Соединения и композиции для доставки активных средств

Соединения и композиции для доставки активных средств

Реферат

 

Изобретение относится к новым соединениям для доставки биологически активных средств к месту действия, обладающим высокой проницаемостью по отношению к биологическим мембранам. Описаны также композиции, содержащие такие соединения, стандартные лекарственные формы и способы введения биологически активного средства, а также способ получения композиции для доставки биологически активных средств к месту действия. 5 н. и 34 з.п. ф-лы, 6 табл.

Область техники, к которой относится изобретение

Настоящее изобретение относится к соединениям для доставки активных средств, таких как биологически или химически активные средства, к месту действия. Такие соединения хорошо подходят для образования смесей без ковалентных связей с активными средствами для перорального введения, введения в ободочную кишку или других способов введения животным. Также описываются способы получения и введения таких композиций.

Предпосылки создания изобретения

Обычные способы доставки активных средств часто серьезно ограничены биологическими, химическими и физическими барьерами. Как правило, эти барьеры создаются средой, через которую происходит доставка, окружающей средой места действия, куда производится доставка, и/или самим местом действия. Биологически и химически активные средства особенно чувствительны к таким барьерам.

При доставке биологически активных и химически активных фармакологических и лечебных средств животным такие барьеры создаются организмом. Примерами физических барьеров являются кожа, липидные бислои и мембраны различных органов, являющиеся относительно непроницаемыми для некоторых активных средств, но которые должны быть пройдены перед достижением места действия, такого как циркуляторная система. К химическим барьерам относятся, но не ограничиваются перечисленными, изменения рН в желудочно-кишечном (GI) тракте и расщепляющие ферменты.

Эти барьеры имеют особое значение при создании систем для пероральной доставки. Можно было бы выбрать пероральную доставку животным многих биологически или химически активных средств, если бы не биологические, химические и физические барьеры. Среди многих средств, которые, как правило, не подходят для перорального введения, находятся биологически или химически активные пептиды, такие как кальцитонин и инсулин; полисахариды и, в частности, мукополисахариды, включая, но не ограничиваясь им, гепарин; гепариноиды; антибиотики и другие органические вещества. Такие средства могут быстро стать неэффективными или разрушиться в желудочно-кишечном тракте под действием кислотного гидролиза, ферментов и т.п. Кроме того, размер и строение макромолекулярных лекарственных средств могут препятствовать поглощению.

Ранее разработанные способы перорального введения уязвимых фармакологических средств основывались на совместном введении с адъювантами (например, резорцинами и неионными поверхностно-активными веществами, такими как полиоксиэтилен-олеиловый эфир и полиоксиэтилен-н-гексадециловый эфир) для искусственного повышения проницаемости стенок кишечника, а также на совместном введении с ингибиторами ферментов (например, ингибиторами панкреатического трипсина диизопропилфторфосфатом (DFF) и трасилолом) для подавления ферментативного расщепления. Также описаны липосомы как системы для доставки лекарственных средств в случае инсулина и гепарина. См., например, патент США 4239754; Patel et al. (1976), FEBS Letters, Vol.62, pg.60; и Hashimoto et al. (1979), Endocrinology Japan, Vol.26, pg.337. Однако широкий спектр применения таких систем для доставки лекарственных средств исключается вследствие того, что (1) такие системы требуют токсичных количеств адъювантов или ингибиторов; (2) подходящие низкомолекулярные "нагрузки", т.е. активные средства, недоступны; (3) системы показывают плохую устойчивость и неадекватные сроки годности; (4) системы трудны для изготовления; (5) системы не в состоянии защитить активное средство (нагрузку); (6) системы неблагоприятным образом изменяют активное средство; или (7) системы не в состоянии создать возможность или промотировать поглощение активного средства.

Позднее для доставки фармацевтических средств стали использовать микросферы из синтетических полимеров смешанных аминокислот (протеиноидов). Например, в патенте США 4925673 описываются соединения для протеиноидных микросфер, содержащих лекарственные средства, а также способы их получения и применения. Такие протеиноидные микросферы полезны для доставки ряда активных средств. Кроме того, для доставки фармацевтических средств используются некоторые модифицированные аминокислоты. См., например, патент США 5629020; патент США 5643957; патент США 5650386 и патент США 5776888.

Однако все еще существует потребность в простых дешевых системах для доставки, которые легко получить, и которые могут доставлять широкий ряд активных средств различными способами.

Краткое изложение сущности изобретения

Описываются соединения и композиции, полезные при доставке активных веществ. К числу таких соединений относятся соединения, перечисленные далее, или их соли. Соответствие номеров и названий соединений по изобретению представлено в табл.1.

