Средство для защиты, сохранения и восстановления лимфоидных органов при воздействии вибрации
Патент 2233660
Авторы
Классы МПК
Средство для защиты, сохранения и восстановления лимфоидных органов при воздействии вибрации
Реферат
Изобретение относится к медицине и фармакологии, конкретнее к иммунологии. Заявляемое средство, включающее эссенциальные фосфолипиды, предлагается использовать, в частности, для сохранения и восстановления структуры и функции тимуса, лимфатических узлов, селезенки; для сохранения в них лимфоэпителиальной паренхимы в корковом и мозговом веществе; тимоцитов и клеток лимфатических узлов, селезенки; ультраструктуры митохондрий и гранулярного эндоплазматического ретикулума; ультраструктуры ретикулярных эпителиальных клеток и лимфобластов, Т-лимфоцитов и макрофагов; ультраструктуры гематотимического барьера в тимусе; для замедления трансформации клеток тимуса, селезенки и лимфатических узлов в фибробластоподобные клетки; для активирования в лимфоидных органах неоангиогенеза; оптимизации в них трансэндотелиального обмена; увеличения микропиноцитозной активности эндотелиоцитов, увеличения образования микроворсинок и выростов на люминальных поверхностях эндотелиоцитов; для улучшения белоксинтетической функции клеток данных органов, увеличения количества рибосом в них; оптимизации энергопродуцирующей функции клеток данных органов; для увеличения содержания функционально активной лимфоидной ткани в них, усиления пролиферации лимфоэпителиальной ткани и снижения темпов апоптоза; усиления процессов клеточного обновления; оптимизации секреторной деятельности субклеточных структур, процесса экструзии секрета; для снижения степени инфильтрации тимуса, селезенки и лимфатических узлов плазматическими и эозинофильными гранулоцитами, тучными клетками; для сохранения и восстановления структурно-функциональных параметров эндотелиоцитов кровеносных капилляров тимуса, селезенки и лимфатических узлов; снижения степени периваскулярного и стромального фиброза в тимусе, селезенке и лимфатических узлах, снижения в них количества ретикулярных клеток и микрофиламентов в эндотелиоцитах; уменьшения дегенеративно-дистрофических изменений в тимусе, селезенке и лимфатических узлах; замедления инволютивной перестройки лимфоидных органов; нормализации иммуноструктурного гомеостаза; усиления иммунного ответа на Т-зависимый антиген; активации Т-клеточного звена иммунитета. Изобретение обеспечивает защиту лимфоидных органов от вибрационного повреждающего воздействия. 22 з.п. ф-лы, 34 табл.
Изобретение относится к медицине и фармакологии, конкретнее к иммунологии, профпатологии, патофизиологии, клинической фармакологии, и может быть применено как лечебное и профилактическое средство.
Известны средства, например, полифенольные соединения манжетки обыкновенной, применяемые для коррекции структурно-функциональных нарушений, возникающих в лимфоидных органах при воздействии на организм различных повреждающих факторов, таких, например, как экстремальное охлаждение (Обухова Л.А., Селятицкая В.Г. Влияние адаптогенов различной природы на структуру тимуса и морфофункциональное состояние надпочечников // Проблемы клинической и экспериментальной лимфологии: Материалы междунар. конф. - Новосибирск, 1996. - с.185-188), длительное сдавливание тканей (Ефремов А.В. Морфофункциональные особенности лимфатического русла при СДС и его фармакологической коррекции. - Дисс.докт. мед. наук. - Новосибирск, 1992. - 539 с.) и др. Известны средства, используемые для предупреждения и восстановления клеточных повреждений, возникающих в различных органах и тканях при действии вибрации. Например, препарат милдронат применяют для коррекции структурно-функциональных нарушений, возникающих в слизистой оболочке желудка при вибрационной патологии (Боброва С.В. Патоморфологическое и клинико-эндоскопическое исследование желудка при вибрационной болезни: Дис.