Стирилсульфоновые соединения, фармацевтические композиции на их основе, способ ингибирования роста опухолевых клеток, способ индукции апоптоза опухолевых клеток и способ лечения

Стирилсульфоновые соединения, фармацевтические композиции на их основе, способ ингибирования роста опухолевых клеток, способ индукции апоптоза опухолевых клеток и способ лечения

Реферат

 

Изобретение относится к стирилсульфоновым соединениям формулы I, где n представляет собой ноль или единицу; R₁ выбирают из группы, включающей хлор, фтор или бром; и R₂ выбирают из группы, включающей хлор, фтор и бром; R₃ выбирают из группы, включающей водород и фтор; оба радикала R₁ и R₂ могут не являться хлором в случае, когда R₃ представляет собой водород; и R₁ может не являться хлором в случае, когда R₂ представляет фтор, и R₃ представляет водород в том же самом соединении. Описаны также фармацевтические композиции на основе соединений формулы II, III и IV. Стирилсульфоновые соединения, являющиеся предметом настоящего изобретения, селективно ингибируют пролиферацию клеток опухоли молочной железы и опухоли простаты и индуцируют апоптоз таких опухолевых клеток, не затрагивая нормальные клетки. 10 с. и 32 з.п. ф-лы, 9 ил, 5 табл.

Изобретение относится к композициям для лечения рака и способам лечения рака, в частности рака молочной железы и рака простаты.

Уровень техники Внеклеточные сигналы, принимаемые трансмембранными рецепторами, передаются в клетки путем каскада реакций трансдукции сигнала (Pelech et al., Science 257:1335 (1992)), который включает множество физиологических процессов, таких как индукция пролиферации клеток, дифференцировка клеток или апоптоз (Davis et al., J.Biol. Chem. 268:14553 (1993)). Каскад реакций активированной митогеном протеинкиназы (МАРК) является основной сигнальной системой, с помощью которой клетки осуществляют трансдукцию внеклеточных сигналов, вызывающую внутриклеточные ответные реакции (Nishida et al., Trends Biochem. Sci. 18: 128 (1993); Blumer et al. Trends Biochem. Sci. 19:236 (1994)). Продукты многих стадий этого каскада реакций сохраняются, и в различных препаратах обнаруживают гомологи активированных митогеном протеинкиназ.

В клетках млекопитающих наиболее типичными и наилучшим образом изученными членами МАРК-семейства являются киназы, регулируемые внеклеточным сигналом (ERK), ERK-1 и ERK-2, причем уникальной особенностью их всех является то, что они активируются при фосфорилировании остатков треонина или тирозина при действии киназы "двойной" специфичности в обратном направлении (Posada et al. . Science 255:212 (1992); Biggs III et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89:6295 (1992); Garner et al., Genes Dev. 6:1280 (1992)).

Последние исследования позволили идентифицировать дополнительную подгруппу семейства МАРК, в которую входят известные как c-Jun NН₂-терминированные киназы 1 и 2 (JNK-1 и JNK-2), которые имеют различную специфичность в отношении субстрата и регулируются действием различных стимулов (Hibi et al., Genes Dev. 7:2135 (1993)). JNK относятся к классу стресс-активируемых протеинкиназ (SPK). Как было показано, JNKs активируются при действии на клетки УФ-излучения, при предвоспалительном цитокинезе или стрессе, вызванном действием окружающей среды (Derijard et al., Cell 1025 (1994)). Активированная JNK связывается с концевой аминогруппой c-Jun белка и повышает транскрипционную активность белка путем фосфорилирования его в положении ser63 и ser73 (Adler et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89:5341 (1992); Kwok et al., Nature 370:223 (1994)).

Анализ установленной первичной последовательности киназ JNK показывает, что они отдаленно схожи с киназами ERK (Davis. Trends Biochem. Sci. 19:1470 (1994)). Как ERK, так и JNK в ответ на воздействие внешних стимулов фосфорилируются по Туг и Thr, что приводит к их активации (Davis, Trends Biochem. Sci. 19: 1470 (1994)). Участки фосфорилирования (Thr и Туr), которые играют критическую роль в их активации, сохраняются между ERK и JNK (Davis. Trends Biochem. Sci. 19: 1470 (1994)). Однако эти участки фосфорилирования расположены в очевидно двойственных мотивах фосфорилирования: Thr-Pro-Tyr (JNK) и Thr-Glu-Tyr (ERK). Фосфорилирование МАРК и JNK при воздействии внешнего сигнала часто связано с активацией протеинтирозинкиназ (РТК) (Gille et al., Nature 358:414 (1992)), что приводит к возникновению большого семейства белков, включающего некоторые рецепторы фактора роста и другие молекулы, передающие сигнал.

Протеинтирозинкиназы представляют собой ферменты, которые катализируют хорошо известные химические реакции: фосфорилирование тирозинового остатка (Hunter et al. Annu. Rev. Biochem. 54:897 (1985)). Тирозинкиназы рецептора представляют собой, в частности, привлекающие мишени для создания лекарственных препаратов, поскольку блокаторы доменов субстрата этих киназ, вероятно, будут являться эффективными и селективными антипролиферативными агентами. Возможное использование блокаторов протеинтирозинкиназы в качестве антипролиферативных средств было выявлено еще в 1981 году, когда в качестве РТК-блокатора был предложен кверцетин (Graziani et al., Eur. J. Biochem. 135: 583-589 (1983)).

