Фармацевтическая композиция для лечения иммунных заболеваний

Фармацевтическая композиция для лечения иммунных заболеваний

Реферат

 

Изобретение относится к медицине. Заявлена композиция, содержащая антитело против AILIM (альтернативно называемой JTT-1-антигеном, JTT-2-антигеном, ICOS и 8F4), которое обладает существенным терапевтическим действием на артроз, например ревматоидный артрит и остеоартрит, болезнь трансплантат против хозяина, иммунное отторжение трансплантата, воспаление (гепатит и воспалительные заболевания кишечника), патологическое состояние, сопровождающееся избыточной продукцией антитела против чужеродного антигена, запускаемой при иммунологической сенсибилизации антигеном. Изобретение обеспечивает получение композиции, не имеющей побочных эффектов. 4 с. и 20 з.п.ф-лы, 52 ил.

Данное изобретение относится к фармацевтической композиции, содержащей вещество, обладающее активностью, которая модулирует биологическую активность AILIM (индуцируемая активацией иммуномодулирующая лимфоцитарная молекула; альтернативно называемая "JTT-1-антигеном", "JTT-2-антигеном", "ICOS (индуцируемый костимулятор)" или "8F4"), особенно сигнальную трансдукцию, опосредуемую AILIM.

В частности, данное изобретение относится к фармацевтической композиции, содержащей вещество, обладающее активностью, которая модулирует (например, ингибирует) пролиферацию AILIM-экспрессирующих клеток или модулирует (например, ингибирует) продукцию цитокина (например, интерферона ) или интерлейкина 4) AILIM-экспрессирующими клетками.

Более конкретно данное изобретение относится (1) к фармацевтической композиции для предотвращения, лечения или профилактики артроза, например, ревматоидного артрита (РА), остеоартрита (ОА), (2) к фармацевтической композиции для предотвращения, лечения или профилактики воспаления (например, гепатита), (3) фармацевтической композиции для предотвращения, лечения или профилактики реакции трансплантат против хозяина (реакции ТПХ), болезни трансплантат против хозяина (ТПХБ) или иммунного отторжения, сопровождающего трансплантацию ткани или органа, (4) фармацевтической композиции для предотвращения или профилактики иммунного ответа, запускаемого чужеродным антигеном или аутоантигеном (например, продукции антитела против антигена, пролиферации клеток, продукции цитокина).

Живой организм млекопитающих обладает системами иммунного ответа, которые не впускают патогенные микроорганизмы (вирусы, бактерии, паразиты и т.д.) или чужеродные тела (оба в последующем называются "антигеном"), которые вторглись в живой организм. Одна из них называется системой естественного иммунного ответа, другая системой приобретенного иммунного ответа. Первая представляет собой механизм удаления, включающий в себя фагоцитоз фагоцитами (полиморфно-ядерные лейкоциты, моноциты, макрофаги и т.д.), атаку природными киллерными клетками (NK) и неспецифическое распознавание, такое как опсонизация антигена комплементом. Последняя, система приобретенного иммунного ответа, представляет собой механизм удаления лимфоцитами (главным образом, Т-клетками и В-клетками), которые приобрели специфичность к антигену (то есть активированные лимфоциты). В-клетки, которые приобрели специфичность к антигену, атакуют антиген, находящийся вне клеток, посредством продукции антител, специфических для антигена. Т-клетки, которые приобрели специфичность к антигену (то есть активированные Т-клетки), делятся на хелперные Т-клетки и цитотоксические Т-клетки (цитотоксические лимфоциты, CTL). Хелперные Т-клетки регулируют дифференцировку В-клеток и продукцию антител и разрушают антиген в кооперации с фагоцитами. Последние, CTL, сами атакуют инфицированные вирусом клетки и так далее (Experimental Medicine: SUPPLEMENT, "Bio Science Term Library, Immunity", Yodosha, pp.14-17 (1995)).

Такое приобретение Т-клетками специфичности к антигену (то есть активация Т-клеток) инициируется посредством распознавания Т-клетками антигена, представленного антигенпредставляющими клетками (АРС), такими как макрофаги, В-клетки или дендритные клетки. Антигенпредставляющие клетки процессируют антигены, включенные таким образом, и представляют эти процессированные антигены посредством их связывания с главным комплексом гистосовместимости (МНС). Т-клетки получают первичный сигнал активации клеток (или приобретения специфичности) при распознавании процессированных антигенов, представленных антигенпредставляющими клетками, благодаря комплексу между рецептором Т-клеток (TcR) и СD3-антигеном, присутствующим на поверхности клеточной мембраны (TcR/CD3-комплекс).

