Производные индола и их применение в качестве антагонистов мср-1

Производные индола и их применение в качестве антагонистов мср-1

Реферат

 

Изобретение относится к производным индола общей формулы I:

где R¹ представляет водород, галоген, метокси; R² представляет водород, галоген, метил, этил, метокси; R³ представляет карбокси, тетразолил или –CONHSO₂R⁴, в котором R⁴ представляет метил, этил, фенил, 2,5-диметилизоксазолил, трифторметил; Т представляет –СН₂- или –SO₂-; и кольцо А представляет 3-хлорфенил, 4-хлорфенил, 3-трифторметилфенил, 3,4-дихлорфенил, 3,4-дифторфенил, 3-фтор-4-хлорфенил, 3-хлор-4-фторфенил, 2,3-дихлорпирид-5-ил; или их фармацевтически приемлемые соли или сложные эфиры, а также фармацевтические композиции, содержащие их. Данные соединения и композиции могут применяться при лечении заболевания, опосредованного моноцитарным хемоаттрактантным белком-1 или RANTES (регулируемый при активации, экспрессируемый и секретируемый нормальными Т-клетками), такого как воспалительное заболевание. 3 н. и 7 з.п. ф-лы, 1 табл.

Настоящее изобретение относится к противовоспалительным соединениям, которые действуют посредством антагонизма рецептора CCR2 (известного так же, как рецептор МСР-1), приводя, наряду с другими эффектами, к ингибированию моноцитарного хемоаттрактантного белка-1 (МСР-1). Эти соединения содержат индольный фрагмент. Изобретение, кроме того, относится к содержащим их фармацевтическим композициям, способам их получения, промежуточным соединениям, полезным при их получении, и к их применению в качестве терапевтических средств.

МСР-1 является членом семейства хемокинов провоспалительных белков, которые опосредуют хемотаксис и активацию лейкоцитов. МСР-1 представляет собой С-С хемокин, который является одним из наиболее мощных и избирательных из известных хемоаттрактантов и активирующих средств Т-клеток и моноцитов. МСР-1 причастен к патофизиологии огромного числа воспалительных заболеваний, включая ревматоидный артрит, гломерулонефриты, фиброз легких, рестеноз (Международная патентная заявка WO 94/09128), альвеолит (Jones et al., 1992, J. Immunol., 149, 2147) и астму. Другими патологическими процессами, при которых, как считают, МСР-1 играет роль в их патологии, являются атеросклероз (например, Koch et al., 1992, J. Clin. Invest., 90, 772-779), псориаз (Deleuran et al., 1996, J. Dermatological Science, 13, 228-236), кожные реакции гиперчувствительности замедленного типа, воспалительное заболевание кишечника (Grimm et al., 1996, J. Leukocyte Biol., 59, 804-812), рассеянный склероз и травма головного мозга (Berman et al., 1996, J. Immunol., 156, 3017-3023). Ингибитор МСР-1 может быть полезен для лечения инсульта, реперфузионного повреждения, ишемии, инфаркта миокарда и отторжения трансплантата.

МСР-1 действует через рецептор CCR2. МСР-2 и МСР-3 могут также, по крайней мере частично, действовать через данный рецептор. Поэтому, когда в данном описании упоминается “ингибирование или антагонизм МСР-1” или “эффекты, опосредованные МСР-1”, это включает ингибирование или антагонизм в отношении эффектов, опосредованных МСР-2 и/или МСР-3, когда МСР-2 и/или МСР-3 действуют через рецептор CCR2.

Заявители обнаружили класс соединений, содержащих индольный фрагмент, которые обладают полезной ингибирующей активностью против МСР-1. Находящаяся одновременно на рассмотрении заявка UK 9716657.3 раскрывает класс индолов с ингибирующей активностью в отношении МСР-1. Данная заявка основана на удивительном открытии того, что конкретные замещенные 5-гидроксииндолы являются ингибиторами МРС-1, которые обладают неожиданными и благоприятными свойствами в отношении мощности и/или уровнями в крови и/или биологической доступности и/или растворимости.

Соответственно, настоящее изобретение предоставляет соединения формулы (I):

в которой

R¹ представляет водород, галоген или метокси;

R² представляет водород, галоген, метил, этил или метокси;

R³ представляет карбокси, тетразолил или -CONHSO₂R⁴, где R⁴ представляет метил, этил, фенил, 2,5-диметилизоксазолил или трифторметил;

Т представляет -СН₂- или -SO₂; и

кольцо А представляет 3-хлорфенил, 4-хлорфенил, 3-трифторметилфенил, 3,4-дихлорфенил, 3,4-дифторфенил, 3-фтор-4-хлорфенил, 3-хлор-4-фторфенил или 2,3-дихлорпирид-5-ил; или их фармацевтически приемлемые соли или пролекарства.

