Биопрепарат на основе бактериофагов для профилактики и лечения сальмонеллеза животных

Биопрепарат на основе бактериофагов для профилактики и лечения сальмонеллеза животных

Реферат

 

Изобретение относится к биотехнологии и ветеринарной медицине, а именно к созданию биологического препарата для профилактики и лечения сальмонеллеза, а также для борьбы с носительством возбудителей сальмонеллезных инфекций у животных, в том числе и птицы. Изобретение также может быть использовано при производстве лечебных кормов и экологически чистых продуктов питания человека. Биопрепарат для профилактики и лечения сальмонеллеза животных, в том числе и птицы, содержит штаммы бактериофагов Phagum Salmonella choleraesuis CSl-ДЕП, и/или Phagum Salmonella choleraesuis CS2-ДЕП, и/или Phagum Salmonella enteritidis SPZ-1-ДЕП, и/или Phagum Salmonella enteritidis SPZ-2-ДЕП, Phagum Salmonella enteritidis SPZ-3-ДЕП и/или Phagum Salmonella enteritidis А-1-ДЕП, и/или Phagum Salmonella enteritidis F-6-ДЕП, и/или Phagum Salmonella enteritidis ЮН-1-ДЕП, и/или Phagum Salmonella enteritidis ЮН-2-ДЕП, и/или Phagum Salmonella enteritidis С-1-ДЕП, и/или Phagum Salmonella enteritidis Г-1-ДЕП, взятые в эффективном количестве. Он также содержит антисептик, например хинозол и стабилизатор. В качестве стабилизатора используют протеин (например, соевый белок), растительную муку, органический полимер, молоко, сыворотку, альбумин. Из органических полимеров могут быть использованы декстран, полиглюкин, крахмал, поливинилпирролидон. Биопрепарат может быть лиофильно высушен, гранулирован, заключен в полимерную матрицу. Он активен против Salmonella enteritidis. Salmonella typhimwium. Salmonella heidelberg, Salmonella choleraesuis, Salmonella gallinarum-pullorum. Биопрепарат нетоксичен для животных, высоко гигроскопичен, хорошо диспергируется в воде, его можно использовать в жидких и сухих рецептурных формах, при различных способах введения: путем подкожной, внутриперитониальной, внутримышечной инъекций и аэрозольно, путем введения фаговых частиц в легочные отделы, перорально - включая использование в виде лечебного корма и добавки к корму, а также путем нанесения на поверхность кожных покровов. Настоящее изобретение позволяет повысить эффективность лечения кишечных инфекций животных, в том числе и птицы, за счет сокращения сроков лечения, расширения спектра литического действия биопрепарата, устойчивости к действию ферментов желудочно-кишечного тракта и удобства применения. 10 з.п. ф-лы, 7 табл.

Изобретение относится к биотехнологии и ветеринарной медицине, а именно к созданию биологического препарата для профилактики и лечения сальмонеллеза, а также для борьбы с носительством возбудителей сальмонеллезных инфекций у животных, в том числе и птицы. Изобретение также может быть использовано при производстве лечебных кормов и экологически чистых продуктов питания человека.

Одним из основных источников кишечных заболеваний человека являются продукты питания, в том числе продукты птицеводства (мясо птицы, сырые и полусырые яйца), инфицированные патогенными микроорганизмами. К числу наиболее частых опасных для человека бактерий, распространяемых с продуктами питания, относятся различные представители рода Salmonella и патогенные. Инфекции, вызываемые этими бактериями, не всегда удается быстро вылечить, используя традиционные антибиотики, а самих возбудителей трудно удалить из объектов окружающей среды. В последние годы появляется все больше сообщений о выделении в России, США и странах Европы сальмонелл, устойчивых даже к нескольким антимикробным препаратам. При этом прослеживается тенденция возрастания доли таких полирезистентных штаммов. Кроме того, использование некоторых антибиотиков для лечения сальмонеллезов приводит к резко противоположному эффекту, усугубляя развитие инфекционного процесса.

Одним из кардинальных и, по-видимому, наиболее эффективных способов борьбы с кишечными инфекциями является защита продуктов животноводства и птицеводства, употребляемых человеком, от микробного заражения. Это может быть достигнуто путем предотвращения заражения сельскохозяйственных животных и проведения санации уже инфицированных особей (в основном молодняка). Использовать антибиотики для этих целей нерационально и не всегда эффективно по причинам, указанным выше.

Сейчас, когда стало понятным, что антибиотики не могут быть панацеей от всех инфекционных заболеваний, появляются все новые данные об использовании для лечения и профилактики инфекционных заболеваний человека и животных бактериофагов - вирусов, специфически лизирующих бактериальные клетки.

Известен препарат "Стрептофагин" для животноводства, содержащий смесь 4-х бактериофагов Streptococcus bovis в жидкой или сухой формах. Жидкая форма содержит смесь 4-х стерильных фаголизатов, сухая форма - лиофильно высушенные фаголизаты с наполнителями, предпочтительно с кукурузной мукой или ячменными отрубями. Препарат предназначен для скармливания лактирующим коровам (RU № 2059723, С 12 N 7/00, опубл. 1996 г.).

Недостатком препарата "Стрептофагин" является ограниченность спектра действия, так как он направлен против узкой группы заболеваний, вызванных возбудителем Streptococcus bovis.

Известен противосальмонеллезный препарат для перорального или аэрозольного введения, содержащий штамм бактериофага Bacteriophagum salmonellae НИИ 04Б СФ-1/36, аминопептид, хинозол и растворитель (воду или физраствор) (RU № 2035510, C 12 N 7/00, опубл. 20.05.1995).

Однако жидкая форма препарата не удобна в применении. Входящий в состав препарата бактериофаг не защищен от воздействия неблагоприятных факторов внешней среды и ферментов желудочно-кишечного тракта птицы. Вследствие этого возможна его инактивация в организме животных.

Известен также противосальмонеллезный препарат для перорального или аэрозольного введения, содержащий фильтрат культуральной жидкости штамма бактериофага Bacteriophagum salmonellae ГосНИИ особо чистых препаратов NCФ-17, аминопептид и бактериостатик (хинозол, метацид, ампициллин). Препарат лизирует сальмонеллы серологических групп А, В, С, D, E (RU № 2080384, C 12 N 7/00, опубл. 27.05.1997).

