Производные имидазола как ингибиторы пренилтрансферазы, фармацевтическая композиция и способы лечения на их основе
Патент 2241712
Авторы
Классы МПК
Производные имидазола как ингибиторы пренилтрансферазы, фармацевтическая композиция и способы лечения на их основе
Реферат
Изобретение относится к производным имидазола формулы (I)
или к его фармацевтически приемлемой соли. Изобретение относится также к фармацевтической композиции, обладающей ингибирующей активностью в отношении пренилтрансферазы, к способам лечения на основе этих соединений. Технический результат - получение новых соединений и фармацевтической композиции на их основе в целях лечения таких заболеваний как фиброз, доброкачественная гиперплазия простаты, атеросклероз, рестеноз, рак груди, рак толстой кишки, рак поджелудочной железы, рак простаты, рак легких, рак яичников, рак эпидермиса и рак органов кроветворения. 5 с. и 13 з.п. ф-лы, 1 табл.
Уровень техники
Семейство белков Ras играет важную роль в пути передачи сигнала, модулирующего рост клеток. Белок продуцируется в рибосоме, выделяется в цитозоль и пост-трансляционно модифицируется. Первая стадия в ряду пост-трансляционных модификаций представляет собой алкилирование Cys168 фарнезил или геранил-геранил пирофосфатом в реакции, катализируемой ферментами пренилтрансферазы, такими как фарнезилтрансфераза и геранил-геранилтрансфераза (Hancock, JF, et al., Cell 57:1167-1177 (1989)). Далее отщепляются три С-концевые аминокислоты (Gu-tierrez, L., et al., EMBO J. 8:1093-1098 (1989)), и концевая Cys превращается в сложный метиловый эфир (Clark, S., et al., Proc. Nat'l Acad. Sci. (USA) 85:4643-4647 (1988)). Некоторые формы Ras также обратимо пальмитоилированы на цистеиновых остатках непосредственно от N-концевых до Cys 168 (Buss, JE, et al., Mol, Cell Biol. 6:116-122 (1986)). Полагают, что такие модификации повышают гидрофобность С-концевые части Ras, что является причиной их локализации на поверхности мембраны клетки. Локализация Ras на мембране клетки необходима для передачи сигнала (Willumsen, ВМ, et al., Science 310:583-586 (1984).
Онкогенные формы Ras обнаружены в относительно большом количестве случаев рака, включая свыше 50% случае рака прямой кишки и свыше 90% случаев рака поджелудочной железы (Bos, JL, Cancer Research 49:4682-4689 (1989)). Подобные наблюдения позволяют предположить, что вмешательство в функцию Ras медиированной передачи сигнала может быть полезным при лечении рака.
Ранее было показано, что С-концевые тетрапептиды Ras имеют мотив "СААХ" (где С является цистеином, А является алифатической аминокислотой и Х является любой аминокислотой). Было показано, что тетрапептиды, имеющие подобную структуру, являются ингибиторами пренилтрансфераз (Reiss, et al., Cell 62:81-88 (1990)). Слабое действие этих ранее известных ингибиторов фарнезилтрансферазы явилось причиной поиска новых ингибиторов с более благоприятным фармакокинетическим поведением (James, GL, et al., Science 260:1937-1942 (1993); Kohl, NE, et al., Nat'l Acad. Sci. USA 91:9141-9145 (1994), de Solms, SJ, et al. Proc. J. Med. Chem. 38:3967-3971 (1995); Nagasu, Т, et al., Cancer Research 55:5310-5314 (1995); Lerner, EC, et al., J. Biol. Chem. 270:26802-26806 (1995); Lerner, EC, et al., J. Biol. Chem. 270:26770 (1995); и James, et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 93:4454 (1996)).
