Порошкообразные композиции униламеллярных липосом

Порошкообразные композиции униламеллярных липосом

Реферат

 

Изобретение относится к области фармакологии и касается порошковых композиций стабилизированных униламеллярных липосом. Изобретение заключается в том, что содержит по меньшей мере одну внешнюю липидную фазу и внутреннее водное полярное ядро, желатинированное при комнатной температуре, способ их получения, а также их применение в качестве пищевых добавок и в фармацевтических композициях, предназначенных для перорального введения (действие на липемию). Названные композиции состоят главным образом из униламеллярных липосом, содержащих внешнюю липидную фазу, состоящую в основном из липидов класса 4 (фосфолипидов) и внутреннего водного ядра, состоящего преимущественно из смеси М по меньшей мере двух различных неполимеризующихся гелеобразующих агентов G1 и G2, характеризующихся точкой фазового перехода гель-золь, выше или равной 37^oС, при условии, что G1 представляет собой гелеобразующий агент, выбираемый из желатина и каррагенанов, а G2 выбирают из каррагенанов, при этом липосомы имеют диаметр от 20 нм до 1 м, преимущественно от 50 до 500 нм, и представлены в форме частиц со средним диаметром от 10 до 1000 м, образованных из одной или нескольких названных выше липосом, покрытых оболочкой, выбранной из группы, в которую входят обезвоженный термообратимый водный гель, идентичный водному гелю внутреннего ядра, декстрины или смесь декстринов. Изобретение обеспечивает получение стабильной порошковой композиции на основе липосом. 7 с. и 14 з.п. ф-лы, 7 ил., 9 табл.

Настоящее изобретение относится к стабилизированным порошковым композициям униламеллярных липосом, содержащих по меньшей мере одну внешнюю липидную фазу и внутреннее водное полярное ядро, желатинированное при комнатной температуре, к способу их получения, а также к их применению в качестве пищевых добавок и в фармацевтических композициях (действие на липемию).

Липосомы с внутренним желатинированным ядром в суспензии в водной среде, содержащие в малых концентрациях желатинирующие вещества, были описаны J.C. Hauton, который дал им название "липогелосомы". Он, в частности, разработал способ получения таких липосом, или липогелосом (Европейский патент 0393049), которые отличаются от классических липосом тем, что инкапсулированная водная фаза находится не в жидкой, а в полутвердой гелевой форме, что препятствует слиянию липосом при их столкновениях. Такие липогелосомы получают исключительно на основе природных веществ, что минимизирует вероятность их непереносимости. В частности, в Европейском патенте 0393049 описаны липогелосомы, состоящие из межфазного бислоя в случае униламеллярных липогелосом или из нескольких концентрически расположенных межфазных бислоев в случае мультиламеллярных липогелосом и инкапсулированной внутренней желатинированной полярной водной фазы, в которой полимеризуемое или неполимеризуемое желатинированное вещество выбирают из полисахаридов, полипептидов или полиакриламидов; например, неполимеризуемое желатинируемое вещество может быть выбрано из желатина, агарозы, каррагенанов, а желатинируемое полимеризуемое вещество выбирают из полиакриламидных гелей. Названные липогелосомы обладают значительно более высокой стабильностью по сравнению с обычными липосомами, в частности, в отношении слияния при столкновении частиц.

Однако липогелосомы обладают тем недостатком, что они находятся в жидкой форме, не пригодной для приготовления твердых составов, удобных при хранении и фармацевтическом применении.

Заявитель в настоящей работе обнаружил, что, выбирая липиды внешней липидной фазы, с одной стороны, и гелеобразователи, с другой стороны, можно получить стабилизированные порошкообразные липогелосомы, обладающие особо привлекательными свойствами в качестве пищевых добавок и в качестве лекарственных средств, предназначенных для перорального введения с целью профилактики гиперлипемий (гиперхолестеринемий или гипертриглицеридемий), такие стабилизированные порошкообразные липогелосомы могут либо вводиться непосредственно пероральным путем, либо могут быть легко растворены в водной фазе непосредственно перед применением.

Сердечно-сосудистые заболевания являются главной причиной смертности и заболеваемости как во Франции, так и во всех индустриальных странах и представляют собой настоящее финансовое бремя (30 миллиардов франков в 1992 г.). Эти цифры настораживают: 36,4% всех смертей обусловлены сердечно-сосудистыми болезнями, из которых 20% возникают из-за патологий сердца и 12% из-за несчастных случаев церебрально-сосудистого происхождения. С целью сравнения укажем, что далее следует смертность, обусловленная различными формами рака, и насильственные смерти (случайные или умышленные), доли которых составляют соответственно 24,2 и 9,4%. Подобная частота кардио-церебрально-сосудистых случаев в странах Запада делает атеросклероз главным социально-экономическим бичом в сфере здравоохранения.

