Аналоги пептида лг-рф, их применение и содержащие их фармацевтические композиции

Аналоги пептида лг-рф, их применение и содержащие их фармацевтические композиции

Реферат

 

Изобретение относится к области медицины, а именно к биомолекулярной эндокринологии. Сущность изобретения состоит в том, что разработаны аналоги пептида рилизинг-фактора лютеинизирующего гормона (ЛГ-РФ), афинные к рецепторам ЛГ-РФ, имеющие формулу А1-А2-A3-A4-A5-A6-HAA-A7-Pro-Z, в которой значения Z и А1 - А7 - это аминокислоты и их производные, а НАА является неароматической гидрофобной аминокислотой, включающей от 7 до 20 атомов углерода. Изобретение также охватывает их применение и фармацевтические композиции. Технический результат изобретения состоит в расширении арсенала гонадотропных средств. 3 с. и 16 з.п. ф-лы, 4 табл.

Изобретение касается аналогов пептида ЛГ-РФ, их применения, а также фармацевтических композиций, в составе которых они присутствуют.

ЛГ-РФ (рилизинг-фактор, или рилизинг-гормон лютеинизирующего гормона) является нейрогормоном, вырабатываемым гипоталамусом: он стимулирует секрецию двух гонадотропных гормонов - ЛГ (лютеинизирующий гормон) или ФСГ (фолликулостимулирующий гормон), которые, в свою очередь, участвуют в контроле эндокринных и экзокринных функций яичников у женских особей и семенников у мужских особей. Структурная формула ЛГ-РФ такова: С точки зрения истории (Karten & Rivier, 1986, Endocrinol. Rev., 7(1), 44-66) впервые улучшение активности ЛГ-РФ синтетическим путем было достигнуто за счет замены С-концевого глицинамида на этиламид, который напрямую был связан с пролином⁹, и затем путем внесения D-аланина в 6-е положение. В обоих этих независимых вариантах полученные в результате аналоги были примерно в 5 раз более активными по сравнению с ЛГ-РФ. Все терапевтически применяемые агонисты образованы в результате дальнейших положительных модификаций по 6-му положению полипептида, осуществляемых путем внесения гидрофобных алифатических или ароматических D-аминокислот, помимо D-аланина, как в сочетании со структурой пролин⁹-N-этиламид, так и без него. Что касается этой С-концевой конструкции, то лишь небольшое улучшение было достигнуто при использовании фторированных амидов или аза-глицинамида. Замещение триптофана в 3-м положении на 1Nal, как сообщалось ранее (Karten & Rivier, 1986, цит. выше), приводило к усилению агонистических свойств вдвое по сравнению с ЛГ-РФ при отсутствии дальнейших синтетических или терапевтических проработок этого варианта.

Единственной другой специфической модификацией аминокислот, способствующей увеличению биологической активности некоторых агонистов, является модификация по 7-му положению. При этом N-метилирование лейцина-7 в составе ЛГ-РФ само по себе не увеличивает его активности, однако увеличение активности выявлено у некоторых синтетических агонистов, включающих определенные D-аминокислоты по 6-му положению, например D-триптофан (Karten & Rivier, 1986, цит. выше); более того, заряженные и имеющие боковую группу L-аминокислоты, помимо лейцина, - Ser(O-Bu^t), Asp(O-Bu^t), Glu(O-Вu^t), BocLys - в некоторой степени увеличивают активность конструкции [des-Gly¹⁰; Рrо⁹-N-этиламид] -ЛГ-РФ, но снижают активность агонистов, модифицированных по 6-му положению (Karten & Rivier, 1986, цит. выше).

Что же касается антагонистов, то были предприняты многочисленные попытки модифицировать ЛГ-РФ по всем аминокислотным положениям, кроме Pro⁹, которые привели к различным результатам с точки зрения достижения подавления активности ЛГ-РФ (Dutta, 1988, Drugs of the Future, 13(8), 761-787; Karten & Rivier, 1986, Endocrinol. Rev., 7(1), 44-66). Например, антид, являющийся стандартным сильным антагонистом ЛГ-РФ, образован в результате замен по аминокислотным положениям 1, 2, 3, 5, 6, 8 и 10. N-метилирование лейцина-7 приводит к снижению активности, а единственными заменами по 7-му положению, приводящими к увеличению активности (максимально двукратному) являются замены лейцина-7 на триптофан-7 или фенилаланин-7.

В настоящее время известно, что замена лейцина-7 на высокогидрофобные аминокислоты приводит к увеличению активности самого ЛГ-РФ и активности известных высокоактивных аналогов ЛГ-РФ (как агонистов, так и антагонистов).

В частности, было обнаружено, что замещение лейцина-7 адамантилаланином (Ada) или неопентилглицином (Npg) приводит к увеличению активности самого ЛГ-РФ и делает возможным получение аналогов, характеризующихся высокой аффинностью к рецепторам ЛГ-РФ. Более конкретно, аналоги [Npg⁷]-ЛГ-РФ по настоящему изобретению являются сильными агонистами/антагонистами ЛГ-РФ in vivo.

