Производные бензазепинон-n-уксусной кислоты, замещенные фосфоновой кислотой, способ их получения и лекарственные средства, содержащие эти соединения

Производные бензазепинон-n-уксусной кислоты, замещенные фосфоновой кислотой, способ их получения и лекарственные средства, содержащие эти соединения

Реферат

 

Изобретение относится к новым производным бензазепинон-N-уксусной кислоты, замещенным фосфоновой кислотой, которые являются фармацевтически активными соединениями. Описываются производные бензазепинон-N-уксусной кислоты, замещенные фосфоновой кислотой общей формулы I где R¹, R², R³ означают водород или группу, образующую биoлабильный сложный эфир фосфоновой кислоты, и физиологически приемлемые соли кислот формулы I. Также описываются лекарственное средство, обладающее тормозящим нейтральную эндопептидазу действием, в состав которого входит соединение формулы (I) и способ получения соединений формулы (I). Технический результат - создание новых фармацевтически активных веществ. 3 c. и 1 з.п.ф-лы, 3 табл.

Настоящее изобретение касается новых производных бензазепинон-N-уксусной кислоты, которые замещены в положении 3 циколопентилкарбониламинным остатком, несущим в положении 1 остаток метилфосфоновой кислоты, их солей и биолабильных сложных эфиров, а также содержащих указанные соединения фармацевтических препаратов и способов получения этих соединений.

Из европейской патентной заявки, номер публикации 0733642, известны производные бензазепин-, бензоксазепин- и бензодиазепин-N-уксусной кислоты, оказывающие тормозящее действие на нейтральную эндопептидазу (NEP).

Задачей изобретения является создание новых NEP-ингибирующего действия, фармацевтических активных веществ с благоприятным профилем действия для лечения сердечной недостаточности и высокого кровяного давления.

Было установлено, что новые производные бензазепинон-N-уксусной кислоты, замещенные в положении 3 каркаса бензазепинона циклопентилкарбониламинным остатком, несущим в положении 1 остаток метилфосфоновой кислоты, согласно изобретению, обладают ценными эффективными для сердца фармакологическими свойствами и отличаются благоприятным профилем действия для лечения сердечно-сосудистых заболеваний, в частности сердечной недостаточности, отличающейся комбинацией ясно выраженного тормозящего действия на нейтральную эндо-пептидазу с тормозящим действием на фермент преобразования эндотелина (ЕСЕ) и хорошей совместимостью.

Предметом изобретения являются новые соединения общей формулы I где R¹ означает водород или группу, образующую биолабильный сложный эфир фосфоновой кислоты, R² означает водород или группу, образующую биолабильный сложный эфир фосфоновой кислоты, R³ означает водород или группу, образующую биолабильный сложный эфир карбоновой кислоты, а также физиологически переносимые соли кислот формулы I, способы получения этих соединений и содержащие указанные соединения лекарственные средства.

Соединения формулы I представляют собой, в случае необходимости, кислотные производные, содержащие группы карбоновой и фосфоновой кислот, этерифицированные образующими биолабильные сложные эфиры группами. Биолабильные сложные эфиры формулы I являются пролекарствами со свободными кислотами. В зависимости от формы применения предпочтительными являются биолабильные сложные эфиры или кислоты, причем последние пригодны, в частности, для внутривенного введения.

В качестве групп R¹ и R², образующих биолабильные сложные эфиры фосфоновой кислоты, пригодны группы, способные отщепляться в физиологических условиях in vivo с выделением соответствующих функций фосфоновой кислоты. Так, например, для этого пригодны низшие алкильные группы, в случае необходимости, С₂-С₆-алканоилоксиметильные группы или фенильные, или фенил-низший-алкилгруппы, фенильное кольцо которых, при необходимости, замещено одно- или многократно низшим алкилом, низшим алкоксильным радикалом или связанной через два соседних атома углерода низшей алкиленовой цепочкой. Если образующая биолабильный сложный эфир группа R¹ и/или R² означает или содержит низший алкил, то последний может быть разветвленным или неразветвленным и содержать от 1 до 4 атомов углерода. В том случае, когда R¹ и/или R² представляет собой, в случае необходимости, замещенную алканоилоксиметиловую группу, то последняя может содержать в себе предпочтительно разветвленную алканоилоксигруппу с 2-6, предпочтительно 3-5, атомами углерода и может означать, например, пивалоилоксиметиловый остаток (трет-бутилкарбонилоксиметиловый остаток). Если R¹ и/или R² представляют собой, при необходимости, замещенную фенил-низший-алкилгруппу, то эта группа может содержать алкиленовую цепь с 1-3, предпочтительно 1, атомами углерода. Если фенильное кольцо замещено цепью низших алкилов, то последняя может содержать 3-4, предпочтительно 3, атома углерода, замещенное фенильное кольцо является, в частности, инданилом.

