Фармацевтические композиции на основе -циклодекстрина для перорального введения аналогов рилизинг-гормона лютеинизирующего гормона (lh-rh)

Фармацевтические композиции на основе -циклодекстрина для перорального введения аналогов рилизинг-гормона лютеинизирующего гормона (lh-rh)

Реферат

 

Изобретение относится к области медицинской эндокринологии. Сущность изобретения составляет применение по новому назначению -циклодекстрина, а именно для обеспечения перорального введения пептидных аналогов рилизинг-гормона лютеинизирующего гормона (LH-RH). Изобретение содержит также сведения о фармацевтических композициях, включающих -циклодекстрин или его производные и упомянутые пептидные аналоги LH-RH. Технический результат изобретения - расширение арсенала неинвазивных средств для устранения эндокринологических нарушений у женщин. 2 c. и 32 з.п. ф-лы, 7 ил., 4 табл.

Настоящее изобретение относится к области фармации. Более конкретно изобретение относится к применению -циклодекстрина или его производных для получения фармацевтических композиций для перорального введения пептидных аналогов LH-RH (рилизинг-гормона лютеинизирущего гормона). Изобретение относится также к пероральным фармацевтическим композициям, содержащим пептидные аналоги LH-RH в комбинации с -циклодекстрином.

Природные и модифицированные циклодекстрины (CDs) являются хорошо известными ингредиентами, применяемыми в самых разнообразных фармацевтических составах, обладающих преимуществом в одном или нескольких своих свойств, относящихся к растворению препарата и его стабилизации (Loftsson and Brewster, 1996, J. Pharm. Sci. , 85 (10):1017-1025) или к общему улучшению доставки препарата in vivо (Rajewski and Stella, 1996, J. Pharm. Sci., 85 (11): 1142-1169). Циклодекстрины представляют собой циклические олигосахариды, содержащие, по меньшей мере, шесть остатков -D-(+)-глюкопиранозы, соединенные (1-4)-гликозидной связью (Nash, Handbook of Pharmaceutical Excipiеnts, ed. by Wade and Weller, 1994, American Pharmaceutical Association, Washington, and The Pharmaceutical Press, London, pp.145-148); тремя наиболее известными циклодекстринами являются -, - и -CD, которые состоят из 6, 7 и 8 углеводных остатков соответственно. Многочисленные производные каждого типа циклодекстринов могут быть получены путем случайной или направленной модификации одной, нескольких или всех свободных гидроксильных групп углеводных остатков.

Рилизинг-гормон лютеинизирущего гормона является нейрогормоном, продуцируемым нейронами гипоталамуса и секретируемым в гипофизарную портальную сосудистую систему для стимуляции высвобождения лютеинизирующего гормона (LН) и фолликулостимулирующего гормона (FSН) с помощью гипофиза. В свою очередь, LH и FSH регулируют эндокринную и герминативную функции яичника у женщин и семенника у мужчин. Рилизинг-гормон лютеинизирующего гормона является пептидом следующей структуры: pGlu-His-Trp-Ser-Tyr-Gly-Leu-Arg-Pro-Gly-NН₂. В течение ряда лет были синтезированы многочисленные нормальные и укороченные, линейные или циклические пептидные аналоги LH-RH, включающие природные, необычные или химически модифицированные аминокислоты и обладающие мощными агонистическими или антагонистическими свойствами (Kartеn and Rivier, 1986, Endocr. Rev., 7 (1):44-46; Dutta, 1988, Drugs of the Future, 13 (8): 761-787; Kutscher et al., 1997, Angew. Chem. Int. Ed., Engl., 36:2148-2161. Однако из-за их полной или частично пептидной структуры все эти аналоги обладают низкой биодоступностью и биологической активностью.

К настоящему времени сообщено только о непероральном введении пептидных аналогов LH-RH. Например, Matsubara et al. (1996, J. Pharm. Sci., 84 (11): 1295-1300) описывают назальную лекарственную форму бусерелина на основе диметил--CD с улучшенной биодоступностью.

Для того чтобы создать удобства для пациентов, необходимо обеспечить лекарственные формы, которые облегчают пероральное применение пептидных аналогов LH-RH.

Неожиданно было обнаружено, что -CD или их производные усиливают биологическую активность пептидных аналогов LH-RH при пероральном применении.

Так, в соответствие с одним из этих признаков изобретение относится к применению -циклодекстрина или его производных с целью получения фармацевтических композиций для перорального введения пептидных аналогов LH-RH.

Примеры пептидных аналогов LH-RH, которые могут использоваться в объеме изобретения, включают аналоги, описанные в заявках на международные патенты WO 98/21229 и WO 98/55505, содержание которых включается в виде ссылки, а также стандартные агонисты и антагонисты LH-RH, такие, как, например, бусорелин, нафарелин, лейпрорелин, госерелин, гистрелин, трипторелин, деслорелин, лутрелин, аворелин, цетрореликс, антид, ганиреликс, азалин В, антареликс, детиреликс, рамореликс, тевереликс или абареликс.

