Рекомбинантная плазмидная днк pul83hcmv, обеспечивающая экспрессию в клетках бактерии escherichia coli рекомбинантного белка, содержащего иммунодоминантную часть фосфопротеина pp65 hcmv и фрагмент -галактозидазы

Рекомбинантная плазмидная днк pul83hcmv, обеспечивающая экспрессию в клетках бактерии escherichia coli рекомбинантного белка, содержащего иммунодоминантную часть фосфопротеина pp65 hcmv и фрагмент -галактозидазы

Реферат

 

Изобретение относится к биотехнологии, в частности к генетической инженерии, и представляет собой сконструированную in vitro рекомбинантную плазмидную ДНК, содержащую фрагмент гена UL83 цитомегаловируса человека (HCMV), кодирующий иммунодоминантную часть фосфопротеина рр65 HCMV с 231 по 551 а. к. Конструкция обеспечивает в клетках бактерий Е.соli биосинтез рекомбинантного белка, содержащего фрагмент рр65 HCMV и фрагмент -галактозидазы Е.соli с полигиотидиновым (6 His) трактом для аффинной очистки, обладающего антигенными свойствами цитомегаловируса человека. Этот очищенный рекомбинантный белок может быть использован в качестве HCMV-антигена для серологического тестирования HCMV в клинической практике. Использование этого антигена для выявления специфичных к вирусу иммуноглобулинов М (IgM-HCMV) показывает 98-99% чувствительности и специфичности в иммуноферментном анализе. 6 ил.

Текст описания в факсимильном виде (см. графическую часть).

Формула изобретения

Рекомбинантная плазмидная ДНК pUL83HCMV размером 3700 п.о. и молекулярной массой 2,5 мегадальтон, обеспечивающая экспрессию в клетках бактерии Escherichia coli рекомбинантного белка размером 67 килодальтон, содержащего иммунодоминантную часть фосфопротеина рр65 HCMV штамма AD-169 с 6 молекулами гистидина на N-конце и фрагмент -галактозидазы, включающая HindIII/Hpal - фрагмент ДНК векторной плазмиды pUR290; фрагмент гена UL83 цитомегаловируса человека размером 974 п.о., кодирующий иммунодоминантную часть фосфопротеина рр65 HCMV с 231 по 551 аминокислоту с 6 молекулами гистидина на N-конце; фрагмент гена -галактозидазы, кодирующий фрагмент -галактозидазы с 1 по 147 аминокислоту, содержит в качестве генетического маркера ген bla -лактамазы, определяющий устойчивость трансформированных плазмидой pUL83HCMV клеток Escherichia coli к ампициллину; уникальные сайты узнавания рестрикционными эндонуклеазами, имеющие следующие координаты: EcoRI (EcoRI)-1507 и 1689; Sal I (Sal I)-1627; Sma I (Sma I)-905 и 1617; EcoRV (EcoRV) -1029; Pst I (Pst I)-1046; HindIII (HindIII)-1105; Nco I (Bspl9I)-1247 и 1466; Cla I (Bsa 291)-1665; PvuII(PvuII)-55 и 323.

РИСУНКИ

Рисунок 1, Рисунок 2, Рисунок 3, Рисунок 4, Рисунок 5, Рисунок 6, Рисунок 7, Рисунок 8, Рисунок 9, Рисунок 10, Рисунок 11, Рисунок 12, Рисунок 13, Рисунок 14, Рисунок 15, Рисунок 16, Рисунок 17