Недавно было обнаружено, что ингибитор пренилтрансферазы может блокировать рост Ras-зависимых опухолей у "голых" мышей (Kohl, NE, et al., Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 91:9141-9145 (1994)). Кроме того, было показано, что свыше 70% больших образцов линий клеток опухоли ингибируются ингибиторами пренилтрансферазы с селективностью в отношении не трансформированных эпителиальных клеток (Sepp-Lorenzino, I, et al., Cancer Research, 55:5302-5309 (1995)). Ингибирование фарнезилирования описано в качестве способа лечения дельта вирусной инфекции гепатита (Casey, P, et al., WO 97/31641).
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
В одном аспекте данное изобретение относится к соединению формулы (I):
где n1 равно 0 или 1;
Х независимо является (chr11)n3(CH 2)n4Z (CH2) n5;
Z является О, N(R12), S или связью;
n3 независимо равно 0 или 1;
n4 и n5 каждый независимо равен 0, 1, 2 или 3;
Y независимо является СО, CH2, CS или связью;
R 1 является
или N(R24R 25);
R2, R11 и R12 каждый независимо является Н или необязательно замещенной алкильной группой, выбранной из группы, включающей (С1-6)алкил или арил, где указанная необязательно замещенная группа необязательно замещена одним или более R3 или R30 ;
R3 независима является Н или необязательно замещенной группой, выбранной из группы, включающей (C 1-6)алкил, (С2-6)алкенил, (С 2-6)-алкинил, (С3-6)циклоалкил, (С 3-6)циклоалкил(C1-6)алкил, (С 5-7)циалоалкенил, (C5-7)циклоалкенил(С 1-6)алкил, арил, арил(C1-6)алкил, гетероциклил и гетероциклил(С1-6) алкил, где указанная необязательно замещенная группа необязательно замещена одним или более R30;
R 4 и R5 каждый независимо является Н или необязательно замещенной группой, выбранной из группы, включающей (C1-6)-алкил, (С 3-6)циклоалкил, арил и гетероциклил, где указанная необязательно замещенная группа необязательно замещена одним или более R 30, где каждый указанный заместитель выбран независимо, или R4 и R5, взятые вместе с атомом углерода, к которому они присоединены, образуют арил;
R6 независимо является Н или необязательно замещенной группой, выбранной из группы, включающей (C1-6)алкил, (С2-6 )-алкенил, (С3-6)циклоалкил, (С 3-6)циклоалкил (C1-6)алкил, (C 5-7)-циклоалкенил, (C5-7) циклоалкенил(C 1-6)алкил, арил, арил(С1-6)-алкил, гетероциклил и гетероциклил(C1-6)алкил, где указанная необязательно замещенная группа необязательно замещена одним или более заместителями, каждый из которых независимо выбран из группы, включающей ОН, (С1-6)алкил, (C1-6)алкокси, N(R8 R9), -СООН, CON(R8 R9) и галоген, где R8 и R9 каждый независимо является Н, (C 1-6)алкилом, (С2-6)алкенилом, (С 2-6)алкинилом, арилом или арил (C1-6 ) алкилом;
R7 независимо является Н, =O, =S или необязательно замещенной группой, выбранной из группы, включающей (С1-6)алкил, (С 2-6)алкенил, (С3-6)циклоалкил, (С 3-6)циклоалкил(С1-6)алкил, (С 5-7) циклоалкенил, (C5-7)циклоалкенил(C 1-6)алкил, арил, арил (C1-6)алкил, гетероциклил и гетероциклил (C1-6) алкил, где указанная необязательно замещенная группа необязательно замещена одним или более заместителей, каждый из которых независимо выбран из группы, включающей ОН, (C1-6)алкил, (C1-6)алкокси, -N(R8 R9), -СООН, -CON(R8 R9) и галоген;
R10 является С;
или если n1=0, R6 и R7, взятые вместе с атомами углерода, к которым они присоединены, могут образовывать арил или циклогексил;