Из сказанного выше следует, что необходима долгосрочная профилактика. Снижения холестеринемии можно достичь соблюдением гиполипидной диеты с использованием, или без использования фармакологических продуктов. Наиболее широко используемым лицами из группы риска (страдающими очень сильной холестеринемией) средством является связывание в кишечнике солей желчных кислот с помощью холестирамина, а продолжительное лечение этой синтетической смолой, как показали исследования, снижает частоту сердечных осложнений (B.M. Rifkind, Atherosclerosis reviews, 1987, 18, 59-70). Однако планирование долгосрочной систематической профилактики с применением этого продукта представляется затруднительным по причине трудностей в обращении с продуктом и из-за малоприемлемого для больных побочного действия.

Строгая гиполипидная диета представляется наиболее эффективным средством для лечения конститутивного атеросклероза, но опыт показывает, что такое лечение чаще всего невозможно, так как принесение в жертву гастрономического удовольствия затрагивает качество жизни и при этом затруднительно в исполнении в контексте повседневной жизни общества в развитых странах.

Используются и другие воздействующие на внутреннюю среду гиполипемианты, такие как ингибиторы HMG СоА-редуктазы, которые тормозят синтез эндогенного холестерина и увеличивают количество гепатических рецепторов атерогенных липопротеинов, уменьшая тем самым их концентрацию в плазме (M.S. Brown et al., Atherosclerosis reviews. 1987, 18, 85-93).

Однако применение медикаментозных профилактических мер для внешне здоровых лиц, у которых липидограмма крови находится в пределах, которые считаются "нормальными", является спорным по причине побочных эффектов.

Долгосрочная профилактика атеросклероза при применении ее в масштабах всего населения требует продуктов, длительно сохраняющих свою активность, легких в обращении и проявляющих минимум нежелательных побочных эффектов.

Необходимо, таким образом, дополнить разумную диетотерапию воздействием на кишечник с целью уменьшения липолиза триглицеридов в свободные жирные кислоты и моноглицериды и понижения продуцирования мицеллярной фазы, из которой происходит всасывание продуктов липолиза, а также холестерина.

Пищевые триглицериды, гидролиз которых начинается в желудке (с помощью подъязычной и желудочной липаз) и продолжается в двенадцатиперстной кишке (с помощью панкреатической липазы), организуются в проксимальном участке кишечника в форме эмульсии, в однослойную пограничную фазу которой, образованную преимущественно пищевыми и желчными фосфолипидами (G.Naibone et at., Lipids, 1974, 9, 765-770), встраиваются продукты липолиза (моноглицериды, свободные жирные кислоты), а также часть солей желчных кислот. Пограничная кишечная фаза не может диссоциировать на мицеллы, поскольку концентрация молекул детергентов в этой фазе (соли желчных кислот, ионизованные жирные кислоты, лизофосфолипиды) не достигает необходимого порога (критической концентрации мицеллообразования).

С целью значительного ингибирования внутрикишечного липолиза триглицеридов и уменьшения или даже подавления образования мицеллярной фазы, из которой осуществляется всасывание продуктов липолиза, J.C.Hauton (Cah. Nutr. Diet., 1990, 25, 2, 87-91) обнаружил, что необходимо: - перевести часть пищеварительных липаз из пограничной фазы частиц липидной эмульсии в конкурирующую пограничную фазу, и - перевести значительное количество желчных кислот в названную конкурирующую пограничную фазу, чтобы снизить их концентрацию ниже определенного порога с целью воспрепятствовать продуцированию мицеллярной фазы.

Проблема, которую необходимо разрешить, состоит таким образом в том, чтобы ввести в проксимальный отдел кишечника в процессе пищеварения нетоксичную конкурирующую пограничную фазу, обладающую максимумом поверхности при как можно меньшем объеме. Наиболее пригодной для этой цели структурой является структура мелких униламеллярных липосом. С точки зрения промышленного производства и по причинам, связанным с обращением и хранением, такие липосомы должны быть устойчивыми. Порошковые композиции стабилизированных липосом по изобретению позволяют эффективно решить эту проблему, с одной стороны, благодаря наличию желатинированного внутреннего ядра и, с другой стороны, благодаря тому, что липосомы имеют форму порошка, который может либо вводиться непосредственно внутрь, либо легко растворяться в водной фазе непосредственно перед применением.

