2229478 - Замещенные [1.3]оксазоло[4,5-d]пиридазины и комбинаторная библиотека

Замещенные [1.3]оксазоло[4,5-d]пиридазины и комбинаторная библиотека

Реферат

Изобретение относится к новым физиологически активным замещенным оксазоло[4,5-d]пиридазинам общей формулы (1), (2) или (3) и комбинаторной библиотеке, предназначенной для поиска среди них физиологически активных веществ, соединений-лидеров и кандидатов (drug-candidates) на основании скрининга. При испытаниях соединения показали способность ингибировать активность протеинкиназы. В соединениях

R¹ и R² каждый независимо друг от друга представляют атом водорода, инертный заместитель, выбранный из группы, включающей необязательно замещенный алкил, необязательно замещенный алкенил, необязательно замещенный алкинил, необязательно замещенный алкокси, необязательно замещенный алкоксиалкил, необязательно замещенный аралкил, необязательно замещенный гетероциклилалкил, необязательно замещенный алкарил, необязательно замещенный циклоалкил, необязательно замещенный циклоалкенил, необязательно замещенный арил, необязательно замещенный алкилсульфинил, необязательно замещенный алкилсульфонил, -(СН₂)_m-O-(С₁-С₇алкил), -(CH₂)m-N(C₁-С₇алкил)_n, где n и m имеют значение от 1 до 7, необязательно замещенный арилоксиалкил, необязательно замещенный гетероциклил; R³ и R⁴ каждый независимо друг от друга представляют: атом водорода, -CN, -Cl, -Br, -I, карбоксильную группу, необязательно замещенную карбокси- C_1-6алкильную группу, необязательно замещенную карбамоильную группу, необязательно замещенную гидроксильную группу, необязательно замещенный гидроксиС_1-5алкил, необязательно замещенный аминоС_1-7алкил, необязательно замещенную аминогруппу, азагетероцикл-N-ил или замещенный азагетероцикл-N-ил, инертный заместитель, выбранный из группы, включающей необязательно замещенный алкил, необязательно замещенный алкенил, необязательно замещенный алкинил, необязательно замещенный алкокси, необязательно замещенный алкоксиалкил, необязательно замещенный аралкил, необязательно замещенный гетероциклилалкил, необязательно замещенный алкарил, необязательно замещенный циклоалкил, необязательно замещенный циклоалкенил, необязательно замещенный арил, необязательно замещенный алкилсульфинил, необязательно замещенный алкилсульфонил, -(CH₂)_m-O-(C₁-C₇ алкил), -(CH₂)_m-N(C₁-С₇алкил)_n, где n и m имеют значение от 1 до 7, необязательно замещенный арилоксиалкил, необязательно замещенный гетероциклил. 2 с. и 6 з.п. ф-лы, 1 ил., 1 табл.

Область изобретения.

Данное изобретение относится к поиску новых химических веществ и новых физиологически активных веществ, соединений-лидеров и кандидатов (drug-candidates) получаемых на основании скрининга комбинаторных библиотек.

Более конкретно, настоящее изобретение относится к новым оксазоло [4,5-d]пиридазинам и комбинаторной библиотеке этого ряда соединений.

Предпосылки создания изобретения

Азолопиридазины обладают высоким физиологически активным потенциалом. Так, например, замещенные 1,2,4-триазоло[2,3-b]пиридазины обладают противовоспалительным, противоастматическим [Miyake, A.; Kawano, Y.; Ashida, A. (Takeda Chemical Industries, Ltd.), EP 0562439; JP 1994279447; US 5389633; US 5482939. J.Lewis, P.J.Shea, (Aventis Pharmaceuticals, Inc.), US 4136182], гипотензивным [G.R. Jr.Allen, J.W. Jr.Hanifin, D.B.Moran, J.D.Albright. US 4112095] и анксиолитическим действием [J.L. Castro Pineiro, L.J.Street, M.G.Russell, K.W.Moore, A.R.Guiblin, W.R.Carling, H.B.Broughton, A. Madin (Merck Sharp & Dohme Ltd.), WO 9804559; EP 0915875], а замещенные пиразоло[3,4-d]пиридазины, тиазоло[4,5-d]пиридазины и триазоло[4,5-d]пиридазины имидазо[4,5-d]пиридазины обладают противораковой активностью [A.Tetsuya, M.Shogo, I.Fumio, Y.Masuo, N.Masafumi (Takeda Chemical Industries, Ltd.), EP 0733633].

Учитывая высокий физиологически активный потенциал азолопиридазинов, актуальным является разработка новых классов этого типа гетероциклических соединений и комбинаторных библиотек, включающих эти соединения для поиска биологически активных лидеров.