Предпочтительно эти пептидные аналоги имеют формулу (SEQ ID :1, последовательность с идентификационным номером 1): A1-A2-A3-A4-A5-A6-A7-A8-Pro-Z (A), где A1 означает pGlu; D-pGlu; Sar; AcSar; Pro или их производные, такие, как AcPro, ForPro, OH-Pro, Ac-OH-Pro, дегидро-Рrо или Ас-дегидро-Pro; Ser; D-Ser; Ac-D-Ser; Thr; D-Thr; Ac-D-Thr; или ароматическую аминокислоту, которая может быть ацилированной, такой, как D-Phe; D-HPhe, D-Tyr, D-HTyr, D-Trp, D-2MeTrp, D-Nal, D-1Nal, D-дифенил-Аlа, D-Bal, D-Pal, D-4Раl или D-Qal, где D-Phe, D-Hphe, D-Tyr, D-HTyr и D-Trp могут быть замещены одним или несколькими атомами галоида, (C₁-C₄)-алкильной, (C₁-C₄)-алкоксильной, нитро- или трифторметильной группами; А2 означает непосредственную связь; His или ароматическую D-аминокислоту, такую, как D-Phe, D-HPhe, D-Tyr, D-HTyr, D-Trp, D-2MeTrp, D-Nal, D-1Nal, D-дифeнил-Ala, D-Bal, D-Pal, D-4Pal или D-Qal, где D-Phe, D-Hphe, D-Tyr, D-HTyr и D-Trp могут быть замещены одним или несколькими атомами галоида, (C₁-C₄)-алкильной, (C₁-C₄)-алкоксильной, нитро- или трифторметильной группами; A3 означает ароматические L- или D-аминокислоты, такие, как Phe, HPhe, Тyr, НТyr, Тrp, 2MeTrp, Nal, 1Nal, дифенил-Ala, Bal, Pal, 4Pal или Qal, где Phe, HPhe, Тyr, НТyr и Тrp могут быть замещены одним или несколькими атомами галоида, (C₁-C₄)-алкильной, (C₁-C₄)-алкоксильной, нитро- или трифторметильной группами; A4 означает Ala, Ser, D-Ser, MeSer, Ser(OBu^t), Ser(OBzl) или Thr; А5 означает ароматическую L-аминокислоту, такую, как Phe, HPhe, Тyr, HTyr, Trp, 2MeTrp, Nal, 1Nal, дифенил-Ala, Bal, Pal, 4Pal или Qal, где Phe, HPhe, Tyr, HTyr и Trp могут быть замещены одним или несколькими атомами галоида, (C₁-C₄)-алкильной, (C₁-C₄)-алкоксильной, нитро- или трифторметильной группами, и/или N--замещены (C₁-С₄)-алкильной группой, необязательно замещенной одним или несколькими атомами фтора; или основные L- или D-аминокислоты, такие, как Arg, HArg, Orn, Lys, HLys, Cit, HCit, APhe или ACha, где Аrg и НАrg могут быть N-замещены (C₁-C₆)-алкильной или (C₃-C₆)-циклоалкильной группой по одному или обоим атомам азота, и где Orn, Lys, HLys, APhe и ACha могут быть N-замещены одной или двумя (C₁-С₆)-алкильной или (С₃-С₆)-циклоалкильной группами, или аминотриазолильной или никотиноильной, изоникотикоильной, 6-метилникотиноильной, глицилникотиноильной, никотинилазаглицильной, фурильной, глицилфурильной, фурилазаглицильной, пиразинильной, пиразинилкарбонильной, пиколиноильной, 6-метилпиколиноильной, шикимильной, шикимилглицильной, Fmoc- или Вос-группой; А6 означает Gly; (S)-спиролактам-Рro; D-Pro; D-Ser; D-Thr; D-Cys; D-Met; D-Asn; D-Pen; D-(S-Me)Pen; D-(S-Et)Pen; D-Ser (OBu^t); D-Asp(OBu^t); D-Glu (O-Bu^t); D-Thr (OBu^t); D-Cys(ОВu^t); D-Ser (OR₁), где R₁ означает остаток углевода; азааминокислоту, такую, как azaGly или azaAla; D-His, который может быть замещен по имидазольнoму кольцу (C₁-С₆)-алкильной, (С₂-С₇)-ацильной или бензильной группой; алифатическую D-аминокислоту с (C₁-C₈)-алкильной или (C₃-C₆)-циклоалкильной боковой цепью, такую, как D-Ala, D-Abu, D-Aib, D-3Aib, D-Val, D-Nva, D-Leu, D-Ile, D-Tle, D-Nle, D-Hol, D-Npg, D-CPa, D-Cpa, D-Cba или D-Cha; ароматическую D-аминокислоту, такую, как D-Phe, D-HPhe, D-Tyr, D-HTyr, D-Trp, D-2MeTrp, D-Nal, D-1Nal, D-дифенил-Аlа, D-антрил-Ala, D-фенантрил-Аlа, D-бензгидрил-Ala, D-флуоренил-Аlа, D-Bal, D-Pal, D-4Pal или D-Qal, где D-Phe, D-HPhe, D-Tyr, D-HTyr или D-Trp могут быть замещены одним или несколькими атомами галоида, (C₁-C₄)-алкильной, (C₁-C₄)-алкоксильной, нитро- или трифторметильной группами; D-циклогексадиенил-Gly; D-пергидронафтил-Ala, D-пергидродифенил-Ala; или основные L- или D-аминокислоты, как Arg, HArg, Orn, Lys, HLys, Cit, HCit, APhe или ACha, где Arg и HArg могут быть N-замещены (С₁-С₆)-алкильной или (С₃-С₆)-циклоалкильной группой по одному или обоим атомам азота, где Orn, Lys, HLys, APhe и ACha могут быть N-замещены одной или двумя (C₁-С₆)-алкильными или (С₃-С₆)-циклоалкильными группами, или аминотриазолильной или никотиноильной, изоникотиноильной, 6-метилникотиноильной, глицилникотиноильной, никотинилазаглицильной, фурильной, глицилфурильной, фурилазаглицильной, пиразинильной, пиразинилкарбонильной, пиколиноильной, 6-метилпиколиноильной, шикимильной, шикимилглицильной, Fmoc- или Вос-группой; А7 означает линейную, разветвленную или циклическую алифатическую L-аминокислоту из от 3 до 20 атомов углерода, такую, как Ala, Abu, Aib, 3Aib, Val, Nva, Leu, Ile, Tle, Nle, Hol, Npg, СPa, Cpa, Cba, Cha или Ada, которые могут быть N--замещены (C₁-C₄)-алкильной группой, необязательно замещенной одним или несколькими атомами фтора; А8 означает основные L- или D-аминокислоты, как Arg, HArg, Orn, Lys, HLys, Сit, НСit, APhe или ACha, где Arg и HArg могут быть N-замещены (C₁-С₆)-алкильной или (С₃-С₆)-циклоалкильной группой по одному или обоим атомам азота и где Orn, Lys, HLys, APhe или ACha могут быть N-замещены одной или двумя (С₁-С₆)-алкильными или (С₃-С₆)-циклоалкильными группами либо аминотриазолильной или никотиноильной, изоникотиноильной, 6-метилникотиноильной, глицилникотиноильной, никотинилазаглицильной, фурильной, глицилфурильной, фурилазаглицильной, пиразинильной, пиразинилкарбонильной, пиколиноильной, 6-метил-пиколиноильной, шикимильной, шикимилглицильной, Fmос-или Воc-группой; Z означает GlyNH₂; D-AlaNH₂; azaGlyNH₂ или группу -NHR₂, где R₂ означает (C₁-C₄)-алкил, который может быть замещен гидроксильной группой или одним или несколькими атомами фтора; (С₃-С₆)-циклоалкил или гетероциклический радикал, выбранный из морфолинильного, пирролидинильного и пиперидильного, а также их фармацевтически приемлемые соли.