Наиболее вероятный каскад реакций МАРК связан с внеклеточным сигналом регуляции киназы, который запускает каскад реакций Ras/Raf/MEK/BRK-киназа (Boudewijn et al., Trends Biochem. Sci. 20, 18 (1995)). Когда такой каскад запускается под действием различных сигналов, МАРК фосфорилируют ряд белков, включающий некоторые факторы транскрипции, которые транслоцируются в ядра и активируют ген транскрипции. Возможно такое негативно-регулирующее воздействие, которое может остановить этот каскад реакций.

Таким образом, необходимы новые противораковые химио-терапевтические средства, которые направленно воздействуют на тирозинкиназу рецепторов и останавливают каскад реакций Ras/Raf/MEK/BRK-киназа. Онкобелки в целом и белки, передающие сигнал, в частности, вероятно, являются наиболее селективной мишенью для химиотерапии, поскольку они представляют подкласс белков, активность которых имеет существенное значение для пролиферации клеток, а также поскольку их активность значительно возрастает при пролиферативных заболеваниях.

Согласно одному из вариантов осуществления изобретения предлагаются новые соединения формулы I где R₁ и R₂ независимо выбирают из группы, включающей хлор, фтор или бром; и R₃ выбирают из группы, включающей водород и фтор; оба радикала R₁ и R₂ могут не являться хлором в случае, когда R₃ представляет собой водород; и R₁ может не являться хлором в случае, когда R₂ обозначает фтор, и R₃ обозначает водород в том же самом соединении.

Согласно другому варианту осуществления изобретения предлагается фармацевтическая композиция, включающая фармацевтически приемлемый носитель и соединение формулы II где n представляет ноль или единицу; R₁ выбирают из группы, включающей водород, хлор, фтор или бром; и R₂ выбирают из группы, включающей водород, хлор, фтор, бром, метил и метокси; и R₃ выбирают из группы, включающей водород, хлор и фтор; при условии, что R₂ может не являться метилом или метокси в случае, когда оба радикала R₁ и R₃ представляют собой водород, и n равно нулю или единице; и все радикалы R₁, R₂ и R₃ могут не являться водородом, в случае, когда n представляет собой единицу.

Согласно предпочтительному варианту осуществления изобретения предлагается фармацевтическая композиция, включающая фармацевтически приемлемый носитель и соединение формулы II, где R₃ представляет собой водород, R₁ и R₂ независимо выбирают из группы, включающей хлор, фтор и бром.

Согласно другому варианту осуществления изобретения предлагается фармацевтическая композиция, включающая фармацевтически приемлемый носитель и соединение формулы III: где R₁ выбирают из группы, включающей водород, хлор, фтор и бром.

Согласно другому варианту осуществления изобретения предлагается способ лечения пациента от рака молочной железы или рака простаты, включающий введение указанному пациенту эффективного количества соединения формулы II или III, одного или в сочетании с фармацевтически приемлемым носителем. Согласно другому варианту осуществления изобретения предлагается способ ингибирования роста клеток опухоли молочной железы или простаты у пациента, пораженного раком молочной железы или простаты, включающий введение указанному пациенту эффективного количества соединения формулы III, одного или в сочетании с фармацевтически приемлемым носителем. Кроме того, предлагается способ индукции апоптоза клеток опухоли молочной железы или простаты у пациента, пораженного раком молочной железы или простаты, включающий введение указанному пациенту эффективного количества соединения формулы III, одного или в сочетании с фармацевтически приемлемым носителем.

Изобретение также относится к фармацевтическим композициям и терапевтическим способам, описанным выше, в которых указанное соединение представляет собой соединение формулы IV: где R₁ выбирают из группы, включающей фтор и бром, и R₂ выбирают из группы, включающей 2-хлорофенил, 4-хлорофенил, 4-фторофенил и 2-нитрофенил.

На фиг. 1А и фиг.1В представлены гистограммы, иллюстрирующие действие соединений: Е-2,4-дифторостирил-4-фторобензилсульфон (FRI-2), Е-4-фторостирил-4-бромо-бензилсульфон (FRI-6), Е-4-бромостирил-4-фторобензилсульфон (FRI-7), Е-4-фторостирил-4-хлоробензилсульфон (FRI-20), и Е-4-хлоростирил-4-хлоробензилсульфон (FRI-22) - на клетки линий NIH3T3, MCF7, ВТ-20 и LnCaP. Клетки обрабатывали соединениями в концентрации 2,5 мкМ (фиг.1А) и 5,0 мкМ (фиг. 1В) и через 48 часов определяли процент выживаемости клеток методом эксклюзии с использованием красителя трипанового синего. Все приведенные данные представляют собой среднее значение для трех независимых экспериментов. Стандартное отклонение не превышает 10%.