канд. мед. наук. - Новосибирск, 1997. - 204 с.). Нами не обнаружено средств, предназначенных для коррекции и протекции структурно-функциональных нарушений в лимфоидных органах, возникающих (средств для восстановления и сохранения лимфоидных органов) при вибрационном повреждающем воздействии. Сущность изобретения Для коррекции и протекции структурно-функциональных нарушений в лимфоидных органах, возникающих при действии вибрации (для защиты, сохранения и восстановления их структуры и функций при повреждающем вибрационном воздействии) предлагается использовать эссенциальные фосфолипиды. Заявляемое средство предлагается использовать, в частности, для сохранения и восстановления: - структуры и функции тимуса, лимфатических узлов, селезенки; - лимфоэпителиальной паренхимы в корковом и мозговом веществе тимуса, лимфатических узлов и селезенки; - тимоцитов и клеток лимфатических узлов, селезенки; - ультраструктуры митохондрий и гранулярного эндоплазматического ретикулума в клетках данных органов; - ультраструктуры ретикулярных эпителиальных клеток и лимфобластов, Т-лимфоцитов и макрофагов в тимусе, селезенке и лимфатических узлах; - ультраструктуры гематотимического барьера; - для замедления трансформации клеток тимуса, селезенки и лимфатических узлов в фибробластоподобные клетки; - для активирования неоангиогенеза в тимусе, селезенке и лимфатических узлах; - для оптимизации трансэндотелиального обмена в тимусе, селезенке и лимфатических узлах, увеличения в них микропиноцитозной активности эндотелиоцитов, увеличения образования микроворсинок и выростов на люминальных поверхностях эндотелиоцитов; - для улучшения белоксинтетической функции клеток данных органов, для увеличения количества рибосом в них; - для оптимизации энергопродуцирующей функции клеток данных органов; - для увеличения содержания функционально активной лимфоидной ткани в тимусе, селезенке и лимфатических узлах, усиления в них пролиферации лимфоэпителиальной ткани и снижения темпов апоптоза; - для усиления процессов клеточного обновления в тимусе, селезенке и лимфатических узлах, увеличения митотической активности их клеточных популяций; - для оптимизации секреторной деятельности субклеточных структур тимуса и лимфатических узлов, оптимизации процесса экструзии секрета, участвующего в иммуногенезе; - для снижения степени инфильтрации тимуса, селезенки и лимфатических узлов плазматическими и эозинофильными гранулоцитами, тучными клетками; - для сохранения и восстановления структурно-функциональных параметров эндотелиоцитов кровеносных капилляров тимуса, селезенки и лимфатических узлов; - для снижения степени периваскулярного и стромального фиброза в тимусе, селезенке и лимфатических узлах, для снижения в них количества ретикулярных клеток и микрофиламентов в эндотелиоцитах; - для уменьшения дегенеративно-дистрофических изменений в тимусе, селезенке и лимфатических узлах; - для замедления инволютивной перестройки лимфоидных органов; - для нормализации иммуноструктурного гомеостаза в лимфоидных органах; - для усиления иммунного ответа на Т-зависимый антиген; - для активации Т-клеточного звена иммунитета. Эссенциальные фосфолипиды являются активными действующими веществами препарата эссенциале Н (Справочник Видаль: Лекарственные препараты в России: АстраФармСервис, 2001, стр. Б-719-720). Фармакологическое действие. Гепатопротектор. Активные вещества “эссенциальные” фосфолипиды (субстанция EPL) являются основными элементами в структуре клеточной оболочки и клеточных органелл печени, в состав EPL входят диглицеридные эфиры холинфосфорной кислоты природного происхождения с преобладанием полиненасыщенных жирных кислот, в основном линолевой (около 70%), линоленовой и олеиновой кислот. EPL в организме оказывает нормализующее действие на метаболизм липидов, белков и на детоксикационную функцию печени; восстанавливает и сохраняет клеточную структуру печени и фосфолипидозависимые энзиматические системы; тормозит формирование соединительной ткани в печени. Показания к применению: жировая дегенерация печени, хронические гепатиты, цирроз печени, нарушения функции печени в результате осложнения при других заболеваниях, радиационный синдром, токсикоз беременности, отравления, псориаз. Сведения, подтверждающие возможность осуществления изобретения с реализацией назначения Исследования были проведены на 170 крысах-самцах линии Вистар массой 180-220 мг. Животных подвергали общей вертикальной вибрации в течение 1 часа один раз в сутки (частота 32 Гц, ускорение 50 м\сек2) в специальной клетке, установленной на площадке вибратора от вибростенда ВЭДС-100Б. Выбранные параметры вибрации в эксперименте позволяют вызвать клиническую картину вибрационной патологии, стандартизировать условия проведения морфологических исследований и проследить процессы поражения и восстановления. Для фармакологической коррекции вибрационного воздействия на организм использовали эссенциальные фосфолипиды (препарат эссенциале Н, („Aventis, Франция-Германия, раствор в ампулах). Введение раствора эссенциальных фосфолипидов крысам осуществляли per os с помощью зонда в дозе 20 мг на 1 кг массы тела ежедневно на протяжении всего периода вибрационной экспозиции. Группе сравнения per os