В данном описании термин "(C₁-C₄)-алкил" означает метильную, этильную, н-пропильную, изопропильную, н-бутильную, изобутильную, втор-бутильную и трет-бутильную группы.

Термин "(C₁-С₆)-алкил" означает метильную, этильную, н-пропильную, изопропильную, н-бутильную, изобутильную, втор-бутильную, трет-бутильную, н-пентильную, изопентильную, втор-пентильную, трет-пентильную и гексильную группы.

Термин "(C₁-C₈)-алкил" означает метильную, этильную, н-пропильную, изо-пропильную, н-бутильную, изо-бутильную, втор-бутильную, трет-бутильную, н-пентильную, изо-пентильную, втор-пентильную, трет-пентильную, гексильную, гептильную и октильную группы.

Термин "(C₁-C₄)-алкокси" означает группу -OR, где R означает (C₁-C₄)-алкил.

Термин "(С₂-С₇)-ацил" означает группу -COR, где R означает (C₁-C₆)-алкил.

Термин "(C₃-C₆)-циклоалкил" означает циклопропильную, циклобутильную, циклопентильную и циклогексильную группы.

Термин "углеводная часть" означает D- или L-пентозы либо гексозы и их аминопроизводные.

Термин "аналоги LH-RH" означает пептиды, у которых в последовательности рилизинг-гормона лютеинизирующего гормона модифицирована, по меньшей мере, одна аминокислота.

Термин "(S)спиролактам-Рro" означает остаток формулы Термин "пероральное введение" означает доставку пептидных аналогов в желудочно-кишечный тракт посредством пероральной лекарственной формы или композиции.

Пептидомиметические аналоги LH-RH, характеризуемые отсутствием, по меньшей мере, одной пептидной амидной связи, как приведенные в качестве примеров в самом последнем обзоре Kutscher et al. (1997, Angew. Chem. Int. Ed., Engl., 36: 2148-2161), не входят в область настоящего изобретения.

