Вакцина ассоциированная инактивированная гидроокисьалюминиевая против инфекционной пневмонии и сальмонеллеза свиней и способ ее изготовления

Вакцина ассоциированная инактивированная гидроокисьалюминиевая против инфекционной пневмонии и сальмонеллеза свиней и способ ее изготовления

Иллюстрации

Показать все

Реферат

Изобретение относится к биотехнологии и ветеринарии и может быть использовано при промышленном производстве ассоциированной инактивированной гидроокисьалюминиевой вакцины против инфекционных пневмоний и сальмонеллеза свиней и в животноводстве для профилактики у свиней инфекционных пневмоний, вызываемых пастереллами, гемофильными бактериями и стрептококками, а также желудочно-кишечных болезней, вызываемых сальмонеллами.

Известна вакцина ассоциированная гидроокисьалюминиевая против инфекционных пневмоний свиней бактериальной этиологии и способ ее изготовления [1] - прототип.

Известен также препарат на основе лизат-антигенов сальмонелл против сальмонеллеза свиней [2, 3].

Применение ассоциированной гидроокисьалюминиевой вакцины против инфекционных пневмоний бактериальной этиологии и препарата на основе лизат-антигенов из штаммов сальмонелл для специфической профилактики болезней свиней проводится в одни и те же сроки. Это позволяет создать единый препарат для вакцинации свиней против инфекционных пневмоний бактериальной этиологии и сальмонеллеза.

Известен способ изготовления вакцины против гемофилезной плевропневмонии свиней [4]. Однако он обладает рядом недостатков: процесс культивирования бактерий проводится в неуправляемом режиме, а процесс инактивации - длительное время при повышенном содержании формальдегида в культуре.

Известны также способы изготовления вакцин против пастереллеза [5] и сальмонеллеза животных [6].

Целью заявляемого изобретения является создание высокоиммуногенной ассоциированной инактивированной гидроокисьалюминиевой вакцины, обеспечивающей надежную защиту не только от инфекционных пневмоний бактериальной этиологии, вызываемых пастереллами, стрептококками и гемофильными бактериями, но и от желудочно-кишечных заболеваний, вызываемых сальмонеллами, а также повышение качества и стандартности биологических свойств ассоциированной вакцины.

Эта цель достигается введением в состав известной вакцины [1] лизат-антигенов из штаммов сальмонелл и оптимальным количественным соотношением всех антигенов, входящих в состав вакцины, а также осуществлением управляемого периодического процесса культивирования и щадящих режимов инактивации гемофильных бактерий.

Способ осуществляют следующим образом.

В стерильный ферментер загружают жидкую питательную среду на основе перевара Хоттингера с ростовыми добавками.

Питательную среду в ферментере засевают культурой гемофильных бактерий (Haemophilus (Actinobacillus) pleuropneumoniae серогрупп 1 или 2), выращенной в жидкой питательной среде на основе бульона Хоттингера с ростовыми добавками, и выращивают при 37±1°С в течение 6-8 часов.

После засева ферментера окислительно-восстановительный потенциал культуральной жидкости снижают до (-80)-(-130) мВ, после чего до окончания процесса культивирования поддерживают рО₂ в культуральной жидкости на уровне 15-25% от насыщения кислородом воздуха, рН культуральной жидкости регулируют на уровне 7,1-7,3 ед. рН, а дробную подачу глюкозы осуществляют дозами до концентрации 0,1-0,2% при лимитировании роста гемофильных бактерий глюкозой, характеризующемся резким повышением рО₂ при неизменных расходе воздуха и оборотах мешалки и прекращением снижения рН культуральной жидкости.

Полученную бактериальную культуру двух производственных штаммов гемофильных бактерий с измеренной концентрацией перекачивают в отдельные, заранее приготовленные стерильные реакторы (или стеклянные баллоны) и добавляют при постоянном перемешивании дробно формальдегид (фА) до его конечной концентрации 0,02-0,08%, доводят рН до 7,1-7,2 ед. рН добавлением 10%-ного раствора гидроокиси натрия, перемешивают 15-20 мин и выдерживают при 36-48°С в течение 24-72 часов.

Выращивание сальмонелл проводят следующим образом [6].

