дает положительный результат, то от каждого из сегментов трубок, которые были использованы для получения первого пула, удаляют следующий или второй пакет. Вторые пакеты делят на две приблизительно равные подгруппы, и содержимое одного из пулов этой подгруппы тестируют на присутствие конкретного вируса. Если тесты проанализированного пула этой подгруппы дают отрицательный результат на вирус, то из соответствующих сегментов трубки, используемых для формирования не проанализированной подгруппы, удаляют следующий пакет. Эти пакеты делят на две приблизительно одинаковые подгруппы следующей генерации, и содержимое пакетов этой подгруппы объединяют в пулы. Один из пулов подгруппы следующей генерации тестируют на присутствие вируса.

Если тесты пула этой проанализированной подгруппы дают положительный результат на вирус, то этот пакет удаляют из соответствующих сегментов трубок, использованных для формирования этой проанализированной подгруппы. Этот процесс повторяют, причем каждый положительный пул снова подразделяют на соответствующие более мелкие подгруппы, где каждая из этих последующих подгрупп содержит фракцию проб от предшествующей положительной подгруппы, и так до тех пор, пока не будет идентифицирован последний пакет, соответствующий пробе плазмы, взятой от одного донора.

В другом предпочтительном варианте настоящего изобретения дополнительный способ тестирования множества проб донорской плазмы, осуществляемый в целях идентификации доноров, являющихся носителями вируса, за один PCR-цикл тестирования, включает в себя стадии определения n-размерной матрицы, которая определяется внутренними элементами, находящимися в точке пересечения каждого из n-измерений матрицы. Пробу от каждого из доноров плазмы отображают в соответствующий элемент массива, причем каждая такая проба определяется матричным представлением Х_rcs, где нижний индекс элемента матричного представления определяет индексы размерности данного массива. От каждой пробы плазмы, взятой от каждого донора, берут аликвоты, и объединяют в подпулы. Каждый подпул включает в себя аликвоту всех проб донорской плазмы, для которых фиксируется один из индексов размерности. Эти подпулы все тестируются одновременно в одном цикле PCR-теста, и индексы размерности для каждого подпула, который дает положительный результат теста, оценивают путем "сокращения" по методу миноров, что позволяет однозначно идентифицировать единственный элемент, определяемый индексом размерности каждого положительного подпула, и тем самым однозначно идентифицировать единственную положительную пробу.

Эти и другие отличительные признаки, аспекты и преимущества настоящего изобретения будут более очевидны из последующего подробного описания, формулы изобретения и чертежей.

Фиг. 1 представляет собой полусхематическое перспективное изображение одного из вариантов сосуда для сбора донорской плазмы и контейнер с пробами, соединенными друг с другом посредством сегмента трубки, используемой при осуществлении настоящего изобретения.

Фиг. 2 представляет собой полусхематическое перспективное изображение сегмента трубки, соединяющего сосуд с донорской плазмой и контейнер с пробами и разделенного на пакеты в соответствии с настоящим изобретением.

Фиг. 2а представляет собой полусхематическое перспективное изображение сегмента трубки, соединяющего сосуд с донорской плазмой и контейнер с пробами и включающего в себя серию соединенных друг с другом Y-элементов в соответствии с настоящим изобретением.

Фиг. 3а представляет собой увеличенный вид сверху части сегмента трубки, показанного на фиг.2, и иллюстрирует дополнительные детали герметичных перемычек, которые разделяют пакеты.

Фиг.3b представляет собой полусхематическое поперечное сечение перемычек сегмента трубки.

Фиг.4 представляет собой полусхематическое перспективное изображение устройства настоящего изобретения для запаивания трубок с образованием отдельных пакетов.

Фиг. 4а представляет собой полусхематическое перспективное изображение верхней и нижней плит в устройстве для термосварки настоящего изобретения, которое может быть вмонтировано в коммерчески доступный аппарат для термосварки.

Фиг. 5 представляет собой полусхематическое перспективное изображение планшета для сбора проб и планшета-крышки, предназначенных для осуществления настоящего изобретения.

Фиг. 6 представляет собой полусхематическое поперечное сечение пакета с плазмой, содержащегося в лунке планшета для сбора проб, предназначенного для осуществления настоящего изобретения.

Фиг. 7 представляет собой полусхематическое перспективное изображение устройства настоящего изобретения для разрушения пакетов с пробами и извлечения жидких проб из контейнера для образования пула.

Фиг. 8 представляет собой полусхематическое поперечное сечение дробильного цилиндра устройства, изображенного на фиг 7.

Фиг. 9а представляет собой полусхематическое поперечное сечение сортировочной плиты, на которой происходит разрушение пакетов, содержащих пробы.

