Композиции и способы лечения или предупреждения воспалительных заболеваний

Композиции и способы лечения или предупреждения воспалительных заболеваний

Реферат

 

Изобретение относится к композициям и способам лечения и предупреждения таких заболеваний и состояний, как отторжение трансплантата, хирургические спайки, воспалительные заболевания кишечника, назальные полипы, и предусматривает доставку к месту воспаления антимикротрубочкового агента, которым является паклитаксел, или его аналог или производное. Изобретение обеспечивает указанное лечение и предупреждение за счет нарушения функции микротрубочек путем деполимеризации или стабилизации их образования, что прерывает патогенез указанных заболеваний. 4 н. и 42 з.п. ф-лы, 14 табл., 81 ил.

ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ

Данное изобретение относится, в общем, к композициям и способам лечения или предупреждения воспалительных заболеваний.

ПРЕДПОСЫЛКИ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Воспалительные заболевания, хронической или острой природы, представляют существенную проблему в системе здравоохранения. Вкратце, хроническое воспаление рассматривается как воспаление долговременной продолжительности (недель или месяцев), в котором активное воспаление, деструкция тканей и попытки репарации происходят одновременно (Robbins Pathological Basis of Disease by R.S.Cotran, V.Kumar, and S.L.Robbins, W.B.Saunders Co., p.75, 1989). Хотя хроническое воспаление может наступать после острого воспалительного приступа, оно может также начинаться в виде постепенно развивающегося процесса, который прогрессирует со временем, например, как результат хронической инфекции (например, туберкулеза, сифилиса, грибковой инфекции), которая вызывает аллергическую реакцию замедленного типа, продолжительного экспонирования с эндогенными (например, повышенным содержанием липидов плазмы) или экзогенными (например, диоксидом кремния, асбестом, сигаретной смолой, хирургическим шовным материалом) токсинами, или аутоиммунных реакций против собственных тканей организма (например, ревматоидный артрит, системная красная волчанка, множественный склероз, псориаз). Таким образом, хронические воспалительные заболевания включают в себя многочисленные общие медицинские состояния, такие как ревматоидный артрит, рестеноз, псориаз, множественный склероз, хирургические спайки, туберкулез и хронические воспалительные болезни легких (например, астма, пневмокониоз, хроническая обструктивная болезнь легких, назальные полипы и фиброз легких).

Псориаз

Псориаз представляет собой общее хроническое кожное заболевание, характеризующееся выпуклыми, воспаленными, утолщенными и чешуйчатыми повреждениями, которые вызывают зуд, чувство жжения, острой боли и легко кровоточат. У приблизительно 10% пациентов псориаз сопровождается выраженными артропатическими симптомами, которые сходны с изменениями, наблюдаемыми при ревматоидном артрите. Приблизительно 2-3% населения США страдает от псориаза, причем ежегодно диагностируются 250000 новых случаев заболевания.

В настоящее время, причина псориаза не известна, хотя имеется достаточное доказательство, что он представляет собой полигенное аутоиммунное нарушение. Кроме того, в настоящее время не существует средства для излечения псориаза. Доступные воздействия включают в себя локальные способы терапии, такие как стероидные кремы и мази, угольная смола и антралин, и системное лечение, такое как лечение стероидами, ультрафиолетом В, PUVA (пероральное введение псоралена и последующее экспонирование на длинноволновом ультрафиолетовом свету УФ-А), метотрексатом и циклоспорином. Однако неудовлетворительные скорости ремиссии и/или потенциально серьезные побочные эффекты характеризуют большинство из способов терапии псориаза. Общая стоимость лечения псориаза в Соединенных Штатах оценивается суммой между 3 и 5 биллионами долларов в год, что делает псориаз основной проблемой здравоохранения.

Рассеянный склероз

Рассеянный склероз (PC), поражающий 350000 человек (отношение женщины:мужчины = 2:1) в Соединенных Штатах, с 8000 новыми случаями заболевания, сообщаемыми каждый год, является наиболее обычным хроническим воспалительным заболеванием, затрагивающим нервную систему. Обычно PC проявляется клинически в виде повторяющихся приступов неблагоприятных неврологических расстройств, имеющих место на протяжении периода нескольких лет. При грубой оценке половина случаев заболеваний PC прогрессируют в более хроническую фазу. Хотя это заболевание не приводит к ранней смерти или ухудшению функций познания, оно делает пациента инвалидом вследствие нарушения остроты зрения, стимуляции диплопии, нарушения двигательных функций, влияющего на ходьбу и использование рук, индуцирования недержания кишечника и мочевого пузыря, спастичности и нарушений чувствительности (чувствительности к прикосновению, болевой чувствительности и температурной чувствительности).