Композиции настоящего изобретения содержат по меньшей мере одно активное средство, предпочтительно биологически или химически активное средство, и по меньшей мере одно из соединений или их солей настоящего изобретения. Также описываются способы получения и введения таких композиций. Композиции, содержащие соединения и активные средства, полезны для доставки активных средств в выбранные биологические системы и для повышения или улучшения биологической доступности активного средства по сравнению с введением одного активного средства.

Подробное описание изобретения

Композиции настоящего изобретения содержат активное средство и средство для доставки. Эти композиции можно использовать для доставки различных активных средств через различные биологические, химические и физические барьеры, и, в частности, они подходят для доставки активных средств, которые подвержены разрушению со стороны окружающей среды.

Другими преимуществами настоящего изобретения являются простота получения и дешевизна сырья. Композиции и способы получения по настоящему изобретению рентабельны, просты для осуществления и могут быть применены для коммерческого производства в промышленном масштабе.

Соединения

Соединения могут быть в форме карбоновой кислоты и/или ее солей. Соли включают, но не ограничиваются ими, соли органические и неорганические, такие как натриевые соли. Кроме того, можно использовать полиаминокислоты и пептиды, содержащие одно или несколько таких соединений.

Аминокислота представляет собой карбоновую кислоту, содержащую по меньшей мере одну свободную аминогруппу, и включает природные и синтетические аминокислоты. Полиаминокислоты или представляют собой пептиды (представляющие собой две или большее число аминокислот, соединенных пептидными связями), или представляют собой две или большее число аминокислот, соединенных связями, образованными другими группами, способными к связыванию, например сложноэфирными или ангидридными связями. Пептиды могут изменяться по длине от дипептидов из двух аминокислот до полипептидов с несколькими сотнями аминокислот. См. Chambers Biological Dictionary, editor Peter M.B. Walker, Cambridge, England: Chambers Cambridge, 1989, page 215. Одна или несколько аминокислот или пептидных звеньев могут быть ацилированы или сульфированы.

Многие соединения из числа описанных здесь могут образовываться из аминокислот, и их можно легко получить из аминокислот способами, известными специалистам в данной области техники, основываясь на данном описании и способах, описанных в WО 96/30036, WO 97/36480, патенте США 5643957 и патенте США 5650386. Например, указанные соединения можно получить посредством взаимодействия одной аминокислоты с подходящим ацилирующим или аминомодифицирующим агентом, который реагирует со свободной аминогруппой, имеющейся в аминокислоте, с образованием амидов. Можно использовать защитные группы, чтобы избежать нежелательных побочных реакций, что хорошо известно специалистам в данной области техники. Что касается защитных групп, можно обратиться к работе T.W.Greene, Protecting Groups in Organic Synthesis, Wiley, New York (1981), включенной в настоящее описание в качестве ссылки.

Соединение можно очистить посредством перекристаллизации или фракционирования на одном или нескольких твердых хроматографических носителях, одном или в сочетании. Подходящие системы растворителей для перекристаллизации включают, но не ограничиваются ими, ацетонитрил, метанол и тетрагидрофуран. Фракционирование можно осуществить на подходящем хроматографическом носителе, таком как оксид алюминия, с использованием смесей метанол/н-пропанол в качестве подвижной фазы; методом хроматографии с обращенной фазой с использованием в качестве подвижной фазы смесей трифторуксусная кислота/ацетонитрил; и методом ионообменной хроматографии с использованием в качестве подвижной фазы воды или подходящего буфера. Когда проводят анионообменную хроматографию, предпочтительно использовать градиент хлорида натрия от 0 до 500 мМ.

Активные средства

К активным средствам, подходящим для применения в настоящем изобретении, относятся биологически активные средства и химически активные средства, включающие, но не ограничивающиеся ими, пестициды, фармакологические средства и лечебные средства.

Например, биологически или химически активные средства, подходящие для применения в настоящем изобретении, включают, но не ограничиваются ими, белки; полипептиды; пептиды; гормоны и, в частности, гормоны, которые самостоятельно не проходят (или проходит только часть введенной дозы) через слизистые оболочки желудочно-кишечного тракта и/или подвержены химическому расщеплению кислотами и ферментами в желудочно-кишечном тракте; полисахариды и, в частности, смеси мукополисахаридов; углеводы; липиды; другие органические соединения; или любые их сочетания.