R21 независимо является Н или необязательно замещенной группой, выбранной из группы, включающей (C 1-6)алкил и арил (C1-6)алкил, где указанная необязательно замещенная группа необязательно замещена одним или более заместителями, независимо выбранными из группы, включающей R8 и R30 ;
R22 является Н, (C 1-6) алкилтио, (С3-6) циклоалкилтио, R8-CO- или заместителем формулы:
R24 и R 25 каждый независимо является Н, (C1-6 )алкилом или арил (C1-6)алкилом;
R30 независимо является (C 1-6)алкилом, -O-R8, -S(O) n6R8, -S(O)n7 N(R8R9), -N(R 8R9), -CN, -NO2 , -CO2R8, -CON(R 8R9), -NCO-R8 или галогеном;
n6 и n7 каждый независимо равен 0, 1 или 2;
где указанным гетероциклилом является азепинил, бензимидазолил, бензизоксазолил, бензофуразанил, бензопиранил, бензотиопиранил, бензофурил, бензотиазолил, бензотиенил, бензоксазолил, хроманил, циннолинил, дигидробензофурил, дигидробензотиенил, дигидробензотиопиранил, дигидробензотиопиранилсульфон, фурил, имидазолидинил, имидазолинил, имидазолил, индолинил, индолил, изохроманил, изоиндолинил, изохинолинил, изотиазолидинил, изотиазолил, изотиазолидинил, морфолинил, нафтиридинил, оксадиазолил, 2-оксоазепинил, 2-оксопиперазинил, 2-оксопиперидинил, 2-оксопирролидинил, пиперидил, пиперазинил, пиридил, пиридил N-оксид, хиноксалинил, тетрагидрофурил, тетрагидроизохинолинил, тетрагидрохинолинил, тиаморфолинил, тиаморфолинил сульфоксид, тиазолил, тиазолинил, тиенофурил, тиенотиенил или тиенил; и
где указанным арилом является фенил или нафтил;
при условии, что;
если n1=1, R10 является С и R6 является Н, то R 10 и R7, взятые вместе, могут образовывать
или если n1=1, R10 является С и R7 является =O, -Н или =S, то R 10 и R6, взятые вместе, могут образовывать
где X1, X2 и X3 каждый независимо является Н, галогеном, -NO2, -NCO-R8, -CO 2R8, -CN или -CON(R 8R9); и
если R 1 является N(R24R 25), то n3 равен 1, n4 и n5 каждый равен О, Z является связью и R3 и R11 , взятые вместе, образуют
где n2 равен 1-6, и X4 и X 5 каждый независимо является Н, (C1-6 )алкилом или арилом, или X4 и X 5, взятые вместе, могут образовывать (С 3-6)циклоалкил;
или его фармацевтически приемлемую соль.
Предпочтительной группой соединений формулы (I), обозначенной как группа А, является группа, в которой
R 1 является
или N(R24R 25); и
X является CH(R11) n3(СН2) n4 или Z, где Z является O, S или N(R12);
или их фармацевтически приемлемая соль.
Другой предпочтительной группой соединений формулы (I), обозначенной как группа В, является группа, в которой
R1 является
Х является СН (R11) n3(СН2)n4; и
n1 равен 0;
или их фармацевтически приемлемая соль.
Другой предпочтительной группой соединений формулы обозначенной как группа С, является группа, в которой
R 1 является
n3, n4 и n5 каждый равен 0;
Z является связью;
Y является, независимо для каждого случая, СО или CS; и
n1 равен 0;
или их фармацевтически приемлемая соль.
Другой предпочтительной группой соединений формулы (I), обозначенной как группа D, является группа, в которой R1 является
R6 является Н;
n1 равен 1;
R7 и R10 , взятые вместе, образуют
n3 равен 1 и R11 является Н;
Z является О или связью;
n5 равен 0; и
Y является СО, СН2 или связью;
или их фармацевтически приемлемая соль.
Другой предпочтительной группой соединений формулы (I), обозначенной как группа Е, является группа, в которой
R1 является N(R 24R25);
n1 равен 0;
n3 равен 1;
n4 равен 0;
n5 равен 0;
Y является СО или CS;
z является связью; и
R 3 и R11, взятые вместе, образуют
или их фармацевтически приемлемая соль.