Краткая характеристика изобретения

В результате проведенных исследований, направленных на поиск новых соединений для поиска биологически активных лидеров, изобретатели получили неизвестные ранее оксазоло[4,5-d]пиридазинам, которым свойственна физиологическая активность, и комбинаторную библиотеку этих соединений.

Известно лишь несколько представителей этого ряда соединений, в частности известен замещенный 2-(2,2-диметил-[1,3]диоксолан-4-ил)-4-гидрокси-6Н-оксазоло[4,5-d]пиридазин-7-он [M.Yokoyama, M.Irie, K.Sujino, T.Kagemoto, H.Togo, M.Funabashi. J.Chem. Soc. Perkin Tr. 1, 1992, 2127-2134], синтез которого осуществлен в связи с доказательством строения соответствующего диметил [1,3]оксазол-4,5-дикарбоксилата по следующей схеме

Известны также 7-хлор-2-фенилоксазоло[4,5-d]пиридазин [Ruraishi, N. Chem. & Pharm. Bull. (Tokyo), 1958, 6, 641-644], 2-амино-7-хлороксазоло[4,5-d]пиридазин, N'-(7-хлороксазоло[4,5-d]пиридазин-2-ил)-N,N-диметилформамидин, N-гидрокси-N'-(7-хлороксазоло[4,5-d]пиридазин-2-ил)-формамидин и N-амино-N'-(7-хлороксазоло[4,5-d]пиридазин-2-ил)-формамидин [Marslavic, M.; Stanovnik. В.; Tisler, M. Monatshefte fuer Chemie, 1985, 116 (12), 1447-1458], оксазоло[4,5-d]пиридазин-2-ил-ацетанилид [Harnisch, H. Пат. США, 3985763, 1976] и поли 2,6-(оксазоло[4,5-d]пиридазин [Kurkov, V.P. Пат. США, 4505840, 1985].

Сведения о биологической активности оксазоло[4,5-d]пиридазинов в научной и патентной литературе до настоящего времени отсутствовали.

Подробное описание изобретения

Ниже приведены определения терминов, которые использованы в описании этого изобретения:

“Комбинаторная библиотека” означает группу соединений, полученных параллельным синтезом, предназначенную для поиска соединения-хита или -лидера, а также для оптимизации физиологической активности хита или лидера, причем каждое соединение библиотеки соответствует общему скэффолду и библиотека является коллекцией родственных гомологов или аналогов.

“Фокусированная библиотека” означает комбинаторную библиотеку, или совокупность нескольких комбинаторных библиотек, или совокупность библиотек и веществ, специальным образом организованную с целью увеличения вероятности нахождения хитов и лидеров или с целью повышения эффективности их оптимизации. Дизайн фокусированных библиотек, как правило, связан с направленным поиском эффекторов (ингибиторов, активаторов, агонистов, антагонистов и т.п.) определенных биомишеней (ферментов, рецепторов, ионных каналов и т.п.).

“Нуклеофильный заместитель” означает химический радикал, который присоединяется к скэффолду в результате реакции с нуклеофильным реагентам, например, выбранным из группы первичных или вторичных аминов, спиртов, фенолов, меркаптанов и тиофенолов.

“Электрофильный заместитель” означает химический радикал, который присоединяется к скэффолду в результате реакции с электрофильным реагентом, например, выбранным из группы органических галогенидов, органических кислот или их производных (ангидридов, имидазолидов, галогенангидридов), эфиров органических сульфокислот или органических сульфохлоридов, органических галогенформиатов, органических изоцианатов и органических изотиоцианатов.

“Арил” означает один или более ароматических циклов, каждой из которых включает 5 или 6 атомов углерода. “Арил” может быть конденсированным полициклом, например как нафталин или неконденсированным, например как бифенил. “Замещенный арил” имеет один или несколько “не мешающих” заместителей.

“Галоген” означает атом фтора, хлора, брома или йода.

“Гетероцикл” означает один или несколько насыщенных, ненасыщенных или ароматических циклов с 5, 6 или 7 атомами, по крайней мере, один из которых является гетероатомом. Преимущественными гетероатомами являются сера, кислород и азот. “Гетероцикл” может быть конденсированным полициклом, например, как бензимидазол, бензоксазол, бензтиазол, хинолин или неконденсированным, например, как бипиридил. “Азогетероцикл” означает гетероцикл, включающий, по крайней мере, один атом азота, например, как пиперидин, морфолин, пиррол, бензимидазол, бензоксазол, бензтиазол, хинолин.

