Замещенные амиды фенилциклогексанкарбоновой кислоты, промежуточные соединения и лекарственное средство на их основе

Замещенные амиды фенилциклогексанкарбоновой кислоты, промежуточные соединения и лекарственное средство на их основе

Иллюстрации

Показать все

Реферат

Данное изобретение относится к новым производным фенилциклогексанкарбоновой кислоты, обладающим биологической активностью, более конкретно к замещенным амидам фенилциклогексанкарбоновой кислоты, обладающим ингибирующим поглощение аденозина действием, промежуточным соединениям и лекарственному средству на их основе.

Аденозин является эндогенным эффектором с защищающим клетки действием, особенно в условиях ограниченного снабжения кислородом и субстратом, таких как, например, при ишемии, апоплексическом ударе и травме головного мозга. Аденозин оказывает нейрозащитное действие в основном путем подавления пресинаптического освобождения глутамата, а также ограничения постсинаптической деполяризации. Благодаря этому предотвращается токсическое проникновение кальция в постсинаптические нервные клетки через рецепторы-NMDA. Внеклеточная концентрация аденозина в ЦНС резко повышается при ишемии и гипоксии.

В различных ссылках указывается на нейропротекторный, антиконвульсивный, анальгетический и индуцирующий сон потенциал ингибиторов поглощения аденозина, так как они усиливают собственный эффект аденозина путем снижения его клеточного обратного поглощения. Поэтому ингибиторы поглощения аденозина могут использоваться при пероральном или внутривенном применении для профилактики и лечения черепно-мозговой ишемии, кровоизлияния в мозг, реперфузионных повреждений травм головного мозга, отеков, судорог, эпилепсии, апноэ, остановки сердца, синдрома Рейе, церебрального тромбоза, эмболии, опухолей, кровоизлияний, энцефаломиелита, повреждений спинного мозга, послеоперационных повреждений головного мозга, повреждений сетчатки или зрительного нерва после глаукомы, ишемии, гипоксии, отека или травмы, а также при лечении шизофрении, нарушения сна и боли (Cerebrovasc. Brain Metab. Rev. 1992, 4, 364-369; Drug Dev. Res. 1993, 28, 410-415; Science 1997, 276, 1265-1268; 'Adenosine in the Nervous System' Ed: Trevor Stone, Academic Press Ltd. 1991, 217-227; Ann. Rep. Med. Chem. 1998, 33, 110-120).

Ингибиторы поглощения аденозина могут быть использованы также для потенцирования действия антиметаболитов нуклеиновых оснований, нуклеозидов или нуклеотидов при химиотерапевтическом лечении рака и в антивирусной (например, ВИЧ) химиотерапии (Сurr. Med. Chem. 1997, 4, 35-66).

В европейских заявках на патент ЕР-А-0611767 и ЕР-А-0725064 описаны амиды фенилциклогексилкарбоновых кислот, которые могут быть использованы для лечения атеросклероза или рестеноза.

Задачей изобретения является расширение ассортимента замещенных амидов фенилциклогексанкарбоновых кислот, обладающих ингибирующим поглощение аденозина действием.

Поставленная задача решается предлагаемыми замещенными амидами фенилциклогексанкарбоновой кислоты общей формулы (I)

в которой

A, D, Е и G одинаковы или различны и означают группу СН или атом азота,

R¹ означает группу СН₂-ОН, или остаток формулы CO-NH2,

R² означает алкил, содержащий 1-8 атомов углерода, который может быть прерван атомом кислорода, или пиперизин, содержащий остаток формулы NR⁴, где R⁴ означает водород, алкил, содержащий 1-6 атомов углерода, или цикпоалкил, содержащий 3-7 атомов углерода,

причем алкил, содержащий 1-8 атомов углерода, который может быть прерван атомом кислорода, замещен 1-3 гидроксильными группами или остатком формулы -NR⁵R⁶,

где R⁵ и R⁶ означают водород, или вместе с атомом азота образуют кольцо морфолина,

R³ означает фенильное кольцо,

и их солями.

Предпочтительными замещенными амидами фенилциклогексанкарбоновой кислоты формулы (I) являются соединения, у которых

R¹ означает группу СН₂-ОН или остаток формулы CO-NH₂,

R² означает алкил, содержащий 1-6 атомов углерода, который может быть прерван атомом кислорода, или 4-R⁴-пипepaзин-1-ил, где R⁴ означает водород, алкил, содержащий 1-4 атома углерода,

причем алкил, содержащий 1-6 атомов углерода, который может быть прерван атомом кислорода, замещен гидроксильной группой и/или остатком формулы -NR⁵R⁶, где R⁵R⁶ означают водород или вместе с азотом образуют кольцо морфолина,

R³ означает фенильное кольцо,

или у которых

A, D и Е означают группу СН,

G означает атом азота или группу СН,

R¹ означает остаток формулы CO-NH₂,

R² означает алкил, содержащий 1-4 атомов углерода, который может быть прерван атомом кислорода, или 4-R⁴-пипepaзин-1-ил, где R⁴ означает водород, алкил, содержащий 1-4 атомов углерода, циклоалкил, содержащий 3-6 атомов углерода,

R³ означает фенильное кольцо,

и их соли.