Фиг.9b представляет собой полусхематическое изображение вида сверху сортировочной плиты, иллюстрирующее радиальные и концентрические желобки для сбора жидких проб после разрушения пакетов с пробами.

Фиг. 10 представляет собой полусхематическое поперечное сечение дробильного поршня устройства, изображенного на фиг.7.

Фиг.11 представляет собой блок-схему проведения тестирования по методике настоящего изобретения в целях выявления положительных доноров путем PCR-теста пулов донорских проб.

Фиг. 12 представляет собой блок-схему проведения серии тестов настоящего изобретения для идентификации одной PCR-положительной пробы из пула, созданного из 512 донорских проб.

Фиг. 13 представляет собой блок-схему проведения второго теста по методике настоящего изобретения в целях выявления положительных доноров путем PCR-теста пулов донорских проб; Фиг. 14 представляет собой 3-мерную матрицу настоящего изобретения, на которой обозначены индексы r, с и s.

Настоящее изобретение относится к системам, способам и устройствам, используемым для анализа донорской крови или плазмы в целях обнаружения конкретных донорских проб, инфицированных вирусом на уровне, превышающем заранее определенный уровень. Такие инфицированные донорские пробы затем отбрасывают для предотвращения введения их в общий поток исходного материала, используемого для получения фармацевтических продуктов или для переливания крови пациентам. Тестами на обнаружение вируса, используемыми в соответствии с настоящим изобретением, могут быть любые тесты, которые позволяют осуществлять прямое обнаружение вируса, в отличие от тестов на антитела, вырабатываемые против этого вируса. Такими тестами являются тесты, проводимые с помощью полимеразной цепной реакции (PCR-тесты), и другие тесты, которые являются достаточно чувствительными для прямого обнаружения вируса даже после объединения в один пул проб, полученных от множества доноров.

В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения получают множество проб плазмы или крови, взятых от отдельных доноров. Пробу крови или плазмы, взятую от каждого донора, вводят в соответствующий гибкий полый сегмент трубки. По всей длине этого сегмента трубки через соответствующие интервалы создают множество расположенных на определенном расстоянии друг от друга герметичных перемычек так, чтобы части этого сегмента в интервалах между этими перемычками образовывали пакеты, где этот пакет содержит пробу крови или плазмы. Как более подробно обсуждается ниже, в настоящем изобретении представлена уникальная методика тестирования проб плазмы из этих пакетов после того, как эти пробы были объединены в пулы, которая позволяет осуществлять экономичное и эффективное обнаружение и выделение любой донорской крови или плазмы, которая инфицирована вирусом.

На фиг. 1 проиллюстрирован вариант системы настоящего изобретения, предназначенный для осуществления процесса взятия проб. Эта система включает в себя стандартный контейнер для донорской плазмы 20, сконструированный из нереакционноспособного материала, такого как поливинилхлорид (ПВХ). Этот контейнер для донорской крови 20 включает в себя крышку 22, имеющую два полых коленчатых патрубка 23 и 24, соответственно соединенных с ее верхней поверхностью. Эти два патрубка сообщаются с внутренним пространством сосуда для донорской крови посредством отверстий, имеющихся в крышке 22 для этой цели. Гибкий полый наливной патрубок 26, сконструированный из биологически нейтрального материала, такого как полимер ПВХ, одним своим концом соединен с коленчатым патрубком 23, а другим концом соединен, например, с иглой, которую вводят донору для взятия крови. В проиллюстрированном варианте настоящего изобретения тест-контейнер 28 также предназначен для сбора пробы донорской крови, которую тестируют на серологическую реакцию. Тест-контейнер 28 представляет собой, в основном, тест-сосуд, имеющий форму пробирки, который также сконструирован из биологически нереакционного материала. Тест-контейнер 28 содержит цельный закрывающий элемент 30, который имеет отверстия для сообщения с внутренней частью тест-контейнера.

Гибкий полый сегмент трубки 32, сконструированный из биологически нереакционноспособного пластикового материала, присоединен между закрывающим элементом 30 тест-контейнера 28 и полым коленчатым патрубком 24 крышки контейнера для донорской плазмы. Сегмент трубки 32 соединен с закрывающим элементом 30 так, чтобы жидкость, проходящая через сегмент трубки, поступала в тест-контейнер 28 через отверстие, имеющееся для этой цели в закрывающем элементе 30. Этот сегмент трубки 32 может быть введен в указанное отверстие путем фрикционной посадки, или путем ультразвуковой сварки, либо он может быть как-нибудь иначе соосно соединен с этим отверстием способами, хорошо известными специалистам.

Этот закрывающий элемент 30 может также иметь второе отверстие, к которому подсоединена вытяжная трубка 34 таким же образом, как и к сегменту трубки 32. Вытяжная трубка 34 имеет, в основном, длину не более чем два дюйма, а на своем конце она обычно имеет антибактериальный фильтр, вставленный путем фрикционной посадки.