Причина PC не известна, хотя имеется значительное количество доказательств того, что он представляет собой аутоиммунное заболевание. В настоящее время нет средства излечения рассеянного склероза, и существующие терапевтические схемы лечения являются лишь частично успешными. Например, хотя химиотерапевтические агенты, такие как метотрексат, циклоспорин и азатиоприн, были испытаны для лечения пациентов с не поддающимся излечению прогрессирующим заболеванием, до настоящего времени были продемонстрированы минимальные долгосрочные благоприятные эффекты.

Другие терапевтические средства, которые были недавно одобрены, включают в себя интерферон- для применения в случае амбулаторных пациентов с рецидивами/ремиссиями PC (Paty et al., Neurology 43: 662-667, 1993), в частности, бетасерон (рекомбинантный интерферон--1; человеческий интерферон бета, замещенный в положении 17, Cys® Ser; Berlex/Chiron) или авонекс (рекомбинантный интерферон -1; гликозилированный человеческий интерферон бета, продуцируемый в клетках млекопитающего; Biogen). К сожалению, хотя бетасерон обеспечивает улучшенное качество жизни для пациентов с PC, прогрессирование заболевания, по-видимому, не улучшается значимо. Вредные побочные эффекты, связанные с терапией с использованием бетасерона, включают в себя: реакции в месте инъецирования (воспаление, боль, аллергию и некроз) и комплекс подобных гриппу симптомов (лихорадочное состояние, ознобы, беспокойство и спутанность сознания).

Ревматоидный артрит

Ревматоидный артрит (РА) представляет собой изнуряющее, хроническое воспалительное заболевание, поражающее 1-2% населения мира. Это состояние вызывает боль, распухание и разрушение многочисленных суставов тела и может также приводить к повреждению в других органах, таких как легкие и почки. Лица с прогрессирующим заболеванием имеют более высокий коэффициент смертности, чем некоторые формы рака, и вследствие этого лечебные схемы были смещены в сторону агрессивной ранней лекарственной терапии, предназначенной для уменьшения вероятности необратимого повреждения суставов. Недавние рекомендации Американского Колледжа Ревматологии (Arthritis and Rheumatism 39(5): 713-722, 1996) включают в себя раннюю инициацию модифицирующей болезнь терапии антиревматическим лекарственным средством (DMARD) для любого пациента с установленным диагнозом и соответствующими симптомами. Противораковые лекарственные средства стали первоочередной терапией для огромного большинства пациентов, причем 60-70% ревматологов предпочли химиотерапевтическое средство, метотрексат. Тяжесть заболевания часто оправдывает неограниченную еженедельную терапию этим лекарственным средством и, в случае пациентов, болезнь которых прогрессирует, несмотря на лечение метотрексатом (свыше 50% пациентов), часто используют химиотерапевтические лекарственные средства второй очереди, такие как циклоспорин и азатиоприн (отдельно или в сочетании).

Рестеноз

Рестеноз представляет собой форму сосудистого повреждения, приводящего к утолщению стенки сосуда и утрате тока крови к ткани, снабжаемой этим кровеносным сосудом. Это происходит в ответ на процедуры пластики сосудов, в том числе фактически любое манипулирование, которое направлено на ослабление закупорок сосудов, и является главным фактором, ограничивающим эффективность инвазивных способов лечения сосудистых заболеваний. Рестеноз был основным объектом внимания сердечно-сосудистых исследований на протяжении последних 15 лет. Согласно оценкам 1994 года (U.S.Heart and Stroke Foundation), свыше 60 миллионов американцев имеют одну или более форм сердечно-сосудистого заболевания. Эти заболевания, унесшие приблизительно 1 миллион жизней в том же году (41% всех смертей в Соединенных Штатах), считаются основной причиной смерти и нарушения трудоспособности в развитом обществе.