На фиг.2А представлена гистограмма, иллюстрирующая зависимость подавления роста клеток линий MCF7, ВТ-20, LnCaP и NIH3T3 от концентрации при обработке их FRI-20. Клетки обрабатывают при концентрации FRI-20, равной 0,250 нМ, 500 нМ, 1 мкМ, 2,5 мкМ и 5,0 мкМ в течение 48 часов. Процентное содержание живых клеток определяют методом эксклюзии с использованием красителя трипанового синего. Приведено среднее значение для трех независимых экспериментов.

На фиг. 2В представлена гистограмма жизнеспособности клеток линий MCF7, ВТ-20, LnCaP и NIH3T3 после обработки их FRI-20 в течение различных промежутков времени. Все клетки обрабатывали соединением FRI-20 в концентрации 2,5 мкМ, и методом эксклюзии с использованием красителя трипанового синего определяли количество жизнеспособных клеток через 12, 24, 48 и 72 часа. Приведено среднее значение для трех независимых экспериментов.

На фиг. 3А представлен график зависимости, иллюстрирующий влияние активности соединения FRI-20 на нормальные клетки линий NIH3T3, HeLa и HFL; позитивно реагирующие на эстроген клетки опухоли молочной железы линий SKBR-3, 435, ВТ-20). Фиг.3В аналогична фиг.3А, с тем исключением, что обработанные клетки включают андрогензависимые клетки опухоли простаты линии LnCaP, а также андрогеннезависимые клетки опухоли простаты линий DU-145 и PC-3, Все клетки обрабатывали соединением FRI-20 в концентрации 2,5 и 5,0 мкМ и анализировали жизнеспособность клеток через 48 часов методом эксклюзии с использованием красителя трипанового синего. Приведено среднее значение для трех независимых экспериментов. Отклонение не превышает 10%.

На фиг. 4 приведена серия блот-анализов цикла клеток линии LnCaP, подвергнутых обработке с использованием соединения FRI-20 и контрольной обработке. Клетки линии LnCaP обрабатывали 120 мл ДМСО (контрольные клетки) или 2,5 мкМ FRI-20 в 10 мл ДМСО. Клетки отбирали через 6, 12, 24 и 48 часов после обработки, окрашивали пропидий иодидом и анализировали методом проточной цитометрии.

На фиг. 5 представлена авторадиограмма после электрофореза в полиакриламидном геле с использованием додецилсульфата натрия, иллюстрирующий действие соединения FRI-20 на активность ERK/MAPK. Клетки линий LnCaP, MCF-7 и NIH3T3 обрабатывают соединением FRI-20 и также, как и обработанные ДМСО клетки, подвергают иммунокомплексному методу анализа киназной активности ERK/MAPK с использованием в качестве субстрата основного миелинового белка (МBР). Активность ERK-2 в отношении МВР анализировали в присутствии [-³²P]ATP. Фосфорилированный МВР разделяли методом электрофореза в полиакриламидном геле с использованием додецилсульфата натрия при 12% концентрации полиакриламидного геля и визуализировали авторадиографически.

На фиг. 6 представлен блоттинг распределения ERK-2 и JNK/SAPK белков в клетках линий NIH3T3, LnCaP и MCF-7. Лизаты клеточных культур, содержащие 100 мг белков, подвергают электрофорезу. После электрофореза и переноса на поливинилиденовую мембрану белки подвергают блоттингу против поликлональных антител к ERK-2 и JNK-2 и визуализируют с использованием хемилюминесценции.

На фиг. 7 представлена авторадиограмма после электрофореза в полиакриламидном геле с использованием додецилсульфата натрия, иллюстрирующий действие FRI-20 на активность JNK/SAPK. JNK иммунопреципитировали из 100 мг лизатов клеточных культур с поликлональными антителами к JNK и подвергали иммунокомплексному методу анализа киназной активности с использованием в качестве субстрата GST-c-Jun (1-79). Фосфорилированные белки разделяли электрофорезом в полиакриламидном геле с использованием додецилсульфата натрия (SDS-PAGE) и визуализировали авторадиографически. Эксперимент повторяли три раза и получили сходные результаты.

Согласно настоящему изобретению некоторые производные стирилсульфонов оказывают влияние на каскад реакций, связанный с передачей сигнала с участием МАРК, оказывая при этом действие на рост и жизнеспособность опухолевых клеток. Эти соединения ингибируют рост и пролиферацию клеток опухоли молочной железы и опухоли простаты дозозависимым образом, не оказывая влияния на рост нормальных клеток. Ингибирование роста клеток связано с регулированием активности киназ ERK и JNK - разновидностей МАРК. Способность стирилсульфонов регулировать активность этих киназ MAPKs и индуцировать остановку роста клеток определяется природой и положением функциональных групп, имеющихся в соединении.