Недостатком препарата является отсутствие кормовых форм и отсутствие стабилизированных форм препарата, вследствие чего активность препарата может быть нестабильна в организме.

Наиболее близким аналогом является биопрепарат, содержащий композицию, по крайней мере, из двух или более вирулентных бактериофагов против любой из 21 групп возбудителей инфекции млекопитающих и стабилизатор - полимеры, буферный раствор и т.д. (US № 6121036, C 12 N 7/00, опубл 19.09.2000).

Однако для получения известного биопрепарата каждый раз необходимо предварительно осуществлять выделение и подбор активных и симбиотных штаммов бактериофагов, что невозможно при промышленном производстве. Кроме того, недостатком препарата является отсутствие кормовых форм.

Задачей изобретения является создание стабильных симбиотических биопрепаратов на основе новых нетоксичных, вирулентных штаммов бактериофагов, обладающих высокой литической активностью в отношении широкого ряда сероваров сальмонелл, удобного в применении и имеющего разные рецептурные формы.

Технический результат изобретения заключается в повышении эффективности лечения кишечных инфекций животных, в том числе и птицы, за счет сокращения сроков лечения, расширения спектра литического действия биопрепарата, устойчивости к действию ферментов желудочно-кишечного тракта и удобства применения.

Сущность изобретения заключается в следующем. Биопрепарат для профилактики и лечения сальмонеллеза животных, в том числе и птицы, содержит штаммы бактериофагов Phagum Salmonella choleraesuis CSl-ДЕП, и/или Phagum Salmonella choleraesuis CS2-ДЕП и/или Phagum Salmonella enteritidis SPZ-1-ДЕП, и/или Phagum Salmonella enteritidis SPZ-2-ДЕП, Phagum Salmonella enteritidis SPZ-3-ДЕП, и/или Phagum Salmonella enteritidis А-1-ДЕП, и/или Phagum Salmonella enteritidis F-6-ДЕП, и/или Phagum Salmonella enteritidis ЮН-1-ДЕП, и/или Phagum Salmonella enteritidis ЮН-2-ДЕП, и/или Phagum Salmonella enteritidis С-1-ДЕП, и/или Phagum Salmonella enteritidis Г-1-ДЕП, взятые в эффективном количестве.

Штаммы бактериофагов Phagum Salmonella choleraesuis CSl-ДЕП, Phagum Salmonella choleraesuis CS2-ДЕП, Phagum Salmonella enteritidis SPZ-1-ДЕП, Phagum Salmonella enteritidis SPZ-2-ДЕП, Phagum Salmonella enteritidis SPZ-3-ДЕП, Phagum Salmonella enteritidis А-1-ДЕП, Phagum Salmonella enteritidis F-6-ДЕП, Phagum Salmonella enteritidis ЮН-1-ДЕП, Phagum Salmonella enteritidis ЮН-2-ДЕП, Phagum Salmonella enteritidis C-1-ДЕП, Phagum Salmonella enteritidis Г-1-ДЕП выделены из образцов сточных вод и фекальных масс птицефабрик, селекционированы на чувствительных нелизогенных штаммах сальмонелл. Для выделения чистых линий фагов, их концентрирования и очистки использованы известные методы (Адамс М., Бактериофаги. - М.: Иностр. лит., 1961, с.397). Среди выделенных чистых линий фагов отобраны обладающие наиболее высокой литической активностью и наиболее широким спектром действия к основным возбудителям сальмонеллеза животных.

Полученные штаммы депонированы в коллекции микроорганизмов Всероссийского государственного научно-контрольного института контроля, стандартизации и сертификации ветеринарных препаратов (ВГНКИ) и им присвоены следующие регистрационные номера: Phagum Salmonella choleraesuis ВГНКИ № CSl-ДЕП, Phagum Salmonella choleraesuis ВГНКИ № СS2-ДЕП, Phagum Salmonella enteritidis ВГНКИ № SPZ-1-ДЕП, Phagum Salmonella enteritidis ВГНКИ № SPZ-2-ДЕП, Phagum Salmonella enteritidis ВГНКИ № SPZ-3-ДЕП, Phagum Salmonella enteritidis ВГНКИ № А-1-ДЕП, Phagum Salmonella enteritidis ВГНКИ № F-6-ДЕП, Phagum Salmonella enteritidis ВГНКИ № ЮН-1-ДЕП, Phagum Salmonella enteritidis ВГНКИ № ЮН-2-ДЕП, Phagum Salmonella enteritidis ВГНКИ № С-1-ДЕП, Phagum Salmonella enteritidis ВГНКИ № Г-1-ДЕП.

Штаммы фагов обладают следующими свойствами.

Морфология и размеры фаговых частиц. По классификационной схеме Ackermann, Dubow выделенные фаги относятся к морфотипам В1 и С1 (Ackermann H.W., Dubow M.S. Viruses of prokaryotes. V.I.General properties of bacteriophages. CRC Press, Boca Raton, FL., 1987, p.96).

Морфологическая характеристика штаммов представлена в табл. 1.

Литические свойства фагов. Селекционированные штаммы фагов сальмонелл обладают высокой литической активностью, сочетающейся с широким спектром литического действия.

Литическая активность штаммов бактериофагов сальмонелл, определенная методами Аппельмана и Грациа, представлена в табл. 2, спектр литической активности и диапазон специфичности - в табл. 3 и 4.

Селекционированные штаммы фагов сальмонелл способны лизировать бактериальные клетки музейных и эпизоотических штаммов сероваров Salmonella enteritidis, Salmonella typhimurium, Salmonella heidelberg, Salmonella choleraesuis, Salmonella gallinarum-pullorum, Salmonella dublin.

При изготовлении эффективных лечебно-профилактических препаратов против сальмонеллезов животных эти литические свойства селекционированных штаммов фагов позволяют использовать их как каждый в отдельности, так и их ассоциации.

Входящие в состав биопрепарата новые штаммы бактериофагов характеризуются широким спектром литического действия, не конкурируют друг с другом за рецепторы на бактериальной поверхности, а вступают в синергидные отношения, что проявляется в снижении частоты появления резистентных форм микроорганизмов.