В данном описании и в формуле изобретения использованы следующие аббревиатуры: Abu: 2-аминомасляная кислота - Ас: ацетил ACha: аминоциклогексилаланин - Aib: 2-аминоизомасляная кислота 3Aib: 3-аминоизомасляная кислота - Аlа: аланин AlaNH₂: аланинамид - APhe: п-аминофенилаланин Arg: аргинин - Asp: аспарагиновая кислота AzaAla: азааланин - AzaGly: азаглицин AzaGlyNН₂: азаглицинамид - Bal: бензотиенилаланин Вос: трет-бутоксикарбонил - Сbа: циклобутилаланин Cha: циклогексилаланин - Cit: цитруллин СРа: циклопропилаланин - Сра: циклопентилаланин Fmoc: флуоренилметоксикарбонил - For: формил Glu: глутаминовая кислота - Gly: глицин GlyNH₂: глицинамид - HArg: гомоаргинин HCit: гомоцитруллин - His: гистидин HLys: гомолизин - Ноl: гомолейцин Ilе: изолейцин - IprLys: N-изопропиллизин Leu: лейцин - Lys: лизин MeSer: N-метилсерин - Met: метионин Nal: 3-(2-нафтил)аланин - 1Nal: 3-(1-нафтил)аланин NEt: N-этиламид - NicLys: N-никотиноиллизин Nle: норлейцин - Npg: неопентилглицин Nva: норвалин - ОВu^t: трет-бутокси OBzl: бензиловый эфир - Оrn: орнитин Pal: 3-(3-пиридил)аланин - pClPhe: 3-(4-хлорфенил)аланин Pen: пеницилламин - pGlu: пироглутаминовая кислота Phe: фенилаланин - Pro: пролин Qal: 3-(3-хинолил) аланин - Sar: саркозин Ser: серин - (S-Me)Pen: S-метилпеницилламин (S-Et)Pen: S-этилпеницилламин - Thr: треонин Tle: трет-лейцин - Тrp: триптофан Тyr: тирозин - Val: валин Ada: адамантилаланин - HPhe: гомофенилаланин MeNpg: N-метилнеопентилглицин - 4Раl: 3-(4-пиридил)аланин HTyr: гомотирозин - 2МеТrp: 2-метилтриптофан Bzl: бензил - SPL: (S)-спиролактам пролина Asn: аспарагин - MeLeu: N-метиллейцин МеТyr: N-метилтирозин - МеНТyr: N-метилгомотирозин Предпочтительная группа пептидных аналогов (А) включает пептиды формулы (SEQ ID :2): A1-His-A3-A4-A5-A6-A7-A8-Pro-Z (I), где А1 означает pGlu, Sar или AcSаr; A3 означает ароматическую L-аминокислоту, такую, как Phe, HPhe, Тyr, HTyr, Trp, 2MeTrp, Nal, 1Nal, дифенил-Ala, Bal, Pal, 4Pal или Qal, где Phe, HPhe, Тyr, НТyr и Тrp могут быть замещены одним или несколькими атомами галоида, (C₁-C₄)-алкильной, (C₁-C₄)-алкоксильной, нитро- или трифторметильной группами; А4 означает Ala, Ser, D-Ser, MeSer, Ser(OBu^t), Ser(OBzl) или Thr; A5 означает ароматическую L-аминокислоту, такую, как Phe, HPhe, Тyr, НТyr, Тrр, 2МеТrр, Nal, 1Nal, дифенил-Ala, Bal, Pal, 4Pal или Qal, где Phe, HPhe, Тyr, НТyr и Тrp могут быть замещены одним или несколькими атомами галоида, (C₁-C₄)-алкильной, (C₁-C₄)-алкоксильной, нитро- или трифторметильной группами; А6 означает Gly; D-Pro; (S)-спиролактам-Рro; D-Ser; D-Thr; D-Cys; D-Met; D-Pen; D-(S-Me)Pen; D-(S-Et)Pen; D-Ser(OBu^t); D-Asp(OBu^t); D-Clu (O-Bu^t); D-Thr(OBu^t); D-Сys(ОВu^t); D-Ser(OR₁), где R₁ означает остаток углевода; азааминокислоту, такую, как azaGly или azaAla; D-His, который может быть замещен по имидазольному кольцу (C₁-С₆)-алкильной или бензильной группой; алифатическую D-аминокислоту с (C₁-C₈)-алкильной или (С₃-С₆)-циклоалкильной боковой цепью, такую, как D-Ala, D-Abu, D-Aib, D-3Aib, D-Val, D-Nva, D-Leu, D-Ile, D-Tle, D-Nle, D-Hol, D-Npg, D-CPa, D-Cpa, D-Cba или D-Cha; ароматическую D-аминокислоту, такую, как D-Phe, D-HPhe, D-Tyr, D-HTyr, D-Trp, D-2MeTrp, D-Nal, D-1Nal, D-дифенил-Аlа, D-антрил-Ala, D-фенантрил-Аlа, D-бензгидрил-Аlа, D-флуоренил-Аlа, D-Bal, D-Pal, D-4Pal или D-Qal, где D-Phe, D-HPhe, D-Tyr, D-HTyr или D-Trp могут быть замещены одним или несколькими атомами галоида, (C₁-C₄)-алкильной, (C₁-C₄)-алкоксильной, нитро- или трифторметильной группами; D-циклогексадиенил-Gly; D-пергидронафтил-Аlа, D-пергидродифенил-Ala; или основные D-аминокислоты, как D-Arg, D-HArg, D-Orn, D-Lys, D-HLys, D-Cit, D-HCit, D-APhe, необязательно замещенные аминотриазолильной группой, или D-ACha, где D-Arg и D-HArg могут быть N-замещены (C₁-C₆)-алкильной или (С₃-C₆)-циклоалкильной группами или Fmос- или Вос-группой; А7 означает линейную, разветвленную или циклическую алифатическую L-амииокислоту из от 3 до 20 атомов углерода, такую, как Ala, Abu, Aib, 3Aib, Val, Nva, Leu, Ile, Tle, Nle, Hol, Npg, CPa, Cpa, Cba, Cha или Ada, которые могут быть N--замещены (C₁-C₄)-алкильной группой, необязательно замещенной одним или несколькими атомами фтора; А8 означает основные L-аминокислоты, как Arg, HArg, Orn, Lys, HLys, Cit, HCit, APhe, необязательно замещенные аминотриазолильной группой, или ACha; Z означает GlyNH₂; azaGlyNH₂ или группу -NHR₂, где R₂ означает (C₁-C₄)-алкил, который может быть замещен гидроксильной группой или одним или несколькими атомами фтора; (С₃-C₆)-циклоалкил или гетероциклический радикал, выбранный из морфолинильного, пирролидинильного и пиперидильного, а также их фармацевтически приемлемые соли.

В числе пептидных аналогов формулы (I) предпочтительными являются те, которые имеют формулу (SEQ ID :3): pGlu-His-A3-Ser-A5-A6-A7-Arg-Pro-Z (II), где A3 и А5 означают ароматические L-аминокислоты, как определено для формулы (I); А6 имеет значение, определенное для формулы (I); А7 означает Leu, Tle, Nle, Hol, Npg, Cha или Ada, которые могут быть N--замещены метильной или этильной группой, необязательно замещенной одним или несколькими атомами фтора; Z имеет значение, определенное для формулы (I), а также их фармацевтически приемлемые соли.