В настоящее время нет технически одобренных способов предупреждения рестеноза, эффективных для человека. Системные терапии, которые были исследованы, включают в себя агенты, направленные на снижение потери эндотелиальных клеток, антитромбоцитарные агенты (например, аспирин), сосудорасширяющие средства (например, блокаторы кальциевых каналов), антитромботические средства (например, гепарин), противовоспалительные средства (например, стероиды), средства, предотвращающие пролиферацию клеток гладких мышц сосудов (VSMC) (например, колхицин) и стимуляторы повторной эндотелиализации (например, фактор роста эндотелия сосудов). Местные обработки, которые были исследованы, включают в себя местную доставку лекарственных средств (например, гепарина) и бета- и гамма-излучение. Все они были неутешительными в применении к человеку, прежде всего потому, что они, по-видимому, действуют на ограниченную часть процесса рестеноза. Системные способы лечения встретились также с дополнительной проблемой достижения адекватного всасывания и удерживания лекарственного средства в месте этого нарушения для обеспечения продолжительного биологического эффекта, без индуцирования неблагоприятных системных осложнений и токсичности.

Воспалительная болезнь кишечника

Термин воспалительная болезнь кишечника (IBD) относится к хроническим расстройствам (первоначально называемым болезнью Крона и язвенным колитом), которые вызывают воспаление или изъязвление в тонкой и толстой кишках. Вкратце, приблизительно 2 миллиона людей в Соединенных Штатах страдают от IBD, причем мужчины и женщины поражаются в равной степени. Пик частоты заболеваний первично наблюдается между возрастом 15 и 30 лет, а второй сообщенный пик частоты заболеваний находится между возрастом 55 и 60 лет. Хотя документированы многие распределения уровня распространения заболевания, причина этого заболевания не известна.

IBD часто характеризуется чередующимися периодами ремиссии с последующими периодами непредсказуемого рецидива или внезапного обострения болезни. Приблизительно 50% пациентов пребывают в ремиссии в любое время, и большинство страдают, по меньшей мере, от одного рецидива в период 10 лет. Кроме того, имеется много системных осложнений, которые сопровождают это заболевание, причем наиболее обычным является артрит. Симптомы артрита имеют место у 1/4 всех людей с IBD. Воспаление суставов имеет место наиболее часто, когда в процесс вовлечена ободочная кишка, и внезапно обостряется, когда заболевание кишечника является наиболее активным. Эта форма воспалительного артрита не вызывает перманентного дефекта и часто является кратковременной. Другие осложнения этого заболевания включают в себя воспаление глаз (ирит, конъюнктивит и эписклерит), воспаление полости рта (мукозит), воспаление кожи (нодозная эритема и гангренозная пиодерма), мышечно-скелетные расстройства (анкилозирующий спондилит), почечные осложнения (почечные камни и свищи мочеиспускательного канала), желчные конкременты и другие заболевания печени (например, гепатит) и билиарной системы (склерозирующий холангит). К сожалению, во многих случаях долговременное (>10 лет) заболевание может приводить к более тяжелым осложнениям, таким как рак ободочной кишки и внекишечные карциномы.

В настоящее время IBD является неизлечимым. Многие существующие терапевтические агенты фокусируются на борьбе с симптомами этого заболевания посредством суппрессии воспаления, связанного с этим заболеванием. Основные лекарственные средства, используемые для лечения IBD, представляют собой аминосалицилаты и кортикостероиды, и для тех индивидуумов, которые не реагируют хорошо на эти агенты, могут быть также использованы антибиотики и иммуносуппрессивные лекарственные средства. Хотя лекарственное лечение является эффективным для 70-80% пациентов, для индивидуумов, имеющих более активное заболевание, часто требуется хирургия. Хронические симптомы и осложнения, связанные с активным заболеванием, такие как закупорка кишечника, прободение, абсцесс или кровотечение, могут быть ослаблены и корректированы инвазивной хирургией. Хотя хирургия не излечивает это заболевание перманентно и частота рецидивов является высокой, она действительно ослабляет активные симптомы.

Хирургические спайки

Хирургическое спайкообразование, сложный процесс, в котором ткани тела, которые в норме являются отдельными, срастаются вместе, наблюдается наиболее часто как результат хирургической травмы. Эти послеоперационные спайки имеют место у 60-90% пациентов, подвергающихся гинекологической хирургии, и являются одной из наиболее обычных причин закупорки сосудов в индустриализованном мире. Эти спайки являются главной причиной неудачного хирургического лечения и являются первоочередной причиной закупорки кишечника и бесплодия. Другие связанные со спайками осложнения включают в себя хроническую боль в области таза, закупорку мочеиспускательного канала и нарушение функции опорожнения (удаления каловых масс или мочевыделения). В настоящее время для ингибирования спайкообразования используют превентивные терапии, проводимые 4-5 дней после хирургии. Были испытаны различные способы предотвращения спайкообразования, в том числе (1) предупреждение отложения фибрина, (2) снижение локального воспаления тканей и (3) удаление отложений фибрина. Отложение фибрина предотвращается посредством применения физических барьеров, которые являются либо механическими, либо состоящими из вязких растворов. Хотя многие исследователи используют барьеры предупреждения спаек, существует целый ряд технических трудностей. Воспаление уменьшают введением лекарственных средств, таких как кортикостероиды и нестероидные противовоспалительные средства. Однако результаты использования этих лекарственных средств в моделях животных не были обнадеживающими вследствие степени воспалительного ответа и ограничения дозы из-за системных побочных эффектов. Наконец, удаление отложений фибрина исследовали с применением протеолитических и фибринолитических ферментов. Потенциальным осложнением для клинического применения этих ферментов является возможность избыточного кровотечения.