с помощью зонда вводили дистиллированную воду в эквивалентном объеме по той же схеме. В восстановительный период введение препаратов не производилось. В каждой из групп исследования была подгруппа интактных животных (контрольная подгруппа), не подвергавшихся воздействию вибрации и не получавших ни эссенциальных фосфолипидов, ни дистиллированной воды. Животные были распределены по группам исследования следующим образом: - группа 1 - острое однократное воздействие. Животных этой группы подвергали вибрации однократно в течение 1 часа. Сразу после воздействия вибрации часть животных (12 особей, подгруппа 1.1) получала препарат эссенциальных фосфолипидов, другие животные (10 особей, подгруппа 1.2) - получали дистиллированную воду, контрольная подгруппа (1.3) состояла из 10 особей. На следующие сутки всех животных забивали; - группа 2 - хроническое воздействие вибрации на протяжении 10 суток. Животных подвергали вибрации (1 час один раз в сутки) на протяжении 10 суток. Ежедневно, сразу после воздействия вибрации, 12 особей (подгруппа 2.1) получали эссенциальные фосфолипиды, 10 особей (подгруппа 2.2) - дистиллированную воду, контрольная подгруппа (2.3) состояла из 10 особей. На 11-е сутки животных забивали; - группа 3 - хроническое воздействие вибрации на протяжении 30 суток. Животных подвергали вибрации (1 час один раз в сутки) на протяжении 30 суток. Ежедневно, сразу после воздействия вибрации 12 особей (подгруппа 3.1) получали эссенциальные фосфолипиды, 10 особей (подгруппа 3.2) -дистиллированную воду, контрольная подгруппа (3.3) состояла из 10 особей. На 31-е сутки животных забивали; - группа 4 - хроническое воздействие вибрации на протяжении 30 суток плюс 30-суточный восстановительный период. Животных подвергали вибрации (в течение 1 часа 1 раз в сутки) на протяжении 30 суток. Ежедневно, сразу после воздействия вибрации, 12 животных (подгруппа 4.1) получали эссенциальные фосфолипиды, 10 особей (подгруппа 4.2) - дистиллированную воду, контрольная подгруппа состояла из 10 особей. После 30-суточного воздействия вибрации животные жили еще 30 суток, не получая ни эссенциальных фосфолипидов, ни воды, после чего их забивали; - группа 5 - хроническое воздействие вибрации на протяжении 30 суток плюс 60-суточный восстановительный период. Животных подвергали вибрации (в течение 1 часа 1 раз в сутки) на протяжении 30 суток. Ежедневно, сразу после воздействия вибрации, 12 животных (подгруппа 5.1) получали эссенциальные фосфолипиды, 10 особей (подгруппа 5.2) - дистиллированную воду, в контрольной подгруппе было 10 особей. После 30-суточного воздействия вибрации животные жили еще 60 суток, не получая ни эссенциальных фосфолипидов, ни воды, после чего их забивали. Забой животных проводили декапитацией в одно и тоже время суток с 10 до 11 часов утра. В каждой группе объектом исследования служили центральный лимфоидный орган (тимус) и периферический (подвздошный лимфатический узел). В качестве контроля были взяты указанные органы интактных животных. Подготовку образцов органов, планирование и проведение морфометрических исследований выполняли в соответствии со ставшими общепринятыми принципами и методами, опубликованными в ряде отечественных и зарубежных работ (Шахламов В.А. Количественный электронно-микроскопический анализ в современной цитологии //Арх. анатомии, гистологии и эмбриологии. - 1968. - 54. №6. - С.89-95; Христолюбова Н.Б. К истории развития стереометрических методов и вывод основных формул //Применение стереологических методов в цитологии. - Новосибирск, 1974. - С.5-10; Автандилов Г.Г. Проблемы патогенеза и патологоанатомической диагностики болезней в аспектах морфометрии. М.: Медицина, 1984. 156с.; Автандилов Г.Г., Невзоров В.П., Невзорова О.Ф. Системный стереометрический анализ ультраструктур клеток. Кишинев: Штиинца, 1984. 168с.; Непомнящих Л.М., Лушникова Е.Л., Непомнящих Г.И. Морфометрия и стереология гипертрофии сердца. - Новосибрск: Наука, 1986. 303с.; Weibel E.R. Stereological methods. Practical method for biological morphometry // Academic Press.