В качестве групп R³, образующих биолабильные сложные эфиры карбоновой кислоты, пригодны группы, способные отщепляться в физиологических условиях in vivo с выделением карбоновой кислоты. Так, например, для этого пригодны низшие алкильные группы, при необходимости, фенильные или фенил-низший-алкилгруппы, в случае необходимости, замещенные в фенильном кольце одно- или многократно низшим алкилом или низшим алкоксильным радикалом или связанной через два соседних углеродных атома цепью низших алкиленов, замещенные фенил- или фенил-низший-алкилгруппы, замещенные в диоксолановом кольце низшим алкилом диоксоланилметиловые группы или, при необходимости, замещенные в оксиметиловой группе низшим алкилом C₂-C₆-алканоилоксиметиловые группы. Если образующая биолабильный сложный эфир группа R³ означает или содержит низший алкил, то последний может быть разветвленным или неразветвленным и содержать от 1 до 4 атомов углерода. Если образующая биолабильный сложный эфир группа представляют собой, при необходимости, замещенную фенил-низший-алкилгруппу, то эта группа может содержать алкиленовую цепь с 1-3, предпочтительно 1, атомами углерода и означает преимущественно бензил.

Если фенильное кольцо замещено цепью низших алкиленов, то последняя может содержать 3-4, предпочтительно 3, атома углерода. Если R³ представляет собой замещенную, при необходимости, алканоилоксиметильную группу, то последняя может содержать преимущественно разветвленную алканоилоксигруппу с 2-6, предпочтительно 3-5, атомами углерода и может являться, например, пивалоилоксиметиловым остатком.

Согласно изобретению новые соединения формулы I и их соли получают известным способом, при котором а) для получения соединений общей формулы IV где R¹⁰¹ и R²⁰¹, независимо друг от друга, означают водород или защитную группу фосфоновой кислоты, R³⁰² означает защитную группу карбоновой кислоты, соединения общей формулы II где R¹⁰¹ и R²⁰¹ имеют приведенные выше значения, вводят во взаимодействие с соединениями общей формулы III где R³⁰² имеет указанное выше значение, и в случае, если R¹⁰¹ и/или R²⁰¹ означают водород, переводят свободную функцию (свободные функции) фосфоновой кислоты, при необходимости, путем этерификации с соединением общей формулы Va и/или Vb R¹¹⁰-Y (Va), R²¹⁰-Y (Vb), где R¹¹⁰ и R²¹⁰ обозначают соответственно группу, образующую биолабильный сложный эфир фосфоновой кислоты, Y означает гидроксильный радикал или отщепляемую летучую группу, в биолабильные эфирные группы фосфоновой кислоты, б) если в соединениях формулы IV защитные группы R¹⁰¹, R²⁰¹ и/или R³⁰² не являются желаемыми группами, образующими биолабильный сложный эфир, то их отщепляют одновременно или в отдельности друг за другом в любой последовательности и, при желании, переводят соответствующие высвободившиеся кислотные функции в биолабильные эфирные группы, этерифицируя при этом свободные функции фосфоновой кислоты соединением формулы Va или Vb и/или свободные функции карбоновой кислоты с соединением общей формулы Vc: R³¹⁰-Y (Vc), где R³¹⁰ означает группу, образующую биолабильный сложный эфир карбоновой кислоты, Y имеет указанное выше значение, и, при необходимости, кислоты формулы I переводят в их физиологически переносимые соли или соли кислот формулы I - в свободные соединения.

В качестве физиологически переносимых солей кислот формулы I могут применяться соответственно их соли щелочных металлов, щелочноземельных металлов и аммония, например соли натрия, калия или кальция, или соли с физиологически совместимыми фармакологически нейтральными органическими аминами, такими, как, например, диэтиламин, трет-бутиламин или фенил-низший-алкиламины, такие, как -метилбензиламин.