Воспалительные заболевания легких

Хронические воспалительных заболевания легких, в том числе, например, астма, пневмокониоз, хроническая обструктивная болезнь легких, назальные полипы и фиброз легких, поражают многих людей по всему свету. Обычно такие заболевания характеризуются инвазивным воспалительным процессом и утолщением пораженных тканей.

Например, назальные полипы характеризуются утолщенной тканью выстилки носа. Полипы могут встречаться в респираторных заболеваниях, таких как астма, муковисцидоэ, первичная цилиарная дискинезия и иммунодефициты. Считают, что назальные полипы развиваются как манифестация хронических воспалительных процессов, вовлекающих верхние дыхательные пути. Они были обнаружены в 36% пациентов с непереносимостью в отношении аспирина, 7% пациентов с астмой, 0,1% у детей и приблизительно 20% пациентов с муковисцидозом. Другими состояниями, связанными с назальными полипами, являются синдром Churg-Strauss, аллергический грибковый синусит и синдром цилиарной дискинезии и синдром Янга. Приблизительно 40% пациентов с хирургическими полипэктомиями имеют рецидивы (Settipane, Allergy Asthma Proc. 17(5): 231-236, 1996).

Основными симптомами назального полипоза являются носовые обструкции и нарушение обоняния. Целями лекарственного лечения назального полипоза являются (1) устранение назальных полипов и симптомов ринита, (2) восстановление дыхания через нос и обоняния и (3) предотвращение рецидива. Закупорка носового хода небольшим количеством больших полипов может лечиться простой полипэктомией, чтобы помочь пациенту дышать через нос. Целью хирургии является восстановление физиологических свойств носа путем освобождения этого дыхательного пути от полипов, насколько это возможно, и создания возможности дренирования инфицированных пазух. Однако рецидивирующий назальный полипоз является одной из наиболее обычных нерешенных проблем клинической ринологии. Дополняющая лекарственная обработка полипоза всегда является необходимой, так как хирургия не может излечить воспалительную составляющую этого заболевания слизистой оболочки. Местные кортикостероиды являются наиболее широко используемыми лекарственными средствами для уменьшения размера полипов и для предупреждения рецидива после хирургии. Стероиды уменьшают ринит, улучшают дыхание через нос, уменьшают размер полипов и уменьшают частоту рецидивов, но они оказывают незначительное действие на обоняние и на любую патологию пазух. Однако использование стероидов при полипозе связано с инфекционными осложнениями, которые требуют применения антибиотиков. Другие лекарственные средства для лечения назального полипоза включают в себя антагонисты H1-рецептора (например, азеластин-НСl) и антидиуретические (мочегонные) средства (например, фуросемид). Эти способы лечения не всегда являются эффективными и частота рецидивов все еще остается очень высокой. Современное лекарственное лечение назального полипоза использует кортикостероиды для ослабления симптомов этого заболевания, но оно не действует против лежащей в основе патологии этого заболевания. Кроме того, у пациентов с назальными полипами наблюдали рецидив заболевания или устойчивость к стероидной терапии.

Отторжение трансплантата

Отторжение трансплантата является сложным процессом, при помощи которого трансплантированная ткань узнается как чужеродная иммунной системой хозяина. На основе морфологии и основного механизма реакции подразделяются на три категории: сверхострые, острые и хронические. С устранением риска инфекции и раннего (острого) отторжения при помощи иммуносупрессивной терапии хроническое отторжение стало все более важной причиной дисфункции трансплантата и конечной неудачи при трансплантации. В настоящее время хроническое васкулярное отторжение является основной причиной смерти или неуспешной трансплантации в реципиентах трансплантируемого сердца по прошествии первого года.