Однако опосредованный TcR/CD3-комплексом первичный сигнал сам по себе не может в достаточной степени активировать Т-клетки и приводит к иммунологической толерантности или клональной анергии, так что клетки впоследствии не могут реагировать на какую-либо полученную стимуляцию. Аутокринный фактор, интерлейкин 2 (IL-2), необходим для того, чтобы Т-клетки были активированы, дифференцированы в клоны Т-клеток, специфичные для антигена, и пролиферировали. При клональной анергии Т-клетки инактивированы вследствие отсутствия продукции IL-2 и ему подобных и отсутствия клеточного деления. То есть активация Т-клеток, сопровождаемая продукцией цитокинов, таких как IL-2, требует вторичного сигнала после первого сигнала через TcR/CD3-комплекс. Этот вторичный сигнал называют костимулирующим сигналом.

Т-клетки получают этот вторичный сигнал и передают его в клетки путем взаимодействия (клеточной адгезии) с другими молекулами, отличными от МНС, на антигенпредставляющих клетках, посредством молекул, отличных от комплекса TcR/CD3 на поверхности Т-клеток. Этот вторичный сигнал отменяет клеточную анергию (клональную анергию) и активирует клетки.

Хотя некоторая часть механизма передачи вторичного сигнала между антигенпредставляющими клетками и такими лимфоцитами, как Т-клетки, еще детально не выяснена, проведенные до настоящего времени исследования показали, что важным фактором для передачи вторичного сигнала является взаимодействие CD28 (также называемого Тр44, Т44 или 9.3 антигеном), который представляет собой молекулу на клеточной поверхности, экспрессируемую главным образом на Т-клетках и клетках тимуса, с CD80 (также называемым В7-1, В7, ВВ1 или В7/ВВ1), который представляет собой молекулу на клеточной поверхности, экспрессируемую на антигенпредставляющих клетках (макрофагах, моноцитах, дендритных клетках и т.д.), и с CD86 (также называемым В7-2 или В70), который также представляет собой молекулу на клеточной поверхности антигенпредставляющих клеток (то есть адгезия клеток посредством связывания между этими молекулами). Кроме того, экспериментально было показано, что взаимодействие ассоциированного с цитолитическими Т-лимфоцитами антигена 4 (CTLA-4), экспрессия которого, как полагают, усиливается в зависимости от вторичного сигнала, с CD80 (В7-1) и CD86 (В7-2) (то есть адгезия клеток посредством связывания между этими молекулами) также играет важную роль в регуляции активации Т-клеток вторичным сигналом. Другими словами, регуляция активации Т-клеток передачей вторичного сигнала вовлекает по меньшей мере взаимодействие между CD28 и CD80/CD86, усиление экспрессии CTLA-4, которое, как считают, зависит от взаимодействия, и взаимодействие между CTLA-4 и CD80/CD86.

Известно, что CD28 является молекулой-костимулятором передачи вторичного сигнала (костимулирующий сигнал), необходимой для активации Т-клеток и для отмены анергии. Вторичный сигнал, передаваемый путем связывания этой молекулы с костимулирующими молекулами, CD80 (В7-1) и CD86 (В7-2), на антигенпредставляющих клетках (адгезия клеток посредством связывания между этими молекулами), стабилизирует мРНК цитокинов Th1-типа и в результате способствует продукции Т-клетками большого количества цитокинов Th1-типа, таких как IL-2, IFN и TNF. Экспрессия CTLA-4 индуцируется первичным сигналом, переданным через TcR/CD3, и экспрессия также усиливается вторичным сигналом, переданным путем связывания между CD28 и CD80. Обнаруживается, что CTLA-4 получает эти сигналы к работе, чтобы ингибировать функцию Т-клеток, которая противоположна активации Т-клеток вторичным сигналом, передаваемым CD28.

CD28 и CTLA-4 человека являются гликопротеидами типа I, молекулярные массы которых составляют 44 кД и от 41 до 43 кД соответственно. Оба гликопротеида имеют домен, подобный иммуноглобулину, относящийся к иммуноглобулиновому супер-семейству, и обладают как функцией молекулы клеточной адгезии, так и функцией молекулы передачи сигнала.

CD28 человека формирует гомодимер с дисульфидной связью, в то время как CTLA-4 существует в виде мономера. И CD28, и CTLA-4 гены локализованы в "2q33" на хромосоме человека и в "1С" на хромосоме мыши и состоят из четырех (4) экзонов. CD28 и CTLA-4 человека состоят из 220 и 223 аминокислот соответственно, включая лидерные последовательности, и гомология аминокислот между ними составляет от 20 до 30%.