“NH-Защитный заместитель” означает химический радикал, который присоединяется к скэффолду или полупродукту синтеза для временной защиты аминогруппы в мультифункциональных соединениях включая, но не ограничивая: амидный заместитель, такой как формил, необязательно замещенный ацетил (например, трихлорацетил, трифторацетил 3-фенилпропионил и др.), необязательно замещенный бензоил и др.; карбаматный заместитель, такой как необязательно замещенный C₁-C₇алкилоксикарбонил, например, метилоксикарбонил, этилоксикарбонил, трет-бутилоксикарбонил, 9-флуоренилметилоксикарбонил (Fmoc) и др.; необязательно замещенный C₁-C₇ алкильный заместитель, например, трет-бутил, бензил, 2,4-диметиксибензил, 9-фенилфлуоренил и др.; сульфонильный заместитель, например, бензолсульфонил, п-толуолсульфонил и др.

“Электрофильный заместитель” означает химический радикал, который присоединяется к скэффолду в результате реакции с электрофильным реагентом, например, выбранным из группы органических галогенидов (необязательно замещенных C₁-C₇ алкилгалогенидов, необязательно замещенных арилС₁-С₇алкилгалогенидов, необязательно замещенных гетероциклилС₁-С₇алкилгалогенидов, необязательно замещенных арилгалогенидов, необязательно замещенных гетероциклилгалогенидов), органических кислот или их производных (ангидридов, имидазолидов, галогенангидридов), эфиров органических сульфокислот или органических сульфохлоридов, органических галогенформиатов, органических изоцианатов и органических изотиоцианатов.

“Галоген” означает атом фтора, хлора, брома или иода.

“Гетероцикл” может быть конденсированным полициклом, например, как бензимидазол, бензоксазол, бензтиазол, хинолин или неконденсированным, например, как бипиридил.

“Азагетероцикл” означает гетероцикл, включающий, по крайней мере, один атом азота, например, как пиперидин, морфолин, пиррол, бензимидазол, бензоксазол, бензтиазол, хинолин.

“Замещенный гетероцикл” означает гетероцикл, имеющий один или несколько “не мешающих” заместителей.

“Замещенный азагетероцикл” означает азагетероцикл, имеющий один или несколько “не мешающих” заместителей.

“Параллельный синтез” означает метод проведения химического синтеза комбинаторной библиотеки индивидуальных соединений.

Целью настоящего изобретения является новые [1,3]оксазоло[4,5-d]пиридазины общей формулы (1), (2) или (3):

в которых R¹ и R², каждый независимо друг от друга, представляют: атом водорода, инертный заместитель, или электрофильный заместитель, выбранный из группы органических галогенидов, таких как: необязательно замещенных C₁-C₇ алкилгалогенидов, необязательно замещенных арилС₁-С₇алкилгалогенидов, необязательно замещенных гетероциклил C₁-С₇алкилгалогенидов, необязательно замещенных арилгалогенидов, необязательно замещенных гетероциклил галогенидов;

R³ и R⁴, каждый независимо друг от друга, представляют: атом водорода, инертный заместитель, -CN, -Cl, -Вr, -I, карбоксильная группа, необязательно замещенную карбокси C_1-6алкильную группу, необязательно замещенную карбамоильную группу, необязательно замещенную гидроксильную группу, необязательно замещенный гидроксиС_1-5алкил, необязательно замещенный аминоС_1-7алкил, необязательно замещенную аминогруппу, азогетероцикл-N-ил или замещенный азагетероцикл-N-ил;

исключая 7-хлор-2-фенилоксазоло[4,5-d]пиридазин, 2-амино-7-хлороксазоло[4,5-d]пиридазин, N'-(7-хлороксазоло[4,5-d]пиридазин-2-ил)-N,N-диметилформамидин, N-гидрокси-N'-(7-хлороксазоло[4,5-d]пиридазин-2-ил)-формамидин, N-aминo-N'-(7-xлopoкcaзoлo[4,5-d]пиpидaзин-2-ил)-фopмaмидин, оксазоло[4,5-d]пиридазин-2-ил-ацетанилид, и поли 2,6-(оксазоло[4,5-d]пиридазин.

Целью настоящего изобретения является также новая комбинаторная библиотека оксазоло[4,5-d]пиридазинов общей формулы (1), (2) и (3).

Предпочтительные варианты воплощения изобретения

Предпочтительным вариантом изобретения являются новые [1,3]оксазоло[4,5-d]-пиридазины общей формулы (1), (2) или (3) и комбинаторная библиотека новых [1,3]оксазоло-[4,5-d]пиридазинов общей формулы (1), (2) или (3).