В типичном варианте осуществления изобретения донорскую кровь или плазму берут у донора и собирают в контейнер для донорской плазмы 20 с последующим ее хранением до тех пор, пока она не потребуется. При взятии донорской плазмы обычно у донора берут кровь и пропускают ее через центрифугу непрерывного действия, где в результате центрифугирования, от окружающей жидкой плазмы отделяются эритроциты, которые возвращают донору. Затем плазму собирают.

После получения плазмы у донора и после наполнения контейнера для донорской крови 20 этот контейнер наклоняют так, чтобы уровень жидкости в этом контейнере был выше коленчатого патрубка 24, соединенного с сегментом трубки 32. Плазма поступает в этот сегмент трубки, проходит через этот сегмент и наполняет тест-контейнер 28. В процессе заполнения воздух, присутствующий в тест-контейнере 28, захватывается и выходит через вытяжную трубу 34, что способствует полному наполнению тест-контейнера. Антибактериальный фильтр 36 удаляет любые бактерии в выходящем воздухе, что предотвращает инфицирование проб из окружающего пространства. После наполнения тест-контейнера плазма, взятая у доноров, наполняет сегмент трубки 32.

Как показано на фиг.2, после поступления проб донорской плазмы в сегмент трубки 32 этот сегмент трубки запаивают путем термосварки 38 или другого подходящего способа запаивания, такого как ультразвуковая сварка, на участке, расположенном возле соединения сегмента трубки с контейнером для донорской плазмы. Затем путем термосварки образуют перемычку 40 в сегменте трубки на участке, расположенном возле соединения сегмента с тест-контейнером 28. Таким образом получают длинную полую трубку, герметично запаянную с обоих концов и содержащую определенное количество донорской плазмы.

Заполненную часть сегмента трубки 32 отделяют от контейнера с донорской плазмой и тест-контейнера путем разрезания сегмента трубки по центру запаянных участков 38 и 40. Затем отделенный контейнер с донорской плазмой удаляют для замораживания и хранения, а отделенный тест-контейнер направляют в лабораторию для серологического анализа. Обычно его содержимое анализируют на различные антитела, которые вырабатываются в ответ на конкретные вирусы, такие как вирус гепатита С (HCV) или ВИЧ-1 и ВИЧ-2.

По всей длине сегмента трубки через соответствующие промежутки делают также дополнительные герметичные перемычки 42, в результате чего образуются отдельные следующие друг за другом и соединенные друг с другом пакеты, каждый из которых содержит полую часть 44 сегмента трубки. Каждая такая часть 44 содержит определенное количество крови или плазмы, необходимое для образования пула конкретной генерации. Так, например, в изолированных пакетах, сформированных для PCR-теста, может находиться приблизительно 0,02-0,5 мл крови или плазмы, взятой от конкретного донора.

Сегмент трубки запаивают с получением от 5 до 15 отдельных и соединенных друг с другом пакетов. Запаивание с образованием пакетов может быть осуществлено либо после того, как этот сегмент трубки был отделен от контейнера для донорской крови и от контейнера для серологического теста, либо, предпочтительно, в то время, когда сегмент трубки был еще присоединен к контейнеру для донорской плазмы, что позволяет избежать создания гидростатического давления. Запаивание может быть осуществлено любым известным методом, таким как термокомпрессионная сварка (термосварка), ультразвуковая сварка или т. п., при условии, что длина уплотненного и запаянного участка является достаточной для того, чтобы соединенные друг с другом пакеты могли быть отделены друг от друга путем разрезания по центру этого запаянного участка без нарушения целостности этого пакета с любой стороны, как это хорошо показано на фиг.3а и 3b.

Второй вариант сегмента трубки, сконструированного так, чтобы его можно было разделить на участки с аликвотами, содержащими пробы крови или плазмы, показан на фиг. 2а, на котором полусхематически представлено перспективное изображение варианта сегмента трубки-сборника, присоединенного между сосудом с донорской плазмой 20 и контейнером для проб 28 и разделенного на участки, содержащие аликвоты в соответствии с настоящим изобретением.

Сегмент трубки-сборника 50 соединен с закрывающим элементом 30 тест-контейнера 28 и с полым коленчатым патрубком 24 крышки контейнера с донорской плазмой. Этот сегмент трубки 50 обычно включает в себя множество Y-элементов 51, последовательно соединенных друг с другом посредством гибких полых сегментов трубок 52, изготовленных из медицинского пластика. Эти Y-элементы 51 обычно сконструированы так, что они подсоединяются к аппарату для внутривенного вливания и содержат цилиндрический корпус 53, через который проходит поток и который имеет выходное отверстие 54 на одном своем конце и входное отверстие 55 на другом своем конце. На корпусе 53 этого Y-элемента имеется боковой патрубок 56, включающий в себя участок, по которому проходит жидкость и который сообщается с участком прохождения жидкости через корпус 53.

