Способ получения природного гуманизированного антитела

Способ получения природного гуманизированного антитела

Реферат

 

Изобретение относится к иммунологии. Предложен способ получения гуманизированного антитела, в котором присутствуют искусственные замещения одного или нескольких аминокислотных остатков в FR области. Так как большая часть гуманизированного антитела получена от антитела человека, а CDR проявляет низкую антигенность, полученное антитело обладает низкой антигенностью и поэтому является весьма многообещающим при лечении. 3 з.п.ф-лы, 33 ил., 9 табл.

Текст описания в факсимильном виде (см. графическую часть)а

Формула изобретения

1. Способ получения природного гуманизированного антитела, включающий I) получение первичного антитела, представляющего собой гуманизированное антитело, полученное путем CDR-переноса и искусственного замещения одного или более аминокислотных остатков в FR; II) поиск гомологии FR последовательности природного антитела человека и FR первичного антитела с использованием базы данных последовательностей; III) составление списка последовательностей FR природного антитела, имеющего высокую степень гомологии с FR первичного антитела; IV) отбор из списка, полученного на стадии III) FR природного антитела человека, в котором природный FR содержит один или более аминокислотных остатков, искусственно введенных на стадии I) путем замещения аминокислот, причем аминокислотная последовательность FR в этом антителе является такой же или имеет высокую степень гомологии с FR первичного антитела; V) если FR в первичном антителе имеет одну или более аминокислот, которые отличаются от соответствующих аминокислот в FR, выбранном на стадии IV), то указанные отличающиеся аминокислоты замещают в FR соответствующими аминокислотами в природном FR, выбранном на стадии IV); VI) конструирование экспрессирующего вектора, включающего ДНК, кодирующую аминокислотную последовательность антитела, полученного на стадии V); VII) культивирование штамма клеток, включающих экспрессирующий вектор, сконструированный на стадии VI), и VIII) выделение из культуральной жидкости природного гуманизированного антитела, включающего природный FR антитела человека.

2. Способ по п.1, в котором первичное антитело содержит CDR, полученные от животного первого вида, и FR, полученные от животного второго вида, имеющие искусственные аминокислотные остатки.

3. Способ по п.2, в котором животным первого вида является крыса, а животным второго вида является человек.

4. Способ по любому и пп.1-3, в котором искусственные аминокислотные остатки происходят от FR антитела, не принадлежащего человеку.

РИСУНКИ

Рисунок 1, Рисунок 2, Рисунок 3, Рисунок 4, Рисунок 5, Рисунок 6, Рисунок 7, Рисунок 8, Рисунок 9, Рисунок 10, Рисунок 11, Рисунок 12, Рисунок 13, Рисунок 14, Рисунок 15, Рисунок 16, Рисунок 17, Рисунок 18, Рисунок 19, Рисунок 20, Рисунок 21, Рисунок 22, Рисунок 23, Рисунок 24, Рисунок 25, Рисунок 26, Рисунок 27, Рисунок 28, Рисунок 29, Рисунок 30, Рисунок 31, Рисунок 32, Рисунок 33, Рисунок 34, Рисунок 35, Рисунок 36, Рисунок 37, Рисунок 38, Рисунок 39, Рисунок 40, Рисунок 41, Рисунок 42, Рисунок 43, Рисунок 44, Рисунок 45, Рисунок 46, Рисунок 47, Рисунок 48, Рисунок 49, Рисунок 50, Рисунок 51, Рисунок 52, Рисунок 53, Рисунок 54, Рисунок 55, Рисунок 56, Рисунок 57, Рисунок 58, Рисунок 59, Рисунок 60, Рисунок 61, Рисунок 62, Рисунок 63, Рисунок 64, Рисунок 65, Рисунок 66, Рисунок 67, Рисунок 68, Рисунок 69, Рисунок 70, Рисунок 71, Рисунок 72, Рисунок 73, Рисунок 74, Рисунок 75, Рисунок 76, Рисунок 77, Рисунок 78, Рисунок 79, Рисунок 80, Рисунок 81, Рисунок 82, Рисунок 83, Рисунок 84, Рисунок 85, Рисунок 86, Рисунок 87, Рисунок 88, Рисунок 89, Рисунок 90, Рисунок 91, Рисунок 92, Рисунок 93, Рисунок 94, Рисунок 95, Рисунок 96, Рисунок 97, Рисунок 98, Рисунок 99, Рисунок 100, Рисунок 101, Рисунок 102, Рисунок 103, Рисунок 104, Рисунок 105, Рисунок 106, Рисунок 107, Рисунок 108, Рисунок 109, Рисунок 110, Рисунок 111, Рисунок 112, Рисунок 113, Рисунок 114, Рисунок 115, Рисунок 116, Рисунок 117, Рисунок 118, Рисунок 119, Рисунок 120, Рисунок 121, Рисунок 122, Рисунок 123, Рисунок 124, Рисунок 125, Рисунок 126, Рисунок 127, Рисунок 128, Рисунок 129, Рисунок 130, Рисунок 131, Рисунок 132, Рисунок 133, Рисунок 134, Рисунок 135, Рисунок 136, Рисунок 137, Рисунок 138, Рисунок 139, Рисунок 140, Рисунок 141, Рисунок 142, Рисунок 143, Рисунок 144, Рисунок 145, Рисунок 146, Рисунок 147, Рисунок 148, Рисунок 149, Рисунок 150, Рисунок 151, Рисунок 152, Рисунок 153, Рисунок 154, Рисунок 155, Рисунок 156, Рисунок 157, Рисунок 158, Рисунок 159, Рисунок 160, Рисунок 161, Рисунок 162, Рисунок 163, Рисунок 164, Рисунок 165, Рисунок 166, Рисунок 167, Рисунок 168, Рисунок 169, Рисунок 170, Рисунок 171, Рисунок 172, Рисунок 173, Рисунок 174, Рисунок 175, Рисунок 176, Рисунок 177, Рисунок 178, Рисунок 179, Рисунок 180, Рисунок 181, Рисунок 182, Рисунок 183, Рисунок 184, Рисунок 185, Рисунок 186, Рисунок 187, Рисунок 188, Рисунок 189, Рисунок 190, Рисунок 191, Рисунок 192