Препарат интерферона
Реферат
Изобретение относится к области медицины, а именно к препаратам интерферона, которые могут применяться для лечения вирусных и онкологических заболеваний. Препарат интерферона, содержащий интерферон -2, буферобразующие соли, обеспечивающие рН 7,4 и стабилизатор, отличающийся тем, что в качестве стабилизатора он содержит смесь ацетата -токоферола и органической кислоты при следующем соотношении ингредиентов: интерферон 1-100 млн ME, ацетата -токоферола 0,05-0,1 мг, органическая кислота 0,02-10 мг, буферобразующие соли, обеспечивающие рН 7,4 - остальное. В качестве органической кислоты он содержит аскорбиновую, лимонную, мочевую, янтарную кислоту или глицин, а в качестве буферобразующих солей он содержит соли, способные образовывать фосфатный, ацетатный, карбонатный или трис-буферные растворы. Технический результат: создание композиции препарата интерферона стабильного при хранении как в сухом, так и в жидком виде, в том числе после приготовления раствора для инъекций, глазных капель, жидких аэрозолей в течение 6 месяцев. 3 з.п. ф-лы, 1 табл.
Изобретение относится к области медицины, а именно к препаратам интерферона, которые могут использоваться для лечения вирусных и онкологических заболеваний.
В настоящее время одной из сложнейших проблем белоксодержащих медицинских препаратов, в частности, препаратов интерферона, является их стабильность. Подобно другим протеинам интерферон подвергается, особенно в водных растворах, модификации и химическому разложению за счет протекания процессов протеолиза, окисления, дисульфидного обмена и т.д. Кроме того на его биологическую активность негативно воздействуют такие факторы, как агрегация, осаждение и адсорбция. Для уменьшении потерь активности интерферона в состав лекарственной формы вводят различные стабилизирующие добавки. Известно использование в качестве стабилизаторов биологической активности интерферона человеческого альбумина (ЕР 133767, А 61 К 45/02, 1984), сахаров - глюкозы, маннозы, галактозы, фруктозы, сахарозы и др. (ЕР 0133767, А 61 К 45/02, 1984), декстранов и гидроксиэтилкрахмала (ЕР 0150067, А 61 К 45/02, 1985), полиэтиленгликоля и гидроксиэтилцеллюлозы (ЕР 0152345, А 61 К 45/02, 1985), поликарбоновых кислот сополимеров метилметакрилата и малеиновой кислоты, Na-соли карбоксиметилцеллюлозы и ксилита (DE 3642223, А 61 К 45/02, 1988). Однако использование известных добавок вызывает в свою очередь определенные проблемы. Так, применение человеческого альбумина, как стабилизатора лекарственных форм интерферонов, связано с дополнительным контролем полученных лекарственных форм на отсутствие антигена гепатита В, вируса СПИДа. Использование этого компонента ограничено также недостаточностью сырья донорской крови. При использовании в качестве стабилизирующих веществ аминокислот или их производных в смеси с человеческим альбумином (ЕР 0082481, А 61 К 45/02, 1982 или US 4496537, А 61 К 45/02, 1983) биологическая стабильность этой композиции сохранялась в достаточной степени только 6 месяцев. Кроме того данной композиции свойственны недостатки, связанные с применением человеческого альбумина. Наиболее близким по технической сущности к заявляемому решению является интерферонсодержащая композиция, содержащая наряду с интерфероном частично гидролизованный декстран (полиглюкин), хлорид натрия и фосфатную смесь (компоненты фосфатного буферного раствора) (RU 2095081, А 61 К 38/21, 1997). Однако данная смесь успешно хранится только в сухом виде и малопригодна для использования в жидких формах, что затрудняет его использование в клинической практике. Задачей, стоявшей перед авторами, являлось создание композиции препарата интерферона, стабильного для хранения как в сухом, так и в жидком виде, в том числе после приготовления раствора для инъекций, глазных капель жидких аэрозолей и т.