В частности предпочитаются (S)-N-{{(1R,2R)-2-{4-{[2-(4-метил-пиперазин-1-ил)-бензимидазол-1ил]метил}-фенил}-циклогекс-1-ил}карбонил}-фенилглицин формулы

и его соли.

Физиологически приемлемые соли соединений данного изобретения могут быть солями соединений данного изобретения с минеральными кислотами, карбоновыми кислотами или сульфоновыми кислотами. Особенно предпочтительными являются, например, соли с хлоридом водорода, бромидом водорода, серной кислотой, фосфорной кислотой, метансульфокислотой, этансульфокислотой, толуолсульфокислотой, бензолсульфокислотой, нафталиндисульфокислотой, уксусной кислотой, пропионовой кислотой, молочной кислотой, винной кислотой, лимонной кислотой, фумаровой кислотой, малеиновой кислотой или бензойной кислотой.

Соединения данного изобретения общей формулы (I) могут существовать в различных стереоизомерных формах, которые ведут себя или как изображение и зеркальное отображение (энантиомеры), или не как изображение и зеркальное отображение (диастереомеры). Изобретение касается как энантиомеров, так и диастереомеров, а также их соответствующих смесей. Рацематы могут быть разделены также как диастереомеры известными методами на однородные стереоизомерные компоненты.

Далее, определенные соединения могут существовать в таутомерных формах. Это известно специалистам, и соединения такого рода также входят в объем изобретения.

Алкил, содержащий 1-8 атомов углерода или алкил, содержащий 1-6 атомов углерода, является неразветвленным или разветвленным алкильным остатком с 1-8, соответственно 1-6 атомами углерода. Примерами являются метил, этил, н-пропил, изопропил, трет-бутил, н-пентил и н-гексил. Предпочтительным является неразветвленный или разветвленный алкильный остаток с 1-4 атомами углерода. Особенно предпочтительным является неразветвленный или разветвленный алкильный остаток с 1-3 атомами углерода

Алкил, содержащий 1-8 атомов углерода, алкил, который может быть прерван атомом кислорода и который замещен от одной до трех гидроксильными группами или остатком формулы -NR⁵R⁶, является, например, 1,3-дигидроксипроп-2-окси-метилом, 2-гидроксиэтоксиметилом, 2-гидроксипроп-1-оксиметилом, 3-гидроксипроп-1-окси-метилом, морфолин-4-ил-метилом, пиперидин-1-ил-метилом, 2-аминоэтилом, 2-диметиламиноэтилом или диэтиламинометилом.

Циклоалкил, содержащий 3-7 атомов углерода, в рамках изобретения является цикпопропилом, циклобутилом, циклопентилом, цикпогексилом или циклогептилом. Предпочтительным является циклопропил, циклопентил и циклогексил.

Предпочтительно соединения общей формулы (I) имеют абсолютную конфигурацию, представленную общей формулой (I')

Соединения данного изобретения могут существовать в четырех различных относительных конфигурациях (A)-(D)

Предпочтительной является конфигурация (D).

Замещенные амиды фенилциклогексанкарбоновой кислоты вышеприведенной общей формулы (I) можно получать за счет того, что

[А] соединения общей формулы (II)

в которой

Т означает алкил, содержащий 1-4 атомов углерода, предпочтительно метил

или трет-бутил,

и

V означает уходящую группу, такую как, например, галоген, мезилат, тозилат, предпочтительно бром,

сначала подвергают взаимодействию с соединением общей формулы (III)

в которой

A, D, Е и G имеют указанные выше значения, a R⁷ имеет указанные выше для радикала R² значения,

Т означает водород или алкил, содержащий 1-4 атома углерода, причем амино- и гидроксифункции, в случае необходимости, защищены амино- и гидроксизащитными группами, в инертном растворителе, в случае необходимости, в присутствии основания, с получением соединения общей формулы (IV)

в которой

R⁷, A, D, Е, G и Т имеют указанные выше значения,

которое на следующей стадии кислотой или основанием переводят в соответствующую карбоновую кислоту общей формулы (V)