В составе предлагаемого биопрепарата указанные штаммы могут использованы в различных сочетаниях, например Phagum Salmonella choleraesuis ВГНКИ № CSl-ДЕП и Phagum Salmonella choleraesuis ВГНКИ № CS2-ДЕП; Phagum Salmonella choleraesuis ВГНКИ № CSl-ДЕП и Phagum Salmonella enteritidis ВГНКИ № SPZ-1-ДЕП; Phagum Salmonella choleraesuis ВГНКИ № CSl-ДЕП и Phagum Salmonella enteritidis ВГНКИ № SPZ-2-ДЕП; Phagum Salmonella choleraesuis ВГНКИ № CSl-ДЕП и Phagum Salmonella enteritidis ВГНКИ № SPZ-3-ДЕП; Phagum Salmonella choleraesuis ВГНКИ № CSl-ДЕП и Phagum Salmonella enteritidis ВГНКИ № А-1-ДЕП; Phagum Salmonella choleraesuis ВГНКИ № CSl-ДЕП и Phagum Salmonella enteritidis ВГНКИ № F-6-ДЕП; Phagum Salmonella choleraesuis ВГНКИ № CSl-ДЕП и Phagum Salmonella enteritidis ВГНКИ № ЮН-1-ДЕП; Phagum Salmonella choleraesuis ВГНКИ № CSl-ДЕП и Phagum Salmonella enteritidis ВГНКИ № ЮН-2-ДЕП; Phagum Salmonella choleraesuis ВГНКИ № CSl-ДЕП и Phagum Salmonella enteritidis ВГНКИ № С-1-ДЕП; Phagum Salmonella choleraesuis ВГНКИ № CSl-ДЕП и Phagum Salmonella enteritidis ВГНКИ № Г-1-ДЕП; Phagum Salmonella choleraesuis ВГНКИ № CS2-ДЕП и Phagum Salmonella enteritidis ВГНКИ № SPZ-1-ДЕП; Phagum Salmonella choleraesuis ВГНКИ № CS2-ДЕП и Phagum Salmonella enteritidis ВГНКИ № SPZ-2-ДЕП; Phagum Salmonella choleraesuis ВГНКИ № CS2-ДЕП и Phagum Salmonella enteritidis ВГНКИ № SPZ-3-ДЕП; Phagum Salmonella choleraesuis ВГНКИ № CS2-ДЕП и Phagum Salmonella enteritidis ВГНКИ № А-1-ДЕП; Phagum Salmonella choleraesuis ВГНКИ № CS2-ДЕП и Phagum Salmonella enteritidis ВГНКИ № F-6-ДЕП; Phagum Salmonella choleraesuis ВГНКИ № CS2-ДЕП и Phagum Salmonella enteritidis ВГНКИ № ЮН-1-ДЕП; Phagum Salmonella choleraesuis ВГНКИ № CS2-ДЕП и Phagum Salmonella enteritidis ВГНКИ № ЮН-2-ДЕП; Phagum Salmonella choleraesuis ВГНКИ № СS2-ДЕП и Phagum Salmonella enteritidis ВГНКИ № С-1-ДЕП; Phagum Salmonella choleraesuis ВГНКИ № CS2-ДЕП и Phagum Salmonella enteritidis ВГНКИ № Г-1-ДЕП; Phagum Salmonella choleraesuis ВГНКИ № CSl-ДЕП, Phagum Salmonella choleraesuis ВГНКИ № CS2-ДЕП и Phagum Salmonella enteritidis ВГНКИ № SPZ-1-ДЕП; Phagum Salmonella choleraesuis ВГНКИ № CSl-ДЕП, Phagum Salmonella choleraesuis ВГНКИ № CS2-ДЕП и Phagum Salmonella enteritidis ВГНКИ № SPZ-2-ДЕП; Phagum Salmonella choleraesuis ВГНКИ № CSl-ДЕП, Phagum Salmonella choleraesuis ВГНКИ № СS2-ДЕП и Phagum Salmonella enteritidis ВГНКИ № SPZ-3-ДЕП; Phagum Salmonella choleraesuis ВГНКИ № CSl-ДЕП, Phagum Salmonella choleraesuis ВГНКИ № CS2-ДЕП и Phagum Salmonella enteritidis ВГНКИ № А-1-ДЕП; Phagum Salmonella choleraesuis ВГНКИ № CSl-ДЕП, Phagum Salmonella choleraesuis ВГНКИ № CS2-ДЕП и Phagum Salmonella enteritidis ВГНКИ № F-6-ДЕП; Phagum Salmonella choleraesuis ВГНКИ № CSl-ДЕП, Phagum Salmonella choleraesuis ВГНКИ № CS2-ДЕП и Phagum Salmonella enteritidis ВГНКИ № ЮН-1-ДЕП; Phagum Salmonella choleraesuis ВГНКИ № CSl-ДЕП, Phagum Salmonella choleraesuis ВГНКИ № CS2-ДЕП и Phagum Salmonella enteritidis ВГНКИ № ЮН-2-ДЕП; Phagum Salmonella choleraesuis ВГНКИ № CSl-ДЕП, Phagum Salmonella choleraesuis ВГНКИ № CS2-ДЕП и Phagum Salmonella enteritidis ВГНКИ № С-1-ДЕП; Phagum Salmonella choleraesuis ВГНКИ № CSl-ДЕП, Phagum Salmonella choleraesuis ВГНКИ № CS2-ДЕП и Phagum Salmonella enteritidis ВГНКИ № Г-1-ДЕП;