-London; New York; Toronto; Sudney; San Francisco, 1979. №1. P.47-50; Weibel E.R., Staubli W., Ghadi H.R., Hess F.A. Corelated morphometric and biochemical studies on the liver cell. Morphometric model, stereologic methods and normal morphometric. Date for rat liver //J. Cell Biol. 1969. №1. P.68-9). Тимус очищали от окружающей жировой ткани и взвешивали на торсионных весах. Для светооптического исследования органы фиксировали в жидкости Теллесницкого, обезвоживали в серии спиртов возрастающей концентрации и заливали в смесь гомогенизированного парафина с воском. С помощью ротационного микротома изготавливали серийные или полусерийные срезы толщиной 10 мкм и окрашивали их гематоксилином Майера и эозином. Для изучения клеточного состава тимуса и подвздошных лимфатических узлов часть срезов толщиной 5 мкм окрашивали азуром (В) и эозином (Y) (Serva). Срезы заключали в бальзам. Для определения абсолютных объемов тимуса и лимфатических узлов и их отдельных структурно-функциональных зон использовали морфометрический метод, предложенный Ю.И. Бородиным, А.Ю. Летягиным, В.Н. Григорьевым (Бородин Ю.И., Летягин А.Ю., Григорьев В.Н. Способ определения количества лимфоидных элементов в лимфатических узлах. Авторское свидетельство №1629791 (СССР) // Бюллетень изобретений. 1991. №7). Морфометрию проводили на срезах толщиной 10 мкм, окрашенных гематоксилином и эозином. Для исследования брали каждый 15 срез из полной серии срезов с целого органа. Каждая структурно-функциональная зона учитывалась отдельно. Морфометрию проводили методом точечного счета с помощью стандартной сетки (256 точек), вмонтированной в окуляр микроскопа Jenamed Hystology. Сетку предварительно откалибровывали с помощью объект-микрометра в абсолютных размерах и определяли площадь, представленную одной точкой в квадратном миллиметре, разделив площадь, ограниченную всей тест-системой (тест-система для морфометрических исследований), на количество точек в тест-системе. Переход к объему, представленному одной точкой тест-системы, осуществляли путем умножения предыдущей величины (площадь зоны одной точки) на среднюю толщину среза и отношение общего количества срезов к числу срезов, использованных для исследования. Расчет абсолютного объема каждой структуры производили, умножая суммарное (со всех исследованных срезов) количество точек, попавших на данную структуру, на объем, представленный одной точкой тест-системы. Срезы тимуса морфометрировали при увеличении в 16 раз, выделяли следующие структурно-функциональные зоны: корковое вещество, мозговое вещество, капсулу и междольковые перегородки. Подсчитывали все тельца Гассаля на срезах с целого органа, а затем рассчитывали их количество на стандартную площадь - 10 мм2. Срезы подвздошных лимфатических узлов морфометрировали при увеличении в 32 раза. Выделяли следующие структурно-функциональные зоны: капсулу, краевой синус, в корковом веществе первичные и вторичные лимфоидные узелки с выделением в последних герминативного центра и короны, межузелковую зону, глубокую кору (паракортикальную зону), в мозговом веществе мозговые тяжи и мозговые синусы. Клеточный состав тимуса и лимфатических узлов изучали на срезах толщиной 5 мкм, окрашенных азуром В и эозином Y. При увеличении в 1000 раз (объектив 100 - масляная иммерсия, окуляр 10) подсчитывали абсолютное количество разных видов клеток на стандартной площади 9000 мкм2. Дифференцировали иммунобласты, средние и малые лимфоциты, незрелые и зрелые плазматические клетки, клетки Мотта, клетки с фигурами митозов, клетки с пикнотическим ядром, ретикулярные клетки (в тимусе эпителиальные клетки), макрофаги, моноциты, эозинофильные гранулоциты, тучные клетки. Подсчет клеток проводили: в тимусе в субкапсулярной зоне и внутренней зоне коркового вещества и в мозговом веществе; в лимфатических узлах в герминативных центрах вторичных лимфоидных узелков, глубокой коре и мозговых тяжах. В связи с тем, что в тимусе тучные клетки располагаются преимущественно в соединительнотканной строме, подсчет их проводили в 10 полях зрения, площадью 22500 мкм2, дифференцировали тучные клетки с разной степенью дегрануляции (0-III). Для всех морфометрических данных определяли абсолютные показатели. Методика электронной микроскопии. Для электронно-микроскопического исследования материал (образцы подвздошных лимфатических узлов, тимуса) забирали в соответствии с требованиями, предъявляемыми к препаративным процедурам по их подготовке, взятию, измельчению и фиксации для электронной микроскопии (Пиз Д. Гистологическая техника в электронной микроскопии. - М., Изд-во иностранной литературы, 1963. - 164 с.; Уикли Б. Электронная микроскопия для начинающих. - М.: Мир, 1975. - 324 с.; Миронов А.А., Комиссарчик Я.Ю., Миронов В.