в которой R⁷, А, D, Е и G имеют указанные выше значения,

и в заключение, после активирования известными методами, подвергают взаимодействию в инертном растворителе с соединением общей формулы (VI)

в которой R¹ и R³ имеют указанные выше значения,

и, в случае необходимости, в случае, если в R⁷ введены защитные группы, последние либо при гидролизе до кислоты (IV)→(V), либо после взаимодействия с соединением общей формулы (VI) отщепляют обычными методами, или

[В] в случае, если R² означает содержащий остаток формулы NR⁷ пиперазин, связанный непосредственно через атом азота с имидазольным кольцом,

сначала приведенное выше соединение общей формулы (II) подвергают взаимодействию в инертном растворителе с соединением общей формулы (IIIa)

в которой

A, D, Е и G имеют указанные выше значения,

и

Y является галогеном или мезилом, предпочтительно хлором, бромом или мезилом,

с получением соединения формулы (VII)

в которой

Y, A, D, Е, G и Т имеют указанные выше значения,

которое на следующей ступени подвергают взаимодействию с соединением

общей формулы (VIII)

в которой

с получением соединения общей формулы (IX)

в которой

А, D, Е, G и Т имеют указанные выше значения,

которое в последующей стадии гидролизом, как описано в [А], переводят в соответствующую карбоновую кислоту общей формулы (X)

в которой

A, D, Е и G имеют указанные выше значения,

и в заключение, после активирования известными методами при получении амидов из аминов и карбоновых кислот, подвергают взаимодействию с соединением общей формулы (VI) и, в случае необходимости, взаимодействием с кислотой переводят в соответствующие соли.

Вышеописанные способы могут быть пояснены следующими схемами

Подходящими аминозащитными группами в рамках данного изобретения являются обычные, применяемые в пептидной химии, аминозащитные группы.

Предпочтительными для этого являются бензилоксикарбонил, 3,4-диметоксибензилоксикарбонил,3,5-диметоксибензилоксикарбонил, 2,4-диметоксибензилоксикарбонил, 4-метоксибензилоксикарбонил, 4-нитробензилоксикарбонил, 2-нитробензилоксикарбонил, 2-нитро-4,5-диметоксибензилоксикарбонил, метоксикарбонил, этоксикарбонил, пропоксикарбонил, изопропоксикарбонил, бутоксикарбонил, изобутоксикарбонил, трет-бутоксикарбонил, аллилоксикарбонил, винилоксикарбонил, 2-нитробензилоксикарбонил, 3,4,5-триметоксибензилоксикарбонил, циклогексоксикарборнил, 1,1-диметилэтоксикарбонил, адамантилкарбонил, фталоил, 2,2,2-трихлорэтоксикарбонил, 2,2,2-трихлор-трет-бутоксикарбонил, ментилоксикарбонил, феноксикарбонил, 4-нитрофеноксикарбонил, флуоренил-9-метоксикарбонил, формил, ацетил, пропионил, пивалоил, 2-хлорацетил, 2-бромацетил, 2,2,2-трифторацетил, 2,2,2-трихлрацетил, бензоил, 4-хлорбензоил, 4-бромбензоил, 4-нитробензоил, фталимидо, изовалероил или бензилоксиметилен, 4-нитробензил 2,4-динитробензил или 4-нитрофенил. Предпочтительной защитной группой для первичных аминов является фталимид.

Предпочтительными защитными группами для вторичных аминов являются бензилоксикарбонил и трет-бутоксикарбонил.

Отщепление аминозащитной группы осуществляют известными методами, например, работают в гидрогенолитических, кислых или основных условиях, предпочтительно с кислотами, такими как, например, хлористый водород или трифторуксусная кислота, в инертных растворителях, таких как эфир, диоксан и метиленхлорид.

Подходящей гидроксизащитной группой в рамках данного выше определения является защитная группа из ряда триметилсилил, триэтилсилил, триизопропилсилил, трет-бутил-диметилсилил, диметилгексилсилил, трет-бутил-ди-фенилсилил, триметилсилилэтоксикарбонил, бензил, трифенилметил (тритил), монометокситритил, (ММТр), диметокситритил (ДМТр), бензилоксикарбонил, 2-нитробензил, 4-нитробензил, 2-нитробензилокси-карбонил, 4-нитробензилоксикарбонил, трет-бутоксикарбонил, 4-метокси-бензил, 4-метоксибензилоксикар-бонил, формил, ацетил, трихлорацетил, 2,2,2-трихлорэтоксикарбонил, 2,4-диметоксибензил, 2,4-диметоксибензилоксикарбонил, метоксиметил, метилтио-метил, метоксиэтоксиметил, [2-(триметилсилил)этокси]-метил, 2-(метилтиометокси)этоксикарбонил, тетрагидрофуранил, бензоил, N-сукцинимид, 4-метилбензоил, 4-нитробензоил, 4-фторбензоил, 4-хлорбензоил или 4-метоксибензоил. Предпочтительным является трет-бутил-диметилсилил.