Другие примеры включают, но не ограничиваются ими, перечисленные далее средства, включая их синтетические, природные или рекомбинантные источники: гормоны роста, в том числе гормоны роста человека (hGH), рекомбинантные гормоны роста человека (rhGH), бычьи гормоны роста и свиные гормоны роста; гормон-высвобождающие гормоны роста; интерфероны, в том числе , и ; интерлейкин-1, интерлейкин-2; инсулин, в том числе свиньи, коровы, человека, и рекомбинантный инсулин человека, необязательно имеющий контрионы, включая ионы натрия, цинка, кальция и аммония; инсулиноподобный фактор роста, в том числе IGF-1; гепарин, в том числе нефракционированный гепарин, гепариноиды, дерматаны, хондроитины, низкомолекулярный гепарин, гепарин с очень низкой молекулярной массой и гепарин с ультранизкой молекулярной массой; кальцитонин, в том числе лосося, угря и человека; эритропоэтин; предсердный натриуретический фактор; антигены; моноклональные антитела; соматостатин; ингибиторы протеаз; адренокортикотропин, гонадотропин-высвобождающий гормон; окситоцин; лютеинизирующий гормон-высвобождающий гормон; фолликулостимулирующий гормон; глюкоцереброзидаза; тромбо-поэтин; филграстим; простагландины; циклоспорин; вазопрессин; кромолиннатрий (натрий- или динатрийхромогликат); ванкомицин; десферриоксамин (DFO); паратиреоидный гормон (РТН), включая его фрагменты; антимикробные средства, включая противогрибковые средства; аналоги, фрагменты, миметики или модифицированные полиэтиленгликолем (ПЭГ) производные этих соединений; или любое их сочетание.

Системы для доставки

Композиции настоящего изобретения содержат средство для доставки и одно или несколько активных средств. В одном из вариантов воплощения изобретения одно или несколько соединений для доставки средства или солей этих соединений, или полиаминокислот или пептидов, из которых образуются одно или несколько звеньев этих соединений или солей, могут использоваться в качестве средства для доставки посредством смешивания с активным веществом перед введением.

Смеси для введения можно получить посредством смешивания водного раствора соединения с водным раствором активного ингредиента непосредственно перед введением. С другой стороны, соединение и биологически или химически активный ингредиент можно смешивать в процессе изготовления.

Растворы могут содержать, необязательно, добавки, такие как соли фосфатного буфера, лимонная кислота, гликоли или другие диспергирующие вещества. В раствор можно включить стабилизирующие добавки предпочтительно в концентрации в интервале примерно от 0,1 до 20% (в/об.).

Композиции для доставки настоящего изобретения могут также содержать один или несколько ингибиторов ферментов. К таким ингибиторам ферментов относятся, но не ограничиваются перечисленными, такие соединения, как актинонин или эпиактинонин и их производные. Производные этих соединений описаны в патенте США 5206384. Другими ингибиторами ферментов являются, но не ограничиваются ими, апротинин (трасилол) и ингибитор Боумана-Бирка.

Количество активного средства представляет собой эффективное количество для осуществления доставки определенного активного вещества к указанной мишени. Количество активного средства в композиции, как правило, является фармацевтически, биологически, терапевтически или химически эффективным количеством. Однако это количество может быть меньше указанного, когда композицию используют в стандартной лекарственной форме, такой как капсула, таблетка, порошок или жидкость, поскольку стандартная лекарственная форма может содержать несколько композиций соединений и биологически или химически активных средств или может содержать отдельные фармацевтически, биологически, терапевтически или химически эффективные количества. Общее эффективное количество затем можно ввести в кумулятивных единицах, содержащих, в целом, фармацевтически, биологически, терапевтически или химически активные количества биологически или химически активного средства.

Общее количество активного средства, которое должно быть использовано, можно определить способами, известными специалистам в этой области техники. Однако поскольку композиции могут доставлять активные средства более эффективно, чем композиции известного уровня техники, субъекту можно вводить меньшие количества биологически или химически активных средств, чем количества, используемые в известных стандартных лекарственных формах или системах для доставки, при этом в то же время достигая те же их уровни в крови и/или то же лечебное действие.

Описываемые здесь соединения доставляют биологически и химически активные средства, в частности, пероральным, интраназальным путем, подъязычно, интрадуоденальным, подкожным, буккальным путем, через ободочную кишку, ректальным, вагинальным, мукозальным путем, через легкие, трансдермально, интрадермально, парентерально, внутривенно, внутримышечно и через глаза, а также посредством перехода гематоэнцефалического барьера.

Стандартные лекарственные формы также могут содержать любой один или сочетание эксципиентов, разбавителей, дезинтегрантов, смазывающих веществ, пластификаторов, красителей, вкусовых добавок, веществ, маскирующих вкус, сахаров, подслащивателей, солей и носителей для дозированной формы, включая, но не ограничиваясь ими, воду, 1,2-пропандиол, этанол, оливковое масло или любое их сочетание.