А. Методы электронной микроскопии в биологии и медицине. СПб: Наука, 1994). Кусочки органов менее 1 мм3 фиксировали в 4% параформальдегидном изотоническом 0,1М фиксаторе на фосфатном буфере Миллонига при рН 7,4 (Millonig G. Advantages of a phosphate buffer for OsО4 solutions in fixation. J. Appl. Physics. - 1961. - Vol. 32. - P.1637-1639) при температуре тающего льда в течение 2 часов. Затем после промывки в течение 15 мин в охлажденном буфере Миллонига образцы в течение 1 ч дополнительно фиксировались также на холоде в 1% осмиевом фиксаторе на 0,2 М какодилатном буфере (рН 7,4) с добавлением в него 1,5% ферроцианида калия (White D.L., Мазurkiewicз J.E., Barmett R.J. A chemical mechanism for tissue staining by osmium tetroxide-ferrocyanide mixtures. J. Histochem and Cytochem. - 1979. - Vol. 27. - №7. P.1084-1091) - с целью обеспечения процесса последовательного одноэлектронного восстановления OsО4 до неокисленнго состояния, для избирательного контрастирования субклеточных структур, в том числе и цитоскелета клеток. После дегидратации образцов в спиртах возрастающей концентрации образцы заключались в эпон-812 (Lugt J.H. Improvements in epoxy resin embedding methods. - J. Biophys. Biochem. Cyt. - 1961. - Vol. 9. - P.409-414). Ультратонкие срезы толщиной 35-45 нм получали на ультратоме LKB-8800, контрастировали вначале насыщенным водным раствором уранилацетата (Watson M.L. Staining of tissue sections for electron microscopy with heavy metals. - J. Biophys. Biochem. Cyt. - 1958. - Vol. 4. - P.475-478) при 40С в течение 40 мин, а затем цитратом свинца (Reynolds E.S. The use of lead citrate at high pH as an electronopague stain in electron microscopy // J. Cell Biol. 1963. - Vol. 17. - P. 208-212) при комнатной температуре в атмосфере азота в течение 20 мин. После напыления углеродом в вакууме (Бирюзова В.Н. и др. Электронно-микроскопические методы исследования биологических объектов. - М., Изд-во Академии наук СССР, 1963. - 200 с.) контрастированные срезы изучались с помощью электронных микроскопов JEM-7A, JEM-100S / SEG, JEM-1010. Изучению ультратонких срезов предшествовало исследование в световом микроскопе полутонких срезов (1 микрон), окрашенных толуидиновым синим (Миронов А.А., Комиссарчик Я.Ю., Миронов В.А. Методы электронной микроскопии в биологии и медицине. - СПб: Наука, 1994) с целью прицельной ультратомии выбираемых на них различных зон исследуемых органов. Эпителиоциты тимуса и эндотелиоциты кровеносных капилляров (по 20 клеток на каждую группу) морфометрировали при конечном увеличении в 30000 раз с помощью многоцелевой открытой тестовой системы. Определяли объемные, поверхностные и численные плотности органоидов, включений, везикулярных структур (табл. 1). Методы статистической обработки. Цифровой материал обрабатывали с использованием методов вариационной статистики (Плохинский Н.А. Биометрия. - М.: Изд-во МГУ, 1970. - 367с.; Тюрин Ю.Н., Макаров А.А. Анализ данных на компьютере. - М.: Инфра-М, 1995. - 384 с.). Расчеты проводили с помощью табличного процессора Excel 5,0 на компьютере IBM PC/AT - Pentium. В таблицах приведены значения М±m, указана достоверность различий между исследованными показателями по t - критерию (Стьюдента). Примечание: Обозначение и размерность параметров приведены согласно рекомендациям Международного стереологического общества (Weibel E.R. Stereological methods. Practical method for biological morphometry // Academic Press.London; New York; Toronto; Sudney; San Francisco, 1979. - №1.-P.47-50). Данные, полученные при воздействии вибрации на фоне введения дистиллированной воды (табл. 2-18), свидетельствуют, что по мере увеличения продолжительности вибрационного воздействия происходило нарастание дистрофических изменений в эпителиальных клетках тимуса и эндотелиоцитах кровеносных капилляров, структурных компонентах подвздошных лимфатических узлов аналогично изменениям в группе животных, подвергнутых вибрации без коррекции. Эти изменения были связаны с отечными явлениями в клетках, набуханием органоидов, снижением белоксинтетической функции клеток и кератинизацией эпителиоцитов значительным накоплением в цитоплазме филаментов, затруднением процесса секреции. Для больших медуллярных клеток было характерно снижение секреторной активности объемные плотности секреторных вакуолей значительно снижались. Результаты исследования свидетельствуют, что введение дистиллированной воды значительно не влияло на структурную организацию тимуса и подвздошных лимфатических узлов животных, подвергнутых действию вибрации. В восстановительный период, через 30 и 60 суток после прекращения вибрационного воздействия на фоне введения дистиллированной воды, в ультраструктурной организации эпителиальных клеток тимуса происходили структурные изменения, свидетельствующие о процессах внутриклеточной регенерации. Увеличивался объем и количество митохондрий, возрастали