Таким образом, в соответствии с одним из аспектов настоящего изобретения, представляются аналоги пептида ЛГ-РФ, высокоаффинные в отношении рецепторов ЛГ-РФ, в составе которых Leu⁷ заменен на неароматическую гидрофобную аминокислоту, включающую от 7 до 20 атомов углерода, например на Ada⁷ или, что предпочтительнее, на Npg⁷. Предпочтительно такие пептиды-аналоги имеют следующую формулу (SEQ ID NO 1): A1-A2-A3-A4-A5-А6-HAA-A7-Pro-Z (I), где A1 - pGlu; D-pGlu; Sar; AcSar; Pro или его производные, такие как AcPro, ForPro, OH-Pro, Ac-OH-Pro, дегидропролин или ацетилдегидропролин; Ser; D-Ser; Ac-D-Ser; Thr; D-Thr; Ac-D-Thr, или ароматическая D-аминокислота, которая может быть ацетилированной, такая как D-Phe, D-HPhe, D-Tyr, D-Trp, D-Nal, D-1Nal, D-дифенил-Аlа, D-Bal, D-Pal, D-4Pal или D-Qal, где D-Phe и D-Trp могут быть замещены одним или большим числом галогенов, (C₁-C₄)-алкил-, (C₁-C₄)-алкокси-, нитро- и трифторметильных групп; - A2 - прямая связь; His или ароматическая D-аминокислота, такая как D-Phe, D-HPhe, D-Tyr, D-Trp, D-Nal, D-1Nal, D-дифeнил-Ala, D-Bal, D-Pal, D-4Pal или D-Qal, где D-Phe и D-Trp могут быть замещены одним или большим числом галогенов, (C₁-C₄)-алкил-, (C₁-C₄)-алкокси-, нитро- и трифторметильных групп; - A3 - ароматическая L- или D-аминокислота, такая как Phe, HPhe, Туr, Trp, Nal, 1Nal, дифенил-Ala, Bal, Pal, 4Pal или Qal, при том, что Phe и Trp могут быть замещены одним или большим числом галогенов, (C₁-C₄)-алкил-, (C₁-C₄)-алкокси-, нитро- или трифторметильных групп; - A4 - Ala, Ser, D-Ser, MeSer, Ser(OBu^t), Ser(OBzl) или Thr; - A5 - ароматическая L-аминокислота, такая как Phe, HPhe, Туr, Trp, Nal, 1Nal, дифенил-Ala, Bal, Pal, 4Pal или Qal, где Phe и Trp могут быть замещены одним или большим числом галогенов, (C₁-C₄)-алкил-, (C₁-C₄)-алкокси-, нитро- и трифторметильных групп, или основная L- или D-аминокислота, такая как Аrg, НАrg, Orn, Lys, HLys, Cit, HCit, APhe или ACha, где Аrg и НАrg могут быть N-замещены (C₁-С₆)-алкильной или (С₃-С₆)-циклоалкильной группой по одному или обоим атомам азота и где Orn, Lys, HLys, APhe и ACha могут быть N-замещены одной или двумя (C₁-C₆)-алкильной или (С₃-С₆)-циклоалкильной группами или никотиноильной, изоникотиноильной, 6-метилникотиноильной, глицилникотиноильной, никотинилазаглицильной, фурильной, глицилфурильной, фурилазаглицильной, пиразинильной, пиразинилкарбонильной, пиколиноильной, 6-метилпиколиноильной, шикимильной, шикимилглицильной, Fmoc- или Вос-группой; - А6 - Gly; D-Pro; D-Ser; D-Thr; D-Cys; D-Met; D-Pen; D-(S-Me)Pen; D-(S-Et)Pen; D-Ser (OBu^t); D-Аsр(ОВu^t); D-Glu(OBu^t); D-Thr (OBu^t); D-Cys (OBu^t); D-Ser (OR₁), где R₁ - производная cахаров; аза-аминокислота, такая как аза-глицин или аза-аланин; D-His, который может быть замещен по имидазольному кольцу (C₁-C₆)-алкильной или (С₂-С₇)-ацильной группой; алифатическая D-аминокислота с (C₁-C₈)-алкильной или (С₃-С₆)-циклоалкильной боковой цепью, такая как D-Ala, A-Abu, D-Aib, D-3Aib, D-Val, D-Nva, D-Leu, D-Ile, D-Tle, D-Nle, D-Hol, D-Npg, D-CPa, D-Cpa, D-Cba или D-Cha; ароматическая D-аминокислота, такая как D-Phe, D-HPhe, D-Tyr, D-Trp, D-Nal, D-1Nal, D-дифенил-Аlа, D-антрил-Аlа, D-фенантрил-Аlа, D-бензгидрил-Ala, 0-флуоренил-Ala, D-Bal, D-Pal, D-4Pal или D-Qal, где D-Phe и D-Trp могут быть замещены одним или большим числом галогенов, (C₁-C₄)-алкил-, (C₁-C₄)-алкокси-, нитро- и трифторметильных групп; D-циклогексадиенилглицин; D-пергидронафтилаланин; D-пергидродифенилаланин или основная L- или D-аминокислота, такая как Аrg, НАrg, Orn, Lys, HLys, Cit, HCit, APhe или ACha, где Аrg и HArg могут быть N-замещены (C₁-C₆)-алкильной или (С₃-С₆)-циклоалкильной группой по одному или обоим атомам азота и где Orn, Lys, HLys, APhe и ACha могут быть N-замещены одной или двумя (C₁-C₆)-алкильной или (С₃-С₆)-циклоалкильной группами или никотиноильной, изоникотиноильной, 6-метилникотиноильной, глицилникотиноильной, никотинилазаглицильной, фурильной, глицилфурильной, фурилазаглицильной, пиразинильной, пиразинилкарбонильной, пиколиноильной, 6-метилпиколиноильной, шикимильной, шикимилглицильной, Fmoc- или Вос-группой; - НАА - неароматическая гидрофобная аминокислота, включающая от 7 до 20 атомов углерода; - А7 - основная L- или D-аминокислота, такая как Аrg, HArg, Оm, Lys, HLys, Cit, HCit, APhe или ACha, где Аrg или HArg могут быть N-замещены (C₁-С₆)-алкильной или (С₃-С₆)-циклоалкильной группой по одному или обоим атомам азота и где Orn, Lys, HLys, APhe и ACha могут быть N-замещены одной или двумя (C₁-C₆) -алкильной или (С₃-С₆)-циклоалкильной группами или никотиноильной, изоникотиноильной, 6-метилникотиноильной, глицилникотиноильной, никотинилазаглицильной, фурильной, глицилфурильной, фурилазаглицильной, пиразинильной, пиразинилкарбонильной, пиколиноильной, 6-метилпиколиноильной, шикимильной, шикимилглицильной, Fmoc- или Вос-группой; - Z - Gly-NHa; D-Ala-NH₂; azaGly-NH₂ или группа -NHR₂, где R₂ - (C₁-C₄)-алкил, который может быть замещен гидроксильной группой или одним или несколькими атомами фтора, (С₃-С₆)-циклоалкил или гетероциклический радикал, выбираемый из морфолинила, пирролидинила и пиперидила, равно как и их фармацевтически приемлемые соли.