Другой предпочтительной группой соединений формулы (I), обозначенной как группа F, является группа, в которой
R 1 является
R7 является Н или=0;
n1 равен 1;
R6 и R 10, взятые вместе, образуют
n3 равен 1 и R11 является Н;
n5 равен 0;
Y является СО или СН 2; и
Z является О или связью;
или их фармацевтически приемлемая соль.
В другом аспекте, данное изобретение относится к фармацевтической композиции, содержащей одно или более соединений формулы (I), таких, как определены выше, или их фармацевтически приемлемую соль, и фармацевтически приемлемый носитель.
В еще одном аспекте, данное изобретение относится к способу ингибирования пренилтрансфераз (например, фарнезилтрансферазы или геранилгеранилтрансферазы) у пациента, например млекопитающего, такого как человек, который включает введение пациенту терапевтически эффективного количества соединения формулы (I), такого как определено выше, или его фармацевтически приемлемой соли. В еще одном аспекте, данное изобретение относится к способу лечения рестеноза или пролиферативных заболеваний тканей (например, опухоли) у пациента введением пациенту терапевтически эффективного количества соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли. Примеры пролиферативных заболеваний тканей включают заболевания, связанные как с доброкачественной (т.е. не злокачественной) пролиферацией клеток, такие как фиброз, доброкачественная гиперплазия простаты, атеросклероз и рестеноз, так и со злокачественной пролиферацией клеток, такие как рак (например, ras-мутированные опухоли). Примеры лечимых опухолей включают, но не ограничиваются ими, рак груди, толстой кишки, поджелудочной железы, простаты, легких, яичников, эпидермиса и органов кроветворения (Sepp-Lorenzino, I, et al., Cancer research 55:5302 (1995)).
В еще одном аспекте данное изобретение относится к использованию одного или более соединений формулы (I), таких как описано выше, или их фармацевтически приемлемой соли, для связывания с пренилтрансферазой, как представлено в in vitro и in vivo тестах.
ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
В общем, соединения формулы (I) могут быть получены способами, известными в области химии для получения соединений. Определенные способы получения соединений формулы (I) представлены как аспекты данного изобретения и иллюстрированы схемами реакций и примерами, представленными в данном описании.
В представленных выше структурных формулах и в контексте описания данной заявки используемые термины имеют следующие значения, если не указано иначе.
Термин "алкил" включает алкильные группы, имеющие указанное количество атомов углерода, в прямой или разветвленной конфигурации. Примеры таких алкильных групп включают метил, этил, пропил, изопропил, бутил, вторбутил, третичный бутиил, пентил, изопентил, гексил, изогексил и подобные. Если в определение включен термин «С 0-алкил», он обозначает простую ковалентную связь.
Термин "циклоалкил" включает моноциклоалкильную группу или бициклоалкильную группу, имеющую указанное количество атомов углерода. Примеры таких циклоалкильных групп включают циклопропил, циклобутил, циклогексил и подобные.
Термин "алкенил" включает углеводородные группы, имеющие одну или более двойных связей и указанное количество атомов углерода, в прямой или разветвленной конфигурации. Примеры таких алкенильных групп включают этенил, пропенил, изопропенил, бутенил, вторбутенил, третичный бутенил, пентенил, изопентенил, гексенил, изогексенил и подобные.
Термин "циклоалкенил" включает моноциклоалкенильную группу или бициклоалкенильную группу с указанным количеством атомов углерода, имеющую одну или более двойную связь, но недостаточно двойных связей для того, чтобы группа стала ароматической. Примеры таких циклоалкенильных групп включают циклопентенил, циклогексенил, циклогептенил и подобные.
Термин "алкинил" включает алкинильные группы, т.е. углеводородные группы, имеющие одну или более тройную связь, имеющие указанное количество атомов углерода, в прямой или разветвленной конфигурации. Примеры таких алкинильных групп включают этинил, пропинил, бутинил, пентинил, изопентинил, гексинил, изогекинил и подобные.