В качестве защитных групп R¹⁰¹ и R²⁰¹ фосфоновой кислоты можно выбирать для защиты функций фосфоновой кислоты обычные защитные группы, которые затем снова отщепляются известными само по себе способами. В качестве защитных групп карбоновой кислоты R³⁰² могут выбираться для защиты функций карбоновой кислоты обычные защитные группы, которые затем могут отщепляться известными само по себе способами. Приемлемые защитные группы для карбоновых кислот известны, например, из McOmie, "Protective Groups in Organic Chemistry" (Защитные группы в органической химии), Plenum Press und Green, Wuts, "Protective Groups in Organic Syntesis" (Защитные группы в органическом синтезе), Wiley Interscience Publication. Приемлемые защитные группы для фосфоновых кислот известны, например, из Houben, Weyl "Methoden der Organischen Chemie" (Методы органической химии), изд-во G. Thieme Verlag, г. Штуттгарт, Нью-Йорк, 1982 г. , стр. 313-341, а также из М. Kluba, A. Zwierak "Synthesis", 1978 г., стр. 134-137, и из McOmie, "Protective Groups in Organic Chemistry", Plenum Press. В качестве кислотных защитных групп могут также применяться группы, образующие биолабильный сложный эфир. Соединения формулы IV, полученные в результате взаимодействия между соединениями формул II и III, представляют собой уже сложные эфиры формулы I согласно изобретению.

Согласно изобретению в качестве защитных групп R¹⁰¹ и R²⁰¹ фосфоновой кислоты пригодными являются такие группы, которые соответствующими методами, независимо друг от друга и независимо от вероятного присутствия защитной группы R³⁰² карбоновой кислоты в молекуле, могут быть отщеплены или селективно введены. Защитные группы фосфоновой кислоты могут легко отщепляться посредством триметилсилилбромида селективно в присутствии защитных групп карбоновой кислоты. В качестве примеров отщепляемых в различных условиях защитных групп фосфоновой кислоты, которые могут выступать и в качестве групп, образующих биолабильные сложные эфиры фосфоновой кислоты, следует назвать следующие: неразветвленные низшие алкилгруппы, такие, как этил, которые могут легко отщепляться, например, кислотами, такими, как трифторуксусная кислота, причем в случае, если обе функции фосфоновой кислоты этерифицированы группами низших неразветвленных алкилов, то в условиях применения основания может отщепляться только одна из этих алкильных групп; разветвленные низшие алкилы, такие как трет-бутил, которые могут быть легко отщеплены в условиях применения кислоты, например трифторуксусной кислоты; замещенные, при необходимости, в фенильном кольце фенилметильные группы, такие, как бензил, способные легко отщепляться при деструктивной гидрогенизации; алканоилоксиметиловые группы, такие, как пивалоилоксиметил, которые легко могут отщепляться, например, кислотами, такими, как трифторуксусная кислота; фенилметиловые группы, такие, как п-метоксибензил, которые замещены в фенильном кольце одно- или многократно низшим алкоксильным радикалом и которые в условиях окисления, например, под действием 2,3-дихлор-5,6-дициан-1,4-бензохинона (DDQ) или нитрита аммония-церия (CAN) могут отщепляться относительно легко.

В качестве защитных групп R³⁰² карбоновой кислоты пригодными являются такие группы, которые независимо от вероятного присутствия защитных групп фосфоновой кислоты в молекуле могут быть отщеплены или селективно введены. В качестве примеров отщепляемых в различных условиях защитных групп карбоновой кислоты, которые могут выступать и в качестве групп, образующих биолабильные сложные эфиры карбоновой кислоты, следует назвать следующие: неразветвленные низшие алкилы, такие, как этил, которые могут относительно легко отщепляться в условиях применения основания; разветвленные низшие алкилы, такие, как трет-бутил, которые могут быть легко отщеплены кислотами, такими, как трифторуксусная кислота; замещенные, при необходимости, в фенильном кольце фенилметильные группы, такие, как бензил, способные легко отщепляться при деструктивной гидрогенизации или в условиях применения основания; фенилметильные группы, такие, как п-метоксибензил, которые замещены в фенильном кольце одно- или многократно низшим алкоксильным радикалом и которые в условиях окисления, например, под воздействием DDQ или CAN могут отщепляться относительно легко.