Среду засевают культурой сальмонелл, выращенной в питательной среде на основе перевара Хоттингера. Культивируют при 37±1°С в течение 6-8 часов. После засева ферментера окислительно-восстановительный потенциал культуральной жидкости снижают до (-110)-(-130) мВ путем выдержки культуры без подачи воздуха на аэрацию и выключенной мешалки, после чего до конца процесса культивирования с помощью изменений расхода воздуха на аэрацию и скорости вращения мешалки поддерживают парциальное давление растворенного в культуральной жидкости кислорода на уровне 15-25% от насыщения кислородом воздуха, рН культуральной жидкости поддерживают на уровне 7,6-7,8 ед. рН с помощью подачи 10%-ного раствора NaOH, а дробную подачу глюкозы осуществляют дозами до концентрации 0,05-0,15% при лимитировании роста сальмонелл глюкозой, характеризующемся резким повышением рО₂ при неизменных расходе воздуха и оборотах мешалки и прекращением снижения рН культуральной жидкости.

Полученную бактериальную культуру двух производственных штаммов сальмонелл с измеренной концентрацией бактерий перекачивают в отдельные, заранее подготовленные реакторы (или стеклянные баллоны) и добавляют гидроксиламин солянокислый из расчета создания концентрации 0,5-0,6%.

После проверки на стерильность и полноту инактивации к инактивированной солянокислым гидроксиламином культуре каждого штамма, содержащей измеренное количество микробных тел в 1 см³, добавляют 4%-ную взвесь гидрата окиси алюминия рН 7,2±0,1 из расчета 130 см³ на каждый дм³ культуры, перемешивают 15-20 мин и выдерживают при 18-20°С в течение 2-3 сут, ежедневно перемешивая 2-3 раза, а затем без перемешивания 2 суток.

После отстоя адсорбированной на гидрате окиси алюминия культуры проводят декантирование прозрачной надосадочной жидкости с таким расчетом, чтобы в осадке получить лизат сальмонелл из бактериальной суспензии с концентрацией, равной 17,5-25,5 млрд м.т./см³.

Инактивированные и адсорбированные на гидрате окиси алюминия культуры стрептококков и пастерелл для вакцины готовят следующим образом [1, 7].

Процесс инактивации штаммов стрептококков проводят формальдегидом при 43°С в течение 12 ч, причем конечная концентрация формальдегида в культуре составляет 0,02%.

Процесс инактивации штаммов пастерелл проводят формальдегидом при 45°С в течение 18-24 ч, причем конечная концентрация формальдегида в культуре составляет 0,14%.

После проверки на стерильность и полноту инактивации к инактивированной культуре каждого штамма, содержащей измеренное количество микробных клеток в 1 см³, добавляют 4%-ную взвесь гидрата окиси алюминия рН 7,2±0,1 из расчета 130 см³ на каждый дм³ культуры, перемешивают 15-20 мин и выдерживают при 18-20°С в течение 2-3 сут, ежедневно перемешивая 2-3 раза, а затем без перемешивания 2 суток.

После отстоя адсорбированной на гидрате окиси алюминия культуры проводят декантирование прозрачной надосадочной жидкости с таким расчетом, чтобы получить в осадке концентрацию микробных тел 17,5-25,5 млрд м.т./см³.

К культурам пастерелл, стрептококков и гемофильных бактерий, смешанных в вакцине в равных объемах при исходных концентрациях 17,5-25,5 млрд м.т./см³ пастерелл и стрептококков и 10,5-17,5 млрд м.т./см³ гемофильных бактерий каждого штамма, дополнительно добавляют лизат-антигены сальмонелл в равных объемах при следующих исходных концентрациях, млрд м.т./см³:

- бактериальная масса из штамма Pasteurella multocida

сероварианта А-№1231 17,5-25,5;

- бактериальная масса из штамма Pasteurella multocida

сероварианта В-№681 17,5-25,5;

- бактериальная масса из штамма Pasteurella multocida

сероварианта Д-Т-80 17,5-25,5;

- бактериальная масса из штамма Haemophilus pleuropneumoniae

серогруппы 1 - №5870 10,5-17,5;

- бактериальная масса из штамма Haemophilus pleuropneumoniae

серогруппы 2 - ГУ-19 10,5-17,5;

- бактериальная масса из штамма Streptococcus

zooepidemicus серогруппы С-П-2082 17,5-25,5;

- бактериальная масса из штамма Streptococcus suis

серогруппы R - “Касли” 17,5-25,5;

- лизат-антиген из штамма Salmonella

choleraesuis №370 17,5-25,5;

- лизат-антиген из штамма Salmonella

typhimurium №415 17,5-25,5.