В данном описании термин “алкил” включает алкильные группы как с прямыми, так и с разветвленными цепями, но ссылки на отдельные алкильные группы, такие как “пропил”, специфичны только для прямоцепочечных вариантов. Термин “галоген” относится к фтору, хлору, брому и иоду.

Конкретные новые соединения изобретения включают, например, соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли или пролекарства, в которых при отсутствии других указаний:

а) R¹ имеет любое из значений, определенных здесь ниже в пунктах i)-iii), или комбинацию двух из этих значений;

b) R² имеет любое из значений, определенных здесь ниже в пунктах iv)-viii), или комбинацию двух из этих значений;

c) R³ имеет любое из значений, определенных здесь ниже в пунктах ix)-xi), или комбинацию двух из этих значений;

e) Т имеет любое из значений, определенных здесь ниже в пунктах xii)-xiii);

f) кольцо А имеет любое из значений, определенных здесь ниже в пунктах xiv)-xxi), или комбинацию двух из этих значений;

i) R¹ представляет водород;

ii) R¹ представляет галоген;

iii) R¹ представляет метокси;

iv) R² представляет водород;

v) R² представляет галоген;

vi) R² представляет метил;

vii) R² представляет этил;

viii) R² представляет метокси;

ix) R³ представляет карбокси;

х) R³ представляет тетразолил;

xi) R³ представляет -CONHSO₂R⁴, где R⁴ представляет метил этил, фенил, 2,5-диметилизоксазолил или трифторметил;

xii) Т представляет -СН₂-;

xiii) Т представляет -SO₂-;

xiv) кольцо А представляет 3-хлорфенил;

xv) кольцо А представляет 4-хлорфенил;

xvi) кольцо А представляет 3-трифторметилфенил;

xvii) кольцо А представляет 3,4-дихлорфенил;

xviii) кольцо А представляет 3,4-дифторфенил;

xix) кольцо А представляет 3-фтор-4-хлорфенил;

хх) кольцо А представляет 3-хлор-4-фторфенил; и

xxi) кольцо А представляет 2,3-дихлорпирид-5-ил.

Предпочтительно R¹ представляет водород.

Предпочтительно R² представляет водород.

Предпочтительно R³ представляет карбоксильную группу.

Предпочтительно Т представляет -СН₂-.

Предпочтительно кольцо А представляет 3-хлорфенил, 4-хлорфенил, 3-трифторметилфенил, 3,4-дихлорфенил, 3,4-дифторфенил, 3-фтор-4-хлорфенил или 3-хлор-4-фторфенил.

Более предпочтительно, кольцо А представляет 3,4-дихлорфенил, 3-фтор-4-хлорфенил или 3-хлор-4-фторфенил.

Например, кольцо А представляет 3,4-дихлорфенил или 3-хлор-4-фторфенил.

В другом аспекте изобретения предпочтительно кольцо А представляет 3,4-дихлорфенил, 2,3-дихлорпирид-5-ил или 3-хлор-4-фторфенил.

Поэтому в предпочтительном аспекте изобретения предоставляются соединения формулы (I), изображенной выше, в которой:

R¹ представляет водород;

R² представляет водород;

R³ представляет карбокси;

Т представляет -СН₂-; и

кольцо А представляет 3,4-дихлорфенил, 3-фтор-4-хлорфенил или 3-хлор-4-фторфенил; в частности, 3,4-дихлорфенил или 3-хлор-4-фторфенил; или его фармацевтически приемлемую соль или пролекарство.

Предпочтительные соединения изобретения включают любое соединение примеров. Более предпочтительными соединениями изобретения являются соединения примеров 1, 3 и 4, например, примера 1 и 3.

Изобретение далее относится ко всем таутомерным формам соединений формулы (I).

Следует также понимать, что некоторые соединения формулы (I) могут существовать в сольватированной, а также несольватированной формах, таких, например, как гидратированные формы. Следует также понимать, что изобретение охватывает все такие сольватированные формы.

Соединения формулы (I) являются ингибиторами хемоаттрактантного белка-1 моноцитов. Кроме того, они по-видимому ингибируют хемотаксис, вызванный RANTES. RANTES (регулируемый при активации, экспрессируемый и секретируемый нормальными Т-клетками) представляет еще один хемокин из того же семейства, что и МСР-1, с аналогичным биологическим профилем, но действующий через рецептор CCR-1. В результате эти соединения могут применяться для лечения заболеваний, опосредованных этими агентами, в частности, воспалительных заболеваний.