Соединения формулы I содержат хиральный атом углерода, а именно углеродный атом в положении 3 структуры бензазепина, несущий амидную боковую цепь. Следовательно, соединения могут присутствовать в двух оптически активных стереоизомерных формах или в виде рацемической смеси. Настоящее изобретение включает в себя как рацемические смеси, так и чистоизомерные соединения формулы I. Если в соединениях формулы I R¹ и R² не означают водород и соответственно имеют разные значения, то и атом фосфора в группе фосфоновой кислоты может быть хиральным. Образуемые хиральными атомами фосфора изомерные смеси и чистоизомерные соединения формулы I также являются предметом данного изобретения.

Взаимодействие кислот формулы II с аминами формулы III с образованием амидов формулы IV может проводиться методами, обычными при образовании амидных группировок путем аминоацилирования. В качестве средств ацилирования могут применяться карбоновые кислоты формулы II или их реакционноспособные производные. Реакционноспособными производными могут служить, в частности, смешанные ангидриды кислоты и галогениды кислоты. Так, например, могут применяться хлорангидриды или бромангидриды кислот формулы II или смешанные сложные эфиры кислот формулы II вместе с органическими сульфокислотами, например низкоалкановыми сульфокислотами, замещенными, при необходимости, галогенами, такими, как метансульфокислота или трифторметансульфокислота, или вместе с ароматическими сульфокислотами, как, например, бензолсульфокислотами, или вместе с замещенными низшим алкилом или галогенами бензолсульфокислотами, например толуолсульфокислотами или бромбензолсульфокислотами. Ацилирование может протекать в инертном в реакционных условиях органическом растворителе при температуре от -20^oС до комнатной. В качестве растворителей пригодны галогенированные углеводороды, такие, как дихлорметан, или ароматические углеводороды, такие, как бензол или толуол, или циклические эфиры, такие, как тетрагидрофуран (THF) или диоксан, или смеси этих растворителей.

Целесообразно проводить ацилирование, в частности, если в качестве ацилирующего средства применяется смешанный ангидрид кислот формулы II вместе с одной из сульфокислот, в присутствии реактива, способного связывать кислоту. В качестве связывающих кислоту веществ пригодны, например, растворимые в реакционной смеси органические основания, такие, как третичные азотные основания, например трет-низкоалкильные амины и пиридины, такие, как, например, триэтиламин, трипропиламин, N-метилморфолин, пиридин, 4-диметиламинопиридин, 4-диэтиламинопиридин или 4-пирролидинопиридин. Применяемые в избытке органические основания одновременно могут служить и растворителями.

В случае, когда в качестве средства ацилирования используются сами кислоты формулы II, то взаимодействие аминных соединений формулы III с карбоновыми кислотами формулы II целесообразно проводить в присутствии связывающего реагента, известного из химии пептидов в качестве пригодного для образования амидов средства. В качестве примера связующих реагентов, способствующих образованию амидов со свободными кислотами в результате того, что они реагируют с кислотой в естественных условиях с образованием реакционноспособного производного кислоты, следует, в частности, назвать алкилкарбодиимиды, например циклоалкилкарбодиимиды, такие, как дициклогексилкарбодиимиды или N-(3-диметиламинопропил)-N'-этилкарбодиимид, карбонилдиимидазол и соли N-низкоалкильного-2-галогенпиридиния, в частности галогениды или толуолсульфонаты. Взаимодействие в присутствии связующего реагента целесообразно проводить при температуре от -30 до +50^oС в растворителях, таких, как галогенированные углеводороды и/или ароматические растворители и, при необходимости, в присутствии описанного выше, связывающего кислоту амина.

Из соединений формулы IV, полученных взаимодействием между соединениями формулы II и соединениями формулы III, можно отщепить известным способом защитные группы R¹⁰¹, R²⁰¹ и R³⁰² при условии, что они не являются желаемыми группами, образующими биолабильный сложный эфир.

В том случае, когда требуется получить соединения формулы I, в которых R¹, R² и R³ означают идентичные группы, образующие биолабильный сложный эфир, целесообразно выбирать идентичные защитные группы в исходных соединениях формулы II и в исходных соединениях формулы III. При этом целесообарэно выбирать защитные группы, которые являются одновременно группами, образующими биолабильный сложный эфир. Если требуется получить свободные кислоты формулы I, в которых R¹, R² и R³ означают соответственно водород, то в качестве защитных групп R¹⁰¹, R²⁰¹ и R³⁰² могут выбираться, при прочих равных условиях, преимущественно в условиях деструктивной гидрогенизации, отщепляемые группы. Например, для R¹⁰¹, R²⁰¹ и R³⁰² могут выбираться бензиловые группы, которые в условиях каталитической гидрогенизации могут одновременно расщепляться с образованием свободных кислотных групп. В качестве катализаторов при каталитическом гидрировании могут использоваться, например, драгоценные металлы, такие, как палладий на носителе из активированного угля. Реакция может проводиться в среде инертного в условиях реакции растворителя, например низшего спирта, такого, как этанол, или низшего алкильного сложного эфира, такого, как сложный этиловый эфир уксусной кислоты, или в смесях этих растворителей. Целесообразно проводить каталитическое гидрирование при давлении водорода от 2 до 6 бар и при комнатной температуре.