Отщепление гидроксизащитной группы осуществляют известным методом, например кислотой, основанием или добавлением тетрабутиламмоний-фторида, или осуществляют при гидролизе карбоновой кислоты.

В качестве растворителя для проведения процесса подходящими являются обычные органические растворители, которые не претерпевают изменений в реакционных условиях. К ним относятся эфиры, такие как диэтиловый эфир, диоксан, тетрагидрофуран, диметиловый эфир гликоля, или углеводороды, такие как бензол, толуол, ксилол, гексан, циклогексан или нефтяные фракции, или галогенуглеводороды, такие как дихлорметан, трихлорметан, тетрахлорметан, дихлорэтилен, трихлорэтилен или хлорбензол, или этилацетат, пиридин, диметилсульфоксид, гексаметилтриамид фосфорной кислоты ацетонитрил, ацетон или нитрометан. Также возможно применять смеси названных растворителей. Для процесса [А] (II) + (III) → (IV) предпочтительными являются диэтиловый эфир, тетрагидрофуран и диметилформамид. Особенно предпочтительным является диметилформамид.

В качестве оснований могут использоваться в общем неорганические или органические основания. К таковым предпочтительно относятся гидроксиды щелочных металлов, такие как, например, гидроксид натрия или гидроксид калия, гидроксиды щелочноземельных металлов, такой как, например, гидроксид бария, карбонаты щелочных металлов, такие как карбонат натрия, карбонат калия или карбонат цезия, карбонаты щелочноземельных металлов, такой как карбонат кальция, или алкоголяты щелочных или щелочноземельных металлов, такие как метилат натрия или калия, этилат натрия или калия или трет-бутилат калия, или органические амины (триалкил(С₁-С₆)амины), такой как триэтиламин, или гетероциклические соединения, такие как 1,4-диазабицикло[2,2,2]октан (ДАБКО), 1,8-диазабицикло[5,4,0]ундец-7-ен (ДБУ), пиридин, диаминопиридин, метилпиперидин или морфолин. Также возможно использовать в качестве основания щелочные металлы, например натрий или их гидриды, например гидрид натрия. Предпочтительными являются гидрид натрия, карбонат калия, карбонат цезия, триэтиламин, триметиламин, пиридин, трет-бутилат калия, ДБУ или ДАБКО. Особенно предпочтительным для стадии [А] (II) + (III) → (IV) является гидрид натрия.

Основание используют в основном в количестве от 0,05 молей до 10 молей, предпочтительно от 1 моля до 2 молей на 1 моль соединения формулы (II).

Способ по схеме (II) + (III) → (IV) проводят в основном температурном интервале от -20°С до +60°С, предпочтительно от 0°С до + 60°С. Данный способ проводят в основном при нормальном давлении. Однако возможно также проводить процесс при избыточном давлении или при пониженном давлении (например, в области от 0,5 до 5 бар).

Гидролиз сложных эфиров карбоновых кислот осуществляют обычными методами, обрабатывая сложный эфир в инертных растворителях обычными основаниями, причем образующуюся сначала соль обработкой кислотой переводят в свободную карбоновую кислоту, или кислотой в случае трет-бутилового эфира.

В качестве основания для гидролиза подходящими являются обычные неорганические основания. Предпочтительными являются гидроксиды щелочных металлов или гидроксиды щелочноземельных металлов, такие как, например, гидроксид натрия, гидроксид лития, гидроксид калия или гидроксид бария, или карбонаты щелочных металлов, такие как карбонат натрия или калия или гидрокарбонат натрия. Наиболее предпочтительно использовать гидроксид натрия или гидроксид лития.

В качестве кислот подходящими, в общем, являются трифторуксусная кислота, серная кислота, хлористый водород, бромистый водород и уксусная кислота или их смесь при необходимости с добавлением воды. Предпочтительными являются хлористый водород или трифторуксусная кислота в случае трет-бутилового эфира и соляная кислота в случае метилового эфира.

В качестве растворителя для гидролиза подходящей является вода или обычный для гидролиза органический растворитель. К ним относятся предпочтительно спирты, такие как метанол, этанол, пропанол, изопропанол или бутанол, или эфиры, такие как тетрагидрофуран или диоксан, диметилформамид, дихлорметан или диметилсульфоксид. Также возможно использовать смесь указанных растворителей. Предпочтительным является вода/тетрагидрофуран и, в случае превращения с трифторуксусной кислотой, дихлорметан, а также в случае хлористого водорода тетрагидрофуран, диэтиловый эфир или вода.