Подходящие фармацевтически приемлемые соли соединений формулы (I) включают соли оснований, такие как соли щелочных металлов, например, натрия, соли щелочноземельных металлов, например, кальция или магния, соль органического амина, например, триэтиламина, морфолина, N-метилпиперидина, N-этилпиперидина, прокаина, дибензиламина, N,N-дибензилэтиламина или аминокислоты, например, лизина. В другом аспекте, когда соединение является достаточно основным, подходящие соли включают кислотно-аддитивные соли, такие как метансульфонат, фумарат, гидрохлорид, гидробромид, цитрат, малеат и соли, образованные с фосфорной и серной кислотой. Может быть несколько катионов или анионов в зависимости от количества заряженных функций и валентности катионов или анионов. Предпочтительной фармацевтически приемлемой солью является натриевая соль.

В данной области известны различные формы пролекарств. Примеры таких производных пролекарств можно найти в публикациях:

a) Design of Prodrugs, edited by H. Bundgaard (Elsevier, 1985) и Methods in Enzymology, Vol.42, p.309-396, edited by K. Widder, et al. (Academic Press, 1985);

b) A Textbook of Drug Design and Development, edited by Krogsgaard-Larsen и H.Bundgaard, Chapter 5 "Design and Application of Prodrugs", by H.Bungaard, p.113-191 (1991);

c) H.Bungaard, Advanced Drug Delivery Reviews, 8, 1-38 (1992);

d) H.Bungaard et al., Journal of Pharmaceutical Sciences, 77, 285 (1988); и

е) N. Kakeya, et al., Chem Pharm Bull, 32, 692 (1984).

Примерами таких пролекарств являются расщепляемые in vivo сложные эфиры соединений изобретения. Расщепляемым in vivo сложным эфиром соединения изобретения, содержащим карбоксигруппу, является, например, фармацевтически приемлемый эфир, который расщепляется в организме человека или животного с образованием исходной кислоты. Подходящие фармацевтически приемлемые эфиры для карбоксигруппы включают сложные C_1-6 алкиловые эфиры, например, метиловые или этиловый; C_1-6 алкоксиметиловые эфиры, например, метоксиметиловый; C_1-6 алканоилоксиметиловые эфиры, например, пивалоилоксиметиловый; фталидиловые эфиры; С_3-8 циклоалкоксикарбонилокси-С_1-6 алкиловые эфиры, например, 1-циклогексилкарбонилоксиэтиловый; 1,3-диоксолан-2-илметиловые эфиры, например, 5-метил-1,3-диоксолан-2-илметиловый; C_1-6 алкоксикарбонилоксиэтиловые эфиры, например, 1-метоксикарбонилоксиэтиловый; аминокарбонилметиловые эфиры и их моно- или ди-N-(С_1-6 алкиловые) варианты, например, N,N-диметиламинокарбонилметиловые эфиры и N-этиламинокарбонилметиловые эфиры; и они могут образовываться по любой карбоксигруппе в соединениях данного изобретения. Расщепляемым in vivo сложным эфиром соединения изобретения, содержащим гидроксильную группу, является, например, фармацевтически приемлемый сложный эфир, который расщепляется в организме человека или животного с получением исходной гидроксильной группы. Подходящие фармацевтически приемлемые эфиры для гидроксигруппы включают C_1-6 алканоиловые эфиры, например, ацетиловые эфиры; и бензоиловые эфиры, в которых фенильная группа может быть замещена аминометилом или N-замещенным моно- или ди-C_1-6 алкиламинометилом, например, 4-аминометилбензоиловые эфиры и 4-N,N-диметиламинометилбензоиловые эфиры.

Дополнительными примерами таких пролекарств являются расщепляемые in vivo амиды соединений изобретения. Примеры таких расщепляемых in vivo амидов включают N-C_1-6 алкиламид и N, N-ди-(С_1-6 алкил)амид, такие как N-метил, N-этил, N-пропил, N,N-диметил, N-этил-N-метил или N,N-диэтиламид.

Еще один аспект настоящего изобретения предоставляет способ получения соединений формулы (I) или их фармацевтически приемлемых солей или пролекарств (R¹, R², R³, Т и кольцо А имеют значения, определенные для формулы (I), если не указано иное), включает стадии:

а) реакции соединений формулы (II)

в которой R³ представляет R³ или защищенный R³, a R^b представляет водород или подходящую гидроксизащитную группу, с соединением формулы (III)

в которой L представляет смещаемую группу;

и после этого при необходимости:

i) превращения соединения формулы (I) в другое соединение формулы (I);

ii) удаления любой защитной группы; или

iii) образования его фармацевтически приемлемой соли или пролекарства.