Особо предпочтительными являются пептидные аналоги формулы (SЕQ ID :4): pGlu-His-A3-Ser-A5-A6-A7-Arg-Pro-Z (III), где A3 и А5 означают каждый независимо друг от друга Phe, Тyr, Trp, 2MeTrp, HPhe, HTyr, Nal, 1Nal, Bal, Pal, 4Pal или pClPhe; А6 означает (S)-спиролактам-Рro; Gly; D-Pro; D-Sеr(ОВu^t); D-Asp(OBu^t); D-Glu(OBu^t); D-Thr (OBt^t); D-Cys (OBu^t); D-His или D-His(Bzl); D-Ala, D-Leu, D-Tle, D-Nle, D-Hol, D-Npg или D-Cha; D-Phe, D-HPhe, D-Tyr, D-HTyr, D-Trp, D-2MeTrp, D-Nal, D-1Nal, D-Bal, D-Pal, D-4Pal или D-pClPhe; D-циклогексадиенил-Сly; D-пергидронафтил-Аlа; D-пергидродифенил-Ala или D-APhe, необязательно замещенный аминотриазолильной группой; А7 означает Leu, Npg или Cha, которые могут быть N--замещены метильной группой; Z означает GlyNH₂; azaGlyNH₂ или -NC₂H₅.

Особо предпочтительными также являются пептидные аналоги формулы (SEQ ID :5): pGlu-His-Trp-Ser-Tyr-A6-A7-Arg-Pro-Z (IV), где А6 означает (S)-спиролактам-Рro, D-Leu, D-Ala, D-Nal, D-Phe, D-Ser(OBu^t) или D-Trp; A7 означает Leu, MeLeu, Npq или MeNpq; Z означает GlyNH₂; azaGlyNH₂ или -NC₂H₅.

Пептидные аналоги формул (I)-(IV), в которых A7 означает Npg, являются особенно предпочтительными.

Типичные пептидные аналоги формул (I)-(IV) включают лейпрорелин, [Npg⁷] -лейпрорелин, трипторелин, [Npg⁷]-трипторелин, госерелин, [Npg⁷]-госерелин, бусерелин и [Npg⁷]-бусерелин.