Лигандами CD28 и CTLA-4 у человека и мыши являются CD80 (В7-1) и CD86 (В7-2). CTLA-4 обладает примерно в 20 раз большим сродством к обоим лигандам, чем CD28. Было выяснено, что структура аминокислотной последовательности "MYPPPY (Met-Tyr-Pro-Pro-Pro-Tyr)", консервативная среди видов животных, важна для связывания CD28 и CTLA-4 с CD80 (В7-1). Также сообщалось, что в случае, когда стимулирован CD28, киназа PI3 (фосфоинозитид-3-киназа, PI3K) связывается с фосфорилированным остатком тирозина в неполной последовательности "YMNM (Tyr-Met-Asn-Met)" CD28, и что CD28 играет важную роль во внутриклеточной передаче сигнала посредством данной "YxxM" структуры. Кроме того, сообщалось, что CTLA-4 также имеет последовательность, представленную "YxxM", a именно "YVKM (Tyr-Val-Lys-Met)" в его цитоплазматическом районе, и что после стимуляции SYP связывается с данной последовательностью.

CD28, в частности, экспрессируется в тимоцитах и Т-клетках периферической крови, а CTLA-4, в частности, экспрессируется в активированных Т-клетках (Cell Engineering: SUPPLEMENT, "Handbook of Adhesion Molecule", Shujunsha, pp. 93-102 (1994); ibid. pp.120-136; Experimental Medicine: SUPPLEMENT, "BIO SCIENCE Term Library, Immunity", Yodosha, pp.94-98 (1995); Experimental Medicine: SUPPLEMENT, "BIO SCIENCE Term Library, Intracellular Signal Transduction", Yodosha, pp.58-59 (1997); Nihon Rinsho, Vol. 55, No. 6, pp. 215-220 (1997)).

Таким образом, в регуляции функции Т-клеток (активации и ингибировании функции Т-клеток) выявлено важное значение взаимодействий между многочисленными молекулами, такими как молекулы-костимуляторы (CD28, CD80 (В7-1), CD86 (В7-2) и т.д.), и CTLA-4, который взаимодействует с ними (другими словами, адгезия клеток посредством связывания между этими молекулами), и этo привлекло внимание к взаимосвязи между этими молекулами и болезнями и лечению болезней путем регулирования функций этих молекул.

Как описано выше, хотя живой организм активирует свою систему приобретенного иммунного ответа, направленного против антигенов, которые являются чужеродными телами для живого организма, он также обладает иммунологической толерантностью, так что не проявляет иммунного ответа против своего собственного компонента (аутоантигена). Если по некоторым причинам иммунологическая толерантность нарушается, возникает иммунный ответ на аутоантиген, аутоантигенреактивные Т-клетки индуцируются посредством того же механизма, который указан выше, что относится к аномальному состоянию иммунитета и вызывает различные аутоиммунные заболевания.

Другими словами, так как не стимулированные антигенпредставляющие клетки (АРС) в нормальных тканях не экспрессируют костимулирующие молекулы в том случае, когда иммунная система живого организма нормальна, Т-клетки находятся в состоянии неотвечаемости, сохраняя иммунологическую толерантность, даже если существуют аутоантигенреактивные Т-клетки, которые реагируют с аутоантигеном. Было высказано мнение, что при аномальном состоянии иммунитета активируется больше аутоантигенреактивных Т-клеток вследствие аномального избытка и непрерывной экспрессии костимулирующих молекул, вызывая, таким образом, аутоиммунные заболевания.

Недавно на основании такой точки зрения предложены многие попытки лечения различных аутоиммунных болезней путем модулирования передачи костимулирующих сигналов, например указанной выше передачи сигналов между CD28/CTLA-4 и CD80/CD86.

Результаты таких попыток еще не объяснили детально механизм активации Т-клеток посредством взаимодействия между костимулирующими молекулами и связанными молекулами (другими словами, адгезию клеток посредством связывания между этими молекулами). В этот механизм могут быть вовлечены другие неизвестные молекулы.

Недавно авторы данного изобретения успешно идентифицировали и выделили новую молекулу на поверхности клеточной мембраны, полученную из млекопитающих (человек, мышь и крыса), которая считается молекулой, которая передает вторичный сигнал (костимулирующий сигнал), необходимый для активации лимфоцитов, например Т-клеток, и контролирует функцию активированных лимфоцитов, например активированных Т-клеток, перерабатывая сигнал таким же образом, как в случае указанных выше "CD28" и "CTLA-4", и назвали молекулой "JTT-1-антигена" или "JTT-2-антигена" (не прошедшая экспертизу опубликованная заявка на патент Японии (JP-A) No. Hei 11-29599; WО98/38216; Int. Immunology, Vol. 12, No. 1, pp.51-55, 2000). Позже авторы данного изобретения изменили название этих молекул на AILIM (индуцируемая активацией иммуномодулирующая лимфоцитарная молекула).

На основании исследований авторов данного изобретения были получены следующие сведения об этой новой молекуле AILIM.