Обработка клеток опухоли молочной железы и опухоли простаты стирилсульфонами, являющимися предметом настоящего изобретения, приводит к ингибированию пролиферации клеток и индукции гибели клеток, вызванной апоптозом. Этот эффект наблюдается как для клеток, позитивно реагирующих на действие эстрогенового рецептора, так и для клеток, негативно реагирующих на действие эстрогенового рецептора, хотя при тестировании раковых клеток молочной железы, клетки линии 361, показали значительную резистентность к стирилсульфонам. Ингибирование пролиферации клеток и индукция гибели клеток, вызванная апоптозом, также наблюдаются для андрогензависимых, а также андрогеннезависимых клеток опухоли простаты, хотя первые значительно более чувствительны к стирилсульфоновым лекарственым средствам.

Клетки опухоли, подвергнутые действию соединений, являющихся предметом настоящего изобретения, аккумулируются на G2/M фазе цикла клетки. Если клетки проходят С2/М-фазу, по-видимому, они претерпевают апоптоз. Обработка нормальных клеток стирилсульфонами не приводит к такому действию на прогрессию цикла клетки. Нормальные клетки характеризуются обычной прогрессией цикла клетки как в присутствии, так и в отсутствие стирилсульфоновых лекарственных препаратов.

Как клетки, обработанные стирилсульфоновыми лекарственными препаратами, являющимися предметом настоящего изобретения, так и необработанные клетки, характеризуются сходным уровнем внутриклеточной ERK-2, однако биохимическая активность киназы ERK-2, что определяют по способности к фосфорилированию субстрата - основного миелинового белка (МВР), значительно отличается у обработанных лекарственным препаратом клеток по сравнению с необработанными клетками. В случае клеток опухоли простаты обработка соединением FR-20, предпочтительным соединением согласно настоящему изобретению, снижает способность к фосфорилированию МВР более, чем на 80%, по сравнению с обработкой контрольным препаратом, не содержащим соединение FR-20. Вестерн-блоттинг лизатов клеток, обработанных лекарственным препаратом и не содержащим лекарства контролем с антителами к ERK-2 дает то же самое количество белка в обоих лизатах, свидетельствуя о том, что более высокий уровень фосфорилирования МВК в обработанных контролем клетках не является следствием различного количества ERK-2 белка в лизатах. Эти результаты подтверждают, что стирилсульфоны, являющиеся предметом настоящего изобретения, блокируют фосфорилирующую способность ERK-2.

Стирилсульфоны, являющиеся предметом настоящего изобретения, усиливают способность JNK фосфорилировать c-Jun, по сравнению с клетками, обработанными контрольным (не содержащим FR-20) препаратом. Вне связи, с какой-либо теорией, эти результаты указывают на то, что стирилсульфоны могут действовать подобно предвоспалительному цитокинезу или УФ-свету, активируя каскад реакций JNK, который, в свою очередь, может включать в работу гены, ответственные за ингибирование роста клеток и апоптоз.

Синтез стирилсульфонов Соединения, являющиеся предметом настоящего изобретения, характеризуются цис-транс изомерией, являющейся следствием присутствия одной или более двойных связей. Эти соединения называют согласно системе Кана-Ингольда-Прелога, Рекомендации ИЮПАК 1974 года, раздел Е: Стереохимия, в Nomenclature of Organic Chemistry, Pergamon, Elmsford, NY, 1979 (The "Blue Book"). См. также: March, Advanced Organic Chemistry, John Wiley & Sons, Inc., New York. NY, 4th ed., 1992, p. 127-138. Стерическое расположение относительно двойной связи обозначается как "Z" или "Е".

(Е)-стирил- и бензилсульфоны получают конденсацией Кневенагеля ароматических альдегидов с активными метиленовыми компонентами, такими, как арил-, бензил-, стирилсульфонилуксусные кислоты, фенациларилсульфоны и сульфонилдиуксусная кислота. Этот метод описан в: Reddy et. al., Acta. Chim. Hung. 115: 269 (1984); Reddy et. al. , Sulfur Letters 13:83 (1991); Reddy et. al., Synthesis 322 (1984); и Reddy et. al., Sulfur Letters 7:43 (1987), эти сведения включены в настоящее описание в качестве ссылки. (Z)-бензил- и (Z)-стирилсульфоны синтезируют путем нуклеофильного присоединения ароматических или алифатических тиолов к фенилацетилену с последующим окислением полученного продукта 30%-ным пероксидом водорода.

Синтез бензилсульфонил- и арилсульфонилуксусных кислот Арил- и бензилсульфонилуксусные кислоты являются исходными соединениями для синтеза (Е)-стириларил- и (Е)-стирилбензилсульфонов. Арилсульфонилуксусные кислоты могут быть получены конденсацией арилсульфината натрия с хлоруксусной кислотой в области щелочных значений рН. Другой метод синтеза тех же самых соединений включает окисление продуктов, полученных при конденсации арилтиолата натрия с хлоруксусной кислотой.

Бензилсульфонилуксусные кислоты могут быть синтезированы при окислении продуктов конденсации бензилхлорида с тиогликолятом натрия 30%-ным пероксидом водорода. Кроме того, бензилсульфонилуксусные кислоты могут быть синтезированы при окислении продуктов конденсации натриевой соли бензилтиолов с хлоруксусной кислотой 30%-ным пероксидом водорода.