Данное изобретение обеспечивает композиции и способы, пригодные для лечения или предупреждения воспалительных заболеваний. Эти композиции и способы направлены на решение проблем, связанных с существующими процедурами, предоставляют значительные преимущества при сравнении с существующими процедурами и обеспечивают дополнительно другие, связанные с ними преимущества.

СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Вкратце, данное изобретение обеспечивает способы лечения или предупреждения воспалительных заболеваний, включающие в себя доставку к месту воспаления антимикротрубочкового агента (агента, действующего на микротрубочки). Характерные примеры таких агентов включают в себя таксаны (например, паклитаксел и доцетаксел), кампотецин, элеутеробин, саркодиктины, эпотилоны А и В, дискодермолид, оксид дейтерия (D₂O), гексиленгликоль (2-метил-2,4-пентандиол), туберцидин (7-деазааденозин), LY290181 (2-амино-4-(3-пиридил)-4Н-нафтол(1,2-b)пиран-3-карбонитрил), фторид алюминия, бис-(сукцинимидилсукцинат)этиленгликоля, этиловый эфир глицина, моноклональные антиидиотипические антитела, белок, стимулирующий сборку микротрубочек (таксолоподобный белок, TALP), набухание клеток, индуцированное гипотоническими (190 мосмоль/л) условиями, инсулином (100 нмоль/л) или глутамином (10 ммоль/л), связывание динеина, гибберелин, ХСНO1 (кинезиноподобный белок), лизофосфатидную кислоту, ион лития, компоненты клеточной стенки растений (например, поли-L-лизин и экстензин), буферы с глицерином, буфер с Тритоном Х-100, стабилизирующий микротрубочки, связанные с микротрубочками белки (например, МАР2, МАР4, тау, большой тау, энсконзин, фактор элонгации 1- (EF-1) и Е-МАР-115), клеточные частицы (например, гистон H1, миелиновый основной белок и кинетохоры), эндогенные микротрубочковые структуры (например, аксонемные структуры, макромолекулярные комплексы ферментов, формирующие поры в клеточной мембране и GTP-кэпы), стабильный трубочковый единственный полипептид (например, STOP145 и STOP220) и напряжение от митотических сил, а также любые аналоги и производные любого из вышеописанных агентов. В других вариантах антимикротрубочковый агент готовят таким образом, чтобы он дополнительно содержал полимер.

Характерные примеры воспалительных заболеваний, которые могут быть подвергнуты лечению, включают в себя множественный склероз, псориаз, артрит, стеноз, отторжение трансплантата, хирургические спайки, воспалительное заболевание кишечника и воспалительное заболевание легких.

В некоторых вариантах данного изобретения антимикротрубочковые агенты могут быть приготовлены вместе с другими соединениями или композициями, такими как, например, мазь, крем, лосьон, гель, спрей или т.п. В некоторых вариантах эти соединения или композиция могут функционировать в качестве носителя, который может быть полимерным или неполимерным. Характерные примеры полимерных носителей включают в себя поли(этиленвинилацетат), сополимеры молочной кислоты и гликолевой кислоты, поли(капролактон), поли( молочную кислоту), сополимеры поли(молочной кислоты) и поли(капролактона), желатин, гиалуроновую кислоту, коллагеновые матриксы и альбумин. Характерные примеры других подходящих носителей включают в себя, но не ограничиваются ими, этанол; смеси этанола и гликолей (например, этиленгликоля или пропиленгликоля); смеси этанола и изопропилмиристата или этанола, изопропилмиристата и воды (например, 55:5:40); смеси этанола и эйнеола или D-лимонена (с водой или без воды; гликоли (например, этиленгликоль или пропиленгликоль) и смеси гликолей, такие как пропиленгликоль и вода, фосфатидилглицерин, диолеоилфосфатидилглицерин, Транскутол®, или терпинолен; смеси изопропилмиристата и 1-гексил-2-пирролидона, N-додецил-2-пиперидинона или 1-гексил-2-пирролидона.

Еще в других аспектах, антимикротрубочковый агент может быть приготовлен таким образом, что он содержится в хирургическом или медицинском устройстве или имплантате или приспособлен к высвобождению таким устройством или имплантатом, таким как, например, стенты, шовные материалы, постоянные катетеры, протезы и т.п.