С учетом сказаного выше заявитель поставил своей целью получить стабильную порошковую композицию на основе липосом, которая в лучшей степени, чем существующие композиции, отвечает практическим требованиям, благодаря тому, что, кроме значительно улучшенной стабильности, композиция по изобретению является также эффективной в отношении как профилактики, так и лечения гиперлипемий.

Целью настоящего изобретения является порошковая композиция для перорального введения, отличающаяся тем, что - она в основном состоит из униламеллярных липосом, содержащих внешнюю липидную фазу, состоящую в основном из липидов класса 4 (фосфолипидов) за исключением веществ класса 3 (холестерин, неионизованные высшие жирные кислоты) и веществ класса 5 (соли желчных кислот, производные фузидовой кислоты), и внутреннего водного ядра, образующего термообратимый водный гель, простирающийся до внешней липидной фазы, причем это внутреннее водное ядро состоит преимущественно из смеси М по меньшей мере двух различных неполимеризующихся гелеобразующих агентов G1 и G2, а точка фазового перехода гель-золь ядра выше или равна 37^oС, при этом G1 представляет собой гелеобразующий агент, выбираемый из желатина и каррагенанов, таких как каппа-каррагенаны, а G2 выбирают из каррагенанов, отличающихся по своим свойствам от каррагенанов, выбираемых для G1, таких как иота-каррагенаны и целлюлозы, такие как гидроксипропилцеллюлоза, причем диаметр липосом составляет от 20 нм до 1 м, преимущественно от 50 до 500 нм; и - она имеет форму частиц со средним диаметром от 10 до 1000 м, образованных из одной или нескольких названных выше липосом, покрытых оболочкой, выбранной из группы, в которую входят обезвоженный термообратимый водный гель, идентичный водному гелю внутреннего ядра, декстрины или смесь декстринов, таким образом, что композиция содержит в среднем от 10¹⁶ до 10¹⁸ липосом на 1 г порошка.

Применение таких порошковых композиций липосом для профилактики и терапии атеросклероза и ожирения может оказаться весьма выгодным, делая менее жесткими и, следовательно, более приемлемыми гиполипидические диеты, предписываемые больным, проходящим лечение от названных выше заболеваний.

Такие порошковые композиции удивительным образом сохраняют целостность содержащихся в них липогелосом, остающихся устойчивыми как в порошковой форме, так и будучи переведенными в суспензию благодаря сохранению целостности составляющих их липидов (отсутствие продуктов распада) и сохранению постоянства характеристик гелеобразующих агентов, в частности, смеси G1 и G2 (вязкость, прочность геля и разрывное усилие, молекулярные массы). Композиции, таким образом, содержат стабилизированные порошковые липогелосомы.

Гелеобразующие агенты G1 и G2 различаются, в частности, по вязкости, молекулярной массе и точке перехода гель-золь (т.е. температуре плавления). У гелеобразующих агентов G1 эта температура ниже или равна 45^oС, в то время как у гелеобразующих агентов G2 она выше или равна 45^oС.

Смесь М по меньшей мере двух определенных выше гелеобразующих агентов G1 и G2 обладает текстурометрическими характеристиками (прочность геля и разрывное усилие), особенно привлекательными с точки зрения устойчивости полученных липосом. В частности, целесообразно, чтобы смесь М по меньшей мере двух гелеобразующих агентов G1 и G2 обладала при 5^oС характеристиками релаксации от 70 до 100 и предпочтительно от 81 до 89% и усилием разрыва от 1000 до 1600 и предпочтительно от 1109 до 1503 г.

В соответствии с предпочтительным вариантом названной композиции, названное выше внутреннее водное ядро липосом содержит также по меньшей мере один стабилизирующий агент олигосахаридной природы и/или по меньшей мере один агент, регулирующий осмолярность среды, и по меньшей мере один поверхностно-активный агент.

Порошковая композиция предпочтительно содержит 25-75 мас. % липидов класса 4, 5-45 мас.% гелеобразующих агентов, от 0 до 70 мас.% стабилизирующего агента олигосахаридной природы, от 0 до 15 мас.% агента, регулирующего осмолярность среды, от 0 до 20 мас.% поверхностно-активных агентов и от 0 до 15 и более предпочтительно 8-12 мас.% декстрина (главным образом мальтодекстрина или циклодекстрина).

В соответствии с изобретением, часть гелеобразующего агента включена во внутреннюю водную фазу названных выше липогелосом, в то время как другая часть гелеобразующего агента образует оболочку вокруг внешнего липидного слоя этих липогелосом.