После перемешивания вакцину расфасовывают с соблюдением условий асептики при постоянном перемешивании в стерильные флаконы.

Пример 1

Способ изготовления вакцины с минимальными значениями параметров

Для культивирования гемофильных бактерий используют жидкую питательную среду на основе перевара Хоттингера с ростовыми добавками.

Среду засевают культурой гемофильных бактерий, выращенной в жидкой питательной среде аналогичного состава. Культивируют при 37±1°С в течение 6-8 часов. После засева ферментера окислительно-восстановительный потенциал культуральной жидкости снижают до -130 мВ путем выдержки культуры без подачи воздуха, после чего до окончания процесса культивирования поддерживают рO₂ в культуральной жидкости на уровне 15% от насыщения кислородом воздуха, рН культуральной жидкости регулируют на уровне 7,1 ед. рН с помощью подачи 10%-ного раствора NaOH, a дробную подачу глюкозы осуществляют дозами до концентрации 0,1% при лимитировании роста гемофильных бактерий глюкозой, характеризующемся резким повышением рO₂ при неизменных расходе воздуха и оборотах мешалки и прекращением снижения рН культуральной жидкости.

Процесс инактивации штаммов гемофильных бактерий проводят формальдегидом при 36°С в течение 24 ч, причем конечная концентрация формальдегида в культуре составляет 0,02%.

К культурам пастерелл, стрептококков и гемофильных бактерий, смешанных в вакцине в равных объемах при исходных концентрациях 17,5 млрд м.т./см³ пастерелл и стрептококков и 10,5 млрд м.т./см³ гемофильных бактерий каждого штамма, дополнительно добавляют лизат-антигены сальмонелл в равных объемах при следующих исходных концентрациях, млрд м.т./см³:

- бактериальная масса из штамма Pasteurella multocida

сероварианта А-№1231 17,5;

- бактериальная масса из штамма Pasteurella multocida

сероварианта В-№681 17,5;

- бактериальная масса из штамма Pasteurella multocida

сероварианта Д-Т-80 17,5;

- бактериальная масса из штамма Haemophilus pleuropneumoniae

серогруппы 1 -№5870 10,5;

- бактериальная масса из штамма Haemophilus pleuropneumoniae

серогруппы 2 - ГУ-19 10,5;

- бактериальная масса из штамма Streptococcus

zooepidemicus серогруппы С - П -2082 17,5;

- бактериальная масса из штамма Streptococcus suis

серогруппы R - “Касли” 17,5;

- лизат-антиген из штамма Salmonella cholerae-suis №370 17,5;

- лизат-антиген из штамма Salmonella

typhimurium №415 17,5.

Пример 2

Способ изготовления вакцины с оптимальными значениями параметров

Для культивирования гемофильных бактерий используют жидкую питательную среду на основе перевара Хоттингера с ростовыми добавками.

Среду засевают культурой гемофильных бактерий, выращенной в жидкой питательной среде аналогичного состава. Культивируют при 37±1°С в течение 6-8 часов. После засева ферментера окислительно-восстановительный потенциал культуральной жидкости снижают до -105 мВ путем выдержки культуры без подачи воздуха, после чего до окончания процесса культивирования поддерживают рO₂ в культуральной жидкости на уровне 20% от насыщения кислородом воздуха, рН культуральной жидкости регулируют на уровне 7,2 ед. рН с помощью подачи 10%-ного раствора NaOH, a дробную подачу глюкозы осуществляют дозами до концентрации 0,15% при лимитировании роста гемофильных бактерий глюкозой, характеризующемся резким повышением рO₂ при неизменных расходе воздуха и оборотах мешалки и прекращением снижения рН культуральной жидкости.

Процесс инактивации штаммов гемофильных бактерий проводят формальдегидом при 42°С в течение 48 ч, причем конечная концентрация формальдегида в культуре составляет 0,05%.