Термин "алкилтио" включает алкилтиогруппы, т.е. углеводородные группы, которые присоединены к молекуле через атом серы, имеющие указанное количество атомов углерода, в прямой или разветвленной конфигурации. Примеры таких алкилтиогрупп включают метилтио, этилтио, пропилтио, изопропилтио, бутилтио, вторбутилтио, третичный бутилтио, пентилтио, изопентилтио, гексилтио, изогексилтио и подобные.
Термин "циклоалкилтио" включает моноциклоалкилтиогруппу и бициклоалкилтиогруппу с указанным количеством атомов углерода. Примеры таких циклоалкилтиогрупп включают циклопентилтио, циклогексилтио и подобные.
Термин "алкокси" включает алкоксигруппы, имеющие указанное количество атомов углерода, в прямой или разветвленной конфигурации. Примеры таких алкоксигрупп включают метокси, этокси, пропокси, изопропокси, бутокси, изобутокси, третичный бутокси, пентокси, изопентокси, гексокси, изогексокси и подобные.
Термин "арил" включает ароматические кольца, известные в данной области техники, который могут быть моноциклическими или бициклическими, такие как фенил и нафтил.
Термин "гетероциклил" в контексте данного изобретения представляет 5-7-членное моноциклическое, или 8-11-членное бициклическое, или 11-15-членное трициклическое кольцо, которое либо насыщено, либо не насыщено, и которое состоит из атомов углерода и включает от одного до четырех гетероатомов, независимо выбранных из группы, включающей N, O и S. Также термин охватывает любые бициклические группы, в которых определенные выше гетероциклические кольца сконденсированы с бензольным кольцом, где гетероциклическое кольцо может быть присоединено к любому гетероатому или атому углерода. Примеры таких гетероциклических групп включают, но не ограничены ими, азепинил, бензимидазолил, бензизоксазолил, бензофуразанил, бензопиранил, бензотиопиранил, бензофурил, бензотиазолил, бензотиенил, бензоксазолил, хроманил, циннолинил, дигидробензофурил, дигидробензотиенил, дигидробензотиопиранил, дигидробензотиопиранилсульфон, фурил, имидазолидинил, имидазолинил, имидазолил, индолинил, индолил, изохроманил, изоиндолинил, изохинолинил, изотиазолидинил, изотиазолил, изотиазолидинил, морфолинил, нафтиридинил, оксадиазолил, 2-оксоазепинил, 2-оксопиперазинил, 2-оксопиперидинил, 2-оксопирролидинил, пиперидил, пиперазинил, пиридил, пиридил N-оксид, хиноксалинил, тетрагидрофурил, тетрагидроизохинолинил, тетрагидрохинолинил, тиаморфолинил, тиаморфолинил сульфоксид, тиазолил, тиазолинил, тиенофурил, тиенотиенил, тиенил и подобные.
Специалисту в области химии понятно, что определенные сочетания заместителей, содержащих гетероатом, перечисленные в данном изобретении, определяют соединения, которые будут менее стабильными в физиологических условиях. Следовательно, такие соединения менее предпочтительны.
Термин "галоген" или "гало" включает атомы галогена фтор, хлор, бром и йод.
Если в представленной химической структуре имеется стрелка, исходящая из нее, стрелка обозначает место присоединения. Например структура
является пентильной группой. Если рядом со стрелкой строит значение в скобках, данное значение указывает, где в соединении находится место присоединения. Например, в общей формуле (I):
такой как определено выше, если R 10 и R7, взятые вместе, образуют
получается следующая структура:
Также, в общей формуле (I), такой как определено выше, если R3 и R11 , взятые вместе, образуют
получается следующая структура:
Если линия изображена проходящей через циклическую группу, то данная линия указывает, что заместитель может быть присоединен к циклической группе в любом доступном месте присоединения. Например,
означает, что заместитель «X» может быть присоединен в орто, мета или пара положении. Далее, если линия изображена проходящей через бициклическую или трициклическую группу, такая линия означает, что заместитель может быть присоединен к бициклической или трициклической группе в любом доступном месте присоединения в любом кольце. Также, если стрелка изображена проходящей через циклическую группу, такая стрелка показывает, что место присоединения циклической группы к соединению может быть любым доступным местом присоединения в циклической группе. Далее, если стрелка изображена проходящей через бициклическую или трициклическую группу, такая стрелка показывает, что место присоединения бициклической или трициклической группы к соединению может быть любым доступным местом присоединения колец бициклической или трициклической группы.