Синтез (Е)-стириларил- и (Е)-бензилсульфонов Для получения (Е)-стирилбензил- и (Е)-бензилсульфонов смесь соответствующей сульфонилуксусной кислоты (например, 10 ммоль), ароматического альдегида (например, 10 ммоль) и каталитическое количество бензиламина в уксусной кислоте (например, 15 мл) нагревают с обратным холодильником в течение 2-3 часов. После охлаждения добавляют осушенный эфир, и охлаждают реакционную смесь в течение ночи. Эфирный раствор последовательно промывают насыщенным раствором гидрокарбоната натрия, бисульфита натрия, разбавленной хлороводородной кислотой и, окончательно, водой. Выпаривание раствора в осушенном эфире, содержащего сульфат натрия, дает твердый продукт - (Е)-стириларил- или бензилсульфон, который может быть затем перекристаллизован из 2-пропанола или из 95%-ного этанола.

Синтез (Z)-стириларил- и (Z)-стирилбензилсульфонов (Z)-стириларил- и (Z)-стирилбензилсульфоны могут быть получены путем присоединения арилтиолата натрия или бензилтиолата натрия, полученного из соответствующего тиола (например, 10 ммоль) и гидроксида натрия (например, 20 ммоль), к свежеперегнанному фенилацетилену в метаноле. Смесь нагревают с обратным холодильником в течение 24 часов и выливают на раздробленный лед. (Z)-стириларил- и (Z)-стирилбензилсульфиды окисляют 30%-ным пероксидом водорода и получают (Z)-стириларил- и (Z)-стирилбензилсульфоны.

Синтез (Е),(Е)- и (Е),(Z)-бис(стирил)сульфонов (Е), (Е)-бис(стирил)сульфоны могут быть получены конденсацией сульфонилдиуксусной кислоты с ароматическими альдегидами в присутствии бензиламина в качестве катализатора. Реакционную смесь нагревают с обратным холодильником в течение 2 часов в ледяной уксусной кислоте. После охлаждения в реакционную смесь добавляют абсолютный эфир, и последовательно промывают насыщенным раствором гидрокарбоната натрия, бисульфита натрия, разбавленной хлороводородной кислотой и водой. Выпаривание высушенного эфирного слоя дает (Е), (Е)-бис(стирил)сульфоны.

(Z), (Е)-бис(стирил)сульфоны могут быть получены путем смешения раствора (Z)-стирилсульфонилуксусной кислоты в ледяной уксусной кислоте с аральдегидом и бензиламином. Раствор кипятят в течение 3 часов. Реакционную смесь охлаждают и добавляют осушенный эфир. Продукты разделяют фильтрованием. Фильтрат разбавляют дополнительным количеством эфира и промывают насыщенным раствором гидрокарбоната натрия, бисульфита натрия, разбавленной хлороводородной кислотой и водой. Эфирный слой отделяют, высушивают и после упаривания получают (Z),(Е)-бис(стирил)сульфоны.

Стирилсульфоны, являющиеся предметом настоящего изобретения, могут вводиться в форме фармацевтической композиции, в сочетании с фармацевтически приемлемым носителем. Количество активного ингредиента в такой композиции может составлять от 0,1 до 99,99 весовых процентов. Под термином "фармацевтически приемлемый носитель" понимают любой носитель, разбавитель или наполнитель, который совместим с другими компонентами композиции и не вреден реципиенту.

Соединения, являющиеся предметом настоящего изобретения, могут вводиться пациентам (млекопитающим, включая животных и человека), пораженным раком молочной железы или раком простаты. Соединения могут вводиться любым способом, включая оральное и парентеральное введение. Парентеральное введение включает, например, внутривенное, внутримышечное, внутриартериальное, интраперитональное, назальное, ректальное и подкожное введение. Активное средство предпочтительно вводится с фармацевтически приемлемым носителем, выбранным в зависимости от предполагаемого способа введения и общепринятой фармацевтической практики.

Активный ингредиент может вводиться в дозированных формах в соответствии с общепринятой практикой в области приготовления фармацевтических препаратов. См.: Gennaro Alphonso, ed. Remington Pharmaceutical Sciences. 18 th Ed. , (1990) Mack Publishing Co., Easton, PA. Подходящие дозированные формы могут включать, например, таблетки, капсулы, растворы, парентеральные растворы, пастилки, суппозитории или суспензии.

Для парентерального введения активное средство может быть смешано с подходящим носителем или разбавителем, таким как вода, масло, солевой раствор, водный раствор декстрозы (глюкозы) и других сахаров, гликоль, например, такой, как пропиленгликоль или полиэтиленгликоль. Растворы для парентерального введения предпочтительно содержат водорастворимую соль активного средства. Также могут быть добавлены подходящие антиокислительные средства и консерванты. Подходящие антиокислительные средства включают сульфит, аскорбиновую кислоту, лимонную кислоту и ее соли, натриевую соль ЭДТА. Подходящие консерванты включают бензалконий хлорид, метил- или пропилпарабен и хлорбутанол.