Другая предпочтительная группа пептидных аналогов (А) включает пептиды формулы (SEQ ID :6): A1-A2-A3-A4-A5-A6-A7-A8-Pro-Z (I'), где А1 означает pGlu; D-pGlu; Sar; AcSar; Pro или их производные, такие, как АсРrо, ForPro, OH-Pro, Ас-ОН-Рrо, дегидро-Рrо или Ас-дегидро-Рrо; Ser; D-Ser; Ac-D-Ser; Thr; D-Thr; Ac-D-Thr, или ароматическую D-аминокислоту, которая может быть ацилированной, предпочтительно ацетилированной, такой, как D-Phe; D-HPhe, D-Tyr, D-Trp, D-Nal, D-1Nal, D-дифенил-Alа, D-Bal, D-Pal, D-4Pal или D-Qal, где D-Phe и D-Trp могут быть замещены одним или несколькими атомами галоида, (C₁-C₄)-алкильной, (C₁-C₄)-алкоксильной, нитро- или трифторметильной группами; А2 означает непосредственную связь или ароматическую D-аминокислоту, такую, как D-Pho, D-HPhe, D-Tyr, D-Trp, D-Nal, D-1Nal, D-дифенил-Ala, D-Bal, D-Pal, D-4Pal или D-Qal, где D-Phe и D-Trp могут быть замещены одним или несколькими атомами галоида, (C₁-C₄)-алкильной, (C₁-C₄)-алкоксильной, нитро- или трифторметильной группами; A3 означает ароматическую L- или D-аминокислоту, такую, как Phe, HPhe, Тyr, Trp, Nal, 1Nal, дифенил-Ala, Bal, Pal, 4Pal или Qal, где Phe и Тrp могут быть замещены одним или несколькими атомами галоида, (C₁-C₄)-алкильной, (C₁-C₄)-алкоксильной, нитро- или трифторметильной группами; А4 означает Ala, Ser, D-Ser, MeSer, Ser(ОВu^t), Ser(OBzl) или Thr; А5 означает ароматическую L-аминокислоту, такую, как Phe, HPhe, Тyr, НТyr, Тrp, Nal, 1Nal, дифенил-Ala, Bal, Pal, 4Pal или Qal, где Phe, Тyr, HТyr и Тrp могут быть замещены одним или несколькими атомами галоида, (C₁-C₄)-алкильной, (C₁-C₄)-алкоксильной, нитро- или трифторметильной группами и/или N--замещены (C₁-C₄)-алкильной группой, необязательно замещенной одним или несколькими атомами фтора; или основные L- или D-аминокислоты, такие, как Аrg, НАrg, Orn, Lys, HLys, Сit, HCit, APhe или ACha, где Аrg и НАrg могут быть N-замещены (C₁-C₆)-алкильной или (С₃-С₆)-циклоалкильной группой по одному или обоим атомам азота и где Orn, Lys, HLys, HPhe и ACha могут быть N-замещены одной или двумя (C₁-С₆)-алкильными или (С₃-С₆)-циклоалкильными группами, или никотиноильной, изоникотиноильной, 6-метилникотиноильной, глицилникотиноильной, никотинилазаглицильной, фурильной, глицилфурильной, фурилазаглицильной, пиразинильной, пиразинилкарбонильной, пиколиноильной, 6-метилпиколиноильной, шикимильной, шикимилглицильной, Fmoc-или Вос-группой; А6 означает Gly; (S)-спиролактам-Рro; D-Pro; D-Ser; D-Thr; D-Cys; D-Met; D-Asn; D-Pen; D-(S-Me)Pen; D-(S-Et)Pen; D-Ser(OBu^t); D-Asp(OBu^t); D-Glu(OBu^t); D-Thr (OBu^t); D-Сys(ОВu^t); D-Ser (OR₁), где R₁ означает остаток углевода; алифатическую D-аминокислоту с (C₁-C₈)-алкильной или (С₃-С₆)-циклоалкильной боковой цепью, такую, как D-Ala, D-Abu, D-Aib, D-3Aib, D-Val, D-Nva, D-Leu, D-Ile, D-Tle, D-Nle, D-Hol, D-Npg, D-CPa, D-Cpa, D-Cba или D-Cha; ароматическую D-аминокислоту, такую, как D-Phe, D-HPhe, D-Tyr, D-Trp, D-Nal, D-1Nal, D-дифенил-Аlа, D-антрил-Ala, D-фенантрил-Аlа, D-бензгидрил-Аlа, D-флуоренил-Ala, D-Bal, D-Pal, D-4Pal или D-Qal, где D-Phe и D-Trp могут быть замещены одним или несколькими атомами галоида, (C₁-C₄)-алкильной, (C₁-C₄-алкокоильной, нитро- или трифторметильной группами; D-циклогексадиенил-Gly; D-пергидронафтил-Аlа; D-пергидродифенил-Аlа; или основные L- или D-аминокислоты, как Аrg, НАrg, Orn, Lys, HLys, Cit, HCit, APhe или ACha, где Аrg и HArg могут быть N-замещены (C₁-C₆)-алкильной или (С₃-С₆)-циклоалкильной группой по одному или обоим атомам азота и где Orn, Lys, HLys, APhe и ACha могут быть N-замещены одной или двумя (C₁-C₆)-алкильными или (С₃-С₆)-циклоалкильными группами, или никотиноильной, изоникотиноильной, 6-метилникотиноильной, глицилникотиноильной, никотинилазаглицильной, фурильной, глицилфурильной, фурилазаглицильной, пиразинильной, пиразинилкарбонильной, пиколиноильной, 6-метилпиколиноильной, шикимильной, шикимилглицильной, Fmoc- или Boc-группой; А7 означает линейную, разветвленную или циклическую алифатическую L-аминокислоту из от 3 до 20 атомов углерода, такую, как Ala, Abu, Aib, 3Aib, Val, Nva, Leu, Ile, Tle, Nle, Hol, Npg, CPa, Cpa, Cba, Cha или Ada, которые могут быть N--замещены (C₁-C₄)-алкильной группой, необязательно замещенной одним или несколькими атомами фтора; А8 означает основные L- или D-аминокислоты, как Аrg, HArg, Orn, Lys, HLys, Сit, HCit, APhe или ACha, где Arg и HArg могут быть N-замещены (C₁-С₆)-алкильной или (С₃-С₆)-циклоалкильной группой по одному или обоим атомам азота и где Orn, Lys, HLys, APhe или ACha могут быть N-замещены одной или двумя (C₁-C₆)-алкильными или (С₃-С₆)-циклоалкильными группами либо никотиноильной, изоникотиноильной, 6-метилникотиноильной, глицилникотиноильной, никотинилазаглицильной, фурильной, глицилфурильной, фурилазаглицильной, пиразинильной, пиразинилкарбонильной, пиколиноильной, 6-метилпиколиноильной, шикимильной, шикимилглицильной, Fmoc- или Вос-группой; Z означает GlyNH₂ или D-AlaNH₂, а также их фармацевтически приемлемые соли.

В число пептидов формулы (I') входят являющиеся предпочтительными аналоги формулы (SEQ ID :7): Ac-D-Nal-D-pClPhe-D-Pal-Ser-A5-A6-A7-A8-Pro-D-AlaNH₂ (II'), где А5 означает Тyr, HTyr, MeTyr, MeHTyr, NicLys или IprLys; А6 означает (S)-спиролактам-Рro, D-Arg, D-NicLys, D-IprLys, D-Cit, D-HCit или D-Asn; A7 означает Leu, MeLeu, Npg или MeNpg; A8 означает Arg, NicLys или IprLys, и их фармацевтически приемлемые соли.

Пептидные аналоги формулы (I') и (II'), в которых A7 означает Npg, являются особенно предпочтительными.

Типичные представители пептидных аналогов формулы (I') и (II') включают антид, [Npq⁷]-антид, цетрореликс, [Npg⁷]-цетрореликс, абареликс и [Npg⁷]-абареликс.

Другие предпочтительные пептидпые аналоги включают таковые формулы (А), в которой А6 имеет приведенные значения, за исключением D-Asn.

Примерами солей с фармацевтически приемлемыми кислотами являются соли с минеральными кислотами, такие, как, например, гидрохлорид, гидробромид, сульфат, фосфат, борат, гидросульфат, дигидрофосфат или нитрат, и соли с органическими кислотами, такие, как, например, ацетат, оксалат, тартрат, сукцинат, малеат, фумарат, глюконат, цитрат, памоат, малат, аскорбат, бензоат, п-толуолсульфонат или нафталинсульфонат.