В частности, предпочтительными новыми соединениями являются:

[1,3]оксазоло[4,5-d]пиридазин-2(3H),7(6H)-дион формулы (1.1):

6-замещенные [1,3]оксазоло[4,5-d]пиридазин-2(3H),7(6H)-дионы общей формулы (1.2):

в которых R¹ = имеет вышеуказанное значение;

3-замещенные [1,3]оксазоло[4,5-d]пиридазин-2(3H),7(6H)-дионы общей формулы (1.3)

в которых R² = имеет вышеуказанное значение;

3,6-дизамещенные [1,3]осазоло[4,5-d]пиридазин-2(3H),7(6H)-дионы общей формулы (1.4)

в которых R¹ и R² = имеют вышеуказанное значение;

2-замещенные [1,3]оксазоло[4,5-d]пиридазины-7(6H)-оны общей формулы (2.1):

в которых R³ имеют вышеуказанное значение;

2,6-дизамещенные [1,3]оксазоло[4,5-d]пиридазины-7(6H)-оны общей формулы (2.2):

в которых R¹ и R³ имеют вышеуказанное значение;

предпочтительным вариантом изобретения являются комбинаторная библиотека [1,3]оксазоло[4,5-d]пиридазинов общей формулы (1), (2) или (3) в которой варьируются заместители R¹, R², R³ и R⁴, имеющие вышеуказанное значение.

Ниже изобретение описывается с помощью конкретных примеров получения конкретных соединений и комбинаторной библиотеки. Структуры полученных соединений подтверждались данными химического, хроматографического и спектрального анализа. Жидкофазный параллельный синтез новых соединений и комбинаторной библиотеки осуществлялись с использованием специальных синтезаторов "CombiSyn-012-3000" [М.Бару, А.Иващенко, патент России 2180609, 2002; РСТ WO 02/087740 A1, 2002] и оборудования [Technology Platform. In Custom Chemistry; Chemical Diversity Labs, Inc.; San Diego, CA, 2002; p.5].

Приведенные ниже примеры иллюстрируют, но не ограничивают данное изобретение.

Примеры.

Общая информация. Все растворители и реагенты были получены из коммерческих источников, таких как Акрос (Бельгия), Сигма-Олдрич (США), Ланкастер (Англия) и Кем Див (США). Точки плавления (т.пл.) были получены на приборе фирмы Бюхи (Швейцария) модель В-520. ¹³С ЯМР спектры были получены на спектрометрах фирмы Брукер модель АМ-300 и модель DRX-500 в диметилсульфоксиде-d₆ химические сдвиги приведены в шкале (ppm). Внутренний стандарт тетраметилсилан. Масс-спектры были измерены на приборе Kratos Model MS-890.

Аналитическую ТСХ проводили на силикагеле на алюминевых пластинках Silufol UV₂₅₄ (5 см 15 см) (Kavalier, Czech Republic) или на стеклянных пластинках с 0,25 мм слоем силикагеля 60 F₂₅₄ (Merck, Germany). Визуализация осуществлялась с помощью УФ-света на длине волны 254 нм. Для хроматографической очистки использовали силикагель 5-40 m (Chemapol, Czech Republic). В соответствии с данными LC/MS все синтезированные соединения имели содержание основного вещества выше 95%.

Пример 1. [1,3]Оксазоло[4,5-d]пиридазин-2(3H),7(6H)-дион 1.1 {1}. К раствору 8 г (48 ммольь) 4,5-дихлор-3(2H)-пиридазинона 6 {1} в 40 мл диметилформамида прибавляли раствор 12 г (170 ммольь) нитрита натрия в 15 мл воды. Смесь кипятили 5 ч до прекращения выделения окислов азота, охлаждали, выпавшие кристаллы отфильтровывали, смешивали с 50 мл теплой 6 N соляной кислоты, затем охлаждали и отфильтровывали желтые кристаллы. Получали 5 г (65%) 4-гидрокси-5-нитро-3(2H)-пиридазинона 6 {1} : Н¹ ЯМР, : 1.068 (t, 6H), 3.246 (q, 4H), 8.1 (d, J=4.4 Hz, 1H), 8.1 (dd, J=8.8 Hz, J=2.0 Hz, 1H), 8.3 (d, J=8.8 Hz, 1H), 9.2 (d, J=4.4 Hz, 1H), 9.3 (d, J=2.1 Hz, 1H), 14.17 (bs, 1H). Гидрировали 15 г нитропроизводного 6 {1} в смеси 100 мл этанола и 50 мл воды в присутствии 150 мг окиси платины при 2 ат водорода и при 50С. Теплый раствор фильтровали и охлаждали. Выпавший продукт отфильтровывали и перекристаллизовывали из воды. Получали 6 г (50%) 5-амино-4-гидрокси-3(2H)-пиридазинона 7 {1} : LC MS m/z 128 (М+1). Нагревали смесь 904 мг полученного продукта 7 {1} и 770 мг 1,1'-карбонилдиимидазола в 6 мл диоксана в течение 1000 сек при 170С в микроволновом реакторе. Реакционную массу охлаждали, осадок отфильтровывали и перекристаллизовывали смеси диоксан:вода (9:1). Получали 260 мг (42%) целевого продукта 1.1:LC MS m/z 154 (М+1).