Соединения и композиции данного изобретения полезны для введения биологически или химически активных средств любым животным, включая, но не ограничиваясь перечисленными, птиц, таких как куры; млекопитающих, таких как коровы, свиньи, собаки, кошки, приматы, в частности люди; и насекомых. Система, в частности, выгодна для доставки биологически или химически активных средств, которые при ином способе будут разрушаться или становиться менее эффективными из-за условий, встречающихся на пути достижения активным средством зоны своего действия (т.е. участка, где активное средство должно высвобождаться из композиции для доставки) и в организме животного, которому их вводят. Соединения и композиции настоящего изобретения также полезны при введении активных средств, в особенности, тех, которые нельзя доставить определенным способом, в частности пероральным путем, или тех, для которых требуется улучшенная доставка. Доставку можно улучшить, доставляя больше активного средства за некоторый период времени или через определенный период времени (как например, ускорить доставку).

После введения активное средство, имеющееся в композиции или стандартной лекарственной форме, поглощается циркуляторной системой. Биологическую доступность средства легко оценить посредством определения известной фармакологической активности в крови, например, по увеличению времени свертывания крови, вызванного гепарином, или по снижению содержания кальция в циркуляторной системе, вызванного кальцитонином. С другой стороны, можно непосредственно определить содержание в циркуляторной системе самого активного средства.

Описание предпочтительных вариантов воплощения изобретения

Приведенные далее примеры иллюстрируют изобретение без его ограничения. Все части даны как весовые, если нет иных указаний.

Пример 1. Получение соединения

Способ А. Получение соединения 26. В 1-л круглодонную колбу, снабженную магнитной мешалкой, загружают 2-амино-п-крезол (1,71 г, 13,88 ммоль, 1 экв.) и 2 М водный раствор гидроксида натрия (20 мл). К раствору при 0°С при перемешивании добавляют по каплям метилазелоилхлорид (3,08 г, 13,96 ммоль, 1,01 экв.). По завершении добавления реакционной смеси дают возможность нагреться до температуры окружающей среды и перемешивают в течение 4-5 часов при температуре окружающей среды. Величину рН раствора поддерживают на уровне примерно 11-12 добавлением 20% раствора гидроксида натрия. Затем раствор экстрагируют этилацетатом (330 мл). Объединенные органические слои сушат над сульфатом натрия, фильтруют и концентрируют в вакууме. Остаток перекристаллизовывают из ТГФ (50 мл) и обрабатывают 2 N раствором NaOH (20 мл). Полученную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 8 часов. ТСХ показывает завершение реакции. Смесь концентрируют в вакууме и подкисляют. Полученное твердое вещество собирают, перекристаллизовывают из смеси метанол/ацетон/вода и получают 2,5 г продукта.

Соединения 11-15, 18-21, 24, 25, 27-35, 48-50, 54-56, 58, 65-68, 73, 83, 110, 120 и 131-133 также получают по этому способу с использованием соответствующих исходных веществ. Соединения 120, 122 и 123 также получают по этому способу с использованием соответствующих исходных веществ, за исключением того, что реакция проводилась в среде, содержащей ТГФ.

Способ В. Получение соединения 60. Суспензию 1,03 г (5,62 ммоль) 3-амино-4-фторгидрокоричной кислоты в 20 мл метиленхлорида обрабатывают 1,45 мл (1/24 г, 11,4 ммоль) триметилсилилхлорида и кипятят с обратным холодильником в течение 150 мин. Реакционную смесь охлаждают до 0°С и обрабатывают 2,4 мл (1,74 г, 17,2 ммоль) триэтиламина. После перемешивания в течение 5 мин смесь выливают в делительную воронку и постепенно добавляют к охлажденному до 0°С раствору 1,21 г (6,09 ммоль) О-ацетилсалицилоилхлорида в 10 мл метиленхлорида. Реакционную смесь нагревают до 25°С и перемешивают в течение 18 ч. После промывания 3% водной хлористоводородной кислотой (220 мл), водой (120 мл) и рассолом (115 мл), сушки над сульфатом натрия и концентрирования в вакууме получают коричневато-желтое твердое вещество. Твердое вещество перекристаллизовывают из 15 мл 65% раствора этанол/вода и получают коричневое твердое вещество. Твердое вещество растворяют в насыщенном водном растворе бикарбоната натрия. После перемешивания до тех пор, пока не произойдет отщепление ацетатной группы (по ВЭЖХ), раствор подкисляют, чтобы вызвать образование осадка. После отделения полученного осадка фильтрацией получают 0,58 г (выход 38%) продукта реакции, т.пл.=202-4°С.

Соединения 59, 61, 74-81, 107, 109 и 111-113 также получают по этому способу с использованием соответствующих исходных веществ. По указанному способу с использованием соответствующих исходных веществ также можно получить соединения 37, 42, 44 и 134.

Способ С. Получение соединения 1. В 250-мл круглодонной колбе, снабженной стержневой магнитной мешалкой, трубкой для подачи аргона и конденсатором, охлаждаемым водой, растворяют 1,4-бензодиоксан-2-он (4,50 г, 30 мл) в ацетонитриле (75 мл).