У этих пептидных аналогов НАА предпочтительно является Ada или Npg, которые могут быть N--замещены (C₁-C₄)-алкильной группой с необязательным замещением одним или несколькими атомами фтора, при том, что Npg является наиболее предпочтительной аминокислотой.

Предпочтительная группа пептидных аналогов (I) включает пептиды, характеризующиеся такой формулой (SEQ ID NO 6): A1-A2-A3-A4-A5-A6-Npg-A7-Pro-Z (I'), где A1 - pGlu; D-pGlu; Sar; AcSar; Pro или его производные, такие как AcPro, ForPro, OH-Pro, Ac-OH-Pro, дегидропролин или ацетилдегидропролин; Ser; D-Ser; Ac-D-Ser; Thr; D-Thr; Ac-D-Thr, или ароматическая D-аминокислота, которая может быть ацетилированной, такая как D-Phe, D-Tyr, D-Trp, D-Nal, D-1Nal, D-дифенил-Аlа, D-Bal, D-Pal или D-Qal, где D-Phe и D-Trp могут быть замещены одним или большим числом галогенов, (C₁-C₄) -алкил-, (C₁-C₄)-алкокси-, нитро- и трифторметильных групп; - А2 - прямая связь; His или ароматическая D-аминокислота, такая как D-Phe, D-Tyr, D-Trp, D-Nal, D-1Nal, D-дифенил-Аlа, D-Bal, D-Pal или D-Qal, где D-Phe и D-Trp могут быть замещены одним или большим числом галогенов, (C₁-C₄)-алкил-, (C₁-C₄)-алкокси-, нитро- и трифторметильных групп; - A3 - ароматическая L- или D-аминокислота, такая как Phe, Туr, Trp, Nal, 1Nal, дифенил-Ala, Bal, Pal или Qal, при том, что Phe и Trp могут быть замещены одним или большим числом галогенов, (C₁-C₄)-алкил-, (C₁-C₄)-алкокси-, нитро- и трифторметильных групп; - А4 - Ala, Ser, D-Ser, MeSer, Ser(OBu^t), Ser(OBzl) или Thr; - А5 - ароматическая L-аминокислота, такая как Phe, Туr, Trp, Nal, 1Nal, дифенил-Ala, Bal, Pal или Qal, где Phe и Trp могут быть замещены одним или большим числом галогенов, (C₁-C₄)-алкил-, (C₁-C₄)-алкокси-, нитро- и трифторметильных групп, или основная L- или D-аминокислота, такая как Аrg, НАrg, Orn, Lys, HLys, Cit, HCit, APhe или ACha, где Аrg и HArg могут быть N-замещены (C₁-C₆)-алкильной или (С₃-С₆)-циклоалкильной группой по одному или обоим атомам азота и где Orn, Lys, HLys, APhe и ACha могут быть N-замещены одной или двумя (C₁-С₆)-алкильной или (С₃-С₆)-циклоалкильной группами или никотиноильной, изоникотиноильной, 6-метилникотиноильной, глицилникотиноильной, никотинилазаглицильной, фурильной, глицилфурильной, фурилазаглицильной, пиразинильной, пиразинилкарбонильной, пиколиноильной, 6-метилпиколиноильной, шикимильной, шикимилглицильной, Fmoc- или Вос-группой; - А6 - Gly; D-Pro; D-Ser; D-Thr; D-Cys; D-Met; D-Pen; D-(S-Me)Pen; D-(S-Et)Pen; D-Ser(OBu^t); D-Asp(OBu^t); D-Сlu(ОВu^t); D-Thr(OBu^t); D-Cys(OBu^t); D-Ser(OR₁), где R₁ - производная cахаров; аза-аминокислота, такая как аза-глицин или аза-аланин; D-His, который может быть замещен по имидазольному кольцу (C₁-C₆)-алкильной или (С₂-С₇)-ацильной группой; алифатическая D-аминокислота с (C₁-C₈)-алкильной или (С₃-С₆)-циклоалкильной боковой цепью, такая как D-Ala, D-Abu, D-Aib, D-3Aib, D-Val, D-Nva, D-Leu, D-Ile, D-Tle, D-Nle, D-Hol, D-Npg, D-CPa, D-Cpa, D-Cba или D-Cha; ароматическая D-аминокислота, такая как D-Phe, D-Tyr, D-Trp, D-Nal, D-1Nal, D-дифeнил-Ala, D-антрил-Ala, D-фeнaнтpил-Ala, D-бензгидрил-Ala, D-флyopeнил-Ala, D-Bal, D-Pal или D-Qal, где D-Phe и D-Trp могут быть замещены одним или большим числом галогенов, (C₁-C₄)-алкил-, (C₁-C₄)-алкокси-, нитро- и трифторметильных групп; D-циклогексадиенилглицин; D-пергидронафтилаланин; D-пергидродифенилаланин, или основная L- или D-аминокислота, такая как Arg, HArg, Orn, Lys, HLys, Cit, HCit, APhe или ACha, где Arg и HArg могут быть N-замещены (C₁-C₆)-алкильной или (С₃-C₆)-циклоалкильной группой по одному или обоим атомам азота и где Orn, Lys, HLys, APhe и ACha могут быть N-замещены одной или двумя (C₁-С₆)-алкильной или (С₃-С₆)-циклоалкильной группами или никотиноильной, изоникотиноильной, 6-метилникотиноильной, глицилни-котиноильной, никотинилазаглицильной, фурильной, глицилфурильной, фурилазаглицильной, пиразинильной, пиразинилкарбонильной, пиколиноильной, 6-метилпиколиноильной, шикимильной, шикимилглицильной, Fmoc- или Вос-группой; - Npg может быть N--замещенной (C₁-C₄)-алкильной группой, которая может быть замещена одним или несколькими атомами фтора; - А7 - основная L- или D-аминокислота, такая как Arg, HArg, Orn, Lys, HLys, Cit, HCit, APhe или ACha, где Arg или HArg могут быть N-замещены (C₁-С₆)-алкильной или (С₃-C₆)-циклоалкильной группой по одному или обоим атомам азота и где Оrn, Lys, HLys, APhe и ACha могут быть N-замещены одной или двумя (C₁-С₆)-алкильной или (С₃-С₆)-циклоалкильной группами или никотиноильной, изоникотиноильной, 6-метилникотиноильной, глицилникотиноильной, никотинилазаглицильной, фурильной, глицилфурильной, фурилазаглицильной, пиразинильной, пиразинилкарбонильной, пиколиноильной, 6-метилпиколиноильной, шикимильной, шикимилглицильной, Fmoc- или Вос-группой; - Z - Gly-NH₂; D-Ala-NH₂; azaGly-NH₂ или группа -NHR₂, где R₂ -(C₁-C₄)-алкил, который может быть замещен гидроксильной группой или одним или несколькими атомами фтора, (С₃-C₆)-циклоалкил или гетероциклический радикал, выбираемый из морфолинила, пирролидинила и пиперидила, равно как и их фармацевтически приемлемые соли.