(1) AILIM обладает следующим сходством с "CD 28", молекулой клеточной поверхности лимфоцита, например, Т-клеток, которая передает костимулирующий сигнал, важный для активации Т-клеток, опосредованной межклеточной адгезией, и с "CTLA-4", молекулой клеточной поверхности лимфоцита, например, Т-клеток, которая контролирует функцию активированных лимфоцитов, таких как активированные Т-клетки, перерабатывая сигнал.

1. 20 или более аминокислотных остатков, включая остатки цистеина, высоко консервативны.

2. Последовательность повторяющихся пролинов "Pro-Pro-Pro (РРР)", необходимая в качестве лигандсвязывающего района, консервативна во внеклеточном районе.

3. Последовательность "Tyr-Xaa-Xaa-Met (YxxM) (Xaa и х представляет собой любую аминокислоту), последовательность, необходимая в качестве района передачи сигнала, консервативна в цитоплазматическом районе.

4. Ген, кодирующий "AILIM мыши (антиген JTT-1 мыши)", в хромосоме мыши локализован в положении "1С3", таком же, как положение "CD28" и "CTLA-4" мыши.

(2) Так же, как "CD28" и "CTLA-4", обладающие функцией опосредования межклеточной адгезии, "AILIM (JTT-1-антиген)" обладает способностью опосредовать клеточную адгезию между клетками тимуса и лимф областными клетками и клетками тимомы, стимулируемыми митогеном, например, КонА.

(3) AILIM строго экспрессируется по меньшей мере в клетках тимуса, лимфобластных клетках, стимулированных митогеном, таким как КонА (активированные Т-лимфобластные клетки и активированные В-лимфобластные клетки), лимфоцитах периферической крови и клетках тимомы.

(4) Антитело против AILIM (JTT-1-антигена) существенно повышает пролиферацию лимфоцитов периферической крови человека, и более высокая пролиферация индуцируется, когда оно одновременно присутствует вместе с моноклональным антителом против CD3, образующего комплекс TcR/CD3 на Т-клетках, который получает первый сигнал от антигенпредставляющих клеток, необходимый для активации Т-клеток.

(5) Состояние экспериментального аллергического энцефаломиелита (ЕАЕ) облегчается при введении антитела против AILIM (JTT-1-антигена).

(6) При введении антитела против AILIM (JTT-1-антигена) в крысиной модели нефрита, поражающего гломерулярную базальную мембрану (GMB), состояние облегчается.

После сообщения об идентификации и анализе характеристик AILIM авторами данного изобретения группа Kroczek et al. сообщила об идентификации молекулы, названной ICOS (индуцируемый костимулятор), или 8F4, молекулы, идентичной AILIM, полученной от человека, или молекулы, названной 8F4 (Nature, Vol. 397, pp.263-266, 1999; W099/15553).

Об AILIM (альтернативно названной JTT-1-антигеном, JTT-2-антигеном, ICOS или 8F4) сообщалось только вышеуказанное, а ее биологические функции и взаимосвязь с заболеваниями еще детально не выяснены.

С другой стороны, новые молекулы, названные B7h, B7RP-1, GL50 или LICOS, которые, как предполагают, являются лигандами, взаимодействующими с данной ко стимулирующей передающей молекулой AILIM, были совсем недавно идентифицированы (Nature, Vol. 402, No. 6763, pp.827-832, 1999; Nature Medicine, Vol. 5, No. 12, pp.1365-1369, 1999; J. Immunology, Vol. 164, pp.1653-1657, 2000; Curr. Biol., Vol. 10, No. 6, pp.333-336, 2000).

Идентификация этих двух новых видов молекул, а именно AILIM (ICOS) и B7RP-1 (B7h, GL50, LICOS), как пути сигнальной трансдукции костимулирующего сигнала, необходимого для указанной выше активации лимфоцитов, таких как Т-клетки, и контроля функции активированных Т-клеток, показала, что существует новый третий путь за счет взаимодействия между AILIM (ICOS) и B7RP-1 (B7h, GL50, LICOS), помимо известных первого и второго сигнальных путей, которые представляют собой уже известный путь трансдукции между CD28 и CD80 (В7-1)/CD86 (В7-2), и путь между CTLA-4 и CD80 (В7-1)/ CD86 (В7-2).

Проводятся исследования биологических функций данных новых молекул, функции контроля лимфоцитов, таких как I-клетки, посредством данного третьего пути трансдукции костимулирующего сигнала молекулами и взаимосвязи между новым путем сигнальной трансдукции и заболеваниями.