Гидролиз проводят, в общем, в области температур от 0°С до + 100°С.

В общем гидролиз проводят при нормальном давлении. Однако, если это возможно, работают при избыточном давлении или при пониженном давлении (например, от 0,5 до 5 бар).

При проведении гидролиза основание или кислоту используют в основном в количестве от 1 до 100 молей, предпочтительно от 1,5 до 40 молей в расчете на 1 моль эфира.

Активирование карбоновой кислоты (V) осуществляют обычно путем превращения в соответствующий галоидангидрид кислоты, предпочтительно хлорангидрид кислоты, или предварительным активированием обычными конденсирующими средствами, что может происходить in situ или с выделением активированного производного карбоновой кислоты. Галоидангидрид кислоты можно получать обычными методами. Например, называется применение оксалилхлорида или тионилхлорида.

В качестве вспомогательных веществ используются предпочтительно конденсирующие средства. Предпочтительным в данном случае является использование обычных конденсирующих средств, таких как карбодиимиды, например N,N'-диэтил-, N,N'-дипропил-, N,N'-диизопропил, -N,N'-дицикло-гексилкарбодиимид, гидрохлорид N-(3-диметиламиноизопропил)-N'-этил-карбодиимида (ЭДК), или карбонильных соединений, таких как карбонилдиимидазол, или 1,2-оксазолийсоединений, таких как 2-этил-5-фенил-1,2-оксазолий-3-сульфат или 2-трет-бутил-5-метил-изоксазолий-перхлорат, или ациламиносоединений, таких как 2-этокси-1-этоксикарбонил-1,2-дигидрохинолин, или ангидрид пропанфосфоновой кислоты, или изобутилхлорформиат, или бис-(2-оксо-3-оксазолидинил)фосфорилхлорид или бензотриазолилокситри-(диметиламино)фосфонийгексафторфосфат, и в качестве оснований карбонатов щелочных металлов, например, карбонатов натрия или калия, или гидрокарбонатов натрия или калия, или органических оснований, таких как триалкиламины, например триэтиламина, N-этилморфолина, N-метилпиперидина или диизопропилэтиламина. Особенно предпочтительным является комбинация ЭДК, N-метил- морфолина и 1-гидроксибензтриазола. В качестве растворителя для образования амидной связи предпочтительным является дихлорметан и ДМФ.

Соединения общей формулы (II), (IIIa), (VI) и (VIII) являются известными или получаются обычными методами (ср. европейские заявки на патент ЕР-А-0725061, ЕР-А-0725064).

Соединения общей формулы (III) являются в большинстве случаев новыми и могут быть получены тем, что в случае, если R⁷ является пиперазином, содержащим остаток NR⁴, соединения общей формулы (XI)

в которой

A, D, Е и G имеют указанные выше значения,

подвергают взаимодействию с соединением общей формулы (XII)

R⁷CO₂H (XII)

в которой

R⁷ имеет указанное выше значение,

при удалении реакционной воды, в случае необходимости, в присутствии кислоты, предпочтительно с ППА, HCl и п-TsOH (ср. также J. Orq. Chem. 1941, 6, 25 ff и Bull. Soc. Chim. Fr. 1991, 128, 255-259)

и, в случае, если R⁷ является алкилом с 1-8 атомами углерода, замещенным морфолиновым остатком, соединение общей формулы (XI) сначала подвергают взаимодействию в инертном растворителе с соединением общей формулы (XIII)

HO-R⁸-CO₂H (XIII)

в которой

R⁸ является алкандиилом, содержащим 1-8 атомов углерода, с получением соединения общей формулы (XIV)

в которой А, В, D, G и R⁸ имеют указанные выше значения,

затем замещают гидроксильную группу на галоген, мезилат или тозилат и получают, таким образом, соединение общей формулы (XV)

в которой

R⁸, A, D, Е и G имеют указанные выше значения

и

Z является галогеном, мезилатом или тозилатом,

и полученное соединение подвергают взаимодействию с морфолином

(см. также J. Am. Chem. Sos. 1948, 70, 3406; J. Heferocycl. Chem. 1969, 759-60).

В качестве растворителей для проведения вышеописанного способа являются пригодными обычные органические растворители, которые не претерпевают изменений в реакционных условиях. К таким растворителям относятся предпочтительно эфиры, такие как диэтиловый эфир, диоксан, тетрагидрофуран, диметиловый эфир гликоля, или углеводороды, такие как бензол, толуол, ксилол, гексан, циклогексан или нефтяные фракции, или галогенуглеводороды, такие как дихлорметан, трихлорметан, тетрахлорметан, дихлорэтилен, трихлорэтилен или хлорбензол, или этилацетат, триэтиламин, пиридин, диметилсульфоксид, диметилформамид, гексаметилтриамид фосфорной кислоты, ацетонитрил, ацетон или нитрометан. Также возможно использование смеси названных растворителей. Предпочтительным является дихлорметан, тетрагидрофуран и диметилформамид.