В описании термин "(C₁-C₄)-алкил" определяет следующие группы: метил, этил, n-пропил, i-пропил, n-бутил, i-бутил, s-бутил и t-бутил.

Термин "(C₁-С₆)-алкил" определяет следующие группы: метил, этил, n-пропил, i-пропил, n-бутил, i-бутил, s-бутил, t-бутил, n-пентил, i-пентил, s-пентил, t-пентил и гексил.

Термин "(C₁-C₈)-алкил" определяет следующие группы: метил, этил, n-пропил, i-пропил, n-бутил, i-бутил, s-бутил, t-бутил, n-пентил, i-пентил, s-пентил, t-пентил, гексил, гептил и октил.

Термин "(C₁-C₄)-алкокси" определяет группу -OR, где R-(C₁-C₄)-алкил.

Термин "(C₂-C₇)-ацил" определяет группу -COR, где R-(C₁-C₆)-алкил.

Термин "(С₃-С₆)-циклоалкил" определяет следующие группы: циклопропил, циклобутил, циклопентил и циклогексил.

Термин "производная сахаров" определяет D- или L-пентозы или гексозы и их аминопроизводные.

Термин "аналоги ЛГ-РФ" определяет пептиды, в которых по крайней мере одна аминокислота была модифицирована в составе последовательности ЛГ-РФ.

Термин "неароматическая гидрофобная аминокислота" определяет линейную, разветвленную или циклическую аминокислоту с боковой цепью, включающую от 5 до 18, а предпочтительно от 5 до 11, атомов углерода (включая первый -атом углерода); гидрофобная природа подходящей аминокислоты может быть определена положительной разницей по крайней мере на 0,5 по сравнению с показателем лейцина либо величины logP (P - коэффициент разделения в системе "n-октанол/вода") или константы гирофобности Ганша "". В данном описании и в формуле изобретения используются следующие сокращения: Abu - 2-аминомасляная кислота.

Ас - ацетил.

ACha - аминоциклогексилаланин.

Aib - 2-аминоизомасляная кислота.

3Aib - 3-аминоизомасляная кислота.

А1а - аланин.

Ala-NH₂ - аланинамид.

APhe - р-аминофенилаланин.

Arg - аргинин.

Asp - аспарагиновая кислота.

azaAla - аза-аланин.

azaGly - аза-глицин.

azaGly-NH₂ - аза-глицинамид.

Ваl - бензотиенилаланин.

Воc - трет-бутоксикарбонил.

Сbа - циклобутилаланин.

Cha - циклогексилаланин.

Cit - цитруллин.

СРа - циклопропилаланин.

Сра - циклопентилаланин.

Fmoc - флуоренилметоксикарбонил.

For - формил.

Glu - глутаминовая кислота.

Gly - глицин.

Gly-NH₂ - глицинамид.

НАrg - гомоаргинин.

HCit - гомоцитруллин.

His - гистидин.

HLys - гомолизин.

Ноl - гомолейцин.

Ilе - изолейцин.

IprLys - N-изoпpoпиллизин.

Leu - лейцин.

Lys - лизин.

MeSer - N-метилсерин.

Met - метионин.

Nal - 3-(2-нафтил)аланин.

1Nal - 3-(1-нафтил)аланин.

NEt-N-этиламид.

NicLys - N-никoтинoиллизин.

Nle - норлейцин.

Npg - неопентилглицин.

Nva - норвалин.

ОВu^t - трет-бутокси.

OBzl - бензиловый эфир.

Orn - орнитин.

Pal - 3-(3-пиридил)аланин.

pClPhe - 3-(4-хлорфенил)аланин.

Pen - пеницилламин.

pGlu - пироглутаминовая кислота.

Phe - фенилаланин.

Pro - пролин.

Qal - 3-(3-хинолил)аланин.

Sar - саркозин.

Ser - серии.

(S-Me)Pen - S-метилпеницилламин.

(S-Et)Pen - S-этилпеницилламин.

Thr - треонин.

Tle - трет-лейцин.

Trp - триптофан.

Туr - тирозин.

Val - валин.

Ada - адамантилаланин.

HPhe - гомофенилаланин.

MeNpg - N-метилнеопентилглицин.

4Pal - 3-(4-пиридил)аланин.