В случае, когда требуется этерификация свободных групп фосфоновой кислоты и/или свободных групп карбоновой кислоты в соединениях формулы I, то для этого свободные группы фосфоновой кислоты соединений формулы I вводят во взаимодействие с соединениями формулы Va или Vb известным само по себе способом. Свободные группы карбоновой кислоты в соединениях формулы I могут известным способом вводиться во взаимодействие с соединениями формулы Vc. В качестве летучих групп Y в соединениях формул Va, Vb и Vc пригодны, например, галогены, в частности хлор или бром, или остатки низших алкановых сульфокислот, как, например, трифторметансульфонилоксильный остаток, или ароматических сульфокислот, таких, как бензолсульфокислоты, или бензолсульфоки слот, замещенных низшим алкилом или галогеном, таких, как толуолсульфокислоты.

В том случае, когда требуется получить соединения формулы I, в которых R¹и R² имеют одинаковое значение, но отличающееся от R³, целесообразно использовать исходные соединения формулы II, в которых R¹⁰¹ и R²⁰¹ имеют идентичные значения, а также исходные соединения формулы III, в которых R³⁰² имеет значение, отличающееся от R¹⁰¹ и R²⁰¹. Так, например, при гидрогенолитических условиях могут выбираться устойчивые защитные группы R¹⁰¹ и R²⁰¹ фосфоновой кислоты, такие, как низший алкил, предпочтительно этил. Одновременно в качестве защитной группы карбоновой кислоты R³⁰² может применяться группа, отщепляемая при гидрогенолитических условиях, такая, как бензиловая группа. В этом случае в условиях каталитического гидрирования будет отщепляться от полученных соединений формулы IV с получением свободной карбоновой кислоты только бензиловая группа R³⁰², тогда, как этиловые группы R¹⁰¹ и R²⁰¹ останутся сохранными. При желании в заключение можно этерифицировать свободную карбоновую кислоту с соединением формулы Vc. Точно также в соединениях формулы I, где защитные группы R¹⁰¹ и R²⁰¹ фосфоновой кислоты при гидрогенолитических условиях означают стабильные группы, такие, как группы низших алкилов, преимущественно этил, и R³⁰² означает группу, отщепляемую гидрогенолитически, такую, как бензиловая группа, могут отщепляться в кислых условиях сначала этиловые группы R¹⁰¹, R²⁰¹, при этом сохраняется бензиловая группа R³⁰². При желании в заключение можно этерифицировать свободные группы фосфоновой кислоты соединениями формулы Va и Vb, например пивалоилоксиметилхлоридом. После этого бензиловую группу R³⁰², отщепляемую при гидрогенолитических условиях, можно отщепить каталитическим восстановлением с помощью водорода в известных условиях с целью получения соединений формулы I, в которой R³ означает водород.

Если требуется получить соединения формулы I, где R¹ и R² имеют разные значения, то целесообразно использовать исходные соединения формулы II, где R¹⁰¹ и R²⁰¹ имеют разные значения. Например, исходными соединениями могут быть выбраны соединения формулы II, где R¹⁰¹ означает водород, R²⁰¹ - стабильную защитную группу фосфоновой кислоты в гидрогенолитических условиях. Например, R²⁰¹ может означать низший алкил, предпочтительно этил. При желании полученные соединения формулы I, в которой R¹⁰¹ означает водород, могут быть затем введены во взаимодействие с соответствующими соединениями формулы Va с целью получения соединений формулы I, где R¹ и R² означают различные группы, образующие биолабильный сложный эфир. Исходные соединения формулы II, в которой R¹⁰¹ означает водород, могут быть получены, например, из соединений формулы II, в которой R¹⁰¹ означает группу, отщепляемую при гидрогенолитических условиях, такую, как бензил, путем каталитического гидрирования в известных условиях.