Подходящими значениями для L являются, например, галогеновая или сульфонилокси группа, например, хлор, бром, метансульфонилокси или толуол-4-сульфонилоксигруппа.

Конкретными условиями для указанных выше реакций являются следующие:

а) Соединения формулы (II) и (III) могут подвергаться реакции вместе в инертном растворителе и основании, таком как N,N-диметилформамид/гидрид натрия или дихлорметан/гидроксид натрия или ацетонитрил/карбонат калия, или в присутствии катализатора переноса фазы, такого как тетра-н-бутиламмонийгидросульфат. Реакцию подходящим образом осуществляют в течение 1-6 ч, предпочтительно 1-3 ч, при температуре 15-30 С, предпочтительно 20-25 С с получением соединения формулы (I).

Соединения формулы (II) могут быть промышленно доступными или они могут быть получены с помощью модификации с использованием известных способов получения промышленно доступных соединений формулы (II), или они могут быть получены следующими способами:

Способ i)

Реакция соединения формулы (IV):

в которой R^b имеет определенные выше значения, с соединением формулы (V)

в которой R^c представляет C_1-4 алкил.

Соединения формулы (IV) и (V) вводятся в реакцию в условиях реакции Reissert, таких как в инертном растворителе (таком как тетрагидрофуран), в присутствии основания (такого как этоксид калия), в диапазоне температур 15-30 С, предпочтительно 20-25 С, в течение 10-20 ч, предпочтительно 15-17 ч. Полученное соединение отделяют и растворяют в спирте, таком как этанол, и органической кислоте (такой как уксусная кислота) и добавляют катализатор на основе переходного металла (такой как 10% Pd/C) и циклогексен. Смесь нагревают при температуре 60-120 С, предпочтительно 70-90 С, в течение 15-25 ч, предпочтительно 16-20 ч, с получением соединения формулы (II), в которой R^a представляет -СO₂С_1-4 алкил.

Способ (ii)

Реакция соединения формулы (VI):

в которой R^b имеет определенные выше значения, с соединением формулы (VII)

в которой R^d представляет C_1-4 алкил.

Соединения формулы (VI) и (VII) вводятся в реакцию в условиях Фишера, как, например, с органической кислотой (такой как уксусная кислота), в спирте (таком как этанол) при температуре 60-90 С, предпочтительно 75-85 С, в течение 1-5 ч, предпочтительно 1-3 ч. Полученное соединение смешивают с сильной кислотой (такой как полифосфорная кислота) и нагревают при 90-150 С, предпочтительно 100-120°С, в течение 0,5-4 ч, предпочтительно 0,5-2 ч с получением соединения формулы (II), в которой R² представляет водород. Затем при желании R² может необязательно превращаться в другое значение R², определенное в формуле (I), с использованием методик, известных в данной области, таких как методики, описанные ниже.

Способ (iii)

Циклизация соединения формулы (VIII)

в которой R¹, R^a, R^b и R² представляют радикалы, определенные выше.

Циклизацию можно осуществлять с помощью кипячения соединения с обратным холодильником в органическом растворителе, таком как ксилол. Соединения формулы (VIII) подходящим образом получают по реакции соединения формулы (IX)

в которой R¹, R² и R^b имеют значения, определенные выше, с соединением формулы (X)

в которой R^a имеет значения, определенные выше. Реакцию подходящим образом проводят в органическом растворителе, таком как спирт, в частности, метанол, в присутствии основания, такого как алкоксид щелочного металла, в частности, метоксид натрия. Подходящей является умеренная температура от -30 до 20°С.

Способ (iv)

Согласно еще одной модификации соединения формулы (II) получают циклизацией соединения формулы (XI)

в которой R¹ и R^b имеют значения, определенные выше, R⁷ представляет алкил, такой как метил, а R⁸ представляет карбоксизащитную группу, такую как алкил, в частности, метил.

Циклизацию можно осуществлять в условиях Klingemann подогреванием раствора соединения в органическом растворителе, таком как толуол, и подходящей кислоте, такой как пара-толуол-сульфоновая кислота.

Соединения формулы (XI) можно получать в результате реакции соединения формулы (XII)

в которой R¹, R^b R⁵ и R⁶ имеют значения, определенные выше, с соединением формулы (XIII)

в которой R⁷ и R⁸ имеют значения, определенные выше в отношении формулы (XI). Соединение формулы (XII) можно растворять в разбавленной кислоте, такой как 1,5 н. НС1, в присутствии нитрита, такого как нитрит натрия, при умеренно низких температурах от -30 до 0°С, предпочтительно -5°С.