Пример 2. 6-Фенил[1,3]оксазоло[4,5-d]пиридазин-2(3H),7(6H)-дион 1.1 {2}. Исходный 4-гидрокси-5-нитро-2-фенил-3(2H)-пиридазинон 6 {2} получали с выходом 67% по аналогии с 4-гидрокси-5-нитро-3(2H)-пиридазиноном 6 {1} (пример 1). К суспензии 1,0 г (4,3 ммоль) нитропиридазинона 6 {2} в 10 мл этанола или метанола или диметилформамида прибавляли 50% водную суспензию 200 мг 10% Pd на угле и 5,0 эквивалентами циклогексена, формиата аммония или формиат триэтиаммония. Реакционную смесь кипятили при перемешивании 15-30 минут (в случае диметилформамида, выдерживали 24 ч при комнатной температуре). Реакционную смесь фильтровали, растворитель отгоняли в вакууме, остаток промывали водой и перекристаллизовывали из этанола. Получали 5-амино-4-гидрокси-2-фенил-3(2H)-пиридазинон 7 {2} с количественным выходом. ¹H-NMR (DMSO-d₆) 5.63 (brs, 2H), 7.35 (t, J=7.3 Hz, 1H), 7.45 (t, J=7.3 Hz, 2H), 7.54 (d, J=7.3 Hz, 2H), 7.71 (s, 1H), 9.40 (brs, 1H); ¹³C-NMR (DMSO-d₆) 125.8, 127.5, 128.7, 131.9, 132.2, 133.6, 142.3, 157.0; LC MS m/z 204.1 (М+1). Растворяли 3,0 г (14,8 ммоль) полученного 7 {2} в 30 мл диоксана и прибавляли к полученному раствору 2,9 г (1,2 эквивалента) 1,1'-карбонилдиимидазола. Смесь кипятили при перемешивании 30 мин. Растворитель отгоняли в вакууме, а остаток растворяли в 30 мл воды и прибавляли 40 мл 1,0 М соляной кислоты. Полученную суспензию охлаждали и фильтровали. Осадок на фильтре промывали водой и сушили на воздухе. Получали 3,16 г (93%) искомого продукта 1.1 {2} в виде слегка окрашенных кристаллов, ¹H-NMR (DMSO-d₆) 7.4-7.5 (m, 5Н), 8.33 (s, 1H); ¹³C-NMR (DMSO-d₆) 126.3, 126.4, 128.7, 129.1, 131.8, 135.5, 141.5, 150.8, 153.8; LC MS m/z 230.0 (М+1).

Пример 3. 3-Бензил[1,3]оксазоло[4,5-d]пиридазин-2(3H),7(6H)-дион 1.2 {1}. К смеси 1 ммольь [1,3]оксазоло[4,5-d]пиридазин-2(3H),7(6H)-диона 1.1 и 500 мг Сs₂СО₃в 1 мл N-метилпирролидона прибавляли 1,2 ммольь бензил бромида в 0,5 мл диоксана. После завершения реакции (контроль по LC MS) реакционную смесь разбавляли водой и продукт экстрагировали дихлорметаном. Растворитель отгоняли, а продукт очищали с помощью флеш-хроматографии на силикагеле с использованием смеси дихлорметана и тетрагидрофурана в качестве элюэнта. Получали продукт 1.2 {1} с выходом 54%. СH-NMR 5.04 (s, 1Н), 7.28-7.44 (m, 5Н), 8.31 (s, 1H), 13.46 (bs, 1H); MS m/z 244 (M+1).

Пример 4. Комбинаторная библиотека 2-замещенных [1,3]оксазоло[4,5-d]пиридазин-7(6H)-онов 2.1 {1-4}. Паралельный синтез комбинаторной библиотеки проводили в синтезаторе "CombiSyn-012-3000". В каждый из 5 реакторов синтезатора загружали смесь 254 мг (2 ммоль) 5-амино-4-гидрокси-3(2H)-пиридазинона 7 {1} , 3 ммоль соответствующей кислоты или нитрила и 0,5 мл 15% раствора фосфорной кислоты в N-метилпирролидоне перемешивали при 230С в течение 800-1000 сек в микроволновом реакторе. Реакционную массу растворяли в минимальном объеме диметилсульфоксида, затем разбавляли водой и экстрагировали дихлорэтаном. Органический слой промывали водой, раствором бикарбоната натрия, снова водой и упаривали в вакууме. Остаток анализировали методом LC MS. В случае необходимости продукт 2.1 очищали флэш-хроматографией на силикагеле смесью дихлорметана и тетрагидрофурана.