Phagum Salmonella enteritidis ВГНКИ № SPZ-1-ДЕП и Phagum Salmonella enteritidis ВГНКИ № SPZ-2-ДЕП; Phagum Salmonella enteritidis ВГНКИ № SPZ-1-ДЕП и Phagum Salmonella enteritidis ВГНКИ № SPZ-3-ДЕП; Phagum Salmonella enteritidis ВГНКИ № SPZ-1-ДЕП и Phagum Salmonella enteritidis ВГНКИ № А-1-ДЕП; Phagum Salmonella enteritidis ВГНКИ № SPZ-1-ДЕП и Phagum Salmonella enteritidis ВГНКИ № F-6-ДЕП; Phagum Salmonella enteritidis ВГНКИ № SPZ-1-ДЕП и Phagum Salmonella enteritidis ВГНКИ № ЮН-1-ДЕП; Phagum Salmonella enteritidis ВГНКИ № SPZ-1-ДЕП и Phagum Salmonella enteritidis ВГНКИ № ЮН-2-ДЕП; Phagum Salmonella enteritidis ВГНКИ № SPZ-1-ДЕП и Phagum Salmonella enteritidis ВГНКИ № С-1-ДЕП; Phagum Salmonella enteritidis ВГНКИ № SPZ-1-ДЕП и Phagum Salmonella enteritidis ВГНКИ № Г-1-ДЕП; Phagum Salmonella enteritidis ВГНКИ № SPZ-2-ДЕП и Phagum Salmonella enteritidis ВГНКИ № SPZ-3-ДЕП; Phagum Salmonella enteritidis ВГНКИ № SPZ-2-ДЕП и Phagum Salmonella enteritidis ВГНКИ № А-1-ДЕП; Phagum Salmonella enteritidis ВГНКИ № SPZ-2-ДЕП и Phagum Salmonella enteritidis ВГНКИ № F-6-ДЕП; Phagum Salmonella enteritidis ВГНКИ № SPZ-2-ДЕП и Phagum Salmonella enteritidis ВГНКИ № ЮН-1-ДЕП; Phagum Salmonella enteritidis ВГНКИ № SPZ-2-ДЕП и Phagum Salmonella enteritidis ВГНКИ № ЮН-2-ДЕП; Phagum Salmonella enteritidis ВГНКИ № SPZ-2-ДЕП и Phagum Salmonella enteritidis ВГНКИ № С-1-ДЕП; Phagum Salmonella enteritidis ВГНКИ № SPZ-2-ДЕП и Phagum Salmonella enteritidis ВГНКИ № Г-1-ДЕП; Phagum Salmonella choleraesuis ВГНКИ № CSl-ДЕП, Phagum Salmonella choleraesuis ВГНКИ № CS2-ДЕП, Phagum Salmonella enteritidis ВГНКИ № SPZ-1-ДЕП, Phagum Salmonella enteritidis ВГНКИ № SPZ-2-ДЕП, Phagum Salmonella enteritidis ВГНКИ № SPZ-3-ДЕП, Phagum Salmonella enteritidis ВГНКИ № А-1-ДЕП, Phagum Salmonella enteritidis ВГНКИ № F-6-ДЕП, Phagum Salmonella enteritidis ВГНКИ № ЮН-1-ДЕП, Phagum Salmonella enteritidis ВГНКИ № ЮН-2-ДЕП, Phagum Salmonella enteritidis ВГНКИ № С-1-ДЕП и Phagum Salmonella enteritidis ВГНКИ № Г-1-ДЕП;

Phagum Salmonella choleraesuis ВГНКИ № CSl-ДЕП, Phagum Salmonella choleraesuis ВГНКИ № CS2-ДЕП, Phagum Salmonella enteritidis ВГНКИ № SPZ-1-ДЕП, Phagum Salmonella enteritidis ВГНКИ № SPZ-2-ДЕП, Phagum Salmonella enteritidis ВГНКИ № А-1-ДЕП, Phagum Salmonella enteritidis ВГНКИ № F-6-ДЕП, Phagum Salmonella enteritidis ВГНКИ № ЮН-1-ДЕП, Phagum Salmonella enteritidis ВГНКИ № ЮН-2-ДЕП, Phagum Salmonella enteritidis ВГНКИ № С-1-ДЕП и Phagum Salmonella enteritidis ВГНКИ № Г-1-ДЕП;

Phagum Salmonella choleraesuis ВГНКИ № CSl-ДЕП, Phagum Salmonella choleraesuis ВГНКИ № CS2-ДЕП, Phagum Salmonella enteritidis ВГНКИ № SPZ-1-ДЕП, Phagum Salmonella enteritidis ВГНКИ № SPZ-2-ДЕП, Phagum Salmonella enteritidis ВГНКИ № А-1-ДЕП, Phagum Salmonella enteritidis ВГНКИ № F-6-ДЕП, Phagum Salmonella enteritidis ВГНКИ № ЮН-2-ДЕП, Phagum Salmonella enteritidis ВГНКИ № С-1-ДЕП и Phagum Salmonella enteritidis ВГНКИ № Г-1-ДЕП; Phagum Salmonella choleraesuis ВГНКИ № CSl-ДЕП, Phagum Salmonella choleraesuis ВГНКИ № CS2-ДЕП, Phagum Salmonella enteritidis ВГНКИ № SPZ-1-ДЕП, Phagum Salmonella enteritidis ВГНКИ № SPZ-2-ДЕП, Phagum Salmonella enteritidis ВГНКИ № А-1-ДЕП, Phagum Salmonella enteritidis ВГНКИ № F-6-ДЕП, Phagum Salmonella enteritidis ВГНКИ № ЮН-2-ДЕП и Phagum Salmonella enteritidis ВГНКИ № Г-1-ДРП;

Phagum Salmonella choleraesuis ВГНКИ № CSl-ДЕП, Phagum Salmonella choleraesuis ВГНКИ № CS2-ДЕП, Phagum Salmonella enteritidis ВГНКИ № SPZ-1-ДЕП, Phagum Salmonella enteritidis ВГНКИ № SPZ-3-ДЕП, Phagum Salmonella enteritidis ВГНКИ № А-1-ДЕП, Phagum Salmonella enteritidis ВГНКИ № F-6-ДЕП, Phagum Salmonella enteritidis ВГНКИ № ЮН-2-ДЕП и Phagum Salmonella enteritidis ВГНКИ № Г-1-ДЕП; Phagum Salmonella choleraesuis ВГНКИ № CSl-ДЕП, Phagum Salmonella choleraesuis ВГНКИ № CS2-ДЕП, Phagum Salmonella enteritidis ВГНКИ № SPZ-1-ДЕП, Phagum Salmonella enteritidis ВГНКИ № SPZ-3-ДЕП, Phagum Salmonella enteritidis ВГНКИ № А-1-ДЕП и Phagum Salmonella enteritidis ВГНКИ № F-6-ДЕП;

Phagum Salmonella choleraesuis ВГНКИ № CS2-ДЕП, Phagum Salmonella enteritidis ВГНКИ № SPZ-1-ДЕП, Phagum Salmonella enteritidis ВГНКИ № ЮН-1-ДЕП, Phagum Salmonella enteritidis ВГНКИ № С-1-ДЕП, Phagum Salmonella enteritidis ВГНКИ № ЮН-2-ДЕП и Phagum Salmonella enteritidis ВГНКИ № Г-1-ДЕП; Phagum Salmonella choleraesuis ВГНКИ № CSl-ДЕП, Phagum Salmonella choleraesuis ВГНКИ № CS2-ДЕП, Phagum Salmonella enteritidis ВГНКИ № SPZ-1-ДЕП, Phagum Salmonella enteritidis ВГНКИ № SPZ-3-ДЕП, Phagum Salmonella enteritidis ВГНКИ № А-1-ДЕП и Phagum Salmonella enteritidis ВГНКИ № F-6-ДЕП;