Затем раствор смешивают с раствором соединения формулы (XIII) в органическом растворителе, таком как этанол, в присутствии раствора основания, такого как гидроксид щелочного металла, например, водный раствор гидроксида натрия.

Соединения формулы (III), (IV), (V), (VI), (VII), (VIII), (X), (XII) и (XIII) являются известными или промышленно доступными, или получаются способами, известными в данной области, с помощью стандартной манипуляции с промышленно доступными или известными материалами.

R^c и R^d представляют C_1-4 алкил. Предпочтительно R^c и R^d представляют метил или этил.

Следует также понимать, что в некоторых из упомянутых здесь реакций может быть необходимо/желательно защищать какие-либо чувствительные группы в соединениях. Случаи, при которых защита необходима или желательна, известны специалистам в данной области. Так, если реагенты включают такие группы, как карбоксильная или гидроксильная, может быть желательным защитить группу в некоторых упомянутых выше реакциях.

Подходящей защитной группой для гидроксильной группы является, например, ацильная группа, например, алканоильная группа, такая как ацетил, ароильная группа, например, бензоил, или арилметильная группа, например, бензил. Условия снятия защиты для указанных выше защитных групп необходимо будет варьировать в зависимости от выбора защитной группы. Так, например, ацильная группа, такая как алканоильная или ароильная группа, могут быть удалены, например, гидролизом подходящим основанием, таким как гидроксид щелочного металла, например, гидроксид лития или натрия. Альтернативно, арилметильная группа, такая как бензильная группа, может быть удалена, например, гидрированием на катализаторе, таком как палладий на угле.

Подходящей защитной группой для карбоксильной группы является, например, этерифицирующая группа, например, метильная или этильная группа, которые могут быть удалены, например, гидролизом основанием, таким как гидроксид натрия, или, например, трет-бутильная группа, которая может быть удалена, например, обработкой кислотой, например, органической кислотой, такой как трифторуксусная кислота, или, например, бензильная группа, которая может быть удалена, например, гидрированием на катализаторе, таком как палладий на угле.

Защитные группы могут быть удалены на любой удобной стадии синтеза с использованием обычных методик, хорошо известных в области химии.

Некоторые из описанных здесь промежуточных соединений возможно являются новыми, например, промежуточные соединения формулы (II), и они как таковые предоставляются в качестве дополнительного признака изобретения.

Когда требуется фармацевтически приемлемая соль соединения формулы (I), она может быть получена, например, реакцией указанного соединения с соответствующей кислотой (которая предоставляет физиологически приемлемый анион) или с соответствующим основанием (которое предоставляет физиологически приемлемый катион), или с помощью любой другой обычной процедуры образования соли.

В соответствии с еще одним аспектом изобретения предоставляется фармацевтическая композиция, которая включает соединение формулы (I), определенное здесь выше, или его фармацевтически приемлемую соль или пролекарство, в сочетании с фармацевтически приемлемым наполнителем или носителем.

Композиции изобретения могут быть в форме, подходящей для орального применения (например, таблеток, пастилок, твердых или мягких капсул, водных или масляных суспензий, эмульсий, диспергируемых порошков или гранул, сиропов или эликсиров), для местного применения (например, в виде кремов, мазей, гелей, водных или масляных растворов или суспензий), для введения ингаляцией (например, в виде тонкоизмельченного порошка или жидкого аэрозоля), для введения вдуванием (например, в виде тонкоизмельченного порошка). Или для парентерального введения (например, в виде стерильного водного или масляного раствора для внутривенного, подкожного, внутримышечного или внутрикожного введения или в виде суппозиторий для ректального введения).

Композиции изобретения могут быть получены с помощью обычных процедур с использованием обычных фармацевтических наполнителей, хорошо известных в данной области. Так, композиции, предназначенные для орального применения, могут содержать, например, одно или несколько красящих, подслащивающих, ароматизирующих и/или консервирующих средств.

Подходящие фармацевтически приемлемые наполнители для образования таблеток включают, например, инертные растворители, такие как лактоза, карбонат натрия, фосфат кальция или карбонат кальция, гранулирующие и разрыхляющие средства, такие как кукурузный крахмал или алгеновая кислота; связывающие средства, такие как крахмал; смазывающие средства, такие как стеарат магния, стеариновая кислота или тальк; консервирующие средства, такие как этил- или пропил-пара-гидроксибензоат, и антиоксиданты, такие как аскорбиновая кислота. Композиции таблеток могут быть непокрытыми или покрытыми или для изменения их дезинтеграции и последующего всасывания активного ингредиента внутри желудочно-кишечного тракта, или для улучшения их стойкости и/или внешнего вида, с использованием обычных средств и процедур, хорошо известных в данной области.