При описанных выше реакциях взаимодействия хиральные углеродные атомы не претерпевают изменений в исходных соединениях формулы III, так что в зависимости от вида исходных соединений возможно получать чисто изомерные соединения формулы I или изомерные смеси. Для получения стереохимически единых соединений формулы I целесообразно вводить во взаимодействие стереохимически единые соединения формулы II со стереохимически едиными соединениями формулы III. В случае, если соединения формулы II не содержат хирального атома фосфора, вступают во взаимодействие с рацемическим соединением формулы III, то получают смесь, состоящую из двух энантиомеров соединения формулы I. При желании смесь энатиомеров можно разделить известным способом, например, хроматографией и на хиральных разделительных материалах или взаимодействием свободной карбоновой кислоты формулы I с соответствующими оптически активными основаниями, например (-)--метилбензиламином, и при последующем разделении оптических антиподов фракционированной кристаллизацией полученных солей.

Исходные соединения формулы II можно получать известными способами.

Таким образом можно получать, например, соединения формулы II, для чего соединения общей формулы VI где R¹⁰² и R²⁰² означают соответственно защитные группы фосфоновой кислоты, Y имеет указанное выше значение, вводят во взаимодействие с циклопентанкарбоновой кислотой формулы VII после чего при желании снова отщепляют защитные группы R¹⁰² и/или R²⁰², пользуясь известным способом. Например, могут быть использованы соединения формулы VI, в которой Y означает остаток низшей алкансульфокислоты, предпочтительно трифторме-тансульфонилоксильный остаток.

Реакция может проводиться известным образом в условиях нуклеофильного замещения в среде инертного в условиях реакции органического растворителя в результате взаимодействия циклопентанкарбоновой кислоты с сильным основанием, способным образовать дианион циклопентанкарбоновой кислоты, с последующим взаимодействием с производным эфира фосфоновой кислоты формулы VI. В качестве растворителей пригодны, например, диалкиловые эфиры с открытой цепью, такие, как диэтиловый эфир или циклические эфиры, такие, как тетрагидрофуран (THF). В качестве сильных оснований пригодны, например, ненуклеофильные органические амиды щелочных металлов, такие, как литийдиизопропиламид (LDA). Целесообразно подвергать взаимодействию циклопентанкарбоновую кислоту в THF с двумя эквивалентными количествами LDA, затем реакционную смесь дополнительно вводить во взаимодействие с соединением формулы VI. Температура реакции может составлять от -70 до 0^oС.

Соединения формулы VI можно получать известным само по себе способом, например взаимодействием диэфиров фосфоновой кислоты общей формулы VIII где R¹⁰² и R²⁰² имеют указанные выше значения, с источником формальдегида, например с параформальдегидом. Целесообразно проводить реакцию без растворителя, но при участии растворимых в реакционной смеси оснований. В качестве оснований могут применяться ненуклеофильные основания, которые были описаны выше и предназначены для взаимодействия соединений формулы II с соединениями формулы III. Целесообразно, чтобы реакция проводилась при температуре от 50 до 130^oС, предпочтительно от 80 до 120^oС. Полученные соединения формулы VI, в которой Y означает гидроксильный радикал, при желании можно перевести известным способом в соединения формулы VI, в которой Y будет означать летучую отщепляемую группу.

Соединения формулы VIII известны или могут быть получены известными способами. Так, например, можно получить производные фосфоновой кислоты формулы VIII, этерифицированныe двумя разными биолабильными группами, для чего от диэфиров фосфоновой кислоты общей формулы VIII, в которой R¹⁰¹ и R²⁰¹ означают одинаковую группу, например низший алкил, отщепляют под действием основания, такого, как гидроокись щелочного металла, например гидроокись натрия, сначала одну из двух групп сложного эфира, и полученный сложный моноэфир или его соль вводят затем во взаимодействие с соответствующим соединением формулы Va или Vb. Для ускорения хода реакции можно вводить соответствующие катализаторы, такие, как соли тетра-низший-алкиламмония, например, гидроокись тетрабутиламмония. Целесообразно добавлять в реакционную смесь соответствующие галогениды щелочных металлов, такие, как йодиды щелочных металлов, например йодид натрия, для ускорения процесса реакции. Реакция может проводиться в диполярноапротическом растворителе, таком, как низший алкильный цианид, например ацетонитрил, в низшем алифатическом эфире, таком, как диэтилэфир, THF или диоксан, в диметилформамиде (DMF), в диметилсульфоокиси (DMSO) или в смесях этих растворителей. Необходимые для этого температуры лежат в диапазоне от 0 до 80^oС, предпочтительно от 5 до 40^oС.