Phagum Salmonella choleraesuis ВГНКИ № CS2-ДЕП, Phagum Salmonella enteritidis ВГНКИ № SPZ-1-ДЕП, Phagum Salmonella enteritidis ВГНКИ № SPZ-2-ДЕП, Phagum Salmonella enteritidis ВГНКИ № А-1-ДЕП, Phagum Salmonella enteritidis ВГНКИ № F-6-ДЕП, Phagum Salmonella enteritidis ВГНКИ № ЮН-2-ДЕП и Phagum Salmonella enteritidis ВГНКИ № Г-1-ДЕП; Phagum Salmonella choleraesuis ВГНКИ № CSl-ДЕП, Phagum Salmonella choleraesuis ВГНКИ № CS2-ДЕП, Phagum Salmonella enteritidis ВГНКИ № SPZ-1-ДЕП, Phagum Salmonella enteritidis ВГНКИ № SPZ-3-ДЕП, Phagum Salmonella enteritidis ВГНКИ № А-1-ДЕП и Phagum Salmonella enteritidis ВГНКИ № F-6-ДЕП; Phagum Salmonella choleraesuis ВГНКИ № CS2-ДЕП, Phagum Salmonella enteritidis ВГНКИ № SPZ-2-ДЕП, Phagum Salmonella enteritidis ВГНКИ № ЮН-1-ДЕП и Phagum Salmonella enteritidis ВГНКИ № F-6-ДЕП;

Phagum Salmonella choleraesuis ВГНКИ № CS2-ДЕП, Phagum Salmonella enteritidis ВГНКИ № ЮН-2-ДЕП, Phagum Salmonella enteritidis ВГНКИ № С-1-ДЕП; Phagum Salmonella choleraesuis ВГНКИ № CS2-ДЕП, Phagum Salmonella enteritidis ВГНКИ № SPZ-2-ДЕП, Phagum Salmonella enteritidis ВГНКИ № ЮН-1-ДЕП, Phagum Salmonella enteritidis ВГНКИ № ЮН-2-ДЕП, Phagum Salmonella enteritidis ВГНКИ № С-1-ДЕП и Phagum Salmonella enteritidis ВГНКИ № Г-1-ДЕП.

Перечисленные выше комбинации штаммов бактериофагов не ограничивают состав предлагаемого биопрепарата.

Биопрепарат может дополнительно содержать антисептик, например хинозол.

Препарат также может дополнительно содержать защитные соединения для обеспечения сохранности бактериофагов в процессе технологической переработки, получения конечной рецептурной формы и последующего хранения. В качестве защитных соединений он может содержать, например, такие вещества, как протеины (в частности, соевый белок), растительная мука, органические полимеры (декстраны, полиглюкин, крахмал, поливинилпирролидон), а также известные природные соединения - молоко, сыворотка, альбумин и т.д., которые помимо защитных свойств могут быть успешно использованы в качестве кормовых добавок.

Эти соединения обволакивают частицы бактериофагов и защищают их не только от действия внешних неблагоприятных факторов, таких как низкие и высокие температуры, но и при попадании в организм животного или птицы от действия клеточных и гуморальных факторов иммунитета или от инактивации литическими секретами и ферментами внутренней (полостной) среды организма, например, желудочно-кишечного тракта.

Биопрепарат может быть инкапсулирован или иммобилизирован на различных типах носителей, включая природные и синтетические полимеры органической природы, такие как карбоксиметилцеллюлоза, гидроксиэтилцеллюлоза, хитозан.

Для эффективного сохранения биологических свойств препарата, особенно при длительном хранении, предпочтительно удалить из него влагу наиболее подходящим для этого способом, так как фаги более чувствительны к обезвоживанию, чем клетки бактерий. Например, для высушивания суспензии бактериофагов предпочтительно использовать контактно-сорбционные методы обезвоживания, которые по своей сути близки к так называемому методу "L-высушивания". В качестве сорбента влаги могут быть использованы предварительно высушенные (до 1-3% остаточной влажности) растительная мука, соевый протеин, мелкие и крупные фракции стандартного корма для животных и птицы. Такого рода природные сорбенты влаги после смешивания с фаговой суспензией и завершения начальной стадии процесса переноса влаги от суспензии к сорбенту затем дополнительно высушиваются до кондиции готового продукта по параметру остаточной влажности.

Биопрепарат может также быть лиофилизирован.

Предлагаемый биопрепарат для лечения и профилактики кишечных заболеваний активен против Salmonella enteritidis, Salmonella typhimurium, Salmonella heidelberg. Salmonella choleraesuis, Salmonella gallinarum-pullorum.

Биопрепарат нетоксичен для животных, высокогигроскопичен, хорошо диспергируется в воде, используют его в жидких и сухих рецептурных формах, при различных способах введения: путем подкожной, внутриперитониальной, внутримышечной инъекций, аэрозольно путем введения фаговых частиц в легочные отделы, перорально - включая использование в виде лечебного корма и добавки к корму, а также путем нанесения на поверхность кожных покровов.

Изобретение иллюстрируется следующими примерами.

Пример 1.

Для получения жидкой концентрированной формы стабилизированного биопрепарата используют суспензии штаммов бактериофагов Phagum Salmonella choleraesuis ВГНКИ № CSl-ДЕП, Phagum Salmonella choleraesuis ВГНКИ № CS2-ДЕП, Phagum Salmonella enteritidis ВГНКИ № SPZ-1-ДЕП, Phagum Salmonella enteritidis ВГНКИ № SPZ-2-ДЕП, Phagum Salmonella enteritidis ВГНКИ № SPZ-3-ДЕП, Phagum Salmonella enteritidis ВГНКИ № А-1-ДЕП, Phagum Salmonella enteritidis ВГНКИ № F-6-ДЕП, Phagum Salmonella enteritidis ВГНКИ № ЮН-1-ДЕП, Phagum Salmonella enteritidis ВГНКИ № ЮН-2-ДЕП, Phagum Salmonella enteritidis ВГНКИ № С-1-ДЕП, Phagum Salmonella enteritidis ВГНКИ № Г-1-ДЕП как по отдельности, так и в любом сочетании.