Эти и другие аспекты данного изобретения станут очевидными при ссылке на следующее подробное описание и прилагаемые рисунки. Кроме того, ниже изложены различные ссылки, которые описывают более детально определенные процедуры, устройства или композиции и, следовательно, включены ссылкой во всей полноте.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ РИСУНКОВ

Фиг.1А - график, показывающий реакцию хемилюминесценции нейтрофилов (5×10⁶ клеток/мл) на опсонизированные плазмой кристаллы CPPD (50 мг/мл). Действие паклитаксела (также называемого "таксолом") при (o) без паклитаксела, () 4,5 мкМ, () 14 мкМ, ( ) 28 мкМ, 46 мкМ; n=3.

Фиг.1В - график, показывающий концентрационную зависимость временного хода ингибирования паклитаксела индуцированной опсонизированными плазмой кристаллами CPPD хемилюминесценции.

Фиг.1С - график, показывающий действие фторида алюминия на индуцированную опсонизированным зимозаном активацию нейтрофилов, измеренное по хемилюминесценции.

Фиг.1D - график, показывающий действие этилового эфира глицина на индуцированную опсонизированным зимозаном активацию нейтрофилов, измеренное по хемилюминесценции.

Фиг.1E - график, показывающий действие LY290181 на индуцированную опсонизированным зимозаном активацию нейтрофилов, измеренное по хемилюминесценции.

Фиг.2 - график, показывающий высвобождение лизоцима из нейтрофилов (5×10⁶ клеток/мл) в ответ на опсонизированные плазмой кристаллы CPPD (50 мг/мл). Действие паклитаксела при (o) без паклитаксела, () 28 мкМ, () контроль (только клетки), ( ) контроль (клетки и паклитаксел при 28 мкМ); n=3.

Фиг.3А - график, показывающий образование супероксидного аниона нейтрофилами (5×10⁶ клеток/мл) в ответ на опсонизированные плазмой кристаллы CPPD (50 мг/мл). Действие паклитаксела при (o) без паклитаксела, () 28 мкМ, ( ) контроль (только клетки); n=3.

Фиг.3В - график, показывающий концентрационную зависимость временного хода ингибирования паклитакселом индуцированного опсонизированными плазмой кристаллами CPPD образования супероксидного аниона нейтрофилами; n=3.

Фиг.3С - график, изображающий действие LY290181 на индуцированное кристаллами CPPD образование супероксидного аниона нейтрофилами.

Фиг.4А - график, показывающий реакцию хемилюминесценции нейтрофилов (5×10⁶ клеток/мл) на опсонизированный плазмой зимозан (1 мг/мл). Действие паклитаксела при (o) без паклитаксела, () 28 мкМ; n=3.

Фиг.4В - график, показывающий индуцированное опсонизированным плазмой зимозаном образование супероксидного аниона. Действие паклитаксела при (o) без паклитаксела, () 28 мкМ, () контроль (только клетки); n=3.

Фиг.5А - график, показывающий высвобождение миелопероксидазы из нейтрофилов (5×10 ⁶ клеток/мл) в ответ на опсонизированные плазмой кристаллы CPPD (50 мг/мл). Действие паклитаксела при (o) без паклитаксела, () 28 мкМ, () контроль (только клетки), ( ) контроль (клетки с паклитакселом при 28 мкМ); n=3.

Фиг.5В - график, показывающий концентрационную зависимость ингибирования паклитакселом высвобождения миелопероксидазы из нейтрофилов в ответ на опсонизированные плазмой кристаллы CPPD; n=3.

Фиг.5С и 5D - графики, показывающие, что LY290181 уменьшает высвобождение как лизозима, так и миелопероксидазы в индуцированных кристаллами CPPD нейтрофилах.

Фиг.6 - график, показывающий пролиферацию синовиоцитов при различных концентрациях паклитаксела.

Фиг.7 - график, показывающий действия паклитаксела на кератиноциты in vitro.

Фиг.8А и 8В показывают действие паклитаксела на морфологию астроцитов. Электронно-микроскопические изображения выявили толстые, хорошо организованные нитевидные отростки в астроцитах трансгенных контрольных животных, тогда как трансгенные животные, обработанные паклитакселом, имели морфологически измененные астроциты. Паклитаксел индуцировал округление астроцита, утончал клеточные отростки и уменьшал цитоплазматические филаменты в сравнении с необработанными животными.

Фиг.9 - график, показывающий жизнеспособность клеток ЕОМА, обработанных концентрациями паклитаксела, большими, чем 10^-8 М.

Фиг.10 - диаграмма, изображающая процент апоптотических клеток ЕОМА в культуре, обработанной увеличивающимися концентрациями паклитаксела.

Фиг.11А-11Е - графики, изображающие действие различных антитрубочковых агентов на синовиоциты после периода 24 часов.