Согласно другому предпочтительному варианту реализации порошковой композиции, последняя содержит 70-95% гелеобразующего агента G1 и 5-30% гелеобразующего агента G2.

Согласно еще одному предпочтительному варианту реализации порошковой композиции по изобретению, стабилизирующим агентом олигосахаридной природы может быть сахароза, трегалоза или другой защитный агент.

Согласно еще одному предпочтительному варианту реализации порошковой композиции по изобретению, липиды, образующие внешнюю липидную фазу липосом, преимущественно содержат 20-25% фосфатидилхолина, 10-18% фосфатидилэтаноламина и 9-15% фосфатидилинозита.

Названные фосфолипиды получают главным образом из лецитинов сои с повышенным содержанием фосфолипидов.

В качестве фосфолипидов могут быть использованы также очищенные фосфолипиды, индивидуально или в смеси, преимущественно в тех же количествах, что и названные выше фосфолипиды.

Предметом настоящего изобретения является также способ получения порошковой композиции по изобретению, в которой внешняя оболочка частиц содержит часть термообратимого водного геля, отличающаяся тем, что он включает следующие стадии: 1) Приготовление дисперсии липосом с желатинированным внутренним ядром (липогелосомы) в водной фазе путем (а) приготовления раствора по меньшей мере одного подходящего гелеобразующего агента, в частности, смеси М гелеобразующих агентов G1 и G2, растворением названных гелеобразующих агентов при медленном перемешивании и при температуре, превышающей температуру фазового перехода гель-золь названных гелеобразующих агентов, в водном растворе, (b) введения липидов в полученный на стадии (а) раствор при медленном перемешивании смеси в течение менее 5 час, преимущественно в вакууме, с образованием эмульсии, и (с) получения дисперсии липосом с желатинированным внутренним ядром (липогелосомы) в водной фазе, содержащей названные гелеобразующие агенты, при быстром перемешивании полученной на стадии (b) эмульсии, преимущественно в вакууме, и 2) получение порошкового продукта путем проведенной подходящим образом непосредственной сушки полученной дисперсии.

Согласно предпочтительному способу осуществления последней операции, сушку осуществляют распыливанием, коацервацией, сушкой в тонком слое или грануляцией.

Предметом настоящего изобретения является также способ получения порошковой композиции по изобретению, в которой внешняя оболочка частиц содержит часть термообратимого водного геля и/или декстрин, отличающаяся тем, что он включает следующие стадии: 1) приготовление дисперсии липосом с желатинированным внутренним ядром (липогелосомы) в водной фазе путем (а) приготовления раствора по меньшей мере одного подходящего гелеобразующего агента, в частности, смеси М гелеобразующих агентов G1 и G2, растворением названных гелеобразующих агентов при медленном перемешивании и при температуре, превышающей температуру фазового перехода гель-золь названных гелеобразующих агентов, в водном растворе, (b) введения липидов в полученный на стадии (а) раствор при медленном перемешивании смеси в течение менее 5 ч, преимущественно в вакууме, с образованием эмульсии, и (с) получения дисперсии липосом с желатинированным внутренним ядром (липогелосомы) в жидкой водной фазе, содержащей названные гелеобразующие агенты, при быстром перемешивании полученной на стадии (b) эмульсии, преимущественно в вакууме; 2) удаление по крайней мере части водной жидкой фазы, содержащей названные гелеобразующие агенты, в которой диспергированы названные выше липосомы; 3) добавление по меньшей мере одного подходящего декстрина; 4) получение порошкового продукта сушкой распыливанием полученного на стадии (3) продукта.

Согласно предпочтительному способу осуществления этого способа, стадию (2) удаления по крайней мере части водной жидкой фазы, содержащей названные гелеобразующие агенты, осуществляют разбавлением и/или фильтрацией.

В соответствии со способами получения согласно изобретению, водный раствор стадии (а) содержит дополнительно агент регуляции осмолярности среды (например, 0,9%-ный NaCl) и/или стабилизирующий агент олигосахаридной природы и/или поверхностно-активный агент.