К культурам пастерелл, стрептококков и гемофильных бактерий, смешанных в вакцине в равных объемах при исходных концентрациях 21,0 млрд м.т./см³ пастерелл и стрептококков и 14,0 млрд м.т./см³ гемофильных бактерий каждого штамма, дополнительно добавляют лизат-антигены сальмонелл в равных объемах при следующих исходных концентрациях, млрд м.т./см³:

- бактериальная масса из штамма Pasteurella multocida

сероварианта А-№1231 21,0;

- бактериальная масса из штамма Pasteurella multocida

сероварианта В-№681 21,0;

- бактериальная масса из штамма Pasteurella multocida

сероварианта Д-Т-80 21,0;

- бактериальная масса из штамма Haemophilus

pleuropneumoniae серогруппы 1 - №5870 14,0;

- бактериальная масса из штамма Haemophilus pleuropneumoniae

серогруппы 2 - ГУ-19 14,0;

- бактериальная масса из штамма Streptococcus

zooepidemicus серогруппы С - П -2082 21,0;

- бактериальная масса из штамма Streptococcus suis

серогруппы R - “Касли” 21,0;

- лизат-антиген из штамма Salmonella

cholerae-suis №370 21,0;

- лизат-антиген из штамма Salmonella

typhimurium №415 21,0.

Пример 3

Способ изготовления вакцины с максимальными значениями параметров

Для культивирования гемофильных бактерий используют жидкую питательную среду на основе перевара Хоттингера с ростовыми добавками.

Среду засевают культурой гемофильных бактерий, выращенной в жидкой питательной среде аналогичного состава. Культивируют при 37±1°С в течение 6-8 часов. После засева ферментера окислительно-восстановительный потенциал культуральной жидкости снижают до -80 мВ путем выдержки культуры без подачи воздуха, после чего до окончания процесса культивирования поддерживают pО₂ в культуральной жидкости на уровне 25% от насыщения кислородом воздуха, рН культуральной жидкости регулируют на уровне 7,3 ед. рН с помощью подачи 10%-ного раствора NaOH, a дробную подачу глюкозы осуществляют дозами до концентрации 0,2% при лимитировании роста гемофильных бактерий глюкозой, характеризующемся резким повышением pO₂ при неизменных расходе воздуха и оборотах мешалки и прекращением снижения рН культуральной жидкости.

Процесс инактивации штаммов гемофильных бактерий проводят формальдегидом при 48°С в течение 72 ч, причем конечная концентрация формальдегида в культуре составляет 0,08%.

К культурам пастерелл, стрептококков и гемофильных бактерий, смешанных в вакцине в равных объемах при исходных концентрациях 25,5 млрд м.т./см³ пастерелл и стрептококков и 17,5 млрд м.т./см³ гемофильных бактерий каждого штамма, дополнительно добавляют лизат-антигены сальмонелл в равных объемах при следующих исходных концентрациях, млрд м.т./см³:

- бактериальная масса из штамма Pasteurella multocida

сероварианта А-№1231 25,5;

- бактериальная масса из штамма Pasteurella multocida

сероварианта В-№681 25,5;

- бактериальная масса из штамма Pasteurella multocida

сероварианта Д-Т-80 25,5;

- бактериальная масса из штамма Haemophilus pleuropneumoniae

серогруппы 1 -№ 5870 17,5;

- бактериальная масса из штамма Haemophilus pleuropneumoniae

серогруппы 2 - ГУ-19 17,5;

- бактериальная масса из штамма Streptococcus

zooepidemicus серогруппы С-П-2082 25,5

- бактериальная масса из штамма Streptococcus suis

серогруппы R - “Касли” 25,5;

лизат-антиген из штамма Salmonella

cholerae-suis №370 25,5;

- лизат-антиген из штамма

Salmonella typhimurium №415 25,5.

Пример 4

Способ изготовления вакцины со значениями параметров ниже минимальных

Для культивирования гемофильных бактерий используют жидкую питательную среду на основе перевара Хоттингера с ростовыми добавками.

Среду засевают культурой гемофильных бактерий, выращенной в жидкой питательной среде аналогичного состава. Культивируют при 37±1°С в течение 6-8 часов. После засева ферментера окислительно-восстановительный потенциал культуральной жидкости снижают до -140 мВ путем выдержки культуры без подачи воздуха, после чего до окончания процесса культивирования поддерживают рO₂ в культуральной жидкости на уровне 10% от насыщения кислородом воздуха, рН культуральной жидкости регулируют на уровне 7,0 ед. рН с помощью подачи 10%-ного раствора NaOH, a дробную подачу глюкозы осуществляют дозами до концентрации 0,05% при лимитировании роста гемофильных бактерий глюкозой, характеризующемся резким повышением рО₂ при неизменных расходе воздуха и оборотах мешалки и прекращением снижения рН культуральной жидкости.

Процесс инактивации штаммов гемофильных бактерий проводят формальдегидом при 30°С в течение 12 ч, причем конечная концентрация формальдегида в культуре составляет 0,01%.