Вышеописанный способ можно проводить в присутствии основания, в качестве которого могут использоваться в общем неорганические или органические основания. К ним относятся предпочтительно гидроксиды щелочных металлов, такие как, например, гидроксид калия или гидроксид натрия, гидроксиды щелочноземельных металлов, такой как, например, гидроксид бария, карбонаты щелочных металлов, такие как карбонат натрия, карбонат калия или карбонат цезия, карбонаты щелочноземельных металлов, такой как карбонат кальция, или алкоголяты щелочных или щелочноземельных металлов, такие как метилат натрия или калия, этилат натрия или калия или трет-бутилат калия, или органические амины (триалкил(С₁-С₆)амины), такой как триэтиламин, или гетероциклические соединения, такие как 1,4-диазабицикло[2,2,2]октан (ДАБКО), 1,8-диазабицикло[5,4,0]ундец-7-ен (ДБУ), пиридин, диаминопиридин, метилпиперидин или морфолин. Возможно также использование в качестве оснований щелочных металлов, такого как натрий, или гидридов щелочных металлов, такого как гидрид натрия. Предпочтительными являются гидрид натрия, карбонат калия, триэтиламин, триметиламин, пиридин, трет-бутилат калия, ДБУ или ДАБКО.

Основание используют в основном в количестве от 0,05 моля до 10 молей, предпочтительно от 1 моля до 2 молей в расчете на 1 моль соединения формулы (XV).

Процесс проводят в основном в температурном интервале от-50°С до +100°С, предпочтительно от -30°С до +60°С, а также при нормальном давлении. Возможно также проведение процесса при избыточном давлении или при пониженном давлении (например, в области от 0,5 до 5 бар).

Соединения общей формулы (XI), (XII), (XIII) и (XVI) являются известными или получаются обычными методами.

Соединения общей формулы (XIV) и (XV) являются частично новыми и могут быть получены, например, как описано выше.

Дальнейшим объектом изобретения являются соединения общей формулы (XVI)

где A, D, Е и G одинаковы или различны и означают группу СН или атом азота,

R⁹ означает алкил с 1-8 атомами углерода, замещенный морфолиновым остатком, или пиперазин, содержащий остаток формулы NR⁴, где R⁴ означает алкил, содержащий 1-6 атомов углерода,

Т означает водород или алкил, содержащий 1-4 атома углерода,

или

R⁹ означает галоген и Т означает алкил, содержащий 1-4 атома углерода.

Соединения данного изобретения, которые ингибируют поглощение аденозина, при пероральном и внутривенном введении могут использоваться для профилактики и лечения черепно-мозговой ишемии, кровоизлияния в мозг, реперфузионных повреждений, травм головного мозга, отеков, судорог, эпилепсии, апноэ, остановки сердца, синдрома Рейе, церебрального тромбоза, эмболии, опухолей, кровоизлияний, энцефаломиелита, гидроэнцефалита, повреждений спинного мозга, послеоперационных повреждений головного мозга, повреждений сетчатки или зрительного нерва после глаукомы, ишемии, гипоксии, опухоли или травмы, а также при лечении шизофрении, нарушения сна и боли.

На основе улучшенной растворимости в воде соединения данного изобретения особенно хорошо подходят для внутривенного введения.

Тестируемые системы

1. Определение растворимости

Для определения растворимости используется метод осаждения:

10 мг тестируемого соединения полностью растворяют в 50 мкл ДМСО (исходный раствор). 20 мкл полученного раствора помещают в 2000 мкл физиологического раствора. Этот раствор поддерживают во взвешенном состоянии встряхиванием при температуре 25°С в термосмесителе Comfort (фирмы Eppendorf) при 1400 об/мин в течение 24 часов.

Выпавшую часть тестируемого соединения отделяют центрифугированием с помощью биофуги 15 фирмы Heraeus в течение 5 минут при 14000 об/мин. 1300 мкл надсадочной жидкости снова центрифугируют на микрофуге фирмы Beckmann при 45000 об/мин=125000g.

10 мкл полученной центрифугированной надсадочной жидкости разбавляют 1000 мкл ДМСО, и этот раствор измеряют с помощью ВЭЖХ (фирмы Hewlett Packard 1090, метод: градиент от 100% физиологического раствора с фосфатным буфером, рН=4, в течение 15 мин до 10% буфера/90% ацетонитрила, колонка: RP18; рН=4 физиологического раствора с фосфатным буфером поддерживается для физиологического раствора, который устанавливается фосфатным буфером до рН=4).