Предпочтительная группа пептидных аналогов в соответствии с настоящим изобретением, обладающих активностью агонистов ЛГ-РФ, включает пептиды, имеющие такую формулу (SEQ ID NO 2): A1-A2-A3-A4-A5-A6-HAA-A7-Pro-Z (IIа), где A1 - pGlu, Sar или AcSar; - A2 - His; - A3 - ароматическая L-аминокислота, такая как Phe, HPhe, Туr, Trp, Nal, 1Nal, дифенил-Ala, Bal, Pal, 4Pal или Qal, при том, что Phe и Trp могут быть замещены одним или большим числом галогенов, (C₁-C₄)-алкил-, (C₁-C₄)-алкокси-, нитро- и трифторметильных групп; - А4 - Ala, Ser, D-Ser, MeSer, Sеr(ОВu^t), Ser(OBzl) или Thr; - А5 - ароматическая L-аминокислота, такая как Phe, HPhe, Туr, Trp, Nal, 1Nal, дифенил-Ala, Bal, Pal, 4Pal или Qal, где Phe и D-Trp могут быть замещены одним или большим числом галогенов, (C₁-C₄)-алкил-, (C₁-C₄)-алкокси-, нитро- и трифторметильных групп; - А6 - Gly; D-Pro; D-Ser; D-Thr; D-Cys; D-Met; D-Pen; D-(S-Me)Pen; D-(S-Et)Pen; D-Ser(OBu^t); D-Asp(OBu^t); D-Glu(OBu^t); D-Thr (OBu^t); D-Cys (OBu^t); D-Ser (OR₁), где R₁ - производная сахаров; аза-аминокислота, такая как аза-глицин или аза-аланин; D-His, который может быть замещен по имидазольному кольцу (C₁-C₆)-алкильной или (С₂-С₇)-ацильной группой; алифатическая D-аминокислота с (C₁-C₈)-алкильной или (С₃-С₆)-циклоалкильной боковой цепью, такая как D-Ala, A-Abu, D-Aib, D-3Aib, D-Val, D-Nva, D-Leu, D-Ile, D-Tle, D-Nle, D-Hol, D-Npg, D-CPa, D-Cpa, D-Cba или D-Cha; ароматическая D-аминокислота, такая как D-Phe, D-HPhe, D-Tyr, D-Trp, D-Nal, D-1Nal, D-дифенил-Ala, D-aнтрил-Ala, D-фенантрил-Ala, D-бензгидрил-Ala, D-флуоренил-Аlа, D-Bal, D-Pal, D-4Pal или D-Qal, где D-Phe и D-Trp могут быть замещены одним или большим числом галогенов, (C₁-C₄)-алкил-, (C₁-C₄)-алкокси-, нитро- и трифторметильных групп; D-циклогексадиенилглицин; D-пергидронафтилаланин; D-пергидродифенилаланин, или основная D-аминокислота, такая как D-Arg, D-HArg, D-Orn, D-Lys, D-HLys, D-Cit, D-HCit, D-APhe или D-ACha, где D-Arg и D-HArg могут быть N-замещены (C₁-C₆)-алкильной или (С₃-C₆)-циклоалкильной группой по одному или обоим атомам азота и где D-Orn, D-Lys, D-HLys, D-APhe и D-ACha могут быть N-замещены одной или двумя (C₁-C₆)-алкильной или (С₃-С₆)-циклоалкильной группами или группами Fmoc или Воc; - НАА определяется так же, как в формуле (I); - А7 - основная L-аминокислота, такая как Arg, HArg, Orn, Lys, HLys, Cit, HCit, APhe или ACha; - Z - Gly-NH₂; azaGly-NH₂ или группа -NHR₂, где R₂-(C₁-C₄)-алкил, который может быть замещен гидроксильной группой или одним или несколькими атомами фтора, (С₃-С₆)-циклоалкил или гетероциклический радикал, выбираемый из морфолинила, пирролидинила и пиперидила, равно как и их фармацевтически приемлемые соли.

У этих пептидных аналогов НАА предпочтительно является Ada или Npg, которые могут быть N--замещены (C₁-C₄)-алкильной группой с необязательным замещением одним или несколькими атомами фтора, при том, что Npg является наиболее предпочтительной аминокислотой.

Предпочтительная группа пептидных аналогов (IIа) включает пептиды, характеризующиеся такой формулой (SEQ ID NO 7): A1-A2-A3-A4-A5-А6-Npg-A7-Pro-Z (II'а), где - A1 - pGlu, Sar или AcSar; A2 - His; A3 - ароматическая L-аминокислота, такая как Phe, Туr, Trp, Nal, 1Nal, дифенил-Ala, Bal, Pal или Qal, при том, что Phe и Trp могут быть замещены одним или большим числом галогенов, (C₁-C₄)-алкил-, (C₁-C₄)-алкокси-, нитро- и трифторметильных групп; A4 - Ala, Ser, D-Ser, MeSer, Sеr(ОВu^t), Ser(OBzl) или Thr; A5 - ароматическая L-аминокислота, такая как Phe, Туr, Trp, Nal, 1Nal, дифенил-Ala, Bal, Pal или Qal, где Phe и Trp могут быть замещены одним или большим числом галогенов, (C₁-C₄)-алкил-, (C₁-C₄)-алкокси-, нитро- и трифторметильных групп; А6 - Gly; D-Pro; D-Ser; D-Thr; D-Cys; D-Met; D-Pen; D-(S-Me)Pen; D-(S-Et)Pen; D-Ser (OBu^t); D-Asp (OBu^t); D-Glu(OBu^t); D-Thr (OBu^t); D-Cys(OBu^t); D-Ser (OR₁), где R₁ - производная сахаров; аза-аминокислота, такая как аза-глицин или аза-аланин; D-His, который может быть замещен по имидазольному кольцу (C₁-С₆)-алкильной или (С₂-С₇)-ацильной группой; алифатическая D-аминокислота с (C₁-C₈)-алкильной или (С₃-С₆)-циклоалкильной боковой цепью, такая как D-Ala, A-Abu, D-Aib, D-3Aib, D-Val, D-Nva, D-Leu, D-Ile, D-Tle, D-NIe, D-Hol, D-Npg, D-CPa, D-Cpa, D-Cba или D-Cha; ароматическая D-аминокислота, такая как D-Phe, D-Tyr, D-Trp, D-Nal, D-1Nal, D-дифенил-Аlа, D-антрил-Аlа, D-фенантрил-Аlа, D-бензгидрил-Ala, D-флуоренил-Аlа, D-Bal, D-Pal или D-Qal, где D-Phe и D-Trp могут быть замещены одним или большим числом галогенов, (C₁-C₄)-алкил-, (C₁-C₄)-алкокси-, нитро- или трифторметильных групп; D-циклогексадиенилглицин; D-пергидронафтилаланин; D-пергидродифенилаланин, или основная D-аминокислота, такая как D-Arg, D-HArg, D-Orn, D-Lys, D-HLys, D-Cit, D-HCit, D-APhe или D-ACha, где D-Arg и D-HArg могут быть N-замещены (C₁-С₆)-алкильной или (С₃-С₆)-циклоалкильной группой по одному или обоим атомам азота и где D-Orn, D-Lys, D-HLys, D-APhe и D-ACha могут быть N-замещены одной или двумя (C₁-С₆)-алкильной или (С₃-С₆)-циклоалкильной группами или группами Fmoc или Воc; - Npg может быть N--замещенной (C₁-C₄)-алкильной группой, которая может быть замещена одним или несколькими атомами фтора; - А7 - основная L-аминокислота, такая как Arg, HArg, Orn, Lys, HLys, Cit, HCit, APhe или ACha; - Z - Gly-NH₂; azaGly-NH₂ или группа -NHR₂, где R₂-(C₁-C₄)-алкил, который может быть замещен гидроксильной группой или одним или несколькими атомами фтора, (С₃-С₆)-циклоалкил или гетероциклический радикал, выбираемый из морфолинила, пирролидинила и пиперидила, равно как и их фармацевтически приемлемые соли.