Фиг.12А-12Н - блоты, показывающие действие различных антимикротрубочковых агентов в ингибировании экспрессии коллагеназы.

Фиг.13А-13Н - блоты, показывающие действие различных антимикротрубочковых агентов на экспрессию протеогликана.

Фиг.14А и 14В - две фотографии САМ, имеющей опухоль, обработанной контрольной (ненагруженной) термопастой. Вкратце, на Фиг.14А центральная белая масса является тканью опухоли. Обратите внимание на обилие кровеносных сосудов, входящих в опухоль из САМ во всех направлениях. Опухоль индуцирует врастание сосудистой сети хозяина путем образования "ангиогенных факторов". Опухоль расширяется дистально вдоль кровеносных сосудов, которые снабжают ее. Фиг.14В является видом снизу САМ, показанной на Фиг.15А. Вкратце, этот вид демонстрирует радиальный вид кровеносных сосудов, которые входят в опухоль подобно спицам колеса. Обратите внимание на то, что плотность кровеносных сосудов больше вблизи опухоли, чем в окружающей нормальной ткани САМ.

Фиг.14С и 14D - две фотографии САМ, имеющей опухоль, обработанной нагруженной 20% паклитакселом термопастой. Вкратце, на Фиг.14С центральная белая масса является тканью опухоли. Обратите внимание на малочисленность кровеносных сосудов вблизи ткани опухоли. Замедленное высвобождение антимикротрубочкового агента способно преодолевать ангиогенный стимул, продуцируемый опухолью. Сама опухоль слабо васкуляризована и прогрессивно уменьшается в размере.

Фиг.14D является видом снизу САМ, показанной на Фиг.14С, и демонстрирует нарушение кровотока в опухоль в сравнении с контрольной опухолевой тканью. Обратите внимание на то, что плотность кровеносных сосудов уменьшается вблизи опухоли и является более скудной, чем плотность нормальной окружающей ткани САМ.

Фиг.15А является фотографией, показывающей культуру яйца без оболочки на 6-й день.

Фиг.15В - дискретизованное компьютерное изображение, полученное при помощи стереомикроскопа, живых неокрашенных капилляров (1040×). Фиг.15С - фотография коррозионных заливок, показывающая капиллярную сеть хорионаллантоисной мембраны (САМ), которая снабжается более крупными, лежащими ниже сосудами (стрелки; 1300×).

Фиг.15D - фотография, изображающая пластиковый срез толщиной 0,5 мм, проходящий поперек САМ и регистрируемый на уровне светового микроскопа. Эта фотография показывает состав САМ, в том числе наружную двухслойную эктодерму (Ее), мезодерму (М), содержащую капилляры (стрелки) и рассеянные адвентициальные клетки и однослойную эндодерму (En) (400×).

Фиг.15Е - фотография на уровне электронного микроскопа (3500×), где представлена типичная капиллярная структура, показывающая тонкостенные эндотелиальные клетки (головки стрелок) и связанный с ними перицит (адвентициальную клетку).

Фиг.16А, 16В, 16С и 16D - серия дискретизованных изображений четырех различных неокрашенных САМ, полученных после 48-часовой экспозиции с 10 мкг паклитаксела на 10 мл метилцеллюлоэы. Прозрачный диск метилцеллюлозы (*), содержащей паклитаксел, присутствует на каждой САМ и расположен на отдельной бессосудистой зоне (А) с окружающими кровяными островками (Is). Эти лишенные сосудов зоны простираются за пределы диска и обычно имеют диаметр приблизительно 6 мм.

Фиг.16D иллюстрирует типичный эффект "локтевого загибания" (головки стрелок) как малых, так и больших сосудов, меняющих направление прочь от периферии бессосудистой зоны.

Фиг.17А - фотография (=400×), показывающая, что капилляры (головки стрелок), непосредственно периферические относительно бессосудистой зоны, обнаруживают многочисленные эндотелиальные клетки с задержанным митозом. Эктодерма (Еc); мезодерма (М); эндодерма (En).

Фиг.17В (=400×) показывает, что в бессосудистой зоне типичная капиллярная структура была ликвидирована и имеются многочисленные транссудированные клетки крови (головки стрелок). Фиг.17С (=400×) показывает, что в центральном участке бессосудистой зоны эритроциты диспергированы по мезодерме.

Фиг.18А (=2200×) показывает небольшой капилляр, лежащий рядом с эктодермальным слоем (Еc), имеющий три эндотелиальные клетки, задержанные в митозе (*). Несколько других типов клеток как в эктодерме, так и в мезодерме также задержаны в митозе.