Примерами солей с фармацевтически приемлемыми основаниями являются соли со щелочными или щелочноземельными металлами, такими, как натрий, калий, кальций или магний, и с органическими основаниями, такими, как амины, трометамол (2-амино-2-гидроксиметил-1,3-пропандиол), N-метилглутамин и тому подобное.

Пептиды, применяемые по настоящему изобретению, могут быть получены хорошо известными методами пептидной химии, такими, как, например, синтез пептидов в растворе или твердофазным пептидным синтезом. В общем, эти методы включают ступенчатое добавление одной или нескольких аминокислот, которые могут быть соответствующим образом защищены с образованием пептидной цепи. Можно, например, сослаться на справочник "Синтетические пептиды: руководство пользователя" (ed. by G.A. Grant, 1992, UWBC Biotechnical Resource Series, Washington University Press, Saint-Louis, USA).

Каждая молекула -циклодекстрина имеет 6 первичных гидроксильных групп и 12 вторичных гидроксильных групп, соответственно относящихся к первичной 6-ОН-группе и ко вторичным 2-ОН-группе и 3-ОН-группе в каждом из шести остатков глюкопиранозы. В другом общем аспекте настоящее изобретение относится к -циклодекстрину и его производным, которые являются результатом химических или биохимических модификаций, включающих точное или среднее число гидроксильных групп от 1 до 18 молекулы -CD, с помощью произвольного или региоселективного метода и реакций одного или нескольких различных типов, таких, как окисление, восстановление, алкилирование, гидроксиалкилирование, этерификация с органической или минеральной кислотами, внутримолекулярная дегидратация, тозилирование, сопровождаемое восстановительным аминированием либо замещением атомом галоида, разветвление углевода или дальнейшая полимеризация, и их различные возможные комбинации и сочетания. Примеры производных -CD включают -циклодекстрин, модифицированный с помощью одной или нескольких групп, выбранных из метила, карбоксиметила, этила, бутила, октила, гидроксиэтила, гидроксипропила, гидроксибутила, ацетила, пропионила, бутирила, сукцинила, бензоила, пальмитила, сульфонила, толуолсульфонила, амино, аминопропила, глюкозила, мальтозила, димальтозила, карбоксиметилового эфира, сульфобутилового эфира и эфира фосфорной кислоты.

Предпочтительные производные -циклодекстрина по изобретению включают метилированный -CD; гексакис(2,3,6-три-О-метил)--СD, известный также как "перметилированный" -CD; карбоксиметилированный -CD и фосфорилированный -CD. При применении для приготовления фармацевтических композиций по изобретению особенно полезными являются -CD и гексакис(2,3,6-три-О-метил)--CD.

Как упомянуто выше, -CD или его производные усиливают биологическую активность пептидных аналогов рилизинг-гормона лютеинизирующего гормона в фармацевтических композициях для перорального применения.

Таким образом, в соответствии с другим отличительным признаком изобретение относится к пероральным фармацевтическим композициям, которые включают в качестве активного ингредиента пептидный аналог LH-RH, описанный выше, в виде комбинации с -CD или его производным, причем упомянутые композиции предполагается доставлять в желудочно-кишечный тракт.

Пептиды, соответствующие общей формуле (I), проявляют агонистическую активность in vivo в отношении рецепторов LH-RH, приводящую к стимуляции гипофизом секреции лютеинизирующего гормона, который у мужчин стимулирует секрецию тестостерона семенниками.

Взрослым крысам-самцам линил Sprague-Dawley с помощью зонда вводили перорально соответствующую лекарственную форму, включающую лейпрорелин (LEU, фирмы Bachem), трипторелин (TRI, фирмы Bachem), деслорелин (DES, фирмы Saxon Biochemicals), госерелин (GOS, фирмы Saxon Biochemicals) или другие аналоги из следующих примеров: пример 1: [(S)-спиролактам-(Pro⁶, Npg⁷), дезGly¹⁰-РroNЕt⁹] LH-RH; пример 2: (D-Ala⁶, Npg⁷, дезGly¹⁰-Рro-NEt⁹)LH-RH; пример 3: Nрg⁷-лейпроролин; пример 4: (D-Phe⁶, Npg⁷, дезGly¹⁰-РroNЕt⁹) LH-RH; пример 5: Nрg⁷-трипторелин и пример 6: (D-Ala⁶, дезGly¹⁰-РroNЕt⁹)LH-RH (фирмы Bachem), в комбинации с -CD (фирмы Sigma или Wacker Chemie). Для сравнения те же самые агонисты вводили перорально с помощью зонда в стандартном водном носителе без включения -CD (сравнительные примеры). Для скрининговых целей образцы крови брали через 2 часа после перорального введения пептидного агониста LH-RH в общей дозе 2 нмоль/крысу в водном растворе, содержащем 10 или 100 мМ -CD (таблицы 1 и 2; фиг.1, 4 и 6). Для кинетических целей влияние доз 2 нмоль/крысу (по примеру 3) с добавлением или без 100 мМ -CD на уровни лютеинизирующего гормона и тестостерона в плазме исследовали между 0,5 и 8 часами (фиг.2 и 5). Влияние увеличивающихся концентраций -CD (5, 10 или 14%) исследовали в примере 2 при дозе 5 мкг/кг через 2 часа после перорального введения (фиг.3). Определение общего тестостерона в плазме (Diagnostic System Laboratories) и лютеинизирующего гормона LH (Amersham Pharmacia Biotech) проводили с помощью радиоиммуноанализа. При проведении двухчасовых скриннинговых экспериментов каждая группа включала 6-8 крыс; в каждый момент кинетического исследования включали данные от четырех животных.