Удивительным образом названные выше способы позволяют получить порошковую композицию устойчивых липосом с желатинированным внутренним ядром (липогелосом) всего лишь в одну стадию, включающую операцию созревания составляющих в водной фазе с малой скоростью и последующую операцию высокоскоростного диспергирования (образование липогелосом), включают стадию, в которой получают устойчивую, морфологически гомогенную дисперсию липогелосом в жидкой фазе, которая может быть подвергнута сушке; причем такая дисперсия липосом с желатинированным внутренним ядром характеризуется следующей морфологией: везикулярная структура с диаметром от 20 нм до 1 м, преимущественно от 70 до 200 нм, микроскопические наблюдения в негативной окраске, при замораживании-скалывании с помощью криотрансмиссионной микроскопии и ядерной микроскопии: везикулы или везикулярные агрегаты с храктерным для фосфолипиднык бислоев видом; негативная окраска позволяет наблюдать более или менее выраженное наличие смеси М гелеобразующих агентов, обволакивающей внешний фосфолипидный слой, и полидисперсность липосом с желатинированным внутренним ядром, составляющая от 10 до 55 и преимущественно от 30 до 50%.

Описанный способ обладает тем преимуществом, что он воспроизводим и прекрасно реализуется в промышленном масштабе.

Способ, кроме того, обладает тем преимуществом, что он менее трудоемок по сравнению с существующими способами, в которых необходимы стадии ультразвуковой обработки, экструзии или удаления детергентов, как описано в Европейском патенте 0393049.

Согласно преимущественному варианту осуществления названных выше способов, стадию (b) проводят преимущественно при скорости среза ниже 200 с^-1; в общем случае скорость среза дается в виде следующего отношения: скорость перемешивающего модуля, деленная на расстояние между внутренней стенкой реактора и дистальным концом перемешивающей лопатки (называемое также воздушным зазором).

Предметом настоящего изобретения является также пищевая добавка, способная регулировать холестеринемию и триглицеридемию, отличающаяся тем, что она содержит определенную порошковую композицию, которая может быть объединена с каким-либо подходящим эксципиентом.

Предметом настоящего изобретения являются также предназначенные для перорального введения фармацевтические композиции, содержащие порошковую композицию по изобретению и по меньшей мере один подходящий носитель; такие композиции особенно пригодны для ослабления холестеринемии и триглицеридемии или в качестве добавки при лечении с использованием одного или нескольких активных начал, стимулирующих повышение уровня трансаминаз или какого-либо другого токсичного маркера; так, совершенно неожиданным образом, порошковые композиции стабилизированных липосом по изобретению в значительной степени препятствуют повышению уровня гепатических глутамат-оксалацетат-трансаминазы и глутамат-пируват-трансаминазы.

Как пищевая добавка, так и фармацевтические композиции могут находиться как в твердом виде (желатинозная капсула, таблетка, водорастворимый порошок), так и в жидком виде (порошковая композиция по изобретению, повторно растворенная в водном растворе). Такие формы пригодны для перорального введения.

Как пищевая добавка, так и фармацевтические композиции по изобретению предпочтительно предназначены для применения в разовой дозе, соответствующей разовой дозе фосфолипидов, входящих в состав липогелосом по изобретению, составляющей от 0,01 до 0,07 г/кг, т.е. суточной дозе от 0,03 до 0,2 г фосфолипидов липогелосом на 1 кг тела при двух- или трехразовом приеме.

Кроме изложенных выше положений, изобретение содержит и другие положения, которые будут выявлены из следующего ниже изложения, которое иллюстрируется примерами осуществления способа, являющегося предметом изобретения, а также фиг. 1-7, в которых: - фиг. 1 иллюстрирует процентное распределение классов радиомеченых липидов (AG - жирные кислоты; MG - моноглицериды; DG - диглицериды; TG - триглицериды), присутствующих в содержимом желудка крыс, забитых через 2 ч после приема пищи; - фиг. 2 иллюстрирует процентное распределение радиомеченных липидов в просвете кишечника по отношению к количеству (в рвм) липидов, извлеченных из желудка крыс, забитых через 2 ч после приема пищи (seg. int. - кишечный сегмент); фиг. 3 показывает процентное распределение классов липидов (жирные кислоты; моноглицериды; диглицериды; триглицериды) с радиоактивной меткой, присутствующие в просвете кишечника крыс, забитых через 2 ч после кормления (seg. intestinal-кишечный сегмент); - фиг.4 показывает процентное содержание липидов с радиоактивной меткой, обнаруженных в слизистой кишечника, по отношению к количеству (в рвм) липидов, прошедших через желудок крыс, забитых через 2 ч после кормления (seg. muq. - сегмент слизистой); - фиг.5 показывает процентное содержание липидов с радиоактивной меткой, обнаруженных в плазме, по отношению к количеству (в рвм) липидов, прошедших через желудок крыс, забитых через 2 ч после кормления; - фиг.6 показывает процентное содержание липидов с радиоактивной меткой, обнаруженных в печени, по отношению к количеству (в рвм) липидов, прошедших через желудок крыс, забитых через 2 ч после кормления; - фиг. 7 показывает количество липидов с радиоактивной меткой (в рвм), обнаруженных в слепой кишке и в экскрементах крыс, забитых через 24 ч после кормления.