К культурам пастерелл, стрептококков и гемофильных бактерий, смешанных в вакцине в равных объемах при исходных концентрациях 14,0 млрд м.т./см³ пастерелл и стрептококков и 7,0 млрд м.т./см³ гемофильных бактерий каждого штамма, дополнительно добавляют лизат-антигены сальмонелл в равных объемах при следующих исходных концентрациях, млрд м.т./см³:

- бактериальная масса из штамма Pasteurella multocida

сероварианта А-№1231 14,0;

- бактериальная масса из штамма Pasteurella multocida

сероварианта В-№681 14,0;

- бактериальная масса из штамма Pasteurella multocida

сероварианта Д-Т-80 14,0;

- бактериальная масса из штамма Haemophilus pleuropneumoniae

серогруппы 1 - №5870 7,0;

- бактериальная масса из штамма Haemophilus pleuropneumoniae

серогруппы 2 - ГУ-19 7,0;

- бактериальная масса из штамма Streptococcus

zooepidemicus серогруппы С-П-2082 14,0;

- бактериальная масса из штамма Streptococcus suis

серогруппы К-“Касли” 14,0;

- лизат-антиген из штамма Salmonella cholerae-

suis №370 15,0;

- лизат-антиген из штамма Salmonella

typhimurium №415 15,0.

Пример 5

Способ изготовления вакцины со значениями параметров выше максимальных

Для культивирования гемофильных бактерий используют жидкую питательную среду на основе перевара Хоттингера с ростовыми добавками.

Среду засевают культурой гемофильных бактерий, выращенной в жидкой питательной среде аналогичного состава. Культивируют при 37±1°С в течение 6-8 часов. После засева ферментера окислительно-восстановительный потенциал культуральной жидкости снижают до -70 мВ путем выдержки культуры без подачи воздуха, после чего до окончания процесса культивирования поддерживают рО₂ в культуральной жидкости на уровне 30% от насыщения кислородом воздуха, рН культуральной жидкости регулируют на уровне 7,4 ед. рН с помощью подачи 10%-ного раствора NaOH, a дробную подачу глюкозы осуществляют дозами до концентрации 0,25% при лимитировании роста гемофильных бактерий глюкозой, характеризующемся резким повышением рО₂ при неизменных расходе воздуха и оборотах мешалки и прекращением снижения рН культуральной жидкости.

Процесс инактивации штаммов гемофильных бактерий проводят формальдегидом при 54°С в течение 84 ч, причем конечная концентрация формальдегида в культуре составляет 0,09%.

К культурам пастерелл, стрептококков и гемофильных бактерий, смешанных в вакцине в равных объемах при исходных концентрациях 28,0 млрд м.т./см³ пастерелл и стрептококков и 21,5 млрд м.т./см³ гемофильных бактерий каждого штамма, дополнительно добавляют лизат-антигены сальмонелл в равных объемах при следующих исходных концентрациях, млрд м.т./см³:

- бактериальная масса из штамма Pasteurella multocida

сероварианта А-№1231 28,0;

- бактериальная масса из штамма Pasteurella multocida

сероварианта В-№681 28,0;

- бактериальная масса из штамма Pasteurella multocida

сероварианта Д-Т-80 28,0;

- бактериальная масса из штамма Haemophilus pleuropneumoniae

серогруппы 1 - №5870 21,5;

- бактериальная масса из штамма Haemophilus pleuropneumoniae

серогруппы 2 - ГУ-19 21,5;

- бактериальная масса из штамма Streptococcus

zooepidemicus серогруппы С-П-2082 28,0;

- бактериальная масса из штамма Streptococcus suis

серогруппы R - “Касли” 28,0;

- лизат-антиген из штамма Salmonella

cholerae-suis №370 28,0;

- лизат-антиген из штамма Salmonella

fyphimurium №415 28,0.

Технологические параметры изготовления ассоциированной инактивированной гидроокисьалюминиевой вакцины против инфекционных пневмоний и сальмонеллеза свиней, указанные в примерах, приведены в таблице.

Вакцина, приготовленная по примерам 1-3, обладает высокой иммуногенной активностью и соответствует требованиям технических условий, тогда как вакцина, приготовленная по примеру 4, не обладает достаточной иммуногенной активностью, а вакцина, приготовленная по примеру 5, обладает повышенной реактогенностью.