Суспензии бактериофагов каждого из указанных выше штаммов получают раздельно на свежевыращенных культурах индикаторных бактериях - хозяев фагов. Инфицированные культуры инкубируют в питательном бульоне Luria-Bertani (LB) с добавлением 5 мM MgSO₄ в течение ночи при 37С, затем центрифугируют 10 минут при 5 000 об/мин и стерилизуют фильтрованием через 0,22-мкм фильтр. Наличие фага в пробе определяют нанесением капли фильтрата на бактериальной газон индикаторной культуры. Последующую очистку и наработку бактериофагов проводят по методам, предложенным Адамсом (Адамс М., Бактериофаги. - М.: Иностр. лит., 1961, с. 397). Полученные таким образом суспензии бактериофагов имеют активность, приведенную в табл. 2.

Для защиты фага от обезвоживания и действия неблагоприятных факторов при применении берут поливинилпирролидон (ПВП) медицинский, или полиглюкин, или декстран. Для этого предварительно в 1 литре дистиллированной воды разводят 50 г ПВП до полного растворения (стерилизация автоклавированием). Затем к полученному раствору добавляют 80 мл суспензии каждого фага в отдельности. Смесь тщательно перемешивают. Для предотвращения зарастания раствора посторонней микрофлорой в него вводят антисептик - хинозол в количестве 0,01%. Концентрация бактериофагов в жидком препарате составляет 3,0¹⁰ БОЕ /мл.

Полученный раствор готов к применению как концентрированный стабилизированный препарат любого из указанных выше штаммов бактериофага с длительным (до 1 года) сроком хранения, пригодный для различных способов применения в т.ч. инъекционным и аэрогенным.

Аналогично готовят биопрепарат из смеси указанных штаммов бактериофагов, взятых в любом сочетании.

Например, берут 80 мл суспензии с концентрацией 410¹¹ фагов (БОЕ) в одном мл, состоящей из смеси штаммов: Phagum Salmonella choleraesuis ВГНКИ № CSl-ДЕП, Phagum Salmonella choleraesuis ВГНКИ № СS2-ДЕП, Phagum Salmonella enteritidis ВГНКИ № SPZ-1-ДЕП, Phagum Salmonella enteritidis ВГНКИ № SPZ-3-ДЕП, Phagum Salmonella enteritidis ВГНКИ № A-1-ДЕП и Phagum Salmonella enteritidis ВГНКИ № F-6-ДЕП. К полученной суспензии добавляют ПВП и хинозол в таком же количестве, как указано выше.

Аналогично готовят биопрепарат из смеси штаммов Phagum Salmonella choleraesuis ВГНКИ № CSl-ДЕП, Phagum Salmonella choleraesuis ВГНКИ № CS2-ДЕП, Phagum Salmonella enteritidis ВГНКИ № SPZ-1-ДЕП, Phagum Salmonella enteritidis ВГНКИ № SPZ-2-ДЕП, Phagum Salmonella enteritidis ВГНКИ № SPZ-3-ДЕП, Phagum Salmonella enteritidis ВГНКИ № С-1-ДЕП и Phagum Salmonella enteritidis ВГНКИ № Г-1-ДЕП.

Жидкая концентрированная форма стабилизированного биопрепарата из различных сочетаний указанных выше штаммов фагов является исходным материалом для приготовления других лечебно-профилактических средств, включая кормовые смеси.

Пример 2.

Для получения сухой формы биопрепарата в виде концентрированного порошка используют штаммы бактериофагов Phagum Salmonella choleraesuis ВГНКИ № CSl-ДЕП, Phagum Salmonella choleraesuis ВГНКИ № CS2-ДEП, Phagum Salmonella enteritidis ВГНКИ № SPZ-1-ДЕП, Phagum Salmonella enteritidis ВГНКИ № SPZ-2-ДЕП, Phagum Salmonella enteritidis ВГНКИ № SPZ-3-ДЕП, Phagum Salmonella enteritidis ВГНКИ № А-1-ДЕП, Phagum Salmonella enteritidis ВГНКИ № F-6-ДЕП, Phagum Salmonella enteritidis ВГНКИ № ЮН-1-ДЕП, Phagum Salmonella enteritidis ВГНКИ № ЮН-2-ДЕП, Phagum Salmonella enteritidis ВГНКИ № С-1-ДЕП и Phagum Salmonella enteritidis ВГНКИ № Г-1-ДЕП.

Готовят концентрированные стабилизированные ПВП и хинозолом суспензии фагов как каждого штамма в отдельности, так и в любом сочетании, аналогично тому, как указано в примере 1.

Затем к 850 мл концентрированной стабилизированной суспензии бактериофагов каждого штамма в отдельности либо приготовленной из смеси указанных штаммов в любом сочетании добавляют сухой порошок полиглюкина (20 г) и 140 мл 50% лактозы, предварительно растворенной при температуре 100 градусов. Смесь тщательно перемешивают. Приготовленная смесь, т.н. техническая жидкость (ТЖ), содержит концентрацию бактериофагов, равную 2,910¹⁰ БОЕ /мл, содержание сухих веществ 14%.

ТЖ разливают во флаконы (большие и малые) слоем не более 15 мм и производят замораживание до температуры не выше минус 20С в низкотемпературном холодильнике. Время выдержки в замороженном состоянии не менее 7 часов, после чего замороженные материалы быстро переносят на полки лиофильной сушилки, предварительно охлажденные до температуры не выше минус 18С. Сублимационную камеру сразу же вакуумируют и процесс обезвоживания осуществляют в диапазоне следующих показателей, зависящих от типа и производительности сушильного оборудования:

вакуум 30-150 мторр, температура конденсатора минус 40-70С, температура материала в период сублимации свободной влаги минус 30-45С, в период досушивания 25-30С, общее время сушки от 18 до 30 ч.

После высушивания в фаговом материале содержится около 1,210¹⁰ БОЕ/г сухого веса. Остаточная влажность лиофилизированного материала равна 4-6%.

Препарат бактериофагов во флаконах герметично укупоривают и хранят при температуре 0-10С. Выживаемость сразу после лиофильного высушивания для отдельных фагов и их смесей от 10 до 50%. Срок хранения не менее года.

При соблюдении асептики полученный биопрепарат после разведения можно применять для подкожного, внутримышечного и других способов введения в организм.

Пример 3.