Само собой разумеется, эти примеры приведены для наглядной иллюстрации объекта изобретения и ни в коем случае не ограничивают его объем.

ПРИМЕР 1: Текстурометрические измерения смеси гелеобразующих агентов G1 и G2 а) Материалы и методы Измерения проводят с помощью аппарата ТА-ХТ2i компании Rheo. Это исследование относится к поведению гелей, состоящих из смеси желатина, йота- и каппа-каррагенанов в тесте на разрыв и релаксацию.

Концентрация образцов: Смесь желатин/йота-каррагенаны/каппа-каррагенаны (80/17,5/2,5) - 7,5% (маc./об) в среде 5 мМ Na₂HPO₄ и 0,9 или 2% NaCl.

Приготовление раствора гелеобразующих агентов: Хлорид натрия растворяют в смесителе, оборудованном турбиной и планетарной мешалкой и содержащем очищенную воду (15 мин при 10 об/мин), поднимают температуру в смесителе до 75^oС (перемешивание при 10 об/мин в течение 45 мин), добавляют в смеситель при 75^oС гелеобразующие агенты (желатин, йота- и каппа-каррагенаны), запускают в действие турбину при скорости перемешивания 1500 об/мин; продолжительность стадии растворения составляет приблизительно 30 мин; растворение заканчивается, когда раствор становится прозрачным и не содержит взвешенных частиц.

Приготовление образцов: При проведении испытаний на релаксацию 45 мл геля разжижают при нагревании в плоскодонной чашке Петри с внешним диаметром 922 мм. При испытаниях на разрыв 30 мл геля разжижают при нагревании в плоскодонном кристаллизаторе с внешним диаметром 502 мм. Получают гель при охлаждении до температуры ниже или равной 37^oС. Время созревания гелей, которое соответствует максимальной гидратации гелей, составляет 2,5 суток в покое при температуре испытаний.

Условия проведения испытаний: При испытаниях на релаксацию к гелю в течение определенного времени прилагается сдавливающая сила. Используемый для этого подвижный элемент представляет собой алюминиевый цилиндр диаметром 25 мм, характеризующийся скоростью предперемещения 1,0 мм/с, скоростью перемещения 0,5 мм/с и скоростью после-перемещения 10,0 мм/с. Элемент перемещается на 1,0 мм за 30 сек.

При испытаниях на разрыв используемый подвижный элемент представляет собой эбонитовый цилиндр диаметром 10 мм со скоростью пред-перемещения, перемещения и после-перемещения, равной 1,0 мм/с. Элемент перемещается на 12 мм.

b) Результаты испытаний при 5^oС с содержанием NaCl 0,9% Релаксация (%) минимальное значение: 812,2 максимальное значение: 890,8 Разрывная сила (г) минимальное значение: 1109125 максимальное значение: 150335 c) Зависимость результатов от температуры и различной концентрации NaCl Условия проведения испытаний те же, что и в п.(а), за исключением того, что касается перемещения подвижного элемента, используемого при испытаниях на релаксацию (перемещение на 20% общей толщины геля).

Релаксация (%) при 5^oС NaCl 0,9%: 890,8 NaCl 2%: 900,2 при 25^oС NaCl 0,9%: 323,9 NaCl 2%: 384,4 при 37^oС NaCl 0,9%: 363,7 NaCl 2%: 404,9 Разрывная сила (г) при 5^oС NaCl 0,9%: 141366 NaCl 2%: 1114143 при 25^oС NaCl 0,9%: 2112,7 NaCl 2%: 1731,5 при 37^oС NaCl 0,9%: 25,72,4 NaCl 2%: 45,73,9 ПРИМЕР 2: Способ получения порошковой композиции по изобретению (ЛГС) (с оболочкой, состоящей из обезвоженных гелеобразующих агентов) 1) Приготовление дисперсии липосом с желатинированным внутренним ядром (липогелосомы) - Составляющие: Лецитины сои 11,915 кг (7,943%) Желатин В150 7,149 кг (4,766%) Йота-каррагенаны 1,565 кг (1,043%) Каппа-каррагенаны 0,222 кг (0,148%) Сахароза 8,936 кг (5,957%) Хлорид натрия 1,073 кг (0,715%) Очищенная вода 119,15 кг (79,43%) СУММАРНО веществ 150,01 кг (100%) а) Приготовление раствора гелеобразующих агентов Приготовление производится так же, как в примере 1. Характеристики раствора проверяются путем отбора проб, после чего добавляют стабилизирующий олигосахаридный агент (сахарозу).

b) Введение - фосфолипидов в полученный в п.(а) раствор Лецитины сои помещают в смеситель, в котором планетарная мешалка вращается со скоростью 10 об/мин и турбина со скоростью 1500 об/мин в течение 5 ч в вакууме (до образования эмульсии).