Добавляют триэтиламин (4,17 мл, 3,03 г, 30 ммоль) и 4-(4-аминофенил)масляную кислоту (5,37 г, 30 мл). Реакционную смесь кипятят с обратным холодильником в течение 2 ч, перемешивают в течение ночи при 25°С и концентрируют в вакууме. Коричневый остаток растворяют в метиленхлориде и промывают водным 1 N раствором хлористоводородной кислоты (1100 мл). Образовавшееся твердое вещество отделяют фильтрацией и промывают водным 1 N раствором хористоводородной кислоты и водой. Полученное твердое вещество сушат в течение ночи в вакуумном шкафу и получают соединение в виде желтовато-коричневого твердого вещества (9,19 г, выход 93%).

По этому способу, исходя из дигидрокумарина и 8-амино-каприловой кислоты, получают соединение 53.

Способ D. Получение соединения 36. С использованием способа Т, исходя из 3,5-динитросалициловой кислоты и 8-аминокаприловой кислоты, получают 8-(N-3,5-динитро-салицилоил)аминокаприловую кислоту.

Раствор 0,7 г (1,9 ммоль) 8-(N-3,5-динитросалицилоил)аминокаприловой кислоты в 40 мл этилацетата обрабатывают 70 мг 10% Pd/C и помещают в атмосферу водорода на 18 ч. Катализатор удаляют фильтрацией. Фильтрат концентрируют в вакууме. Остаток перекристаллизовывают из смеси метанол/ацетон/вода и получают 0,4 г (выход 62%) продукта реакции, т.пл.=156-7°С.

Способ Е. Получение соединения 2. С использованием способа С, посредством взаимодействия 4-(4-амино-фенил)масляной кислоты с 4-бензилоксифеноксиацетилхлоридом получают 4-(4-(4-бензилоксифеноксиацетил)амино)фенил)масляную кислоту.

Суспензию 5,00 г (11,9 ммоль) 4-(4-(4-бензиолксифенокси-ацетил)амино)фенил)масляной кислоты в 150 мл метилового спирта перемешивают в атмосфере аргона в течение приблизительно 20 минут. Добавляют в один прием каталитическое количество (0,4 г) 10% палладия-на-угле. Реакционный сосуд откачивают. Реакционную смесь выдерживают в атмосфере водорода в течение ночи при комнатной температуре. Затем палладий-на-угле отфильтровывают и фильтрат концентрируют в вакууме, получая продукт реакции в виде белого твердого вещества.

Соединения 8, 9 и 38 также получают по этому способу с использованием соответствующих исходных веществ.

Способ F. Получение соединения 39. Суспензию 10,82 г (59,7 ммоль) 5-фторизатового (isatoic) ангидрида, 9,50 г 8-аминокаприловой кислоты, 16,8 г 50 мас.% раствора К₂СО₃ в воде в 40 мл диоксана кипятят с обратным холодильником. Через 2 часа реакция завершается (определяют методом ВЭЖХ). Темно-лиловый раствор охлаждают до 25°С и подкисляют 3% водной хлористоводородной кислотой до рН 4,00, что вызывает образование черного осадка. Твердое вещество отделяют фильтрацией и перекристаллизовывают из 65% раствора этанол/вода, получая 11,86 г (выход 67%) продукта реакции в виде желтого твердого вещества, т.пл.=108-9°С.

Соединения 3-7, 10, 40 и 43 также получают по этому способу с использованием соответствующих исходных веществ.

Способ G. Получение соединения 62. Охлажденную до 5°С смесь 4-(4-аминофенил)масляной кислоты (1,0 экв.) и 6 N хлористоводородной кислоты (5,44 экв.) обрабатывают 1,05 экв. 3 N водного раствора нитрита натрия, причем его добавляют медленно, чтобы температура оставалась ниже 5°С. Добавляют 2,8 N водный раствор иодида калия (1,01 экв.). Реакционную смесь перемешивают в течение ночи. Слои разделяют. Органическую фазу очищают флэш-хроматографией с использованием в качестве элюента смеси метанол/метиленхлорид и получают 4-(4-иодфенил)масляную кислоту.

Раствор 4-(4-иодфенил)масляной кислоты (0,86 М) в диметилформамиде обрабатывают 2 экв. карбоната калия, 1,5 экв. 2-гидрокситиофенола и каталитическим количеством ацетата меди(2) (0,01 экв.). Реакционную смесь кипятят с обратным холодильником в течение 18 ч, охлаждают до 25°С, подкисляют водной кислотой и экстрагируют этилацетатом. Органическую фазу концентрируют. Остаток очищают флэш-хроматографией с использованием в качестве элюента смеси этилацетат/гексан и получают 4-(4-(2-гидроксифенил)тиофенил)масляную кислоту.