Некоторые соединения в соответствии с данным изобретением могут иметь, по крайней мере, один центр асимметрии. Дополнительные центры асимметрии могут присутствовать в молекуле в зависимости от природы различных заместителей в молекуле. Каждый такой центр асимметрии дает два оптических изомера и подразумевается, что все такие оптические изомеры, как разделенные, очищенные или частично очищенные оптические изомеры, их рацемические смеси или диастереомерные смеси, включены в объем данного изобретения.
Соединения в соответствии с данным изобретением обычно могут быть выделены в виде их фармацевтически приемлемых кислотно-аддитивных солей, таких как соли с неорганическими и органическими кислотами. Примеры таких кислот включают соляную, азотную, серную, фосфорную, муравьиную, уксусную, трифторуксусную, пропионовую, малеиновую, янтарную, D-винную, L-винную, малоновую, метансульфоноую и подобные. Кроме того, определенные соединения, содержащие кислотные функциональные группы, такие как карбокси, могут быть выделены в виде их неорганической соли, в которой противоион может быть выбран из натрия, калия, лития, кальция, магния и подобных, а также из органических оснований.
Фармацевтически приемлемые соли могут быть получены взаимодействием приблизительно 1 эквивалента соединения формулы (I) и приблизительно 1 эквивалентом или более подходящей соответствующей кислоты, соль которой желательна. Методы обработки и выделение полученной соли хорошо известны специалисту в данной области.
Соединения в соответствии с данным изобретением могут вводиться перорально, парентерально (например, внутримышечными, внутрибрюшинными, внутривенными или подкожными инъекциями или имплантантом), интраназально, вагинально, ректально, подъязычно или местно и могут быть составлены в препаративную форму с фармацевтически приемлемыми носителями для получения дозированных форм, подходящих для каждого способа введения. Следовательно, в объем данного изобретения включены фармацевтические композиции, содержащие, в качестве активного ингредиента, по крайней мере, одно соединение формулы (I) в сочетании с фармацевтически приемлемым носителем.
Твердые дозированные формы для перорального введения включают капсулы, таблетки, пилюли, порошки и гранулы. В подобных твердых дозированных формах активное соединение смешивают с, по крайней мере, одним инертным фармацевтически приемлемым носителем, таким как сахароза, лактоза или крахмал. Такие дозированные формы также могут содержать, что является обычной практикой, дополнительные вещества, отличные от инертных разбавителей, например, смазывающие агенты, такие как стеарат магния. Для капсул, таблеток и пилюль, дозированные формы также могут содержать буферные агенты. Таблетки и пилюли могут дополнительно быть приготовлены с энтеросолюбильными оболочками.
Жидкие дозированные формы для перорального введения включают фармацевтически приемлемые эмульсии, растворы, суспензии, сиропы, эликсиры, содержащие инертные разбавители, обычно используемые в данной области техники, такие как вода. Кроме указанных инертных разбавителей, композиции также могут содержать адъюванты, такие как смачивающие агенты, эмульгаторы и суспендирующие агенты, и подсластители, вкусовые добавки и ароматизаторы.
Препаративные формы для парентерального введения в соответствии с данным изобретением включают стерильные водные и неводные растворы, суспензии или эмульсии. Примеры неводных растворителей или носителей включают пропиленгликоль, полиэтиленгликоль, растительные масла, такие как оливковое масло и кукурузное масло, желатин и органические сложные эфиры, подходящие для инъекций, такие как этилолеат. Указанные дозированные формы также могут содержать адъюванты, такие как консерванты, смачивающие агенты, эмульгаторы и диспергирующие агенты. Они могут быть стерилизованы, например, фильтрацией через улавливающий бактерии фильтр, добавлением стерилизующих агентов в композицию, облучением композиции или нагреванием композиции. Они также могут быть получены в виде стерильных твердых композиций, которые могут быть растворены в стерильной воде или некоторых других стерильных средах для инъекций непосредственно перед использованием.