Композиции для орального применения могут быть в форме твердых желатиновых капсул, в которых активный ингредиент смешан с инертным твердым растворителем, например, карбонатом кальция, фосфатом кальция или каолином, или в виде мягких желатиновых капсул, в которых активный ингредиент смешан с водой или маслом, таким как арахисовое масло, жидкий парафин или оливковое масло.

Водные суспензии обычно содержат активный ингредиент в тонкоизмельченной порошкообразной форме вместе с одним или несколькими суспендирующими агентами, такими как натрий карбоксиметилцеллюлоза, метилцеллюлоза, гидроксипропилметилцеллюлоза, альгинат натрия, поливинилпирролидон, смола трагаканта и смола акации; диспергирующие или смачивающие агенты, такие как лецитин или продукты конденсации алкиленоксида с жирными кислотами (например, полиоксиэтиленстеарат), или продукты конденсации этиленоксида с длинноцепочечными алифатическими спиртами, например, гептадекаэтиленоксиэтанол, или продукты конденсации этиленоксида с частичными сложными эфирами, полученными из жирных кислот и гексита, такие как полиоксиэтиленсорбитмоноолеат, или продукты конденсации этиленоксида с длинноцепочечными алифатическими спиртами, например, гептадекаэтиленоксицетанол, или продукты конденсации этиленоксида с частичными сложными эфирами, полученными из жирных кислот и гексита, такие как полиоксиэтиленсорбитмоноолеат, или продукты конденсации этиленоксида с частичными сложными эфирами, полученными из жирных кислот и ангидридов гексита, например, полиэтиленсорбитанмоноолеат. Водные суспензии могут также содержать один или несколько консервантов (таких как этил или пропил пара-гидроксибензоат), антиоксиданты (такие как аскорбиновая кислота), красящие агенты, ароматизирующие агенты и/или подслащивающие агенты (такие как сахароза, сахарин или аспартам).

Масляные суспензии могут составляться суспендированием активного ингредиента в растительном масле (таком как арахисовое масло, оливковое масло, кунжутное масло или кокосовое масло) или в минеральном масле (таком как жидкий парафин). Масляные суспензии могут также содержать загуститель, такой как пчелиный воск, твердый парафин или цетиловый спирт. Подслащивающие агенты, такие как агенты, указанные выше, и ароматизаторы могут добавляться для предоставления приятного на вкус препарата. Данные композиции могут консервироваться добавлением антиоксиданта, такого как аскорбиновая кислота.

Диспергируемые порошки и гранулы, подходящие для получения водной суспензии добавлением воды, обычно содержат активный ингредиент вместе с диспергирующим или смачивающим агентом, суспендирующим агентом и одним или несколькими консервантами. Примеры подходящих диспергирующих или смачивающих агентов уже упомянуты выше. Могут также присутствовать дополнительные наполнители, такие как подслащивающие, ароматизирующие и красящие агенты.

Фармацевтические композиции изобретения могут также быть в форме эмульсий масло-в-воде. Масляная фаза может представлять растительное масло, такое как оливковое масло или арахисовое масло, или минеральное масло, такое как, например, жидкий парафин, или смесь любых из них. Подходящими эмульгирующими агентами могут быть, например, встречающиеся в природе смолы, такие как смола акации или смола трагаканта, встречающиеся в природе фосфатиды, такие как соевые бобы, лецитин, сложные эфиры или частичные сложные эфиры, полученные из жирных кислот и ангидридов гексита (например, сорбитан моноолеат), и продукты конденсации указанных частичных сложных эфиров с этиленоксидом, такие как полиоксиэтиленсорбитанмоноолеат. Эмульсии могут также содержать подслащивающие, ароматизирующие и консервирующие агенты.

Сиропы и эликсиры могут составляться с подслащивающими агентами, такими как глицерин, пропиленгликоль, сорбит, аспартам или сахароза, и могут также содержать смягчающее средство, консервант, ароматизатор и/или краситель.

Фармацевтические композиции могут также быть в форме стерильной водной или масляной суспензии для инъекций, которая может быть составлена в соответствии с известными процедурами с использованием одного или нескольких соответствующих диспергирующих или смачивающих агентов и суспендирующих агентов, которые были упомянуты выше. Стерильный препарат для инъекций может также представлять стерильный раствор или суспензию для инъекций в нетоксичном, приемлемом для парентерального применения разбавителе или растворителе, например, раствор в 1,3-бутандиоле.