объемы, занимаемые мембранами гранулярного эндоплазматического ретикулума. Возрастали, хотя и оставались в некоторых клетках ниже уровня контроля, численные плотности прикрепленных и свободных полисомальных рибосом. Сохранялась значительная кератинизация цитоплазмы эпителиальных клеток, связанная с накоплением филаментов (табл. 2-18). В эндотелиоцитах кровеносных капилляров коркового вещества лимфатических узлов при воздействии вибрации на фоне введения дистиллированной воды происходило нарастание дистрофических изменений клеток, связанных со снижением белоксинтетической функции и уменьшением трансэндотелиального обмена (табл. 17). В постконтактном периоде в эндотелиоцитах кровеносных капилляров коркового вещества лимфатических узлов не происходило в полной мере восстановления белоксинтетической и транспортной функции клеток, количество рибосом достоверно было снижено, сохранялось снижение микропиноцитозной активности эндотелиоцитов (табл. 18). Введение дистиллированной воды не привносило достоверных изменений в структурную организацию эндотелиоцитов кровеносных капилляров лимфатических узлов животных, подвергнутых общей вибрации. Таким образом, при изучении структурно-функциональных изменений паренхиматозных клеток и стромальных компонентов лимфоидных органов при воздействии вибрации на фоне введения дистиллированной воды и в восстановительном периоде было выявлено, что дистиллированной вода не оказывает положительного влияния на структурно-клеточные параметры в тимусе и лимфатических узлах и не может служить в качестве протективного и корригирующего средства при дестабилизирующем воздействии вибрации. Изучение эффективности фармакологической коррекции с помощью эссенциальных фосфолипидов, возникающих при вибрации клеточных и субклеточных изменений в лимфоидных органах, показало следующее. Общий объем тимуса при однократной вибрации на фоне использования препарата эссенциальных фосфолипидов достоверно снижался. К 30 суткам действия вибрации на фоне введения эссенциальных фосфолипидов данный показатель был достоверно выше уровня контроля (табл. 19). Объем коркового вещества через сутки после однократного воздействия вибрации снижался, затем имел тенденцию к восстановлению и к 30 суткам вибрационной экспозиции на фоне введения эссенциальных фосфолипидов полностью достигал объема такового показателя контрольных животных. Объем мозгового вещества тимуса был достоверно ниже через сутки после однократного действия вибрации на фоне введения эссенциальных фосфолипидов. В дальнейшем объем мозгового вещества не имел достоверных отличий от контроля. Массовый индекс тимуса практически не изменился. Объем соединительнотканной стромы на протяжении всего периода вибрации на фоне введения эссенциальных фосфолипидов не превышал уровень контроля. Изучение клеточного состава показало, что в субкапсулярной зоне тимуса у животных данной экспериментальной группы плотность клеточных элементов на стандартной площади максимально снижалась на 10 сутки, а к 30 суткам хотя и имела тенденцию к увеличению, но не достигала интактного уровня. Количество иммунобластов после однократной вибрации снизилось (табл. 20). К 30 суткам количество иммунобластов в субкапсулярной зоне тимуса превышало уровень контрольных животных. Если численность средних лимфоцитов на фоне введения эссенциальных фосфофолипидов в первые сутки лишь имела тенденцию к снижению, то на 10 сутки опыта их количество было достоверно меньше уровня контроля. К 30 суткам численность средних лимфоцитов была уже в пределах нормы. Количество малых лимфоцитов достоверно снижалось на 10 и 30 сутки воздействия вибрации на фоне введения эссенциальных фосфолипидов. Митотическая активность клеточных элементов в субкапсулярной зоне к 30 суткам достоверно увеличивалась. При этом количество гибнущих клеток имело достоверные различия с уровнем контроля на 30 сутки. В данной зоне коркового вещества тимуса численность эпителиальных клеток на протяжении всего периода вибрации на фоне введения эссенциальных фосфолипидов определялась в пределах исходных показателей. Количество плазматических клеток достоверно увеличивалось на 10 и 30 сутки эксперимента по отношению к соответствующему показателю контроля. Численность эозинофилов субкапсулярной зоны тимуса достоверно возрастала только к 30 суткам. Во внутренней зоне коркового вещества тимуса при действии вибрации на фоне введения эссенциальных фосфолипидов также увеличивалось содержание молодых форм лимфоидных клеток (табл. 21). Количество иммунобластов достоверно превышало