Источники информации

1. Патент РФ №2191598 от 27 октября 2002 г., А 61 К 39/102 “Вакцина ассоциированная гидроокисьалюминиевая против инфекционных пневмоний свиней бактериальной этиологии и способ ее изготовления”

2. Кудрявцев В.В. Иммуногенные свойства лизат-антигенов из сальмонелл, эшерихий и стафилококков. // Автореферат дис. канд. ветнаук, Москва. 1993.

3. Субботин В.В., Сидоров М.А. Иммуногенные свойства лизат-антигенов из сальмонелл, эширихий и стафилококка. // Ветеринария, 1996. №4.

4. Инструкция по изготовлению и контролю вакцины против гемофилезной плевропневмонии свиней эмульгированной, утв. 11.07.90.

5. Патент РФ №1566533 от 7 апреля 1993 г., А 61 К 39/102 “Способ изготовления вакцины против пастереллеза птиц”.

6. Патент РФ №2129016 от 20 апреля 1999 г., А 61 К 39/112 “Способ изготовления вакцины против сальмонеллеза сельскохозяйственных животных”.

7. Авторское свидетельство РФ №1792708 от 8 октября 1992 г., А 61 К 39/102 “Способ получения сывороток для лечения и профилактики пастереллеза сельскохозяйственных животных, преимущественно свиней, пушных зверей и кроликов”.

1. Вакцина ассоциированная инактивированная гидроокисьалюминиевая против инфекционной пневмонии и сальмонеллеза свиней, содержащая бактериальную массу Pasteurella multocida серовариантов А, В и Д, Haemophilus pleuropneumoniae серогрупп 1 и 2 и стрептококков серогрупп С и R, смешанных в вакцине в равных объемах при исходных концентрациях 17,5-25,5 млрд м.т./см³ пастерелл и стрептококков и 10,5-17,5 млрд м.кл./см³ гемофильных бактерий каждого штамма, отличающаяся тем, что она дополнительно содержит лизат-антигены сальмонелл Salmonella cholerae-suis штамм №370 и Salmonella typhimurium штамм №415, смешанных в равных объемах при следующих исходных концентрациях, млрд м.т./см³:

Бактериальная масса из штамма Pasteurella multocida

сероварианта А - №1231 17,5-25,5

Бактериальная масса из штамма Pasteurella multocida

сероварианта В - №681 17,5-25,5

Бактериальная масса из штамма Pasteurella multocida

сероварианта Д-Т-80 17,5-25,5

Бактериальная масса из штамма Haemophilus pleuropneumoniae

серогруппы 1 - №5870 10,5-17,5

Бактериальная масса из штамма Haemophilus pleuropneumoniae

серогруппы 2 - ГУ-19 10,5-17,5

Бактериальная масса из штамма Streptococcus

zooepidemicus серогруппы С-П-2082 17,5-25,5

Бактериальная масса из штамма Streptococcus suis

серогруппы R - “Касли” 17,5-25,5

Лизат-антиген из штамма Salmonella

cholerae-suis №370 17,5-25,5

Лизат-антиген из штамма Salmonella

typhimurium №415 17,5-25,5

2. Способ изготовления вакцины ассоциированной инактивированной гидроокисьалюминиевой против инфекционных пневмоний и сальмонеллеза свиней, включающий засев вакцинных штаммов пастерелл, гемофильных бактерий, стрептококков и сальмонелл, их раздельное культивирование в жидкой питательной среде в ферментерах с последующей инактивацией культур пастерелл, гемофильных бактерий и стрептококков формальдегидом, лизированием сальмонелл гидроксиламином солянокислым, адсорбцией всех антигенов на адъюванте и смешиванием инактивированных культур, отличающийся тем, что при культивировании культур штаммов гемофильных бактерий сразу после засева окислительно-восстановительный потенциал культуральной жидкости снижают до (-80)-(-130) мВ, после чего до окончания процесса культивирования поддерживают рО₂ в культуральной жидкости на уровне 15-25% от насыщения кислородом воздуха, рН культуральной жидкости регулируют на уровне 7,1-7,3, а дробную подачу глюкозы осуществляют дозами до концентрации 0,1-0,2% при лимитировании роста гемофильных бактерий глюкозой.

3. Способ изготовления вакцины по пп.1 и 2, отличающийся тем, что инактивацию культур гемофильных бактерий проводят формальдегидом при температуре 36-48°С в течение 24-72 ч, причем конечная концентрация формальдегида в культуре составляет 0,02-0,08%.