Композиции суппозиторий могут быть получены смешиванием активного ингредиента с подходящим нераздражающим наполнителем, который представляет твердое вещество при обычных температурах, но жидкое вещество при ректальной температуре, и поэтому в прямой кишке расплавляется с высвобождением препарата. Подходящие наполнители включают, например, масло какао и полиэтиленгликоли.

Композиции для местного применения, такие как кремы, мази, гели и водные или масляные растворы или суспензии, могут быть обычно получены объединением активного ингредиента с обычным, приемлемым для местного применения носителем или разбавителем с использованием обычной процедуры, хорошо известной в данной области.

Композиции для введения вдуванием могут быть в форме тонкоизмельченного порошка, содержащего частицы со средним диаметром, например, 30 мкм или гораздо меньше, причем сам порошок содержит или один активный ингредиент, или разбавленный одним или несколькими физиологически приемлемыми носителями, такими как лактоза. Затем порошок для вдувания для удобства помещают в капсулу, содержащую, например, от 1 до 50 мг активного ингредиента для применения с устройством турбоингаляции, таким как устройство, используемое для вдувания известного средства кромогликата натрия.

Композиции для введения путем ингаляции могут быть в виде обычного находящегося под давлением аэрозоля, приспособленного для подачи активного ингредиента или в виде аэрозоля, содержащего мелко измельченное твердое вещество, или капельки жидкого вещества. Могут использоваться обычные аэрозольные газы-вытеснители, такие как летучие фторированные углеводороды или углеводороды, и аэрозольное устройство может быть для удобства отрегулировано для подачи дозированного количества активного ингредиента.

Дополнительную информацию о готовых формах композиций читатель может получить в главе 25.2 тома 5 Comprehensive Medicinal Chemistry (Corwin Hansch; Chairman of Editorial Board), Pergamon Press, 1990.

Количество активного ингредиента, которое комбинируется с одним или несколькими наполнителями для получения одной дозированной лекарственной формы, необходимо варьировать в зависимости от подвергаемого лечению субъекта и от конкретного способа введения. Например, композиция, предназначенная для орального введения людям, обычно содержит, например, от 0,5 мг до 2 г активного агента, объединенного с соответствующим и удобным количеством эксципиентов или наполнителей, которое может варьировать примерно от 5 до 98 мас.% всей композиции. Дозированные лекарственные формы обычно содержат от 1 мг до около 500 мг активного ингредиента. За дополнительной информацией о способах введения и схемах дозировки читатель может обратиться к главе 25.3 тома 5 Comprehensive Medicinal Chemistry (Corwin Hansch; Chairman of Editorial Board), Pergamon Press, 1990.

Размер дозы соединения формулы I для лечебных или профилактических целей будет, естественно, варьировать в соответствии с природой и тяжестью заболеваний, возрастом и полом животного или пациента и путем введения в соответствии с хорошо известными принципами медицины. Как указывалось выше, соединения формулы I полезны для лечения заболеваний или медицинских состояний, которые являются полностью или частично следствием эффекта фарнезилирования крыс.

При применении соединения формулы I в лечебных или профилактических целях его обычно следует вводить так, чтобы суточная доза приема составляла в диапазоне, например, от 0,5 мг до 75 мг/кг массы тела, при необходимости вводимая дробными дозами. При использовании парентерального пути обычно вводятся более низкие дозы. Так, например, для внутривенного введения обычно применяют дозу в диапазоне, например, от 0,5 мг до 30 мг/кг массы тела. Аналогичным образом, для введения ингаляцией применяется доза в диапазоне, например, от 0,5 мг до 25 мг/кг массы тела. Однако предпочтительно оральное введение.

В соответствии с еще одним аспектом настоящего изобретения предоставляется соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемая соль или пролекарство, определенные здесь выше, для применения в способе терапевтического лечения организма человека или животного. Как описывалось выше, изобретение предоставляет подходящий способ лечения воспалительного заболевания введением соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли, пролекарства или фармацевтической композиции.

Еще одним аспектом настоящего изобретения является соединение формулы (I) и его фармацевтически приемлемая соль или пролекарство для применения в качестве лекарственного средства.

Данное соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемая соль или пролекарство предназначены для применения в качестве лекарственного средства для антагонизма действию, опосредуемому МСР-1, у теплокровного животного, такого как человек.

Таким образом, в соответствии с еще одним аспектом изобретения, предоставляется применение соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли или пролекарства в производстве лекарственного средства для проявления антагонизма действию, опосредуемому МСР-1, у теплокровного животного, такого как человек.