контрольное значение, причем в наибольшей мере на 30 сутки. Количество средних лимфоцитов достоверно увеличивалось на 1,10 и 30 сутки эксперимента. Численность малых лимфоцитов во внутренней зоне коркового вещества тимуса достоверно снижалось только на 10 сутки, в остальные сроки действия вибрации на фоне введения эссенциальных фосфолипидов достоверных различий в их количестве с интактным уровнем не было выявлено. В целом общее количество лимфоидных клеток значительно возрастало на 30 сутки вибрационной экспозиции на фоне коррекции эссенциальными фосфолипидами. Численность клеток с фигурами митозов имела тенденцию к увеличению на ранних этапах воздействия вибрации на фоне введения эссенциальных фосфолипидов, достигая достоверных различий на 30 сутки. Содержание макрофагов возрастало на протяжении всего периода воздействия вибрации на фоне коррекции эссенциальными фосфолипидами и было достоверно выше контрольного уровня. Количество эпителиальных клеток имело тенденцию к возрастанию по срокам эксперимента. Эозинофилы были выявлены только к 30 суткам вибрации на фоне введения эссенциальных фосфолипидов. В мозговом веществе тимуса плотность клеточных элементов на стандартной площади достоверно увеличивалась на 10 и 30 сутки относительно соответствующих показателей контроля (табл. 22). Общая численность клеток лимфоидного ряда была также достоверно выше на 10 и 30 сутки действия вибрации на фоне коррекции эссенциальными фосфолипидами. Количество иммунобластов достоверно возрастало к концу периода действия вибрации на фоне введения эссенциальных фосфолипидов. Численность средних лимфоцитов достоверно возрастала уже с 10 суток эксперимента, а малых лимфоцитов - с 1 суток на фоне введения эссенциальных фосфолипидов. Количество клеток с фигурами митозов было достоверно выше на всех сроках вибрации при введении эссенциальных фосфолипидов. Численность гибнущих клеток хотя и несколько возрастала, но все же она не была столь высокой, как при действии вибрации без коррекции эссенциальными фосфолипидами, при введении дистиллированной воды (табл. 5). Количество макрофагов в мозговом веществе достоверно превышало контрольное значение. Число эпителиальных клеток достоверно увеличивалось на 1 сутки, а далее имело тенденцию к возрастанию. Количество плазматических клеток имело тенденцию к увеличению на ранних сроках эксперимента, на 30 сутки воздействия вибрации при введении эссенциальных фосфолипидов их количество было достоверно выше контроля, но ниже, чем при введении дистиллированной воды (табл. 22, 5). Эозинофилы в мозговом веществе тимуса на фоне фармакологической коррекции были выявлены лишь в незначительном количестве на 10 и 30 сутки эксперимента. Изменения тучноклеточной популяции в тимусе при воздействии общей вибрации на фоне введения эссенциальных фосфолипидов заключались в следующем. Соотношение между различными формами тучных клеток, установившееся во время введения эссенциальных фосфолипидов, существенно не изменялось (табл. 23). По сравнению с контролем у животных данной группы абсолютное число и доля тучных клеток с дегрануляцией II степени к концу 30 суток имели тенденцию к уменьшению (табл. 23). Количество тучных клеток с III степенью дегрануляции не имело достоверных отличий от контроля. Содержание телец Гассаля в мозговом веществе не имело достоверных отличий по сравнению с исходными показателями (табл. 19). При однократном воздействии вибрации в ультраструктурной организации светлых эпителиальных клеток увеличивалось достоверно к 30 суткам количество прикрепленных рибосом. Содержание филаментов достоверно снижалось на 10 и 30 сутки. Достоверно возрастала объемная плотность митохондрий на 10 и 30 сутки (табл. 24); Морфометрические исследования больших медуллярных клеток выявили снижение в 2 раза объемной плотности секреторных вакуолей после первых суток и в четыре и более раз после 10 и 30 суток соответственно. Цистерны гранулярного эндоплазматического ретикулума были несколько расширенными. Цифровые показатели рибосом имели тенденцию к увеличению по срокам вибрационной экспозиции (табл. 25). В структурной организации кровеносных капилляров тимуса выделяли светлые и темные эндотелиальные клетки. Отмечали повышенное содержание микропиноцитозных везикул. Возрастали объемные плотности: базальных - на 80%, люминальных - на 55%, цитоплазматических - на 30%, суммарная объемная плотность всех везикул в клетке - на 53% (табл. 26). Митохондрии были набухшими, с небольшим количеством крист, их объемная плотность по срокам эксперимента возрастала. Между