Раскрытие сути изобретения Целью данного изобретения, в частности, является выяснение биологических функций новой молекулы AILIM, которая, подобно "CD28" и "CTLA-4", считается молекулой, которая передает вторичный сигнал (ко стимулирующий сигнал), необходимый для активации лимфоцитов, таких как Т-клетки, и которая контролирует функции активированных лимфоцитов, таких как активированные Т-клетки, при переработке сигнала; выявление взаимосвязей между экспрессией AILIM и болезнями и предоставление способа и фармацевтического средства, которые ингибируют развитие различных заболеваний, в зависимости от характера экспрессии AILIM, или которые лечат заболевания посредством контролирования биологических функций AILIM, используя медицинские и фармацевтические способы (например, лекарственное средство, такое как низкомолекулярное соединение и антитело).

Авторы данного изобретения исследовали биологические функции AILIM млекопитающих, характер экспрессии AILIM в различных клетках, взаимосвязи между экспрессией AILIM и заболеваниями, обнаружив следующие сведения в дополнение к указанным выше сведениям, полученным до настоящего времени, для завершения данного изобретения.

(I) В Т-клетках тимуса, одной из лимфоидных тканей нормальной мыши, наблюдается строгая экспрессия AILIM таким же образом, как в клетках, которые строго экспрессируют CD3, что подтверждает корреляцию между обеими экспрессиями. Напротив, экспрессия CD28, костимулирующей молекулы, снижается по мере того, как экспрессия CD3 увеличивается. В Т-клетках, полученных из нормального тимуса мышей, экспрессии AILIM и CD28 проявляют противоположный характер движения. В CD4-негативных CD8-негативных Т-клетках не наблюдается экспрессии ни AILIM, ни CD28. В Т-клетках, полученных из тимуса нормальных мышей, наиболее высокая экспрессия CD28 имеет место в CD4-позитивных CD8-позитивных Т-клетках, и экспрессия в CD4-негативных CD8-позитивных Т-клетках, или CD4-позитивных CD8-негативных клетках, которые претерпели последующую клеточную дифференцировку, была пониженной. Напротив, в клетках тимуса нормальных мышей экспрессия AILIM в CD-4 позитивных CD8-позитивных клетках только незначительно выявлялась, но высокая экспрессия была обнаружена в CD4-негативных CD8-позитивных Т-клетках, или CD4-позитивных CD8-негативных Т-клетках, которые претерпели последующую клеточную дифференцировку. Экспрессия AILIM в Т-клетках тимуса нормальных мышей отличается от экспрессии CD28 не только в связи с экспрессией CD3, но также с экспрессией CD4 и CD8.

(II) Экспрессия AILIM в Т-клетках селезенки и лимфатических узлов, которые являются одними из нормальных лимфоидных тканей мышей, была небольшой, по сравнению с экспрессией в Т-клетках, полученных из тимуса мышей, и экспрессия AILIM обнаруживается в очень небольшом количестве СD4-позитивных Т-клеток (примерно от 1 до 3% CD4-позитивных Т-клеток).

(III) Четко видимая экспрессия AILIM наблюдается в Т-клетках (мононуклеарных клетках), полученных из тканей печени в модели гепатита мышей, индуцированного введением Р. acnes (Propionibacterium acnes) и ЛПС (липополисахарида). Экспрессия намного выше по сравнению с СD4-позитивными клетками, полученными из селезенки нормальных мышей, или Т-клетками, полученными из лимфатического узла.

(IV) В клетках, полученных из периферической крови человека с нормальным здоровьем, большинство AILIM-позитивных клеток является СD4-позитивными CD8-негативными клетками, и большинство AILIM-позитивных клеток является Т-клетками. В В-клетках, полученных из периферической крови человека с нормальным здоровьем, экспрессия AILIM также наблюдается незначительно.

(V) В Т-клетках, инфильтрирующих ткань сустава, в синовиальной жидкости пациентов с ревматоидным артритом (РА) (СD4-позитивные Т-клетки и СD4-негативные Т-клетки) обнаруживается значительно более высокая экспрессия AILIM по сравнению с Т-клетками в периферической крови этого же пациента и Т-клетками в периферической крови нормального здорового человека.

(VI) В CD4-позитивных Т-клетках синовиальной жидкости пациентов с остеоартритом (ОА) значительно увеличивается доля AILIM-позитивных клеток. Доля AILIM-позитивных клеток также значительно возрастает в CD4-позитивных Т-клетках у пациентов с прогрессирующим системным склерозом (ПСС).

(VII) Повышенная экспрессия AILIM наблюдается в Т-клетках, полученных из лимфоидных тканей мыши через 3-6 часов после стимуляции с использованием ионофора с анти-СD3-антителом, конканавалина А (КонА) или ФМА (форболмиристатацетата), и максимальная экспрессия AILIM устанавливается примерно через 12 часов после стимуляции. Высокая экспрессия AILIM удерживается через 24 часа или более после стимуляции, и экспрессия сохраняется на таком же уровне даже примерно через 48 часов после стимуляции.