В соответствии с еще одним аспектом изобретения, предоставляется способ оказания антагонизма действию, опосредуемому МСР-1, у теплокровного животного, такого как человек, нуждающегося в таком лечении, который включает введение указанному животному эффективного количества соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли или пролекарства, определенных здесь выше.

Биологические испытания

Следующие способы биологического испытания, данные и примеры служат для иллюстрации настоящего изобретения.

Сокращения:

АТСС American Type Culture Collection, Rockville, USA (Американская коллекция типов культур)

ВСА Бицинхрониновая кислота (используемая с сульфатом меди для анализа белка)

BSA Бычий сывороточный альбумин

DMEM Среда Игла, модифицированная по Дульбекко

EGTA Этиленбис(оксиэтиленнитрило)тетрауксусная кислота

FCS Плодная сыворотка теленка

HEPES (N-[2-Гидроксиэтил]пиперазин-N'-[2-этансульфоновая кислота])

HBSS Сбалансированный солевой раствор Хенкса

hMCP-1 Человеческий моноцитарный хемоаттрактантный белок-1

PBS Солевой раствор с фосфатным буфером

PCR Полимеразная цепная реакция

В качестве источника теплостойкой ДНК полимеразы используют AMPLITAQ , поставляемый фирмой Perkin-Elmer Cetus.

Связывающий буфер представляет 50 мМ HEPES, 1 мМ CaCl₂, 5 мМ MgCl₂, 0,5% плодной телячьей сыворотки, доведенный до рН 7,2 с помощью 1 М NaOH.

Заменимыми аминокислотами (концентрат 100Х) являются L-аланин, 890 мг/л; L-аспарагин, 1320 мг/л; L-аспарагиновая кислота, 1330 мг/л; L-глутаминовая кислота, 1470 мг/л; глицин, 750 мг/л; L-пролин, 1150 мг/л и L-серин, 1050 мг/л.

Добавка гипоксантина и тимидина (концентрат 50х) представляет собой гипоксантин, 680 мг/л, и тимидин, 194 мг/л.

Пенициллин-стрептомицин представляет: Пенициллин G (натриевая соль); 5000 ед/мл; стрептомицинсульфат 5000 мкг/мл.

Клетки линии человеческих моноцитарных клеток ТНР-1 доступны в АТСС под номером АТСС TIB-202.

Сбалансированный солевой раствор Хенкса (HBSS) получали от Gibco; см. Proc.Soc.Exp.Biol.Med., 1949, 71, 196.

Синтетическую среду для клеточных культур, RPMI 1640, получали у Gibco; она содержит неорганические соли [Са(NО₃)₂ 4Н₂O 100 мг/л; КСl 400 мг/л; MgSO₄ 7H₂O 100 мг/л; NaCl 6000 мг/л; NaHCO₃ 2000 мг/л и Na₂HPO₄ (ангидрид) 800 мг/л], D-глюкозу 2000 мг/л, восстановленный глутатион 1 мг/л, аминокислоты и витамины.

FURA-2/AM представляет пентаацетоксиметиловый эфир 1-[2-(5-карбоксиоксазол-2-ил)-6-аминобензофуран-5-окси]-2-(2'-амино-5'-метилфенокси)-этан-N,N,N',N'-тетрауксусной кислоты и его получали у Molecular Probes, Eugene, Oregon, USA.

Буфер для осаждения крови содержит 8,5 г/л NaCl и 10 г/л гидроксиэтилцеллюлозы.

Буфер для лизиса представляет 0,15 М NH₄Cl^-, 10 мМ КНСО₃, 1 мМ EDTA (этилендиаминтетрауксусная кислота).

Связывающий буфер цельных клеток представляет 50 мМ HEPES, 1 мМ CaCl₂, 5 мМ MgCl₂, 0,5% BSA, 0,01% NaN₃, pH доведен до 7,2 1М NaOH.

Буфер для промывки представляет 50 мМ HEPES, 1 мМ CaCl₂, 5 мМ MgCl₂, 0,5% FCS, инактивированной теплом, 0,5М NaCl, pH доведен до 7,2 1М NaOH.

Можно следовать общим процедурам молекулярной биологии по любому из способов, описанных в руководстве "Molecular Cloning - A Laboratory Manual" Second Edition, Sambrook, Fritsch and Maniatis (Cold Spring Harbor Laboratory, 1989).

i) Клонирование и экспрессия рецептора hMCP-1

кДНК рецептора В МСР-1 (CCR2B) клонируют с помощью PCR из РНК клеток ТНР-1 с использованием подходящих олигонуклеотидных праймеров на основании опубликованных данных о последовательностях рецептора МСР-1 (Charo et al., 1994,