Как можно видеть из приведенных выше результатов, а также из данных, приведенных на фиг.1-4, пероральные лекарственные формы с -CD значительно усиливают стимуляцию секреции тестостерона, индуцируемую аналогами LH-RH. Особенно деслорелин, который один в предельной дозе 2 нмоль/крысу был неактивен, но проявил выраженную активность при введении в лекарственную форму с -CD. Решающая роль -CD демонстрируется зависимостью его эффектов от концентрации: в комбинации с 10 мМ -циклодекстрина (0,972%) активность при пероральном введении в примере 3 значительно не улучшилась (фиг.1); при 5% (51,4 мМ) -циклодекстрин заметно усилил симуляцию секреции тестостерона, индуцированную в примере 2 путем перорального введения, хотя и не до максимального уровня, достигнутого при 10% (103 мМ), а также при 14% (144 мМ) (фиг.3).

Заслуживает также внимания тот факт, что (см. фиг.1 и 3) -циклодекстрин (-CD), гидроксипропил-CD (HP--CD) и -циклодекстрин (-СD) не оказывают потенцирующего эффекта на индуцируемую аналогами LH-RH стимуляцию секреции тестостерона.

Как можно видеть из приведенных выше результатов, а также из данных, приведенных на фиг. 5 и 6, потенцирующий эффект -CD в лекарственной форме для перорального применения, содержащей аналоги LH-RН, на высвобождение лютеинизирующего гормона является даже более выраженным, чем на секрецию тестостерона: все тестируемые аналоги LH-RН были неактивны при введении по отдельности в той же самой дозе 2 нмоль/крысу, тогда как в зависимости от структуры аналога они индуцировали 3-16-кратное усиление по сравнению с контролем, если вводились в комбинации с -CD.

Подобные или даже еще лучшие результаты были получены с производными -CD, такими, как метилированный -CD, гексакис(2,3,6-три-О-метил)--CD, карбоксиметилированный -CD или фосфорилированный -CD. Все производные -CD приобретены у фирмы Cyclolab (Budapest, Hungary). В примере 3 влияние производных -CD на потенцирование агонистической активности LH-RH сопоставляли с воздействием самого -CD при пероральном введении крысам с помощью желудочного зонда в низкой дозе 5 мкг/кг: уровни общего тестостерона в плазме измеряли через 2 часа после введения (таблица 3).

Производные -CD, испытанные выше, по меньшей мере, удваивали эффект, полученный в примере 3 при пероральном применении. Нативный -CD и его перметилированные аналоги, по-видимому, являются особенно подходящими, приводя соответственно к 2,9- и 3,8-кратному усилению агонистического действия из примера 3 на тестостерон при данном дозовом уровне, составляющем 5 мкг/кг перорально.

В дальнейшем эксперименте образец по примеру 3 исследовали с -CD или перметилированным -CD в равных концентрациях, составляющих 10%. Через 2 часа после введения измеряли уровни лютеинизирующего гормона в плазме у восьми крыс на каждую дозу (фиг.7). Доза аналога из примера 3, равная 5 мкг/кг и введенная перорально, не влияла на уровни LH в этот момент времени, а дозы 10 и 20 мкг/кг, введенные перорально, были несомненно пороговыми дозами в этих условиях эксперимента.

Комбинация аналога из примера 3 с 10% -CD приводила к легкой, но заметной стимуляции при дозах 5 и 10 мкг/кг перорально и к намного большему эффекту при дозе 20 мкг/кг перорально по сравнению только с аналогом примера 3 (более чем пятикратное усиление активности, вызывающей секрецию лютеинизирующего гормона). Более того, комбинация аналога из примера 3 с 10% перметилированного -CD привела даже к более высокому потенцированию: дозы 2,5, 5 и 10 мкг/кг перорально, которые были неактивными при введении только аналога из примера 3, вызывали быструю дозозависимую стимулирующую реакцию (фиг.7).

Пептиды, соответствующие общей формуле (I'), проявляют антагонистическую активность in vivo в отношении рецепторов LH-RH, приводя, в частности, к подавлению овуляции.

Исследовали влияние -, - и -CD на активность антида (пример пептидного антагониста LH-RH) при пероральном введении с помощью зонда взрослым с нормальным циклом самкам крыс линии Wistar в период между 1 час 30 мин и 3 час пополудни в день проэструса после, по меньшей мере, двух полных регулярных эстральных циклов, контролируемых с помощью ежедневных вагинальных мазков. Антиовуляционную эффективность контролировали на следующее утро, в день ожидаемого эструса путем наблюдения за зародышевыми клетками в маточных трубах обработанных самок. Наличие, по меньшей мере, одной зародышевой клетки свидетельствовало о том, что в некоторой степени происходила спонтанная овуляция, и только полное отсутствие зародышевых клеток рассматривалось как эффективное подавление овуляции, вызываемое антагонистом LH-RH. Антид растворяли в носителе, состоящем из 20% (объем/объем) пропиленгликоля в воде, уже содержавшей 1% бычьего альбумина, куда затем прибавляли 10% (вес/объем) или -, - и -CD. Результаты экспериментов суммированы в следующей таблице 4.

Носитель с -CD или без него не дает никакого эффекта. Пороговая эффективная доза антида при пероральном введении составила 400 мкг/кг, при этом только у 3 животных из 22 обнаружилось подавление овуляции. При этом дозовом уровне -CD и -CD не влияли на минимальную активность антида.

Од