(VIII) При активации Т-клеток периферической крови человека (СВ4-позитивные клетки и CD8-позитивные Т-клетки) ФМА и ионофором, AILIM экспрессируется на высоком уровне примерно через 8 часов после стимуляции. В клетках периферической крови человека высокий уровень экспрессии AILIM также индуцируется стимуляцией либо анти-СО3-антителом и анти-AILIM-антителом, либо анти-СD3-антителом и анти-СD28-антителом.

(IX) Конститутивная экспрессия AILIM наблюдается в линиях Т-клеток, которые обладают свойством продуцировать цитокин типа Th2 (например, DC10, MS202, CD28KO, EL-4). Экспрессия AILIM в этих линиях клеток высока, на таком же уровне или даже выше, чем экспрессия CD28.

(X) В том случае, когда Т-клетки, полученные из селезенки или тимуса нормальной мыши или крысы, или Т-клетки, полученные из периферической крови нормального здорового человека, культивируют на чашках, покрытых как анти-AILIM-антителом, так и анти-СD3-антителом, составляющими предмет данного изобретения, индуцируется продукция Т-клетками цитокина (IFN, IL-4, TNF, IL-2, IL-10) и пролиферация Т-клеток.

(XI) В том случае, когда Т-клетки периферической крови, стимулированные КонА или ФМА, культивируют на чашках, покрытых как анти-АILIМ-антителом, так и анти-СD3-антителом, составляющими предмет данного изобретения, индуцируются продукция цитокина Т-клетками и пролиферация клеток. Данный результат имеет место на таком же уровне, как и в случае культивирования Т-клеток, полученных из периферической крови, стимулированных КонА или ФМА, на чашках, покрытых обоими антителами - анти-СВ-28- и анти-СD3-антителом.

(XII) В том случае, когда анти-АILIМ-антитело, составляющее предмет данного изобретения, добавляют к Т-клеткам, в которых был запущен Т-клеточный ответ культивированием клеток тимуса и клеток селезенки, выделенных из нормальной селезенки и нормального тимуса (адгезивные клетки удаляют в каждом случае) на чашках, покрытых анти-СD3-антителом, ингибируется продукция цитокина[например, интерферона (INF-), интерлейкина 4 (IL-4)] Т-клетками, и ингибируется пролиферация Т-клеток. Кроме того, ингибирование Т-клеточного ответа анти-AILIM-антителом (например, указанной выше продукции цитокина, пролиферации клеток) зависит от концентрации антитела. Напротив, в случае, когда вместо анти-AILIМ-антитела добавляют анти-СD28-антитело, ответ Т-клеток усиливается, в отличие от результата использования анти-АILIМ-антитела.

(XIII) Когда анти-АILIМ-антитело, составляющее предмет данного изобретения, вводят животному в модели гепатита, индуцированного введением Р. acnes (Propionibacterium acnes) и ЛПС (липополисахарида), увеличение IFN- в крови в значительной мере ингибируется в зависимости от концентрации антитела, и увеличение GOP/GPT существенным образом ингибируется.

(XIV) Когда анти-АILIМ-антитело, составляющее предмет данного изобретения, вводят животному в модели артрита, индуцированного введением мертвых туберкулезных палочек, опухание лапы в значительной мере ингибируется в зависимости от концентрации антитела, и увеличение различных параметров при артрите существенным образом ингибируется.

(XV) Когда анти-АILIМ-антитело, составляющее предмет данного изобретения, вводят животному в модели болезни трансплантат против хозяина (ТПХБ), продукция IgG и IgE, которые являются продуктами реакции трансплантат против хозяина (ТПХР), в значительной мере ингибируется, и существенным образом ингибируется повышенная продукция анти-днДНК (двунитевая ДНК)антитела, показателя валентности аутоантитела.

(XVI) Когда анти-АILIМ-антитело, составляющее предмет данного изобретения, вводят модельному животному, у которого продукция антитела против избыточных чужеродных антигенов индуцирована сенсибилизацией эритроцитами барана (ЭБ) в качестве чужеродного антигена (сразу же или через несколько дней после сенсибилизации), увеличение продукции антитела против ЭБ, чужеродного антигена, существенным образом ингибируется. Ингибирующее действие выше, чем действие в случае введения CTLA4-Ig.

(XVII) Когда анти-АILIМ-антитело, составляющее предмет данного изобретения, вводят модельному животному, у которого продукция антитела против избыточных чужеродных антигенов индуцирована сенсибилизацией NP-KLH в качестве чужеродного антигена (сразу же или через несколько дней после сенсибилизации), увеличение продукции антитела против NP-KLH, чужеродного антигена, существенным образом ингибируется.