Пример 5. 2-(Бицикло[2.2.1]гепт-2-илметил)[1,3]оксазоло-[4,5-d]пиридазин-7(6H)-он 2.1 {1} : выход 75%. ¹Н-NMR: 1.02-1.21 (m, 4Н), 1.36-1.54 (m, 4Н), 1.94-2.04 (m, 2H), 2.20 (bs, 1H), 2.77-2.99 (m, 2H), 8.51 (s, 1H), 13.35 (bs, 1H). MS m/z 246 (M+1).

Пример 6. 2-(2-Нафтил)[1,3]оксазоло[4,5-d]пиридазин-7(6H)-он 2.1 {2} : выход 81%. ¹H-NMR: 7.60-7.70 (m, 2H), 7.98-8.22 (m, 4H), 8.61 (s, 1H), 8.81 (s, 1H), 13.43 (bs, 1H). MS m/z 263 (M+1).

Пример 7. 2-(2-Фторбензил)[1,3]оксазоло[4,5-d]пиридазин-7(6H)-он 2.1 {3} : выход 63%. ¹H-NMR: 4.49 (s, 2H), 7.02-7.11 (m, 1H), 7.21-7.30 (m, 2H), 7.35-7.45 (m, 1H); 8.51 (s, 1H). MS m/z 245 (М+1).

Пример 8. 2-(2-Фторфенил)[1,3]оксазоло[4,5-d]пиридазин-7(6H)-он 2.1 {4} : выход 77%. ¹H-NMR: 7.45-7.58 (m, 2H), 7.72-7.81 (m, 1H), 8.22 (t, J=7.5 Hz, 1H), 13.47 (bs, 1H). MS m/z 231 (M+1).

Примеры 9, 10. Общий способ получения 6-замещенных 2-(бицикло [2.2.1] гепт-2-ил-метил) [1,3]-оксазоло [4,5-d] пиридазин-7(6H)-онов 2.2 {1, 2}. Получали алкилированием 2-(бицикло[2.2.1]гепт-2-ил)[1,3]оксазоло[4,5-d]пиридазин-7(6H)-она 1.2 {1} , соответственно бензил бромидом или этилмонохлорацетатом, в условиях, аналогичных, приведенным в примере 3.

Пример 11. 6-Бензил 2-(бицикло[2.2.1]гепт-2-ил-метил)[1,3]оксазоло-[4,5-d]пиридазин-7(6H)-он 2.2 {1} : выход 45%. ¹Н-NMR: 1.05-1.27 (m, 4H), 1.40-1.52 (m, 4H), 1.94-2.10 (m, 2H), 2.20 (bs, 1H), 2.78-3.03 (m, 2H), 5.39 (s, 2H), 7.20-7.40 (m, 5H), 8.60 (s, 1H). MS m/z 336(M+1).

Пример 12. Этил {2-(бицикло[2.2.1]гепт-2-ил-метил)-7-оксо[1,3]-оксазоло[4,5-d]пиридазин-7(6H)-ил} ацетат 2.2 {2} : выход 48%. ¹H-NMR: 1.05-1.23 (m, 7H), 1.38-1.50 (m, 4H), 1.95-2.08 (m, 2H), 2.22 (bs, 1H), 2.78-3.06 (m, 2H), 4.15 (q, J=7.9 Hz), 5.01 (s, 2H), 8.61 (s, 1H). MS m/z 332 (M+1).

Пример 13. 2-(2-Пиридил)-6-фенил[1,3]-оксазоло[4,5-d]пиридазин-7(6H)-он 2.2 {3}. Смесь 1 ммольь (203 мг) 5-амино-4-гидрокси-2-фенил-3(2H)-пиридазинон 7 {2} , 4 ммольь (416 мг) 2-цианопиридина и 0,5 мл 15% полифосфорной кислоты растворяли в N-метилпирролидоне при перемешивании и нагревали в микроволновом реакторе при 180С в течение 500 сек. После охлаждения реакционную массу растворяли в диметилформамиде, разбавляли водой и экстрагировали дихлорметаном. Экстракт промывали водой, раствором карбоната натрия, снова водой, сушили безводным сульфатом натрия, фильтровали и упаривали в вакууме. Остаток перекристаллизовывали из ацетонитрила. Получали 116 мг (40%) продукта 2.2 {3} с т.пл. 251-254С. ¹H-NMR : 8.86 (m, 2H), 8.40-8.37 (d,1H), 8.13 (t, 1H), 7.75-7.71 (dd, 1H), 7.62-7.48 (m, 5Н); LC-MS m/z 291.1 [M+1].