Для орального введения активное средство может быть смешано с одним или более твердым неактивным ингредиентом для приготовления таблеток, капсул, или других подходящих дозированных форм для орального введения. Например, активный ингредиент может быть смешан с карбоксиметилцеллюлозой кальция, стеаратом магния, маннитом или крахмалом, а затем сформован в таблетки обычными методами таблетирования.

Конкретная доза соединения, являющегося предметом настоящего изобретения, необходимая для получения терапевтического эффекта, конечно, будет зависеть от индивидуальных особенностей пациента, которые включают величину, вес, возраст и пол пациента, природу и стадию заболевания, степень выраженности заболевания и способ введения лекарства. Например, может быть использована суточная доза от около 0,05 до около 50 мг/кг в день. Также возможны более высокие или более низкие дозы.

Изобретение иллюстрируется следующими примерами, которые не ограничивают объем изобретения.

Методика 1 Общая методика синтеза стирил- и бензиларилсульфонов К раствору гидроксида натрия (8 г, 0,2 моль) в метаноле (200 мл) медленно добавляют соответствующий тиофенол или бензилмеркаптан (0,1 моль). Затем частями добавляют хлоруксусную кислоту (0,1 моль), и реакционную смесь нагревают с обратным холодильником в течение 2-3 часов. Охлажденный продукт выливают на измельченный лед и нейтрализуют разбавленной хлороводородной кислотой (200 мл). Полученные арил- и бензилтиоуксусные кислоты (0,1 моль) подвергают окислению 30%-ным раствором пероксида водорода (0,12 моль) в ледяной уксусной кислоте (25 мл) при нагревании с обратным холодильником в течение 1-2 часов. Содержимое охлаждают и выливают на измельченный лед. Отделенное твердое вещество перекристаллизовывают из горячей воды и получают арил- и бензилсульфонилуксусные кислоты.

Смесь соответствующей арил- или бензилсульфонилуксусной кислоты (0,001 моль), ароматического альдегида (0,001 моль) и бензиламина (1 мл) в ледяной уксусной кислоте (15 мл) нагревают с обратным холодильником в течение 2-3 часов. Продукт охлаждают и обрабатывают осушенным эфиром (50 мл). Разделенный продукт собирают с помощью фильтрации. Фильтрат разбавляют дополнительным количеством эфира и последовательно промывают насыщенным раствором бикарбоната натрия (20 мл), бисульфита натрия (20 мл), разбавленной хлороводородной кислотой (20 мл) и окончательно водой (35 мл). Выпаривание высушенного эфирного слоя в большинстве случаев позволяет получить твердое вещество. Однако в некоторых случаях отделяется сиропообразный продукт, который переходит в твердое состояние при обработке 2-пропанолом. Чистоту продукта контролируют ТСХ (силикагель BDH, гексан/этилацетат в соотношении 3:1).

Методика 2 Общая методика синтеза (Е)(Е)- и (Е)(Z)-бис-(стирил)сульфонов К свежеперегнанному фенилацетилену (51,07 г, 0,5 моль) добавляют тиогликолят натрия, полученый из тиогликолевой кислоты (46 г, 0,5 моль) и гидроксида натрия (40 г, 1 моль) в метаноле (250 мл). Смесь нагревают с обратным холодильником в течение 24 часов и выливают на измельченный лед (500 мл) после охлаждения. Стирилтиоуксусную кислоту, образующуюся после нейтрализации разбавленной хлороводородной кислотой (250 мл), фильтруют и высушивают; выход 88 г (90%); т.пл. 84-86^oС.

Затем стирилтиоуксусную кислоту окисляют до стирилсульфонилуксусной кислоты следующим образом. Смесь стирилтиоуксусной кислоты (5 г, 25 ммоль) в ледяной уксусной кислоте (35 мл) и 30%-ный пероксид водорода (15 мл) нагревают с обратным холодильником в течение 60 мин, после охлаждения смесь выливают на измельченный лед (200 мл). Отделенное соединение фильтруют и перекристаллизовывают из горячей воды, получают белые кристаллические хлопья (Z)-стирилсульфонилуксусной кислоты; выход 2,4 г (41%); т.пл. 150-151^oС.

Раствор (Z)-стирилсульфонилуксусной кислоты (2,263 г, 10 ммоль) в ледяной уксусной кислоте (6 мл) смешивают с ароматическим альдегидом (10 ммоль) и бензиламином (0,2 мл) и нагревают с обратным холодильником в течение 3 часов. Реакционную смесь охлаждают, обрабатывают осушенным эфиром (50 мл), и продукты разделяют фильтрацией. Полученный фильтрат разбавляют дополнительным количеством эфира и последовательно промывают насыщенным раствором гидрокарбоната натрия (15 мл), бисульфита натрия (15 мл), разбавленной хлороводородной кислотой (20 мл) и окончательно водой (30 мл). Упаривание эфирного слоя дает (Е)(Z)-бис-(стирил)сульфоны.

(Е), (Е)-бис-(стирил)сульфоны получают согласно той же самой методике, которая описана выше, с тем исключением, что вместо (Z)-стирилсульфонилуксусной кислоты используют сульфонилдиуксусную кислоту, и используют вдвое большее количество ароматического альдегида (20 ммоль).