Раствор (0,33 М) 4-(4-(2-гидроксифенил)тиофенил)масляной кислоты в смеси этилацетат/уксусная кислота обрабатывают 9,8 М водным раствором пероксида водорода. После перемешивания в течение 12 ч слои разделяют. Органическую фазу концентрируют. Очистка остатка флэш-хроматографией с использованием в качестве элюента смеси толуол/ацетон/гексан дает продукт реакции.

Способ Н. Получение соединения 82. Охлажденный до 0°С раствор 3,97 г (17,8 ммоль) 9-бром-1-нонанола в метиленхлориде обрабатывают раствором 2,91 г 2-нитрофенилизоцианата в 10 мл метиленхлорида. Реакционную смесь кипятят с обратным холодильником в течение 2 ч, перемешивают при 25°С в течение 16 ч и концентрируют в вакууме. Желтое твердое вещество идентифицируют как 9-бромнонил N-(2-нитрофенил)карбамат и используют его как оно есть.

Суспензию 2,99 г (7,72 ммоль) 9-бромнонил N-(2-нитрофенил)карбамата, 1,61 г (23,3 ммоль) нитрита натрия и 4,50 мл (4,72 г, 78,5 ммоль) уксусной кислоты в 15 мл диметилсульфоксида перемешивают при 35°С в течение 7 ч. Реакционную смесь подкисляют 3% водной хлористоводородной кислотой и экстрагируют диэтиловым эфиром (320 мл). Объединенные органические слои экстрагируют 2 N водным раствором гидроксида натрия (320 мл). Щелочную водную фазу подкисляют 3% водной хлористоводородной кислотой, что вызывает образование осадка. Твердое вещество собирают фильтрацией и получают 0,79 г (выход 30%) соединения, т.пл.=90-1°С.

Способ I. Получение соединения 64. С использованием способа F, исходя из изатового ангидрида и 4-(4-аминофенил)масляной кислоты, получают 4-(4-(2-аминобензоил)аминофенил)масляную кислоту.

Суспензию 4,73 г (16,0 ммоль) 4-(4-(2-аминобензоил)аминофенил)масляной кислоты в 40 мл триэтилортоформиата помещают в атмосферу аргона и кипятят с обратным холодильником в течение 18 ч. В процессе кипячения реакционная смесь становится прозрачнее. Реакционную смесь охлаждают до комнатной температуры, полученное твердое вещество собирают фильтрацией и получают 4,47 г (выход 88%) продукта реакции, т.пл.=201-204°С.

Способ J. Получение соединения 63. Раствор (0,05 М) 4-(4-(2-гидроксифенил)тиофенил)масляной кислоты в метиленхлориде при 0°С обрабатывают 4 экв. м-хлорпербензойной кислоты. Реакционной смеси дают возможность нагреться до 25°С и перемешивают в течение 12 ч. Растворитель удаляют. Остаток очищают флэш-хроматографией с использованием в качестве элюента смеси этилацетат/гексан/уксусная кислота и получают продукт реакции.

Способ К. Получение соединения 84. С использованием способа F, исходя из изатового ангидрида и 8-аминокаприловой кислоты, получают 8-N-(2-аминобензоил)аминокаприловую кислоту.

Суспензию 6,88 г (24,7 ммоль) 8-N-(2-аминобензоил)аминокаприловой кислоты в 100 мл метиленхлорида охлаждают до 0°С и обрабатывают раствором 2,00 мл (2,08 г, 12,4 ммоль) гексаметилендиизоциананта в 5 мл метиленхлорида. Реакционную смесь кипятят с обратным холодильником в течение 2 ч, охлаждают до 25°С и разбавляют 20 мл этанола. Полученное твердое вещество выделяют фильтрацией и перекристаллизовывают из смеси этилацетат/этанол/вода (1/2/1), получая в целом 5,15 г (выход 57%) продукта реакции в виде желтовато-коричневого вещества, т.пл.=138-142°С.

По этому способу с использованием соответствующих исходных веществ, также можно получить соединение 135.

Способ L. Получение соединения 51. С использованием способа А, исходя из 2-хлор-6-метоксибензойной кислоты и 8-аминокаприловой кислоты, получают 8-(N-6-хлор-2-метокси-бензоил)аминокаприловую кислоту.

Суспензию 1,27 г (3,72 ммоль) 8-(N-6-хлор-2-метокси-бензоил)аминокаприловой кислоты в 200 мл метиленхлорида в атмосфере аргона охлаждают до 0°С и обрабатывают 8 мл 1,0 М раствора трибромида бора в метиленхлориде. После перемешивания в течение 60 мин ТСХ показывает, что реакция завершилась. Реакционную смесь разбавляют водой и перемешивают в течение 30 мин. Слои разделяют. Водный слой экстрагируют метиленхлоридом (230 мл). Объединенные органические слои сушат над сульфатом натрия, фильтруют и концентрируют в вакууме. Полученное белое твердое вещество перекристаллизовывают из смеси метанол/ацетон/вода и получают 0,5 г (выход 43%) продукта реакции, т.пл.=156-7°С.