Один Y-элемент соединен путем сварки под флюсом со следующим Y-элементом посредством гибкой полой медицинской пластиковой трубки 52, идущей от выходного порта 54, расположенного в нижней части одного Y-элемента, к боковому патрубку 56 другого последовательно соединенного с ним Y-элемента. Первая гибкая входная трубка 57 соединяется путем сварки под флюсом с боковым патрубком первого Y-элемента в этой серии Y-элементов. Эта первая входная трубка 57, в свою очередь, соединяется путем сварки под флюсом с коленчатым патрубком 24 крышки контейнера с донорской плазмой. Это соединение может быть осуществлено путем введения первой входной трубки 57 в коленчатый патрубок 24 посредством фрикционной посадки или путем ультразвуковой сварки, либо он может быть как-нибудь иначе соосно соединен с этим отверстием способами, хорошо известными специалистам. Кроме того, первая входная трубка 57 может заканчиваться стандартным патрубком люэровского типа 58, позволяющим последовательно соединять Y-элементы, которые являются съемными и соединяются с контейнером для донорской крови, снабженным стыкующим соединителем люэровского типа на конце колена 24.

Аналогичным образом, концевой Y-элемент снабжен гибкой полой концевой выходной трубкой 59, которая соединена путем сварки под флюсом с концевым Y-элементом у его выходного порта. Своим дистальным концом эта трубка может быть также соединена со стандартным патрубком люэровского типа.

Способом, аналогичным описанному выше для первого варианта осуществления изобретения, после взятия донорской плазмы и после наполнения контейнера донорской плазмой этот контейнер наклоняют так, чтобы уровень жидкости в этом контейнере был выше коленчатого патрубка 24, соединенного с сегментом входной трубки 57. Плазма поступает в этот сегмент трубки и проходит через последовательно соединенные Y-элементы, входя в каждый из этих Y-элементов через его боковой патрубок 56 и попадая в следующий Y-элемент из выходного отверстия 54 предыдущего Y-элемента. Плазма течет до тех пор, пока не будет заполнен тест-контейнер 28. После заполнения тест-контейнера донорская плазма продолжает поступать до тех пор, пока не будут также заполнены последовательно соединенные друг с другом Y-элементы, составляющие сегмент трубки 50.

После поступления проб донорской плазмы в сегмент трубки 50 этот сегмент трубки у выходного конца герметично закрывают путем запаивания или термосварки с образованием перемычки 40а или другим подходящим способом герметизации, таким как ультразвуковая сварка, на соответствующем участке, расположенном возле соединения сегмента выходной трубки с тест-контейнером 28.

Заполненную часть сегмента трубки 50 отделяют от тест-контейнера путем отрезания сегмента выходной трубки 59 от тест-контейнера по центру перемычки 40а. Альтернативно, если на конце сегмента трубки 50 находится соединитель люэровского типа, то сегмент трубки 50 отделяют от тест-контейнера 28 путем отсоединения люэровского соединителя. Вторую паяную перемычку 38а создают на начальном входном сегменте трубки 57 на участке возле соединения этого начального сегмента с контейнером для донорского материала 20. Заполненную часть сегмента трубки 50 отделяют от контейнера с донорской плазмой путем отрезания сегмента начальной входной трубки 57 по центру перемычки 38а или путем отсоединения патрубка люэровского типа 58, если он присутствует. Таким образом получают длинную полую состоящую из отдельных звеньев трубку, запаянную с обоих концов и содержащую множество Y-элементов, последовательно соединенных друг с другом. Каждый из таких соединенных вместе Y-элементов содержит аликвоту донорской крови или плазмы.

Как будет более подробно описано ниже, эти сегменты трубок, соединяющие выходное отверстие предшествующего Y-элемента с боковым патрубком последующего Y-элемента, также имеют паяные перемычки 42а, которые образуют отдельные последовательно соединенные друг с другом аликвоты проб, каждая из которых составляет отдельный Y-элемент. Каждый такой Y-элемент содержит конкретное количество крови или плазмы, необходимое для формирования пула конкретной генерации. Запаивание для отделения каждого Y-элемента может быть осуществлено либо после того, как этот сегмент трубки 50 был отделен от контейнера с донорской плазмой, либо оно может быть осуществлено в то время, когда сегмент трубки еще присоединен к этому контейнеру.

Предпочтительно, запаивание для изоляции Y-элементов осуществляют в то время, когда сегмент трубки 50 еще присоединен к контейнеру с донор