Соединения формулы III известны из европейской патентной заявки, номер публикации 0733642, и могут быть получены раскрытыми в ней методами.

Соединения формулы I и их фармакологически приемлемые соли характеризуются интересными фармакологическими свойствами. В частности, вещества замедляют действие фермента преобразования эндотелина (ЕСЕ) и нейтральной эндопептидазы (NEP) и обладают, следовательно, особо благоприятным профилем действия для лечения сердечной недостаточности.

При сердечной недостаточности вызванное болезнью снижение его выбрасывающей способности приводит к рефлекторному увеличению сопротивления периферийных сосудов. В результате миокарду приходится преодолевать дополнительную повышенную нагрузку. Это создает замкнутый круг, приводит к повышенной нагрузке на сердце и дополнительно ухудшает состояние. Увеличение сопротивления периферийных сосудов вызывается в числе прочего вазоактивным пептидом эндотелином. Эндотелин является сильнейшим аутогенным, известным в настоящее время сосудосужающим веществом и образуется из предстадии биг-эндотелина под действием фермента преобразования эндотелина (ЕСЕ).

При заболеваниях, связанных с сердечной недостаточностью, вследствие пониженной выбрасывающей способности сердца и повышения сопротивления периферийных сосудов происходят явления ретроградного застоя крови в малом круге кровообращения и в самом сердце. В результате происходит увеличение напряжения стенки миокарда в зоне предсердия и камер. При такой ситуации сердце функционирует как эндокринный орган и выделяет в числе прочего также пептид ANP (атриальный пептид натрийуреза) в кровеносное русло. Благодаря его выраженной активности в отношении расширения сосудов, натрийуреза и диуреза ANP вызывают уменьшение как сопротивления периферийных сосудов, так и циркулирующего объема крови. В результате происходит ярко выраженное снижение начальной и дополнительной нагрузок. Это представляет собой эндогенный механизм защиты сердца. Такой положительный эндогенный механизм ограничен тем, что ANP имеет лишь очень короткий период полураспада внутри плазмы. Причиной этого является очень быстрое разложение гормона нейтральной эндопептидазой (NEP).

Соединения согласно изобретению препятствуют благодаря замедлению активности ЕСЕ возникновению эндотелина и противодействуют таким образом увеличению сопротивления периферийных сосудов, что имеет своим следствием разгрузку сердечной мышцы. Вещества согласно изобретению вызывают, кроме того, в результате замедления активности NEP повышение уровня ANP и увеличивают длительность его действия. Это приводит к усилению действия, обеспечивающего ANP, эндогенного кардиозащитного механизма. В частности, вещества обладают высокой эффективностью относительно усиления диуретически/натрийуретической ANP-индуцирующей активности.

Нейтральная эндопептидаза (NEP) участвует не только в разложении атриального пептида натрийурезы (ANP), но также и в разрушении эндотелина. Отсюда следует, что одно только подавление нейтральной эндопептидазы (NEP) привело бы наряду с требуемым повышением уровня атриального пептида натрийуреза (ANP) и к нежелательному повышению уровня эндотелина. По этой причине следует считать особенно оптимальным смешанный профиль, заключающийся в подавлении фермента преобразования эндотелина (ЕСЕ) и нейтральной эндопептидазы, так как препятствуется разрушению атриального пептида натрийуреза/диуреза (блокада нейтральной пептидазы), а также одновременно замедляется образование эндотелина (подавление фермента преобразования эндотелина). Тем самым более уже не проявляется отрицательный сопутствующий эффект чистых NEP-ингибиторов нейтральной эндопептидазы (повышение уровня эндотелина).

1.Определение минимальной токсической дозы.

Группам, каждая из 10 крыс, с весом тела 250 г (в возрасте от 5 до 6 недель) внутривенно вводили тестируемые вещества в максимальной дозе 250 мг/кг (растворены в 0,1 н. водном растворе NaOH, pH 7,1). За животными внимательно наблюдали с момента введения веществ в течение 5 часов на проявление клинических признаков токсичности. Кроме того, на протяжении одной недели за ними наблюдали дважды в день. По истечении недели производили полное вскрытие каждого животного в отдельности и макроскопически исследовали все органы. Если отмечались гибель или сильные токсические симптомы, то последующим крысам вводили существенно меньшие дозы до тех пор, пока не исчезали симптомы токсичности. Наименьшая доза, при которой происходила гибель или проявлялись сильные симптомы токсичности, определяли как минимальную токсическую дозу. Испытуемое вещество, полученное в примере 2 и введенное внутривенно в количестве 215 мг/кг, не обнаружило значительных признаков токсичности.