Измеренная площадь пика, полученного ВЭЖХ, пересчитывается с помощью эталонов на концентрацию вещества. Для получения эталонов 20 мкп исходного раствора последовательно разбавляют ДМСО таким образом, чтобы получить 5 концентраций от 2,5 до 2000 мг/л. Эти растворы также анализируют с помощью ВЭЖХ (метод s.o.) и получают площади пиков для каждой концентрации.

Растворимость, определенная этим методом, для соединений примеров 3 и 5 составляет 176 и 16 мг/л, соответственно.

2. Связывание соединений данного изобретения с белком-переносчиком аденозина из коры головного мозга теленка

Способность веществ оказывать влияние на аденозин-поглощающую систему изучается, во-первых, путем определения сродства связи выбранных веществ к белку-переносчику аденозина ЦНС и, во-вторых, путем определения ингибирующего действия веществ на функциональное поглощение аденозина.

Для теста связывания используется препарат мембраны коры головного мозга теленка, который является моделью релевантного переносчика аденозина. Определяют сродство связи (К_i-значение) измерением вытеснения тестируемым соединением специфического, радиоактивно-меченного лиганда [нитробензилтиоинозин (НБТИ)] из соответствующего участка связи. Речь идет о релевантном для истинного процесса переноски участке связи на белке-переносчике. Связь тестируемого соединения в этих опытах приводит к высвобождению связанного радиоактивного НБТИ, которое можно измерить, что делает возможным определение значения K_i (J. Neurochemistry 1982, 39, 184-191).

Соединения примеров 3 и 5 ингибируют связь НБТИ с К_i=2 нМ.

3. Ингибирование поглощения аденозина в синаптосомах телячьей коры соединениями данного изобретения

Для эффективного испытания поглощения аденозина используют препарат синаптосом из коры головного мозга теленка, который является моделью соответствующего переносчика аденозина. Синаптосомы являются свободной от клеток, функционально активной везикулой, которая получается из корковой ткани с применением срезающего усилия, и, кроме того, обладают свойствами интактных синаптических концевых петелек. Ингибирующая активность (значение IC₅₀) определяется измерением ингибирования поглощения специфического, радиоактивно-меченного «субстрата» аденозина в синаптосомах (J. Neurochemistry 1990, 55, 541-550).

Соединения примеров 3 и 5 ингибируют поглощение аденозина в синаптосомах с IС₅₀= 8 нМ и14 нМ, соответственно.

Нейропротекторное действие соединений данного изобретения определяется на животной модели транзиторной окклюзии средней церебральной артерии (tMCA-O) и субдуральной гематомы (SDN).

4. tMCA-O

На этой модели грызунов (крысы) имитируют патологическую физиологию и церебральную патологию апоплексии или остановки снабжения кровью (эмболизация, тромбоз, спазм сосудов, остановка сердца, быстрое или драматическое снижение кровяного давления, высокая потеря крови, и.т.д.) с последующей рециркуляцией у человека (модификация по: J. Cereb. Blood Flow Metab. 1997, 17, 1066-1073).

Под общим наркозом (ингаляционный наркоз изофлураном) сбривают волосы под передней областью шеи, фиксируют голову в положении лежа на спине и вдоль по центру вскрывают трахею. Рассеченная вдоль правая боковая мускулатура отслаивается и вместе с кожей оттягивается на сторону (захват раны) так, чтобы была отчетливо видна общая сонная артерия. Общая сонная артерия свободно препарируется в направлении головы до тех пор, пока она не разделится на внутреннюю сонную артерию и наружную сонную артерию. С помощью хирургического шовного материала связывают общую сонную артерию (около области грудной клетки) и наружную сонную артерию. Внутренняя сонная артерия временно перекрывается микрозажимом. Через отверстие в общей сонной артерии вводят, через общую сонную артерию, затем, после снятия микрозажима, через внутреннюю сонную артерию, нейлоновый монофиламент с округленным кончиком и силиконовым цилиндром длиной 1 см так, чтобы перекрыть среднюю церебральную артерию (Arteria cerebri media). Двумя временными нитяными петлями фиксируют филамент во внутренней сонной артерии. По истечении часа филамент вытягивают и внутреннюю сонную артерию, а также общую сонную артерию над отверстием перевязывают. Поток крови следует через контралатеральные кровеносные сосуды. Введение веществ начинают непосредственно с началом реперфузии. Операционная рана хирургически обрабатывается. Во время операции и применения веществ (вливания) температура тела поддерживается постоянной с помощью тепловой пластины.