Способ М. Получение соединения 17. Раствор, содержащий 4,28 мл (0,034 моль) дигидрокумарина, 75 мл ацетонитрила, 4,79 мл триэтиламина (3,48 г, 0,0343 моль) и 5,62 г 3-(4-аминофенил)пропионовой кислоты (0,034 моль), перемешивают в атмосфере аргона и смесь в колбе кипятят с обратным холодильником в течение 18 ч. Реакционную смесь охлаждают до комнатной температуры и ацетонитрил удаляют в вакууме.

Остаток перемешивают с метиленхлоридом и 1 N водной хлористоводородной кислотой, причем образуется белое твердое вещество. Это твердое вещество отфильтровывают, промывают водой и метиленхлоридом, затем сушат в вакууме при 50°С и получают 9,17 г (выход 86,1%) продукта реакции, т.пл.=163-165°С.

По этой процедуре, с использованием соответствующих исходных веществ получают также соединение 16.

Способ N. Получение соединения 52. Раствор 10,0 г (65,8 ммоль) 3-гидроксифенилуксусной кислоты в 50 мл ксилола обрабатывают 6,45 мл (68,4 ммоль) уксусного ангидрида. Эту смесь кипятят с обратным холодильником в течение примерно 2,5 ч до тех пор, пока не отгонится большая часть побочного продукта ксилола и уксусной кислоты. Олиго(3-гидроксифенилуксусную кислоту) выделяют в виде коричневого масла.

Это масло растворяют в 150 мл 1,4-диоксана. К раствору олигомера добавляют раствор 9,97 г (62,7 ммоль) 8-амино-каприловой кислоты в 34,5 мл 2 N раствора NaOH. Реакционную смесь кипятят с обратным холодильником в течение ночи. Затем удаляют диоксан в вакууме. Коричневый остаток растворяют в 2 N растворе NaOH и экстрагируют двумя порциями этилацетата по 100 мл. Затем водный слой подкисляют 2 N раствором серной кислоты и затем экстрагируют тремя порциями этилацетата по 100 мл. Объединенные этилацетатные слои обесцвечивают с помощью активированного угля, сушат над сульфатом натрия и концентрируют в вакууме. Затем полученное коричневое масло очищают колоночной хроматографией с использованием колонки с силикагелем со смесью этилацетат:гексан:уксусная кислота (60:40:1) в качестве подвижной фазы. Полученное белое твердое вещество промывают теплой водой (40-50°С) и получают продукт реакции в виде белого твердого вещества.

Соединения 41, 45 и 47 также получают по этому способу с использованием соответствующих исходных веществ.

Способ О. Получение соединения 22. К раствору 3,0 г (11,0 ммоль) 3-(4-(2-аминобензоил)аминофенил)пропионовой кислоты в 10 мл метиленхлорида добавляют по каплям в течение 30 минут уксусный ангидрид (1,12 г, 1,04 мл, 11,0 ммоль). После добавления всего количества уксусного ангидрида реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 18 ч. Реакция завершается, что определяют методом ВЭЖХ. Полученное твердое вещество выделяют фильтрацией. Полученное белое твердое вещество сушат в вакууме в течение ночи и получают продукт реакции.

Способ Р. Получение соединения 23. Смесь 5,13 г (27,9 ммоль) 2-сульфобензойного циклического ангидрида, 5,0 г (27,9 ммоль) 4-(4-аминофенил)масляной кислоты и 100 мл ацетонитрила перемешивают в течение 18 ч. Молочно-белый раствор концентрируют. Остаток растворяют в 50 мл холодной водной хлористоводородной кислоты, раствор экстрагируют этилацетатом (550 мл) и экстракт концентрируют. Остаток очищают колоночной хроматографией с использованием в качестве элюента ацетонитрила и получают продукт реакции.

Способ Q. Получение соединения 57. Раствор, содержащий 10 г 5-хлор-2-гидроксибензамида (58,0 ммоль), пиридин (22 мл) и ацетонитрил (25 мл), перемешивают на ледяной бане. Добавляют по каплям этилхлорформиат (6,1 мл, 0,0638 моль). Розовый раствор перемешивают в течение 30 минут при <10°С. Ледяную баню заменяют масляной баней. Реакционную смесь нагревают до 95°С и отгоняют летучие вещества (43 мл). Реакционную смесь охлаждают до комнатной температуры, что вызывает образование белого твердого вещества. Смесь выливают в воду (100 мл) и подкисляют концентрированной водной хлористоводородной кислотой. Полученное твердое вещество отфильтровывают и перекристаллизовывают из горячего этанола, получая 9,77 г 6-хлор-2Н-1,3-бензоксазин-2,4(3Н)-диона.