2. Исследование веществ in vitro на тормозящее действие NEP - нейтральной эндопептидазы.

Для подтверждения тормозящего действия веществ согласно изобретению на нейтральную эндопептидазу (NEP) исследовали путем стандартного теста in vitro тормозящее действие веществ на гидролитическое разложение метионин-энкефалина (мет-энкефалин) путем воздействия ферментативной активности нейтральной эндопептидазы. В качестве единицы тормозящей эффективности веществ при этом была определена их величина IC₅₀. Величиной IC₅₀ тестируемого вещества с эффектом торможения фермента является концентрация тестируемого вещества, при которой блокируются 50% ферментативной активности нейтральной эндопептидазы (NEP).

Проведение теста Для проведения теста были приготовлены пробы по 100 мкл разных инкубационных растворов каждая с содержанием 10 нано-грамм очищенной нейтральной эндопептидазы (Е.С. 3.4.24.11) и соответственно различные количества тестируемого вещества, а также 20 мкМ субстрата (мет-энкефалина) и 50 мМ трис-буфера (трис(гидроксиметил)аминометан/HCl, рН 7,4).

По каждому тестируемому веществу было приготовлено 6 разных инкубационных растворов с 3 разными концентрациями этого вещества для двукратного определения.

При каждом тестировании соответственно обрабатывали двукратно и контрольные инкубационные растворы, во-первых, проводился контроль за ферментом без содержания тестируемого вещества, и, во-вторых, контроль за субстратом, в котором не содержались ни фермент, ни тестируемое вещество.

Инкубационные растворы инкубировали в течение 30 минут при 37^oС на встряхиваемой водяной бане. Ферментную реакцию запускали через 15 минут добавкой субстрата (мет-энкефалина) и прекращали в конце инкубационного периода нагревом в течение 5 минут при 95^oС. Затем инкубационный раствор центрифугировали в течение 3 минут при 12000 х g и в надосадочной жидкости определяли концентрацию непрореагировавшего субстрата и гидролизных продуктов, образовавшихся в результате ферментной реакции. Для этого производили разделение проб надосадочной жидкости посредством жидкостной хроматографии высокого давления (HPLC) на гидрофобном силикагеле и продукты ферментативной реакции и непрореагировавший субстрат определяли фотометрически при длине волны 205 нм. При разделении жидкостной хроматографией высокого давления применялась разделительная колонка (4,6 х 125 мм), содержавшая в себе разделительный материал с обращенной фазой Nucleosin С 18,5 мкм. Поток растворителя составил 1,0 мл/мин, колонку нагревали до 40^oС. Текучим средством А служили 5 мМ Н₃РO₄, рН 2,5, текучим средством В - ацетонитрил + 1% 5 мМ Н₃РO₄, рН 2,5.

Исходя из замеренной концентрации гидролизных продуктов и непрореагировавшего субстрата в разных пробах, определяли известным способом показатель IC₅₀ для тестируемых веществ. Тестируемое вещество, полученное в примере 2, при данном тесте имело показатель IC₅₀ подавления нейтральной эндопептидазы 1,7 нМ и, следовательно, зарекомендавало себя как высокоэффективный ингибитор нейтральной эндопептидазы.

3. Определение in vivo влияния веществ на диурез/натрийурез в крысах с объемной нагрузкой.

Активность in vivo исследовали на крысе с объемной нагрузкой. При этом эксперименте применением изотонического раствора хлорида натрия вызывали высокое давление наполнения сердца, в результате чего выделялся атриальный пептид натрийуреза и происходил диурез/натрийуреза.

Проведение теста Опыты проводились на крысах-самцах Wistar весом от 200 до 400 г. При неврологической анальгезии (Fentanyl; Hypnorm, изготовитель фирма Janssen) катетер вводили в правую бедренную вену для фонового вливания и объемной нагрузки изотоническим раствором хлорида натрия. После вскрытия брюшной полости вводили второй катетер в пузырь и перевязывали у