(XVIII) Анти-АILIМ-антитело значительно ингибирует клеточную пролиферацию Т-клеток в реакции аллогенной смешанной культуры лимфоцитов (РСКЛ) с моноцитами периферической крови (РВМС) и Т-клетками, полученными от различных нормальных доноров.

Фармацевтическая композиция данного изобретения пригодна в качестве фармацевтического средства модулирования различных реакций in vivo, в которые вовлечена трансдукция костимулирующего сигнала к AILIM-экспрессирующим клеткам, опосредованная AILIM (например, клеточная пролиферация AILIM-экспрессирующих клеток, продукция цитокина(нов) AILIM-экспрессирующими клетками, иммунный цитолиз или апоптоз AILIM-экспрессирующих клеток и активность в индукции антитело-зависимой клеточной цитотоксичности, направленной против AILIM-экспрессирующих клеток) и/или в качестве фармацевтического средства для предотвращения внезапного приступа и/или прогрессирования различных болезней, в которые вовлечена сигнальная трансдукция, опосредованная AILIM, и лечения или профилактики заболеваний.

В частности, фармацевтическая композиция данного изобретения может модулировать пролиферацию AILIM-экспрессирующих клеток (ингибирование или стимулирование) или может модулировать (ингибировать или стимулировать) продукцию цитокинов AILIM-экспрессирующими клетками (например, интерферона или интерлейкина 4), и может предотвращать различные патологические состояния, запускаемые различными физиологическими явлениями, в которые вовлечена сигнальная трансдукция, опосредованная AILIM, и может лечить или предотвращать различные заболевания.

При использовании фармацевтической композиции данного изобретения можно ингибировать, предотвращать и/или лечить, например, артроз (например, ревматоидный артрит (РА), остеоартрит (ОА), воспаление (например, гепатит), реакцию трансплантат против хозяина (ТПХ), болезнь трансплантат против хозяина (ТПХБ), ответ иммунного отторжения, сопровождающий трансплантацию ткани или органа, иммунный ответ, запускаемый чужеродным антигеном или аутоантигеном (например, продукцию антитела против антигена, пролиферацию клеток, продукцию цитокина(ов)).

Кроме того, фармацевтическая композиция данного изобретения может применяться для лечения или профилактики произвольного воспаления, при котором применяются различные стероиды в качестве противовоспалительного средства.

Кроме того, фармацевтическая композиция данного изобретения может применяться для лечения или предотвращения воспалительных заболеваний, например воспаления, сопровождающего различные артриты (например, ревматоидный артрит, остеоартрит), пневмонии, гепатита (включая вирусный гепатит), воспаления, сопровождающего инфекционные болезни, воспалительных заболеваний кишечника, энтерита тонкого кишечника, нефрита (воспаление, сопровождающее гломерулярный нефрит, фиброз почек), гастрита, ангиита, панкреатита, перитонита, бронхита, миокардита, энцефалита, воспаления при постишемическом реперфузионном повреждении (ишемическое реперфузионное повреждение миокарда), воспаления, приписываемого иммунному отторжению после трансплантации ткани или органа, ожога, различных воспалений кожи (псориаз, аллергический дерматит контактного типа, красный плоский лишай, который является хроническим воспалительным заболеванием кожи), воспаления при множественной органной недостаточности, воспаления после операции РТСА или PTCR и воспаления, сопровождающего артериосклероз и аутоиммунный тиреоидит.

Данное изобретение, в частности, является изобретением, описываемым следующими пунктами от (1) до (32).

(1) Фармацевтическая композиция для предотвращения, лечения или профилактики артроза, содержащая вещество, обладающее активностью в модулировании сигнальной трансдукции, опосредованной AILIM, и фармацевтически приемлемый носитель.

(2) Фармацевтическая композиция по п. (1), где вещество обладает активностью в ингибировании пролиферации AILIM-экспрессирующих клеток или в ингибировании продукции цитокина AILIM-экспрессирующими клетками.

(3) Фармацевтическая композиция по п. (1) или (2), где цитокином является интерферон , который является цитокином, продуцируемым Т-клетками Th1-типа, или интерлейкин 4, который является цитокином, продуцируемым Т-клетками Тh2-типа.

(4) Фармацевтическая композиция по любому из пп. с (1) по (3), где артрозом является ревматоидный артрит.

(5) Фармацевтическая композиция по любому из пп. с (1) по (3), где артрозом является остеоартрит.

(6) Фармацевтическая композиция по любому из пп. с (1) по (5), в которой веществом является белковое вещество.

(7) Фармацевтическая композиция по п. (6), в которой белковое вещество выбирают из группы, состоящей из a) антитела, которое связывается с AILIM или его частью; b) полипептида, содержащего полностью или частично внеклеточный район AILIM; c) слитого полипептида, содержащего полностью или частично внеклеточный район AILIM и полностью или частично константный район тяжелой цепи иммуноглобулина, и d) полипептида, который связывается с AILIM.