эндотелиоцитами присутствовали все типы контактов конец в конец, наложения и интердигитации. Морфометрическое исследование подвздошных лимфатических узлов выявило тенденцию к увеличению их общего объема на фоне коррекции эссенциальными фосфолипидами на протяжении всего периода вибрации по сравнению с контрольными показателями (табл. 27). При этом объемы как коркового, так и мозгового вещества определялись в пределах нормы. В показателях объема первичных лимфоидных узелков, по сравнению с уровнем контроля, достоверных различий не было выявлено. Объем же вторичных лимфоидных узелков достоверно возрастал к 30 суткам действия вибрации на фоне коррекции эссенциальными фосфолипидами по сравнению с интактным уровнем. Очень важно отметить, что объем глубокой коры на 1 сутки имел тенденцию к снижению, а уже к 10 суткам возрастал, хотя не имел достоверных различий с уровнем контроля. Объем площади межузелковой зоны не имел достоверных различий с контролем. Как видно из таблицы 27, морфометрическое исследование большинства структур подвздошных лимфатических узлов не выявило достоверных изменений их микроанатомической организации в ответ на воздействие вибрации на фоне коррекции эссенциальными фосфолипидами. Исследование клеточного состава подвздошных лимфатических узлов показало, что в герминативных центрах плотность клеточных элементов на единицу площади не имела достоверных отличий с контролем. Количество иммунобластов на протяжении всего периода вибрации при введении эссенциальных фосфолипидов имело тенденцию к увеличению, по сравнению с контрольным уровнем (табл. 28). Численность средних лимфоцитов достоверно увеличивалась к 30 суткам эксперимента. Количество малых лимфоцитов достоверно увеличивалось уже к 10 суткам действия вибрации при введении эссенциальных фосфолипидов. Клетки с фигурами митозов имели тенденцию к увеличению на протяжении всего периода вибрации по сравнению с контролем. Численность макрофагов не имела достоверных различий с таковым показателем уровня интактных животных. Клеточный состав глубокой коры подвздошных лимфатических узлов изменялся следующим образом. Плотность клеточных элементов на единицу площади достоверно возрастала преимущественно на 10 сутки действия вибрации на фоне коррекции эссенциальными фосфолипидами (табл. 29). Количество иммунобластов, малых и средних лимфоцитов достоверно возрастало, по сравнению с уровнем контроля, начиная с 10 суток эксперимента. Количество клеток с фигурами митозов в глубокой коре подвздошных лимфатических узлов имело тенденцию к увеличению на протяжении всего срока действия вибрации при введении эссенциальных фосфолипидов. Количество макрофагов было достоверно увеличено на протяжении всего срока вибрации, по сравнению с исходными показателями. Численность ретикулярных клеток не имела достоверных отличий с контролем. В мозговых тяжах подвздошного лимфатического узла плотность клеточных элементов на стандартной площади не имела достоверных различий с уровнем контроля на протяжении всего периода действия вибрации на фоне коррекции эссенциальными фосфолипидами (табл. 30). Количество средних лимфоцитов достоверно увеличивалось на 10 сутки, в остальные периоды достоверных отличий в данном показателе с контролем не выявлено. Численность незрелых плазматических клеток и клеток Мотта достоверно возрастала к 30 суткам вибрационной экспозиции. При исследовании количества плазмобластов, зрелых плазматических клеток и ретикулярных клеток была выявлена тенденция к их увеличению на протяжении периода вибрации по сравнению с контролем. Митотическая активность имела тенденцию к возрастанию в мозговых тяжах подвздошных лимфатических узлов по срокам эксперимента, по сравнению с контролем. Численность гибнущих клеток достоверно была выше такового показателя у интактных животных, но меньше, чем у животных при действии вибрации на фоне введения дистиллированной воды, не получавших коррекцию эссенциальными фосфолипидами (табл. 30, 16). Количество макрофагов, моноцитов и эозинофилов было достоверно выше уровня контроля на протяжении всего периода эксперимента (моноцитов на 10 и 30 сутки), однако эти значения были ниже, чем у животных, получавших дистиллированную воду и не получавших эссенциальные фосфолипиды (табл. 30, 16). При изучении структурной организации эндотелиоцитов обменных микрососудов коркового вещества подвздошных лимфатических узлов при воздействии общей вибрации в течение 1, 10 и 30 сут. на фоне введения препарата эссенциале Н не происходило достоверных изменений объемных плотностей митохондрий