Другая предпочтительная группа пептидных аналогов в соответствии с настоящим изобретением, обладающих активностью антагонистов ЛГ-РФ, включает пептиды, имеющие такую формулу (SEQ ID NO 3): A1-A2-A3-A4-A5-A6-HAA-A7-Pro-Z (IIb), где A1 - pGlu; D-pGlu; Sar; AcSar; Pro или его производные, такие как AcPro, ForPro, OH-Pro, Ac-OH-Pro, дегидропролин или ацетилдегидропролин; Ser; D-Ser; Ac-D-Ser; Thr; D-Thr; Ac-D-Thr, или ароматическая D-аминокислота, которая может быть ацетилированной, такая как D-Phe, D-HPhe, D-Tyr, D-Trp, D-Nal, D-1Nal, D-дифенил-Аlа, D-Bal, D-Pal, D-4Pal или D-Qal, где D-Phe и D-Trp могут быть замещены одним или большим числом галогенов, (C₁-C₄)-алкил-, (C₁-C₄)-алкокси-, нитро- и трифторметильных групп; - A2 - прямая связь или ароматическая D-аминокислота, такая как D-Phe, D-HPhe, D-Tyr, D-Trp, D-Nal, D-1Nal, D-дифенил-Ala, D-Bal, D-Pal, D-4Pal или D-Qal, где D-Phe и D-Тrр могут быть замещены одним или большим числом галогенов, (C₁-C₄)-алкил-, (C₁-C₄)-алкокси-, нитро- и трифторметильных групп; - A3 - ароматическая L- или D-аминокислота, такая как Phe, HPhe, Туr, Trp, Nal, 1Nal, дифенил-Ala, Bal, Pal, 4Pal или Qal, при том, что Phe и Trp могут быть замещены одним или большим числом галогенов, (C₁-C₄)-алкил-, (C₁-C₄)-алкокси-, нитро- и трифторметильных групп; - А4 - Ala, Ser, D-Ser, MeSer, Ser(OBu^t), Ser(OBzl) или Thr; - A5 - ароматическая L-аминокислота, такая как Phe, HPhe, Туr, Trp, Nal, 1Nal, дифенил-Ala, Bal, Pal, 4Pal или Qal, где Phe и Trp могут быть замещены одним или большим числом галогенов, (C₁-C₄)-алкил-, (C₁-C₄)-алкокси-, нитро- и трифторметильных групп, или основная L- или D-аминокислота, такая как Аrg, НАrg, Orn, Lys, HLys, Cit, HCit, APhe или ACha, где Аrg и НАrg могут быть N-замещены (C₁-C₆)-алкильной или (С₃-С₆)-циклоалкильной группой по одному или обоим атомам азота и где Orn, Lys, HLys, APhe и ACha могут быть N-замещены одной или двумя (C₁-C₆)-алкильной или (С₃-С₆)-циклоалкильной группами или никотиноильной, изоникотиноильной, 6-метилникотиноильной, глицилникотиноильной, никотинилазаглицильной, фурильной, глицилфурильной, фурилазаглицильной, пиразинильной, пиразинилкарбонильной, пиколиноильной, 6-метилпиколиноильной, шикимильной, шикимилглицильной, Fmoc- или Вос-группой; - А6 - Gly; D-Pro; D-Ser; D-Thr; D-Cys; D-Met; D-Pen; D-(S-Me)Pen; D-(S-Et)Pen; D-Ser(OBu^t); D-Asp(OBu^t); D-Glu(OBu^t); D-Thr (OBu^t); D-Cys (OBu^t); D-Ser (OR₁), где R₁ - производная cахаров; алифатическая D-аминокислота с (C₁-C₈)-алкильной или (С₃-С₆)-циклоалкильной боковой цепью, такая как D-Ala, D-Abu, D-Aib, D-3Aib, D-Val, D-Nva, D-Leu, D-Ile, D-Tle, D-Nle, D-Hol, D-Npg, D-CPa, D-Cpa, D-Cba или D-Cha; ароматическая D-аминокислота, такая как D-Phe, D-HPhe, D-Tyr, D-Trp, D-Nal, D-1Nal, D-дифенил-Аlа, D-антрил-Аlа, D-фенантрил-Ala, D-бензгидрил-Аlа, D-флуоренил-Аlа, D-Bal, D-Pal, D-4Pal или D-Qal, где D-Phe и D-Trp могут быть замещены одним или большим числом галогенов, (C₁-C₄)-алкил-, (C₁-C₄)-алкокси-, нитро- или трифторметильных групп; D-циклогексадиенилглицин; D-пергидронафтилаланин; D-пергидродифенилаланин, или основная L- или D-аминокислота, такая как Аrg, НАrg, Orn, Lys, HLys, Cit, HCit, APhe или ACha, где Аrg и НАrg могут быть N-замещены (C₁-C₆)-алкильной или (С₃-С₆)-циклоалкильной группой по одному или обоим атомам азота и где Orn, Lys, HLys, APhe и ACha могут быть N-замещены одной или двумя (C₁-C₆)-алкильной или (С₃-С₆)-циклоалкильной группами или никотиноильной, изоникотиноильной, 6-метилникотиноильной, глицилникотиноильной, никотинилазаглицильной, фурильной, глицилфурильной, фурилазаглицильной, пиразинильной, пиразинилкарбонильной, пиколиноильной, 6-метилпиколиноильной, шикимильной, шикимилглицильной, Fmoc- или Вос-группой; - НАА определяется так же, как в формуле (I); - А7 - основная L- или D-аминокислота, такая как Аrg, НАrg, Orn, Lys, HLys, Cit, HCit, APhe или ACha, где Аrg или НАrg могут быть N-замещены (C₁-С₆)-алкильной или (С₃-C₆)-циклоалкильной группой по одному или обоим атомам азота и где Orn, Lys, HLys, APhe и ACha могут быть N-замещены одной или двумя (C₁-С₆)-алкильной или (С₁-С₆)-циклоалкильной группами или никотиноильной, изоникотиноильной, 6-метилникотиноильной, глицилникотиноильной, никотинилазаглицильной, фурильной, глицилфурильной, фурилазаглицильной, пиразинильной, пиразинилкарбонильной, пиколиноильной, 6-метилпиколиноильной, шикимильной, шикимилглицильной, Fmoc- или Вос-группой; - Z - Gly-NH₂ или D-Ala-NH₂, равно как и их фармацевтически приемлемые соли.