Композиции для ректального или вагинального введения предпочтительно являются суппозиториями, которые могут содержать, в дополнение к активному ингредиенту, наполнители, такие как кокосовое масло или парафин для суппозиториев.
Композиции для интраназального или подъязычного введения также получают со стандартными наполнителями, которые хорошо известны в данной области техники.
В общем, эффективная доза активного ингредиента в композициях в соответствии с данным изобретением может варьироваться; однако необходимо, чтобы количество активного ингредиента было таковым, чтобы получить подходящую дозированную форму. Выбранная доза зависит от желаемого терапевтического действия, способа введения и продолжительности лечения, что входит в сферу знаний специалиста в данной области. В общем доза составляет от 0,0001 до 100 мг/кг веса тела ежедневно для введения человеку и другим животным, например млекопитающим.
Предпочтительная доза составляет от 0,01 до 10,0 мг/кг веса тела ежедневно и может вводиться единичной дозой или может быть разделена на множество доз.
Соединения в соответствии с данным изобретением могут быть и были оценены в отношении действия на зависимый от якорной подложки рост линий клеток опухоли у человека согласно следующему тесту.
Клетки высевают в 96-ячеечный планшет на 0 день и обрабатывают на 1 день в течение 96 часов следующими концентрациями соединений в соответствии с данным изобретением; 50,25, 12,5, 6,25, 3,12, 1,56, 0,78, 0,39 и 0,00 мкМ. В конце данного периода количественный анализ пролиферации клеток проводят с помощью колориметрического теста, основанного на отщеплении тетразолиевой соли WST1 митохондриальными дегидрогеназами в жизнеспособных клетках, приводящем к образованию формазана. Данные эксперименты повторяют дважды в октупликатах, таким образом, определяя интервал концентраций соединения, включающий значение IC 50.
По описанной выше методике проводят анализ со следующими линиями клеток опухоли человека: простата: DU145 аденокарцинома с WT ras, резистентными к L744-832; прямая кишка: НТ29, аденокарцинома с немутантным типом ras (WT), чувствительным к L744-832; поджелудочная железа: MIA РаСа-2, карцинома с Ki-ras мутацией; легкие: А427, карцинома с Ki-ras мутацией. (см. табл.1)
Должно быть понятно, что хотя данное изобретение описано совместно с подробным описанием, представленное ниже описание предназначено для иллюстрации и не ограничивает объем данного изобретения, который определен формулой изобретения.
Примеры
Соединение 1: 8-бутил-7-(3-(имидазол-5-ил)-1-оксопропил)-2-(2-метоксифенил)-5,6,7,8-тетрагидроимидазо[1,2а]пиразин
Соединение 2: 8-бутил-2-(2-гидроксифенил)-7-(имидазол-4-ил-пропил)-5,6,7,8-тетрагидроимидазо[1,2а]пиразин