Для получения биопрепарата в форме гранул, содержащих белковую добавку, используют концентрированные стабилизированные суспензии штаммов бактериофагов Phagum Salmonella choleraesuis ВГНКИ № CSl-ДЕП, Phagum Salmonella choleraesuis ВГНКИ № CS2-ДЕП, Phagum Salmonella enteritidis ВГНКИ № SPZ-1-ДЕП, Phagum Salmonella enteritidis ВГНКИ № SPZ-2-ДЕП, Phagum Salmonella enteritidis ВГНКИ № SPZ-3-ДЕП, Phagum Salmonella enteritidis ВГНКИ № А-1-ДЕП, Phagum Salmonella enteritidis ВГНКИ № F-6-ДЕП, Phagum Salmonella enteritidis ВГНКИ № ЮН-1-ДЕП, Phagum Salmonella enteritidis ВГНКИ № ЮН-2-ДЕП, Phagum Salmonella enteritidis ВГНКИ № С-1-ДЕП и Phagum Salmonella enteritidis ВГНКИ № Г-1-ДЕП как по отдельности, так и смешанные в любом сочетании.

Аналогично примеру 1 готовят 500 мл концентрированной стабилизированной суспензии бактериофагов, содержащей 5% ПВП и хинозол в количестве 0,01%.

Изготавливают сухую кормовую основу, состоящую из порошков соевого протеина - 10%, активированного угля - 3%, растительной муки - 70% и мелкозернистого песка - 17%. Порошкообразную смесь в количестве 2500 г тщательно перемешивают в смесителе до однородного состояния и затем переносят в барабан роторного гранулятора.

Сухую кормовую основу приводят в круговое движение в барабане гранулятора, вращающегося со скоростью 30-35 об/мин, во время которого ее обрабатывают с помощью форсунки концентрированной стабилизированной суспензией бактериофагов. Капли суспензии являются матрицей для формирования гранул. Полученные гранулы (размер 2-4 мм) высушивают в барабане гранулятора в потоке подогретого до 50-60 градусов воздуха (2-3 часа), а затем дополнительно досушивают при температуре 25-30 градусов в течение 15-18 часов до приобретения гранулами остаточной влажности не более 10%.

Гранулы исследуют на содержание фаговых частиц и остаточную влажность, после чего затаривают во влагонепроницаемые емкости и хранят при температуре 0-10 градусов.

Концентрация фага: (1-510⁷) на грамм гранул. Гранулы используют для кормления животных и особенно привлекательны для цыплят, так как имеют темную окраску.

Пример 4.

Для приготовления биопрепарата в форме лечебной добавки на основе компонентов стандартного корма используют концентрированные суспензии штаммов бактериофагов Phagum Salmonella choleraesuis ВГНКИ № CSl-ДЕП, Phagum Salmonella choleraesuis ВГНКИ № CS2-ДЕП, Phagum Salmonella enteritidis ВГНКИ № SPZ-1-ДЕП, Phagum Salmonella enteritidis ВГНКИ № SPZ-2-ДЕП, Phagum Salmonella enteritidis ВГНКИ № SPZ-3-ДЕП, Phagum Salmonella enteritidis ВГНКИ № А-1-ДЕП, Phagum Salmonella enteritidis ВГНКИ № F-6-ДЕП, Phagum Salmonella enteritidis ВГНКИ № ЮН-1-ДЕП, Phagum Salmonella enteritidis ВГНКИ № ЮН-2-ДЕП, Phagum Salmonella enteritidis ВГНКИ № С-1-ДЕП, Phagum Salmonella enteritidis ВГНКИ № Г-1-ДЕП, полученные по примеру 1.

К суспензии бактериофагов каждого штамма по отдельности или штаммов, взятых в любом сочетании, добавляют сухой полимер ПВП и протеин (например, сухой соевый белок).

Полученную жидкую смесь соединяют с мелкой фракцией сухого предварительно измельченного стандартного корма для цыплят (частицы размером до 150 мкм) путем капельного распыления в барабане гранулятора, так как описано в примере 3. Соотношение суспензии бактериофага и сухого корма 1:3 (1 л суспензии на 3 кг сухой субстанции).

Первичную стадию удаления влаги осуществляют непосредственно в барабане роторного гранулятора на протяжении первых 2-3 часов, а окончательное досушивание проводят стационарно в течение 15-20 часов при температуре 25-30 градусов.

После полного завершения процессов влагопереноса получают лечебную добавку к корму, содержащую бактериофаги в концентрации (1-9)10⁹ БОЕ/г. Лечебную добавку вносят в обычный корм в соотношении 1:(50-100).

Пример 5.

Для приготовления биопрепарата в форме лечебного корма используют концентрированные суспензии штаммов бактериофагов Phagum Salmonella choleraesuis ВГНКИ № CSl-ДЕП, Phagum Salmonella choleraesuis ВГНКИ № CS2-ДЕП, Phagum Salmonella enteritidis ВГНКИ № SPZ-1-ДЕП, Phagum Salmonella enteritidis ВГНКИ № SPZ-2-ДЕП, Phagum Salmonella enteritidis ВГНКИ № SPZ-3-ДЕП, Phagum Salmonella enteritidis ВГНКИ № A-1-ДЕП, Phagum Salmonella enteritidis ВГНКИ № F-6-ДЕП, Phagum Salmonella enteritidis ВГНКИ № ЮН-1-ДЕП, Phagum Salmonella enteritidis ВГНКИ № ЮН-2-ДЕП, Phagum Salmonella enteritidis ВГНКИ № С-1-ДЕП, Phagum Salmonella enteritidis ВГНКИ № Г-1-ДЕП, полученные по примеру 1.

Берут 1,8 литра жидкой концентрированной стабилизированной суспензии бактериофагов (каждого штамма по отдельности или штаммов, взятых в любом сочетании) добавляют сухой соевый белок в количестве 10-15%.

Полученную жидкую смесь помещают в диспергатор для микрокапельного разбрызгивания.

Во время вращения роторного гранулятора при условиях, как указано в примере 3, смесь разбрызгивают на 15 кг стандартного корма, например на корм марки ПК-5 для бройлерных цыплят.

Досушивают его, как указано в примере 4, до остаточной влажности не более 12%. После контрольной проверки влажности и содержания числа живых вирионов лечебный корм закладывают на хранение.