п. Указанная задача решается созданием композиции, содержащей на 1-100 млн ME интерферона -2 0,05-0,1 мг ацетата -токоферола, 0,02-10 мг органической кислоты и буферобразующие соли, обеспечивающие в водном растворе рН 7,4. Технический результат достигается за счет способности ацетата -токоферола образовывать с интерфероном--2 комплекс, предотвращающий разрушение молекулярной структуры интерферона--2 в сухом виде, которая наблюдается при приготовлении препарата. Комплекс распадается при растворении препарата с высвобождением активного интерферона. Одновременно в присутствии даже небольших количеств воды (влаги воздуха) ацетат -токоферола с органическими кислотами образует динамическую систему, одним из компонентов которой становится -токоферол, ингибирующий протекание радикальных процессов и тем самым стабилизирующий жидкую лекарственную форму препарата. В качестве органической кислоты используют органические кислоты, способные кристаллизоваться без разложения, такие как аскорбиновая, лимонная, глициновая, мочевая, янтарная и т.п. В качестве буферного раствора используют 1 М фосфатный, ацетатный, карбонатный или трис буферные растворы. Препарат готовится следующим образом. Генно-инженерный интерферон в виде жидкой субстанции (от 2106 МЕ/мл до 4107 МЕ/мл) в количестве от 0,5 мл до 2,5 мл забуференный до рН 7,4 смешивают со слабой кислотой от 0,25 мл до 1,25 мл в концентрации от 0,08 мг/мл до 40 мг/мл и корректируют рН добавлением 10 М NaOH. К полученной смеси добавляют ацетат -токоферола, который готовят следующим образом. Растворяют в 96% спирте ацетат -токоферола в концентрации от 5 мг/мл до 1 г/мл. Затем разводят в 25 раз полученный концентрат дистиллированной водой и готовый раствор в объеме от 0,25 мл до 1,25 мл добавляют к смеси. Полученную смесь переносят во флаконы или ампулы и завальцовывают или запаивают. При необходимости полученную жидкую смесь замораживают во флаконах или ампулах (незавальцованных и незапаянных) и затем лиофильно высушивают. Сущность и преимущества заявляемого изобретения иллюстрируется следующими примерами. Пример 1. К 2 мл раствора генно-инженерного интерферона--2 с активностью 3106 МЕ/мл добавляли фосфатный буферный раствор до рН 7,4, а затем 0,5 мл лимонной кислоты в концентрации 20 мг/мл и 10 М NaOН до рН 7,4. К полученной смеси добавляли 1 мл водно-спиртового раствора ацетата -токоферола с концентрацией ацетата -токоферола 10 мг/мл. Полученную смесь переносили в ампулы. Часть ампул запаивали и ставили на хранение, часть замораживали, а затем лиофильно высушивали. Стабильность сухих и жидких форм препарата интерферона--2 при хранении (температура 4oС) приведена в таблице. Пример 2. В условиях примера 1, варьируя состав и количество используемых ингредиентов, получали препараты интерферона различного состава. Для экспериментальной проверки заявленного способа (смеси) стабилизации препарата были приготовлены сухие и жидкие смеси, содержащие указанные компоненты в соотношениях, приведенных в таблице, а также контрольные смеси, не содержащие ряд компонентов. До и после шестимесячного хранения было проведено определение биологической активности препарата на клетках диплоидной ткани опухоли легкого человека в присутствии (против) вируса везикулярного стоматита. При определении активности препарата сухие формы разводили в соответствующем количестве воды, а жидкие использовали без дальнейшей обработки. Стабильность сухих и жидких форм препарата интерферона--2 при хранении (температура 4oС) приведена в таблице. Таким образом, было установлено, что смеси, приготовленные по указанным выше прописям и содержащие компоненты интерферона -2, ацетата -токоферола и органической кислоты в указанных диапазонах сохраняют активность в течение 6 месяцев. Количество ацетата -токоферола, меньшее 0,005 мг/мл, и кислоты, меньшее 0,02 мг/мл, не предотвращает потери активности при хранении.Формула изобретения
1. Препарат интерферона, содержащий интерферон -2, буферобразующие соли, обеспечивающие рН 7,4 и стабилизатор, отличающийся тем, что в качестве стабилизатора он содержит смесь ацетата -токоферола и органической кислоты при следующем соотношении ингредиентов: Интерферон -2 1-100 млн ME Ацетата -токоферола 0,05-0,1 мг Органическая кислота 0,02-10 мг Буферобразующие соли, обеспечивающие рН 7,4 Остальное 2. Препарат по п.1, отличающийся тем, что в качестве органической кислоты он содержит органические кислоты, способные кристаллизоваться без разложения. 3. Препарат по пп.1 и 2, отличающийся тем, что в качестве органической кислоты он содержит аскорбиновую, лимонную, мочевую, янтарную кислоту или глицин. 4. Препарат по пп.1 и 2, отличающийся тем, что в качестве буферобразующих солей он содержит соли, способные образовывать фосфатный, ацетатный, карбонатный или трис-буферные растворы.РИСУНКИ
Рисунок 1, Рисунок 2, Рисунок 3