Методика 3 Общая методика синтеза 2-(арилсульфонил)-1-фенил-3-арил-2-пропен-1-онов Эти соединения синтезируют двумя способами, согласно которым используют различные условия реакции, различные растворители и катализаторы.

Способ 1: Фенациларилсульфоны получают при нагревании с обратным холодильником в течение 6-8 часов -бромацетофенонов (0,05 моль) и арилсульфинатов натрия (0,05 моль) в абсолютном этаноле (200 мл). Продукт, который отделяют после охлаждения, фильтруют и промывают несколько раз водой до удаления бромида натрия. Затем продукт перекристаллизовывают из этанола: фенацилфенилсульфон, т. пл. 90-91^oС; фенацил-п-фторофенилсульфон, т.пл. 148-149^oС; фенацил-п-бромофенилсульфон, т. пл. 121-122^oС; фенацил-п-метоксифенилсульфон, т.пл. 104-105^oС; п-нитрофенацилфенилсульфон, т.пл. 136-137^oС.

Раствор фенациларилсульфона (0,01 моль) в уксусной кислоте (10 мл) смешивают с аральдегидом (0,01 моль) и бензиламином (0,02 мл), нагревают с обратным холодильником в течение 3 часов. Раствор охлаждают и добавляют осушенный эфир (50 мл). Эфирный раствор последовательно промывают разбавленной хлороводородной кислотой, водным 10%-ным раствором NaOH, насыщенным раствором NаНSО₃ и водой. Упаривание высушенного эфирного слоя дает твердый продукт, который очищают перекристаллизацией.

Способ 2: В коническую колбу объемом 500 мл, снабженную вводом азота, помещают сухой тетрагидрофуран (200 мл). К содержимому колбы добавляют по каплям при непрерывном перемешивании раствор хлорида титана (IV) (11 мл, 0,01 моль) в абсолютном четыреххлористом углероде. В течение всего времени добавления температуру колбы поддерживают равной -20^oС. К реакционной смеси добавляют смесь фенациларилсульфона (0,01 моль) и ароматического альдегида (0,01 моль), а также медленно добавляют пиридин (4 мл, 0,04 моль) в тетрагидрофуране (8 мл), в течение 1 часа. Содержимое колбы перемешивают в течение 10-12 часов, обрабатывают водой (50 мл) и затем добавляют эфир (50 мл). Эфирный слой отделяют и промывают 15 мл насыщенных растворов 10%-ного гидроксида натрия, бисульфита натрия и насыщенного солевого раствора. Упаривание высушенного эфирного слоя дает 2-(арилсульфонил)-1-фенил-3-арил-2-пропен-1-оны.

Пример 1 Е-стирилфенилсульфон Синтез осуществляют согласно методике 1, используя раствор фенилсульфонилуксусной кислоты (0,01 моль) и бензальдегида (0,01 моль). Указанное в заглавии соединение получают с выходом 68-72%.

Пример 2 Е-4-хлорстирилфенилсульфон Синтез осуществляют согласно методике 1, используя раствор фенилсульфонилуксусной кислоты (0,01 моль) и 4-хлоробензальдегида (0,01 моль). Указанное в заглавии соединение получают с выходом 78-80%.

Пример 3 Е-2,4-дихлорстирилфенилсульфон Синтез осуществляют согласно методике 1, используя раствор фенилсульфонилуксусной кислоты (0,01 моль) и 2,4-дихлоробензальдегида (0,01 моль). Указанное в заглавии соединение получают с выходом 60-65%.

Пример 4 Е-4-бромстирилфенилсульфон Синтез осуществляют согласно методике 1, используя раствор фенилсульфонилуксусной кислоты (0,01 моль) и 4-бромбензальдегида (0,01 моль). Указанное в заглавии соединение получают с выходом 78-80%.

Пример 5 Е-4-хлорстирил-4-хлорфенилсульфон Синтез осуществляют согласно методике 1, используя раствор 4-хлорфенилсульфонилуксусной кислоты (0,01 моль) и 4-хлорбензальдегида (0,01 моль). Указанное в заглавии соединение получают с выходом 70-72%.

Пример 6 Е-4-метилстирил-4-хлорфенилсульфон Синтез осуществляют согласно методике 1, используя раствор 4-хлорфенилсульфонилуксусной кислоты (0,01 моль) и 4-метилбензальдегида (0,01 моль). Указанное в заглавии соединение получают с выходом 60-64%.

Пример 7 Е-4-метоксистирил-4-хлорфенилсульфон Синтез осуществляют согласно методике 1, используя раствор 4-хлорофенилсульфонилуксусной кислоты (0,01 моль) и 4-метоксибензальдегида (0,01 моль). Указанное в заглавии соединение получают с выходом 68-70%.

Пример 8 Е-4-бромстирил-4-хлорфенилсульфон Синтез осуществляют согласно методике 1, используя раствор 4-хлорофенилсульфонилуксусной кислоты (0,01 моль) и 4-бромобензальдегида (0,01 моль). Указанное в заглавии соединение получают с выходом 80%.