Пример 14. Этил 2-{3-бензил-2,7-диоксо-3,7-дигидро[1,3]оксазоло[4,5-d]пиридазин-6(2H)-ил}ацетат 3.1 {1}. Получали алкилированием 3-бензил[1,3]-оксазоло[4,5-d]пиридазин-2(3H),7(6H)-диона 1.2 {1} этилмонохлорацетатом в условиях, аналогичных, приведенным в примере 3. Выход 62%. ¹Н-NMR: 1.18 (t, J=7.5 Hz, 3Н), 4.08 (q, 7.5 Hz, 2H), 4.95 (d, J=1.7 Hz, 2H), 5.05 (s, 1H); 7.30-7.45 (m, 5H), 8.37 (s, 1H). MS m/z 330 (M+1).

Пример 15. 3,6-Дибензил[1,3]оксазоло[4,5-d]пиридазин-2(3H),7(6H)-дион 3.1 {2}. Получали алкилированием 3-бензил[1,3]оксазоло[4,5-d]пиридазин-2(3H),7(6H)-диона 1.2 {1} бензил бромидом в условиях, аналогичных, приведенным в примере 3. Выход Y=67%. ¹Н-NMR ;: 5.04 (s, 2H), 5.33 (s, 2H), 7.35-7.45 (m, 10Н), 8.38 (s, 1H). MS m/z 334 (M+1).

Пример 16. Этил 2- {3-(2-этилокси-2-оксоэтил)-2,7-диоксо-3,7-дигидро[1,3]оксазоло[4,5-d]пиридазин-6(2H)-ил}ацетат 3.1 {1}. Получали алкилированием ммольь [1,3]оксазоло[4,5-d]пиридазин-2(3H),7(6H)-диона 1.1 этилмонохлорацетатом в условиях, аналогичных, приведенным в примере 3. Выход 34%, ¹Н-NMR: 1.15-1.30 (m, 6H), 4.10-4.25 (m, 4H), 4.83 (s, 2H), 4.98 (s, 2H), 8.52 (s, 1H). MS m/z 326 (M+1).

Пример 17. Фокусированная библиотека новых оксазоло[4,5-d]пиридазинов общей формулы (1). Из синтезированных оксазоло[4,5-d]пиридазинов общей формулы (1) выбрали 11 новых оксазоло[4,5-d]пиридазинов и составили фокусированную библиотеку, которую испытали на способность ингибировать активность протеинкиназы, которая определялась следующим образом. Раствор полипептида (Calbiochem, USA), состоящего из случайной последовательности глутаминовой кислоты и тирозина в количественном соотношении 4:1, соответственно, выдерживался в лунках 96-луночных тарелок с оптически прозрачным дном в течение ночи. За это время полипептид прочно сорбировался на поверхности лунок. Сорбированный полипептид служил субстратом для киназы, которая фосфориллировала тирозин в этом полипептиде. Затем 100 микролитров 1U киназы (Calbiochem, USA, 1U определялась, как концентрация этого фермента, способная присоединить к субстрату 1 пикомоль фосфата за 1 минуту) добавляли в лунки с адсорбированным полипептидом без тестируемых соединений (контрольная активность) или в присутствии разных концентраций этих соединений. После 30 минутной инкубации эти растворы удаляли путем вытряхивания из лунок и лунки дважды промывались физиологическим раствором. В лунки заливали 100 микролитров раствора анти-фосфотирозиновых моноклональных IGg антител с коньюгированной пероксидазой из хрена (Sigma, USA). Количество связавшихся антител определялось по соответствующей активности пероксидазы, которая в свою очередь определялась по скорости преобразования пероксидазного субстрата (OPD, o-phenolenediamine dihydrochloride, Sigma) в окрашенный продукт. Концентрация этого продукта, образовавшегося за 30 минут реакции, определялась по оптической плотности при 490 nm, измеренной с помощью параллельного 96-луночного считывателя VICTOR²V (Perkin Elmer, USA).

Для расчета процента ингибирования киназной активности, каждая 96-луночная тарелка содержала следующие контрольные лунки: 1) реакционный раствор, содержащий все компоненты кроме киназы; 2) реакционный раствор вместе с киназой. Оптическая плотность, измеренная в контрольных лунках (1) принималась за нулевую активность (OD₀), а оптическая плотность, измеренная в контрольных лунках (2) - за 100% (OD₁₀₀). Оптические плотности, измеренные в присутствии тестируемых соединений (OD_i), выражались в процентах от максимальной активности и процент ингибирования киназной активности рассчитывался по следующей формуле

В фокусированной библиотеке оксазоло[4,5-d]пиридазинов общей формулы (1) были обнаружены соединения с различной ингибирующей способностью, в том числе принадлежащие к группе неполных (частичных) ингибиторов, представляющих значительный интерес для создания новых лекарств. Неполные ингибиторы снижают, но не полностью ингибируют константу скорости образования продукта ферментативной активности.