(8) Фармацевтическая композиция по любому из пп. с (1) по (5), в которой веществом является небелковое вещество.

(9) Фармацевтическая композиция по п. (8), в которой небелковым веществом является ДНК, РНК или химически синтезируемое соединение.

(10) Фармацевтическая композиция для предотвращения, лечения или профилактики воспаления, содержащая вещество, обладающее активностью в модулировании сигнальной трансдукции, опосредованной AILIM, и фармацевтически приемлемый носитель.

(11) Фармацевтическая композиция по п. (10), в которой вещество обладает активностью в ингибировании пролиферации AILIM-экспрессирующих клеток или в ингибировании продукции цитокина AILIM-экспрессирующими клетками.

(12) Фармацевтическая композиция по п. (11), где цитокином является интерферон , который является цитокином, продуцируемым Т-клетками Th1-типа, или интерлейкин 4, который является цитокином, продуцируемым Т-клетками Тh2-типа.

(13) Фармацевтическая композиция по любому из пп. с (10) по (12), где воспалением является гепатит.

(14) Фармацевтическая композиция по любому из пп. с (10) по (13), где веществом является белковое вещество.

(15) Фармацевтическая композиция по п. (14), в которой белковое вещество выбирают из группы, состоящей из a) антитела, которое связывается с AILIM или его частью; b) полипептида, содержащего полностью или частично внеклеточный район AILIM; c) слитого полипептида, содержащего полностью или частично внеклеточный район AILIM и полностью или частично константный район тяжелой цепи иммуноглобулина, и d) полипептида, который связывается с AILIM.

(16) Фармацевтическая композиция по любому из пп. с (10) по (13), в которой веществом является небелковой вещество.

(17) Фармацевтическая композиция по п. (16), в которой небелковым веществом является ДНК, РНК или химически синтезируемое соединение.

(18) Фармацевтическая композиция для предотвращения, лечения или профилактики реакции трансплантат против хозяина и иммунного отторжения, сопровождающего реакцию трансплантат против хозяина или трансплантацию ткани или органа, содержащая вещество, обладающее активностью в модулировании сигнальной трансдукции, опосредованной AILIM, и фармацевтически приемлемый носитель.

(19) Фармацевтическая композиция по п. (18), в которой вещество обладает активностью в ингибировании пролиферации AILIM-экспрессирующих клеток или в ингибировании продукции цитокина AILIM-экспрессирующими клетками.

(20) Фармацевтическая композиция по п. (19), где цитокином является интерферон , который является цитокином, продуцируемым Т-клетками Th1-типа, или интерлейкин 4, который является цитокином, продуцируемым Т-клетками Тh2-типа.

(21) Фармацевтическая композиция по любому из пп. с (18) по (20), в которой веществом является белковое вещество.

(22) Фармацевтическая композиция по п. (21), в которой белковое вещество выбирают из группы, состоящей из а) антитела, которое связывается с AILIM или его частью; b) полипептида, содержащего полностью или частично внеклеточный район AILIM; c) слитого полипептида, содержащего полностью или частично внеклеточный район AILIM и полностью или частично константный район тяжелой цепи иммуноглобулина, и d) полипептида, который связывается с AILIM.

(23) Фармацевтическая композиция по любому из пп. с (18) по (20), в которой веществом является небелковое вещество.

(24) Фармацевтическая композиция по п. (23), в которой небелковым веществом является ДНК, РНК или химически синтезируемое соединение.

(25) Фармацевтическая композиция для предотвращения иммунного ответа, запускаемого чужеродным антигеном или аутоантигеном, содержащая вещество, обладающее активностью в модулировании сигнальной трансдукции, опосредованной AILIM, и фармацевтически приемлемый носитель.

(26) Фармацевтическая композиция по п. (25), где иммунным ответом является продукция антитела против антигена, пролиферация клеток или продукция цитокина.

(27) Фармацевтическая композиция по п. (25) или (26), в которой вещество обладает активностью в ингибировании пролиферации AILIM-экспрессирующих клеток или в ингибировании продукции цитокина AILIM-экспрессирующими клетками.

(28) Фармацевтическая композиция по п. (27), где цитокином является интерферон , который является цитокином, продуцируемым Т-клетками Th1-типа, или интерлейкин 4, который является цитокином, продуцируемым Т-клетками Тh2-типа.

(29) Фармацевтическая композиция по любому из пп. с (25) по (28), в которой веществом является белковое вещество.

(30) Фармацевтическая композиция по п. (29), в которой белковое вещество выбирают из группы, состоящей из a) антитела, которое связывается с AILIM или его частью; b) полипептида, содержащего полнос