Пример 9 Е-2-хлорстирилбензилсульфон Синтез осуществляют согласно методике 1, используя раствор бензилсульфонилуксусной кислоты (0,01 моль) и 2-хлоробензальдегида (0,01 моль). Указанное в заглавии соединение получают с выходом 72%.

Пример 10 Е-4-хлорстирилбензилсульфон Синтез осуществляют согласно методике 1, используя раствор бензилсульфонилуксусной кислоты (0,01 моль) и 4-хлорбензальдегида (0,01 моль). Указанное в заглавии соединение получают с выходом 78%.

Пример 11 Е-4-фторстирил-4-хлорбензилсульфон Синтез осуществляют согласно методике 1, используя раствор 4-хлорбензилсульфонилуксусной кислоты (0,01 моль) и 4-фторбензальдегида (0,01 моль). Указанное в заглавии соединение получают с выходом 72%.

Пример 12 Е-4-хлорстирил-4-хлорбензилсульфон Синтез осуществляют согласно методике 1, используя раствор 4-хлорбензилсульфонилуксусной кислоты (0,01 моль) и 4-хлорбензальдегида (0,01 моль). Указанное в заглавии соединение получают с выходом 80%.

Пример 13 Е-4-фторстирил-4-фторбензилсульфон Синтез осуществляют согласно методике 1, используя раствор 4-фторбензилсульфонилуксусной кислоты (0,01 моль) и 4-фторбензальдегида (0,01 моль). Указанное в заглавии соединение получают с выходом 73%.

Пример 14 Е-2,4-дифторстирил-4-фторбензилсульфон Синтез осуществляют согласно методике 1, используя раствор 4-фторбензилсульфонилуксусной кислоты (0,01 моль) и 2,4-дифторбензальдегида (0,01 моль). Указанное в заглавии соединение получают с выходом 68%.

Пример 15 Е-4-фторстирил-4-бромбензилсульфон Синтез осуществляют согласно методике 1, используя раствор 4-бромбензилсульфонилуксусной кислоты (0,01 моль) и 4-фторбензальдегида (0,01 моль). Указанное в заглавии соединение получают с выходом 82%.

Пример 16 Е-4-бромстирил-4-бромбензилсульфон Синтез осуществляют согласно методике 1, используя раствор 4-бромбензилсульфонилуксусной кислоты (0,01 моль) и 4-бромбензальдегида (0,01 моль). Указанное в заглавии соединение получают с выходом 88%.

Пример 17 Е-4-бромстирил-4-фторбензилсульфон Синтез осуществляют согласно методике 1, используя раствор 4-фторбензилсульфонилуксусной кислоты (0,01 моль) и 4-бромбензальдегида (0,01 моль). Указанное в заглавии соединение получают с выходом 82%.

Пример 18 Е-4-хлорстирил-4-бромбензилсульфон Синтез осуществляют согласно методике 1, используя раствор 4-бромбензилсульфонилуксусной кислоты (0,01 моль) и 4-хлорбензальдегида (0,01 моль). Указанное в заглавии соединение получают с выходом 88%.

Пример 19 Е-4-бромстирил-4-хлорбензилсульфон Синтез осуществляют согласно методике 1, используя раствор 4-хлоробензилсульфонилуксусной кислоты (0,01 моль) и 4-бромбензальдегида (0,01 моль). Указанное в заглавии соединение получают с выходом 92%.

Пример 20 (Z)-стирил-(Е)-4-фторстирилсульфон Синтез осуществляют согласно методике 2, используя раствор (Z)-стирилсульфонилуксусной кислоты (0,01 моль) и 4-4-фторбензальдегида (0,01 моль). Указанное в заглавии соединение получают с выходом 68%.

Пример 21 (Z)-стирил-(Е)-4-бромстирилсульфон Синтез осуществляют согласно методике 2, используя раствор (Z)-стирилсульфонилуксусной кислоты (0,01 моль) и 4-бромбензальдегида (0,01 моль). Указанное в заглавии соединение получают с выходом 70%.

Пример 22 (Z)-стирил-(Е)-4-хлорстирилсульфон Синтез осуществляют согласно методике 2, используя раствор (Z)-стирилсульфонилуксусной кислоты (0,01 моль) и 4-хлорбензальдегида (0,01 моль). Указанное в заглавии соединение получают с выходом 64%.

Пример 23 2-[(4-фторфенил)-сульфонил]-1-фенил-3-(4-фторфенил)-2-пропен-1-он Синтез осуществляют согласно способу 1 методики 3, используя раствор фенацил-4-фторфенилсульфона (0,01 моль) и 4-фторбензальдегида (0,01 моль). Указанное в заглавии соединение получают с выходом 63%.

Пример 24 2-[(2-хлорфенил)-сульфонил]-1-фенил-3-(4-фторофенил)-2-пропен-1-он Синтез осуществляют согласно способу 1 методики 3, используя раствор фенацил-2-хлорфенилсульфона (0,01 моль) и 4-фторбензальдеги