У этих пептидных аналогов НАА предпочтительно является Ada или Npg, которые могут быть N--замещены (C₁-C₄)-алкильной группой с необязательным замещением одним или несколькими атомами фтора, при том, что Npg является наиболее предпочтительной аминокислотой.

Предпочтительная группа пептидных аналогов (IIb) включает пептиды, имеющие следующую формулу (SEQ ID NO 8): A1-А2-A3-А4-А5-А6-Npg-A7-Pro-Z (II'b), где A1 - pGlu; D-pGlu; Sar; AcSar; Pro или его производные, такие как AcPro, ForPro, OH-Pro, Ac-OH-Pro, дегидропролин или ацетилдегидропролин; Ser; D-Ser; Ac-D-Ser; Thr; D-Thr; Ac-D-Thr, или ароматическая D-аминокислота, которая может быть ацетилированной, такая как D-Phe, D-Tyr, D-Trp, D-Nal, D-1Nal, D-дифенил-Аlа, D-Bal, D-Pal или D-Qal, где D-Phe и D-Trp могут быть замещены одним или большим числом галогенов, (C₁-C₄)-алкил-, (C₁-C₄)-алкокси-, нитро- и трифторметильных групп; - А2 - прямая связь или ароматическая D-аминокислота, такая как D-Phe, D-Tyr, D-Trp, D-Nal, D-1Nal, D-дифенил-Ala, D-Bal, D-Pal или D-Qal, где D-Phe и D-Trp могут быть замещены одним или большим числом галогенов, (C₁-C₄)-алкил-, (C₁-C₄)-алкокси-, нитро- и трифторметильных групп; - A3 - ароматическая L- или D-аминокислота, такая как Phe, Туr, Trp, Nal, 1Nal, дифенил-Ala, Bal, Pal или Qal, при том, что Phe и Trp могут быть замещены одним или большим числом галогенов, (C₁-C₄)-алкил-, (C₁-C₄)-алкокси-, нитро- и трифторметильных групп; - А4 - Ala, Ser, D-Ser, MeSer, Ser(OBu^t), Ser(OBzl) или Thr; - A5 - ароматическая L-аминокислота, такая как Phe, Туr, Trp, Nal, 1Nal, дифенил-Ala, Bal, Pal или Qal, где Phe и Trp могут быть замещены одним или большим числом галогенов, (C₁-C₄)-алкил-, (C₁-C₄)-алкокси-, нитро- и трифторметильных групп, или основная L- или D-аминокислота, такая как Аrg, НАrg, Orn, Lys, HLys, Cit, HCit, APhe или ACha, где Аrg и НАrg могут быть N-замещены (C₁-C₆)-алкильной или (С₃-С₆)-циклоалкильной группой по одному или обоим атомам азота и где Orn, Lys, HLys, APhe и ACha могут быть N-замещены одной или двумя (C₁-C₆)-алкильной или (С₃-С₆)-циклоалкильной группами или никотиноильной, изоникотиноильной, 6-метилникотиноильной, глицилникотиноильной, никотинилазаглицильной, фурильной, глицилфурильной, фурилазаглицильной, пиразинильной, пиразинилкарбонильной, пиколиноильной, 6-метилпиколиноильной, шикимильной, шикимилглицильной, Fmoc- или Вос-группой; - А6 - Gly; D-Pro; D-Ser; D-Thr; D-Cys; D-Met; D-Pen; D-(S-Me)Pen; D-(S-Et)Pen; D-Ser (OBu^t); D-Asp (OBu^t); D-Glu(OBu^t); D-Thr (OBu^t); D-Cys (OBu^t); D-Ser(OR₁), где R₁ - производная cахаров; алифатическая D-аминокислота с (C₁-C₈)-алкильной или (С₃-С₆)-циклоалкильной боковой цепью, такая как D-Ala, A-Abu, D-Aib, D-3Aib, D-Val, D-Nva, D-Leu, D-Ile, D-Tle, D-Nle, D-Hol, D-Npg, D-CPa, D-Cpa, D-Cba или D-Cha; ароматическая D-аминокислота, такая как D-Phe, D-Tyr, D-Trp, D-Nal, D-1Nal, D-дифeнил-Ala, D-aнтрил-Ala, D-фeнaнтpил-Ala, D-бензгидрил-Ala, D-флyopeнил-Ala, D-Bal, D-Pal или D-Qal, где D-Phe и D-Trp могут быть замещены одним или большим числом галогенов, (C₁-C₄)-алкил-, (C₁-C₄)-алкокси-, нитро- и трифторметильных групп; D-циклогексадиенилглицин; D-пергидронафтилаланин; D-пергидродифенилаланин, или основная L- или D-аминокислота, такая как Arg, HArg, Orn, Lys, HLys, Cit, HCit, APhe или ACha, где Arg и HArg могут быть N-замещены (C₁-C₆)-алкильной или (С₃-С₆)-циклоалкильной группой по одному или обоим атомам азота и где Orn, Lys, HLys, APhe и ACha могут быть N-замещены одной или двумя (C₁-С₆)-алкильной или (С₃-С₆)-циклоалкильной группами или никотиноильной, изоникотиноильной, 6-метилникотиноильной, глицилникотиноильной, никотинилазаглицильной, фурильной, глицилфурильной, фурилазаглицильной, пиразинильной, пиразинилкарбонильной, пиколиноильной, 6-метилпиколиноильной, шикимильной, шикимилглицильной, Fmoc- или Вос-группой; - Npg может быть N--замещен (С₁-С₄-алкильной группой, которая может быть замещена одним или несколькими атомами фтора; - А7 - основная L- или D-аминокислота, такая как Аrg, НАrg, Orn, Lys, HLys, Cit, HCit, APhe или ACha, где Аrg или НАrg могут быть N-замещены (C₁-C₆)-алкильной или (С₃-С₆)-циклоалкильной группой по одному или обоим атомам азота и где Orn, Lys, HLys, APhe и ACha могут быть N-замещены одной или двумя (C₁-С₆)-алкильной или (С₃-С₆)-циклоалкильной группами или никотиноильной, изоникотиноильной, 6-метилникотиноильной, глицилникотиноильной, никотинилазаглицильной, фурильной, глицилфурильной, фурилазаглицильной, пиразинильной, пиразинилкарбонильной, пиколиноильной, 6-метилпиколиноильной, шикимильной, шикимилглицильной, Fmoc- или Вос-группой; - Z - Gly-NH₂ или D-Ala-NH₂, равно как и их фармацевтически приемлемые соли.