- заключительное диспергирование при увеличении скорости перемешивания планетарной мешалкой (25 об/мин) и турбиной (2500 об/мин) в течение времени, достаточного для получения полидисперсности ниже 40%.

Получают дисперсию липогелосом в водной фазе.

Изучение отобранных в конце диспергирования образцов обнаруживает везикулярные структуры с диаметром 12030 нм.

Микроскопические наблюдения в негативной окраске, при замораживании-скалывании, криотрансмиссионной микроскопии и ядерной микроскопии: везикулы или везикулярные агрегаты с характерным для фосфолипидных бислоев видом; негативная окраска позволяет наблюдать более или менее выраженное наличие внешнего гелеобразующего агента в зависимости от выбранного способа получения и/или отделения.

2) Сушка полученной дисперсии Полученную дисперсию липогелосом в водной фазе переливают в сушилку под вакуумом (50-100 мбар) в течение приблизительно 4 ч. Получают достаточно гомогенный, очень светлый соломенно-желтый порошок, содержащий зерна с диаметром от 0,1 мкм до 1 мм. Могут быть использованы и другие способы сушки.

При наблюдениях в электронном микроскопе наблюдается уменьшение размеров липидных везикул, обусловленное их обезвоживанием. Наряду с этим обнаруживают, что липогелосомы в жидком состоянии часто агрегированы внутри гомогенной желатинированной оболочки, находясь в окружении множества изолированных везикулярных структур. Стадия сушки превращает эту гелеобразную оболочку в сухие нити гелеобразующего материала на поверхности как агрегатов, так и изолированных везикулярных структур. Заявитель полагает, что эта морфологическая разница является вероятной причиной различного поведения сухих структур и влажной формы липогелосом в отношении метаболизма липидов.

Возможен вариант сушки, в котором дисперсию липогелосом в водной фазе распределяют непосредственно на сушилке с вращающимися барабанами (температура барабанов 120-150^oС, скорость вращения 3-6 об/мин). Полученные "чешуйки" после этого размалывают и рассеивают на подходящем сите. Получают порошок липогелосом (называемых далее ЛГС) с указанными выше характеристиками.

ПРИМЕР 3: Способ получения порошковой композиции по изобретению (ЛГС) (с оболочкой, содержащей мальтодекстрины) 1) Приготовление дисперсии липосом с желатинированным внутренним ядром (липогелосомы): - Составляющие: Лецитины сои 11,915 кг (7,943%) Желатин В150 7,149 кг (4,766%); Йота-каррагенаны 1,565 кг (1,043%) Каппа-каррагенаны - 0,222 кг (0,148%) Сахароза 8,936 кг (5,957%) Хлорид натрия 1,073 кг (0,715%) Очищенная вода 119,15 кг (79,43%) СУММАРНО веществ 150,01 кг (100%) a) Приготовление раствора гелеобразующих агентов Приготовление производится так же, как в примере 2.

b) Введение фосфолипидов в полученный в п.(а) раствор Лецитины сои помещают в смеситель, в котором планетарная мешалка вращается со скоростью 10 об/мин и турбина со скоростью 1500 об/мин в течение 5 ч в вакууме (до образования эмульсии).

- заключительное диспергирование при увеличении скорости перемешивания планетарной мешалкой (25 об/мин) и турбиной (2500 об/мин) в течение времени, достаточного для получения полидисперсности ниже 40%.

Получают дисперсию липогелосом в водной фазе.

Изучение отобранных в конце диспергирования образцов обнаруживает везикулярные структуры с диаметром 12030 нм.

Микроскопические наблюдения в негативной окраске при замораживании-скалывании криотрансмиссионной микроскопии и ядерной микроскопии: везикулы или везикулярные агрегаты с характерным для фосфолипидных бислоев видом; негативная окраска позволяет наблюдать более или менее выраженное наличие внешнего гелеобразующего агента в зависимости от выбранного способа получения и/или отделения.