На чертеже представлена концентрационная зависимость ингибирования киназной активности одним из обнаруженных активных соединений (6) и одним из не активных соединений (1).

В таблице приведены величины ингибирования ABL-киназы, определенные при концентрации соответствующих соединений 30 мкМ.

Формула изобретения

1. Замещенные оксазоло[4,5-d]пиридазины общей формулы (1), (2) или (3)

в которых R¹ и R² каждый независимо друг от друга представляют атом водорода, инертный заместитель, выбранный из группы, включающей необязательно замещенный алкил, необязательно замещенный алкенил, необязательно замещенный алкинил, необязательно замещенный алкокси, необязательно замещенный алкоксиалкил, необязательно замещенный аралкил, необязательно замещенный гетероциклилалкил, необязательно замещенный алкарил, необязательно замещенный циклоалкил, необязательно замещенный циклоалкенил, необязательно замещенный арил, необязательно замещенный алкилсульфинил, необязательно замещенный алкилсульфонил, -(СН₂)_m-О-(С₁-С₇алкил),-(CH₂)_m-N(C₁-С₇алкил)_n, где n и m имеют значение от 1 до 7, необязательно замещенный арилоксиалкил, необязательно замещенный гетероциклил;

R³ и R⁴ каждый независимо друг от друга представляют: атом водорода, -CN, -Cl, -Вr, -I, карбоксильную группу, необязательно замещенную карбокси-C1-C₆алкильную группу, необязательно замещенную карбамоильную группу, необязательно замещенную гидроксильную группу, необязательно замещенный гидроксиС₁-C₅алкил, необязательно замещенный аминоС₁-C₇алкил, необязательно замещенную аминогруппу, азагетероцикл-N-ил или замещенный азагетероцикл-N-ил, инертный заместитель, выбранный из группы, включающей необязательно замещенный алкил, необязательно замещенный алкенил, необязательно замещенный алкинил, необязательно замещенный алкокси, необязательно замещенный алкоксиалкил, необязательно замещенный аралкил, необязательно замещенный гетероциклилалкил, необязательно замещенный алкарил, необязательно замещенный циклоалкил, необязательно замещенный циклоалкенил, необязательно замещенный арил, необязательно замещенный алкилсульфинил, необязательно замещенный алкилсульфонил, -(СН₂)_m-О-(C₁-C₇ алкил), -(CH₂)_m-N(C₁-С₇алкил)_n, где n и m имеют значение от 1 до 7, необязательно замещенный арилоксиалкил, необязательно замещенный гетероциклил;

исключая 7-хлор-2-фенилоксазоло[4,5-d]пиридазин, 2-амино-7-хлороксазоло[4,5-d]пиридазин, N'-(7-хлороксазоло[4,5-d]пиридазин-2-ил)-N,N-диметилформамидин, N-гидрокси-N' -(7-хлороксазоло [4,5 -d] пиридазин-2-ил)-формамидин, N-амино-N'-(7-хлороксазоло[4,5-d]пиридазин-2-ил)-формамидин, оксазоло[4,5-d]пиридазин-2-ил-ацетанилид, и поли-2,6-(оксазоло[4,5-d]пиридазин).

2. Соединение по п.1, представляющее [1,3]оксазоло[4,5-d]пиридазин-(3Н),7(6Н)-дион (1.1) формулы

3. Соединения по п.1, представляющие 6-замещенные [1,3]оксазоло[4,5-d]-

пиридазин-2(3Н),7(6Н)-дионы общей формулы (1.2)

в которых R¹ имеет вышеуказанное значение.

4. Соединения по п.1, представляющие 3-замещенные [1,3]оксазоло[4,5-

d]-пиридазин-2(3Н),7(6Н)-дионы общей формулы (1.3)

в которых R² имеет вышеуказанное значение.

5. Соединения по п.1, представляющие 3,6-дизамещенные [1,3]оксазоло[4,5-

d]-пиридазин-2(3Н),7(6Н)-дионы общей формулы (1.4)

в которых R¹ и R² имеют вышеуказанное значение.

6. Соединения по п.1, представляющие 2-замещенные [1,3]оксазоло[4,5-d]-пиридазины-7(6Н)-оны общей формулы (2.1)

в которых R³ имеет вышеуказанное значение.

7. Соединения по п.1, представляющие 2,6-дизамещенные[1,3]оксазоло[4,5-d]-пиридазины-7(6Н)-оны общей формулы (2.2)

в которых R¹ и R³ имеют вышеуказанное значение.

8. Комбинаторная библиотека [1,3]оксазоло[4,5-d]пиридазинов общей формулы (1), (2) или (3) по п.1.

РИСУНКИ

Рисунок 1

Замещенные [1.3]оксазоло[4,5-d]пиридазины и комбинаторная библиотека

Патент 2229478