Среди пептидных аналогов формулы (IIа) наиболее предпочтительными являются те, которые имеют следующую формулу (SEQ ID NO 4): pGlu-His-A3-Ser-Tyr-A6-HAA-Arg-Pro-Z (IIIа), где A3 и HAA определяются так же, как в формуле (IIа); - A6 - Gly; алифатическая D-аминокислота с (C₁-C₈)-алкильной боковой цепью или ароматическая D-аминокислота; - Z - Gly-NH₂ или группа -NHC₂H₅, и их фармацевтически приемлемые соли.

Предпочтительными являются те, у которых A3 - это Тrg; среди остальных наиболее предпочтительными являются те, у которых НАА - Npg, которая может быть N--метилирована.

Среди пептидов формулы (IIb) наиболее предпочтительными являются те, которые имеют следующую формулу (SEQ ID NO 5): Ac-D-Nal-D-pClPhe-D-Pal-Ser-A5-A6-HAA-A7-Pro-D-AlaNH₂ (IIIb), где - А5 и А7 определяются так же, как в формуле (IIb); - А6 - Gly или основная L- или D-аминокислота; - НАА определяются так же, как в формуле (IIb), и их фармацевтически приемлемые соли.

Из пептидных аналогов формулы (IIIb) особенно предпочтительными являются те, у которых HAA - Npg, которая может быть N--метилирована.

Примеры солей фармацевтически приемлемых кислот - это те соли, которые являются солями неорганических кислот, таких как соляная, бромистая, серная, фосфорная, борная, сероводородная, двухосновная фосфорная или азотная кислоты, или солями органических кислот, такими как, например, ацетат, оксалат, тартрат, сукцинат, малеат, фумарат, глюконат, цитрат, памоат, малат, аскорбат, бензоат, р-толуолсульфонат или нафталинсульфонат.

Примеры солей фармацевтически приемлемых оснований -это те соли, которые являются производными оснований щелочных и щелочно-земельных металлов, таких как натрий, калий, кальций или магний, или органических оснований, таких как амины, трометанол, N-метилглутамин и подобное.

Пептиды в соответствии с настоящим изобретением могут быть получены с применением хорошо известных в химии пептидов способов, таких как, например, синтез пептидов в растворе или твердофазный синтез пептидов. В целом, эти методики включают поэтапное присоединение одной или нескольких аминокислот, которые могут быть приемлемым способом защищены, с формированием пептидной цепочки.

Предпочтительно пептиды по настоящему изобретению синтезируют, применяя поэтапный твердофазный синтез [1, 2] с защитой группой N--Fmoc. Например, пептиды конструируют на 4-метилбензилгидриламиновой смоле (Peninsula Laboratories, Великобритания) или аминометиловой смоле (Peninsula Laboratories, Великобритания). С-концевой пролин вносят в виде 4-(Вос-пролилоксиметил)фенилуксусной кислоты. Последующее отщепление защитной группы Воc достигается обработкой сначала трифторуксусной кислотой и затем промывкой в дихлорметане и диметилформамиде (DMF) и нейтрализацией диизопропилэтиламином. Также возможным является использование смолы "Rink" - 4-(2',4'-диметоксифенил)-Fmoc-аминометилфеноксидная смола) - с применением Fmoc-стратегии синтеза [2].

Синтез включает этапы конструирования ("сборки"), расщепления и очистки в соответствии с описанным ниже.

I. Конструирование ("сборка").

Для всех пептидов была применена следующая процедура "освобождения от защиты/присоединения": 1 - промывка в DMF - 3 раза по 1 минуте; 2 - 25% пиперидина в DMF - 1 минута; 3 - 25% пиперидина в DMF - дважды по 15 минут; 4 - промывка в DMF - 7 раз по 1 минуте.

На каждом этапе использовали по 15 мл растворителя на 1 г связанной с пептидом смолы.

Присоединение всех аминокислот (при трехкратном избытке) осуществляют в DMF в присутствии ВОР, Hobt и DIEA [3]. Каждый этап присоединения контролируют по его завершению с помощью нингидринового теста [4] и при необходимости проводят повторное присоединение. Если даже после повторного присоединения данный тест сохраняет положительный сигнал, то осуществляют ацетилирование смолы (уксусный ангидрид в 10-кратном избытке и DIEA).

В целом, до этапа "освобождения от защиты/расщепления" проводят обработку трифторуксусной кислотой (TFA).

II. Расщепление.

Пептиды расщепляют со смолой, полностью освобождают от защиты путем обработки либо жидкой плавиковой кислотой (HF), либо TFA. В классическом варианте используют 10 мл HF или TFA на 1 г связанной с пептидом смолы при 0^oС в течение 45 минут или 2,5 часов в присутствии соответственно р-крезола или этандитиола (для пептидов, включающих триптофан), взятых в качестве акцепторов примесей.

После выпаривания HF полученную реакционную смесь про