2) Дисперсию ЛГС во внешней гелеобразующей среде разбавляют в отношении 1/10 0,9%-ным раствором NaCl, затем фильтруют на фильтре 300 или 500 кДа (тангенциальная фильтрационная система "Open Channel", PAL FILTRON) при 37^oС. После концентрирования ЛГС получают дисперсию, в которой содержание сухих веществ составляет от 37 до 50% (маc./об). Добавляют эквивалентное количество (4-6 мас. %) мальтодекстрина. После растворения и гомогенизации смесь распыливают (например, с помощью распылителя направленного действия NIRO). Получают частицы, в которых внешняя оболочка содержит мальтодекстрины и состав которых примерно следующий: ЛГС, концентрированные до 44,6% сухого материала 1500 г Мальтодекотрин 80 г Общий теоретический атомизат ЛГС 830 г Полученное количество (выход 84%) 760 г Распыление проводят в следующих условиях: Температура воздуха на входе: 180-200^oС Температура воздуха на выходе: 80-95^oС Давление в головке турбины: приблизительно 4 бар Температура распыляемого раствора на выходе: 20-45^oС.

ПРИМЕР 4: Влияние порошковой композиции из примера 2 на всасывание из кишечника пищевых липидов у крыс в период после кормления Это исследование проводится на крысе с нормальным липидемическим статусом в период после кормления. Нормальный липидемический статус позволяет изучение реальных эффектов липогелосом, не искаженных метаболическими нарушениями, порождаемыми патологическим состоянием. Период после кормления делает возможным изучение механизмов путем "фотографирования" эффектов липогелосом в конкретный момент пищеварения.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ Животные и диеты *Животные Соблюдаются официальные французские нормы (n^o 87-848 от 19 октября 1987 г. ) и европейские нормы (n^o 86-609 от 24 ноября 1986 г.) по уходу и использованию лабораторных животных.

В качестве животных использованы крысы-самцы Wistar (Iffa-Credo, I'Arbresle, Франция) весом 300 г. Во время 10-дневного адаптационного периода крысы помещались в клетки в климатизированном помещении (температура 21^oС, влажность 50%) с циклом свет-темнота 12 на 12 ч; воду и корм давали ad libitum за 48 ч до эксперимента. Крыс помещали в клетки-контейнеры с глюкозной диетой 50 г/л. За 24 ч до эксперимента крыс переводили на диету, включающую только воду ad iibitum, с целью недопущения копрофагии.

Таким образом, желудки крыс перед интубацией тест-корма освобождены от посторонних материалов.

Шесть групп мышей составлены произвольным образом: две группы контрольные (К), две группы "липогелосомные" (ЛГС) и две группы "ингредиентные" (И), животных из которых забивают через 2 или 24 ч после приема пищи. Число крыс в группах зависит от предъявляемых для каждой группы экспериментальных требований.

*Тест-корм Каждый тест-корм содержит липидную эмульсию, к которой непосредственно перед применением добавляют липогелосомы (группа ЛГС), ингредиенты липогелосом (группа И) или хлорид натрия (группа К).

- Липидная эмульсия: 522,5 мг смеси, содержащей триолеин, холестерин и лецитины сои (таблица 1), добавляют к водному раствору хлорида натрия, сахарозы и альбумина. Препарат эмульгируют с помощью перемешивания магнитной мешалкой и действия ультразвуком. Каждую неделю препарат обновляют. Диаметр частиц эмульсии контролируется каждый день с помощью гранулометра (Сара 700, Horiba, Kyoto, Япония). Не наблюдалось никаких отклонений от среднего диаметра 2,97 мкм в различные дни.

В каждом тест-корме величины удельной радиоактивности триолеина-¹⁴С и холестерина-³H составляли соответственно 68,45 и 4,27 кБк/ммоль.

- Липогелосомы: Порошковую композицию из примера 2 растворяют в воде до получения концентрации фосфолипидов 39,47 мг/мл; диаметр суспендированных липогелосом, контролируемый гранулометрически и с помощью электронного микроскопа, постоянен и составляет 164,9 нм (средняя величина).

- Ингредиенты липогелосом: Используются составляющие липогелосомы сырьевые материалы, указанные в примере 2. Фосфолипиды и гелеобразующую смесь приготовляют отдельно.

- Введение тест-корма: Непосредственно перед применением 2,2 мл препарата липогелосом или ингредиентов смешивают в шприце с 1,5 мл липидной эмульсии для групп ЛГС и И. Эквивалентн