Фиг.18В (=2800×) показывает раннюю лишенную сосудов фазу, которая содержит транссудированные клетки крови рядом с эктодермой; эти клетки крови смешаны с предположительными эндотелиальными клетками (*) и их отростками. Показаны деградированные клеточные вакуоли (головки стрелок). Фиг.18С (=2800х) показывает, что в ответ на паклитаксел поверхность раздела эктодермы-мезодермы становится заселенной клетками в различных стадиях деструкции, содержащих густо расположенные вакуоли и гранулы (головки стрелок).

Фиг.19А схематически изображает транскрипционную регуляцию металлопротеиназ матрикса.

Фиг.19В - блот, демонстрирующий, что IL-1 стимулирует транскрипционную активность АР-1.

Фиг.19С - диаграмма, показывающая, что индуцированная IL-1 связывающая активность уменьшалась в лизатах из хондроцитов, которые были предобработаны паклитакселом.

Фиг.20 - блот, показывающий, что индукция IL-1 увеличивает уровни РНК коллагеназы и стромелизина в хондроцитах и что эта индукция ингибируется предобработкой паклитакселом.

Фиг.21 - диаграмма, показывающая действие паклитаксела на жизнеспособность нормальных хондроцитов in vitro.

Фиг.22 - график, показывающий наблюдаемую кинетическую деструкцию псевдопервого порядка паклитаксела (20 мкг на мл ^-1 в растворах 10% HPCD и 10% HPCD при 37°С и рН 3,7 и 4,9 соответственно.

Фиг.23 - график, показывающий фазовую растворимость для циклодекстринов и паклитаксела в воде при 37°С.

Фиг.24 - график, показывающий графики второго порядка комплексообразования паклитаксела и CD, HPCD и HPCD при 37°С.

Фиг.25 - таблица, показывающая температуру плавления, энтальпию, молекулярную массу, полидисперсность и характеристическую вязкость композиции PDLLA-PEG-PDLLA.

Фиг.26 - график, изображающий термограммы ДСК (дифференциальной сканирующей калориметрии) PDLLA-PEG-PDLLA и PEG. Скорость нагревания была 10°С/мин. См. Фиг.30 в отношении температур плавления и энтальпий.

Фиг.27 - график, показывающий кумулятивное высвобождение паклитаксела из нагруженных 20% паклитакселом цилиндров PDLLA-PEG-PDLLA в ЗФР-альбуминовый буфер при 37°С. Столбики ошибок обозначают стандартное отклонение 4 проб. Цилиндры из 40% ПЭГ прекращали исследовать при 4 днях из-за разрушения.

Фиг.28А, 28В и 28С - графики, показывающие изменение в размерах, длине (А), диаметре (В) и сыром весе (С) нагруженных 20% паклитакселом цилиндров PDLLA-PEG-PDLLA во время высвобождения паклитаксела in vitro при 37°С.

Фиг.29 - таблица, показывающая потерю массы и изменение полимерного состава цилиндров PDLLA-PEG-PDLLA (нагруженных 20% паклитакселом) во время высвобождения в ЗФР-альбуминовый буфер при 37°С.

Фиг.30 - график, показывающий гель-фильтрационные хроматограммы цилиндров PDLLA-PEG-PDLLA (20% ПЭГ, диаметр 1 мм), нагруженных 20% паклитакселом, во время высвобождения в ЗФР-альбуминовый буфер при 37°С.

Фиг.31А, 31В, 31С и 31D являются фотографиями растровой (сканирующей) электронной микроскопии (РЭМ) высушенных цилиндров PDLLA-PEG-PDLLA (нагруженных 20% паклитакселом, диаметр 1 мм) перед высвобождением паклитаксела и во время высвобождения паклитаксела. А: 20% ПЭГ, день 0; В: 30% ПЭГ, день 0; С: 20% ПЭГ, день 69; D: 30% ПЭГ, день 69.

Фиг.32 - график, показывающий кумулятивное высвобождение паклитаксела из нагруженных 20% паклитакселом смесей PDLLA-PCL и PCL в ЗФР-альбуминовый буфер при 37°С. Столбики ошибок обозначают стандартные отклонения 4 проб.

Фиг.33 - график, показывающий временной ход высвобождения паклитаксела из PCL-паст в ЗФР при 37°С. PCL-пасты содержат микрочастицы паклитаксела и различных добавок, приготовленные с применением меш №140. Столбики ошибок обозначают стандартное о