Суспензию 9,77 г 6-хлор-2Н-1,3-бензоксазин-2,4(3Н)-диона (50 ммоль) в 60 мл ДМФ обрабатывают раствором 1,10-дибромдекана (52,52 г, 0,175 моль) в ДМФ (60 мл). Добавляют по каплям диизопропилэтиламин (9,6 мл, 55 ммоль). Присоединяют термометр и обратный холодильник и колбу помещают на масляную баню. Реакционную смесь нагревают при 60°С в течение приблизительно 3 час, охлаждают до 47°С и добавляют гексан (150 мл). Смесь разбавляют водой (175 мл). Образовавшееся твердое вещество удаляют фильтрацией. Водный слой промывают теплым гексаном. Образовавшееся твердое вещество отфильтровывают от гексанового слоя и перекристаллизовывают из теплого гексана, получая 10,39 г 6-хлор-3-(10-бромдецил)-2Н-1,3-бензоксазин-2,4(3Н)-диона.

Смесь 6-хлор-3-(10-бромдецил)-2Н-1,3-бензоксазин-2,4(3Н)-диона (10,39 г, 0,025 моль), нитрита натрия (5,52 г, 0,08 моль) и ДМСО (60 мл) перемешивают в атмосфере аргона. Добавляют уксусную кислоту (14,9 мл) и реакционную смесь нагревают при 75°С в течение 6 ч. Затем, после охлаждения до комнатной температуры, реакционную смесь растворяют в этилацетате и раствор промывают 0,5 N НСl (2х) и 2 N раствором NaOH (2x). Слои с гидроксидом натрия перемешивают в течение 2 ч 20 мин и раствор подкисляют 2 М раствором H₂SO₄. Затем твердое вещество отфильтровывают и перекристаллизовывают из метиленхлорида и гексана. Выход 3,0 г.

Способ R. Получение соединения 71. Раствор 3,22 г (18,4 ммоль) монометилфталата и 2,90 мл (2,11 г, 20,8 ммоль) триэтиламина в 20 мл ацетона охлаждают на ледяной (с солью) бане и обрабатывают раствором 2,00 мл (2,27 г, 20,9 ммоль) этилхлорформиата в 10 мл ацетона, который добавляют по каплям в течение 20 мин. Белый мутный раствор перемешивают в течение 15 мин и обрабатывают раствором 2,53 г (38,9 ммоль) азида натрия в 8 мл воды. После перемешивания в течение 30 мин все еще мутный раствор выливают в 50 мл воды со льдом и экстрагируют толуолом (330 мл). Толуольную фазу сушат над сульфатом натрия и кипятят с обратным холодильником в течение 80 мин. Реакционную смесь охлаждают до 0°С. В несколько приемов в течение 5 мин добавляют 3,11 г (18,8 ммоль) 3-(4-аминофенил)пропионовой кислоты. После перемешивания в течение 64 ч реакционную смесь разбавляют 80 мл смеси диоксан/вода (3:1) и кипятят с обратным холодильником в течение 3 ч. Охлажденную смесь экстрагируют 2 N (130 мл) и 0,5 N (230 мл) раствором гидроксида натрия. Объединенные водные слои подкисляют, что вызывает образование белого твердого вещества. Выделение фильтрацией, растворение в этилацетате, фильтрация от нерастворимых веществ и концентрирование фильтрата дают 1,13 г твердого продукта реакции.

Способ S. Получение соединения 69. Суспензию 3,17 г (21,7 ммоль) 4-гидроксихиназолина с 3 каплями диметилформамида в 20,0 мл тионилхлорида кипятят с обратным холодильником. Через 150 мин прозрачный желтый раствор охлаждают до 30°С. Избыток тионилхлорида отгоняют при 50 мм рт.ст. После 15-мин выдержки при давлении 1,0 мм рт.ст. беловато-желтое содержимое колбы растворяют в 30 мл метиленхлорида и обрабатывают суспензией 3,61 г (21,9 ммоль) 3-(4-аминофенил)пропионовой кислоты в 40 мл изопропанола. Реакционную смесь перемешивают в течение 18 ч. Светло-желтое твердое вещество выделяют фильтрацией и сушат в вакууме, получая продукт реакции.

По этому же способу получают также соединение 70, за исключением того, что подкисление осуществляют только до рН 4,56, чтобы выделить свободный амин.

Способ Т. Получение соединения 46. Уксусный ангидрид (6,45 мл, 6,98 г, 68,4