Соединение 3: 8-бутил-7-(4-имидазолилпропил)-2-(2-метоксифенил)-5,6,7,8-тетрагидроимидазо[1,2а]пиразин
Соединение 4: 7-(2-(имидазол-4-ил)-1-оксоэтил)-2-(2-метоксифенил)-8-(1-метилпропил)-5,6,7,8-тетрагидроимидазо[1,2а]-пиразин
Соединение 5: 2-(2-метоксифенил)-8-(1-метилпропил)-7-(1-оксо-2-(1-фенилметил)имидазол-5-ил)этил)-5,6,7,8-тетрагидроимидазо [1,2а]пиразин
Соединение 6: 2-(2-метоксифенил)-8-(1-метилпропил)-7-(2-(1-фенилметил)имидазол-5-ил)этил)-5,6,7,8-тетрагидроимидазо-[1,2а]пиразин
Соединение 7: 7-(2-(1-(4-цианофенилметил)имидазол-5-ил)1-оксоэтил)-2-(2-метоксифенил)-8-(1-метилпропил)-5,6,7,8-тетрагидроимидазо[1,2а]пиразин
Соединение 8: 7-((1Н-имидазол-4-ил)метил)-2-(2-метоксифенил) -8-(1-метилпропил)-5,6,7,8-тетрагидроимидазо[1,2а]-пиразин
Соединение 9: 7-((4-имидазолил)карбонил)-2-(2-метоксифенил)-8-(1-метилпропил)-5,6,7,8-тетрагидроимидазо[1,2а]пиразин
Соединение 10: 7-(1-(4-цианофенилметил)имидазол-5-ил)метил-2-(2-метоксифенил)-8-(1-метилпропил)-5,6,7,8-тетрагидроимидазо-[1,2а]пиразин
Соединение 11: 5-(2-(1-(4-цианофенилметил)-имидазол-5-ил)-1-оксоэтил)-5,6-дигидро-2-фенил-1Н-имидазо[1,2а][1,4]бензодиазепин
Соединение 12: 7-(2-(4-цианофенилметил)-имидазол-5-ил)-1-оксоэтил)-2-(2-метоксифенил)-5,6,1,8-тетрагидроимидазо[1,2а]-пиразин
Соединение 13: 7-(2-амино-1-оксо-3-тиопропил)-8-(меркаптоэтил)-2-(2-метоксифенил)-5,6,7,8-тетрагидроимидазо-[1,2а]-пиразин дисульфид
Соединение 14: 5-бутил-7-(2-(4-цианофенилметилимидазол-5-ил)-1-оксоэтил)-2-фенил-5,6,7,8-тетрагидроимидазо[1,2а]-пиразин
Соединение 15: 6-бутил-7-(2-(4-цианофенилметилимидазол-5-ил)-1-оксоэтил)-2-(2-метоксифенил)-5,6,7,8-тетрагидроимидазо-[1,2а]пиразин
Соединение 16: 6-бутил-7-(2-(4-цианофенилметилимидазол-5-ил)-1-оксоэтил)-2-фенил-5,6,7,8-тетрагидроимидазо[1,2а]-пиразин
Соединение 17: 5-бутил-7-(2-(1-(4-цианофенилметил)имидазол-5-ил)-1-оксоэтил)-2-(2-метоксифенил)-5,6,7,8-тетрагидроимидазо-[1,2а]пиразин
Соединение 18; 7-(2-(1-(4-цианофенилметил)имидазол-5-ил)1-оксоэтил)-8-(циклогексилметил)-2-(2-метоксифенил)-5,6,7,8-тетрагидроимидазо[1,2а]пиразин
Соединение 19: 5-бутил-7-(2-(1Н-имидазол-5-ил)-1-оксоэтил)2-(2-метоксифенил)-5,6,7,8-тетрагидроимидазо[1,2а]пиразин
Соединение 20: 7-(2-(4-цианофенилметил)имидазол-5-ил)-1-оксоэтил)-2-(2-фенилметокси)фенил)-5,6,7,8-тетрагидроимидазо-[1,2а]пиразин
Соединение 21: 2-(2-бутоксифенил)-7-(2-(4-цианофенилметил)имидазол-5-ил)-1-оксоэтил)-5,6,7,8-тетрагидроимидазо[1,2а]-пиразин
Соединение 22: 1,2-дигидро-1-((1Н-имидазол-4-ил)метил)4-(2-метоксифенил)имидазо[1,2с][1,4]бензодиазепин
Соединение 23: 1-(2-(1-(4-цианофенилметил)имидазол-4-ил)-1-оксоэтил)-1,2-дигидро-4-(2-метоксифенил)имидазо[1,2с][1,4]-бензодиазепин
Соединение 24: 9-бром-1-(2-(1-(4-цианофенилметил)имидазол-4-ил)-1-оксоэтил)-1,2-дигидро-4-(2-метоксифенил)имидазо[1,2с]-[1,4]-бензодиазепин