Готовый лечебный корм, содержащий не менее - 1,010⁷ БОЕ/г, состоит из частиц стандартного корма, которые содержат на своей поверхности инкапсулированные в полимерной матрице бактериофаги. Полученный лечебный корм затаривают в полипропиленовые мешки и хранят установленным порядком при температуре 0-10 градусов. Он может быть использован в течение не менее 3 месяцев.

Пример 6.

Полученный по примеру 1 биопрепарат, содержащий смесь концентрированных стабилизированных суспензий штаммов бактериофагов Phagum Salmonella choleraesuis ВГНКИ № CSl-ДЕП, Phagum Salmonella choleraesuis ВГНКИ № CS2-ДЕП, Phagum Salmonella enteritidis ВГНКИ № SPZ-1-ДЕП, Phagum Salmonella enteritidis ВГНКИ № SPZ-2-ДЕП, Phagum Salmonella enteritidis ВГНКИ № SPZ-3-ДЕП, Phagum Salmonella enteritidis ВГНКИ № С-1-ДЕП и Phagum Salmonella enteritidis ВГНКИ № F-6-ДЕП, Phagum Salmonella enteritidis ВГНКИ Г-1, Phagum Salmonella enteritidis ВГНКИ A-1, Phagum Salmonella enteritidis ВГНКИ ЮН-1, Phagum Salmonella enteritidis ВГНКИ ЮН-2 используют для лечения экспериментального сальмонеллеза у белых мышей.

Для моделирования экспериментального сальмонеллеза у белых мышей используют вирулентный штамм S. enteritidis 92 из коллекции микроорганизмов ГНЦ ПМ. Животных инфицируют внутрибрюшинно.

Три группы мышей по 10 особей в каждой инфицируют культурой штамма S.enteritidis 92 в дозе 1,210³ м.к. Мышей первой группы (контроль) не лечат препаратами бактериофагов. Животным второй группы биопрепарат вводят в количестве 10⁸ БОЕ на 1 животное, однократно за 30 минут до заражения штаммом S.enteritidis 92. Третья группа мышей получает биопрепарат, содержащий 10⁵ БОЕ на 1 животное, 4 раза: за 30 мин до заражения и через 24, 48 и 72 часа после заражения. Препараты бактериофагов вводятся во всех случаях внутрибрюшинно.

За экспериментальными животными наблюдают в течение 21 суток, регистрируя их гибель посуточно. Павших животных и животных, оставшихся в живых и умерщвленных по истечении срока наблюдения, вскрывают, исследуют патологоанатомическую картину и высевают суспензию клеток внутренних органов на мясопептонный агар для выявления бактериальной культуры. Результаты лечения представлены в табл. 5.

Как видно из табл. 5, все контрольные мыши, не леченные специфическими фагами, пали в период с 4 по 7 сутки. В группе из 10 мышей, леченных биопрепаратом в дозе 10⁸ БОЕ, однократно, погибли 4 особи. Выживаемость составила 60%. В другой группе мышей, леченных фаговым препаратом в дозе 10⁵ четырехкратно, эффективность фаготерапии оказалась еще выше - 70% мышей остались живы. Погибло три мыши, при этом следует отметить, что две из них пали на 15 и 16 сутки после инфицирования со значительной задержкой срока гибели по сравнению с контрольными животными.

При вскрытии мышей, выживших и умерщвленных по истечении срока наблюдения, специфических для сальмонеллезной инфекции патологоанатомических изменений во внутренних органах не обнаружено. Использованная для заражения культура S.enteritidis из органов не выделяется. Эти результаты свидетельствуют о полном лизисе инфицирующего агента специфическими фагами, введенными в организм животных внутрибрюшинным способом.

Пример 7.

Для лечения экспериментального сальмонеллеза у белых мышей используют биопрепараты, полученные по примерам 1, 3 и 5.

В данной серии экспериментов используют пять групп мышей по 10 особей в каждой. Животных заражают перорально (per os) культурой вирулентного штамма S.enteritidis 92 в дозе 1,210⁷ живых микробных клеток. Первая группа мышей не получает биопрепарат бактериофагов (контроль). Остальных животных лечат биопрепаратом бактериофагов, используя четыре разные схемы введения препарата.

Мышам второй группы вводят с помощью иглы с оливой однократно за 30 минут до заражения биопрепарат в виде жидкой концентрированной стабилизированной суспензии с концентрацией 10⁸ БОЕ per os, полученной по примеру 1.

Животных третьей группы лечат биопрепаратом с концентрацией 10⁵ БОЕ, который вводят per os четырехкратно: первое введение за 30 минут до заражения, последующие 3 введения через 24, 48 и 72 часа после заражения.

Мышей четвертой группы лечат, скармливая им ежедневно в течение 14 суток лечебный корм, приготовленный по примеру 5.

Мышей пятой группы (10 особей) лечат, скармливая им ежедневно в течение 14 суток гранулированную кормовую добавку, приготовленную по примеру 3.

За экспериментальными животными наблюдают в течение 21 суток, регистрируя их гибель посуточно. Павших животных и животных, оставшихся в живых и умерщвленных по истечении срока наблюдения, вскрывают, исследуют патологоанатомическую картину и высевают суспензию клеток внутренних органов на мясопептонный агар для выявления бактериальной культуры. Результаты представлены в табл. 6.

Из приведенных в табл. 6 данных следует, что все контрольные мыши, не леченные специфическими фагами, пали в период с 6 по 13 сутки. В группе № 3 из 10 мышей, леченных суспензией фагов в дозе 10⁵ БОЕ, четырехкратно, все животные также погибли. Всего одно животное выжило в другой группе мышей, леченных тем же препаратом в более высокой дозе (10 БОЕ, однократно).

Лечебный эффект от введения биопрепарата наблюдают в двух группах животных (№ 4 и № 5), которым биопрепарат вводят вместе с лечебным кормом. При вскрытии животных, умерщвленных по истечении срока наблюдения (21 сутки), патологоанатомических изменений во внутренних органах, характерных для сальмонеллезной инфекции, не выявляют. Использованную для заражения культуру S.enteritidis из органов не выделяют, что свидетельствует о полном лизисе инфицирующего агента специфическими фагами.

Таким образом, биопрепарат, защищенный полимерами, в форме гранулированной кормовой добавки или включенный в состав сухого корма, проявляет заметное лечебное действие при пероральном способе введения.

Пример 8.

Для лечения экспериментальной сальмонеллезной инфекции цыплят используют биопрепарат в форме лечебного