После двух дней послеоперационного времени выживания определяется объем мозгового инфаркта с помощью компьютерного контроля картины анализируемой системы на заранее заготовленной серии гистологических срезов головного мозга. Объем инфаркта оценивается дифференцировано в корковом слое, полосатом теле, гиппокампе и других областях головного мозга.

В дозе 0,001 мг/(кг*ч) (внутривенное вливание) соединения примеров 3 и 5 снижают объем инфаркта на 81 и 91%, соответственно, по сравнению с контролем.

5. Субдуральная гематома у крыс (SDN)

На этой модели грызунов (крысы) имитируют патофизиологию и церебральную патологию тупой черепно-мозговой травмы с субдуральным кровотечением и развитием субдуральной гематомы у человека (Neurosurgery 1990, 27, 433-439). При анестезии животным инъецируют одностороннюю собственную субдуральную кровь. Гематома вызывает инфаркт. Введение веществ осуществляют по различным временным схемам и при различных методах введения (внутривенно, внутрибрюшинно). Определение объема инфаркта осуществляют, как описано, на модели транзиторной локальной ишемии у крыс (tMCA-O).

В дозе 0,001 мг/(кг*ч) (внутривенное введение) примеры 3 и 5 снижают объем инфаркта на 30 и 45%, соответственно, в сравнении с контрольными животными.

Новые вещества могут быть переведены известными методами в обычные препаративные формы, такие как таблетки, драже, пилюли, грануляты, аэрозоли, сиропы, эмульсии, суспензии и растворы с применением инертных нетоксичных фармацевтически приемлемых носителей или растворителей. При этом терапевтически действующее вещество должно находиться в концентрации от около 0,0001 до 90% масс., предпочтительно 0,0001 до 1,0% масс. от общего состава, т.е. в количестве, которое достаточно, чтобы достичь указанного дозированного объема.

Препаративную форму получают, например, смешиванием активнодействующего вещества с растворителем и/или носителем, в случае необходимости, с применением эмульгаторов и/или диспергаторов, причем в случае использования воды в качестве растворителя, в случае необходимости, могут применяться органические растворители в качестве вспомогательных растворителей.

Введение осуществляют обычным способом, предпочтительно перорально, чрезкожно или парентерально, в особенности, подъязычно или внутривенно.

В общем для достижения эффективного результата предпочтительно при внутривенном введении давать от около 0,00001 до 10 мг/кг, более предпочтительно от около 0,0001 до 1 мг/кг веса тела.

Несмотря на это, в случае необходимости, если потребуется, можно отклониться от указанных количеств, а именно, в зависимости от веса тела или вида и способа введения, от индивидуального восприятия медикамента, вида препаративной формы и момента или интервала, с которым осуществляется применение. Так, в некоторых случаях, может оказаться достаточным обходиться меньшим чем вышеназванное минимальное количество, в то время как в других случаях необходимо превысить указанные выше границы. В случае применения больших количеств может быть рекомендовано последние разделять на несколько разовых доз в день.

Сокращения

ДМФ N,N-диметилформамид

ДМСО диметилсульфоксид

ПФК полифосфорная кислота

ТФУ трифторуксусная кислота

ТГФ тетрагидрофуран

Исходные соединения

Пример 1А

(1R,2R)-2-(4-метил-фенил)-циклогексан-1-карбоновая кислота

Рацемическую (1R*,2R*)-2-(4-метил-фенил)-циклогексан-1-карбоновую кислоту получают аналогично способу, описанному в патенте США 5395840, столбец 16. Полученную рацемическую смесь делят на энантиомеры с использованием следующей методики:

Рацемическую кислоту (415 г; 1,9 моля) и триэтиламин (96,2 г; 0,95 моля; 131,8 мл) суспендируют в смеси из ТГФ (2,7 л) и воды (5,3 л). S-(-)-Фенетиламин (115,2 г; 0,95 моля) прибавляют по каплям при температуре 60°С, при этом выпадает осадок. Смесь перемешивают в течение 2 часов при температуре 60°С и затем охлаждают на ледяной бане. Этот осадок отсасывают и получают в преобладающем количестве (1S,2S)-энантиомер фенетиламиновой соли. Фильтрат подкисляют концентрированной HCl и дважды экстрагируют дихлорметаном. Объединенные экстракты сушат сульфатом натрия и упаривают. Выход: 202,4 г (28%) энантиомерной смеси, обогащенной(1R,2R)-изомером.

Эту смесь обрабатывают, как описано выше R-(+)-фенетиламином, чтобы осадить желаемый энантиомер в виде соли. Бесцветные кристаллы отфильтровывают и перекристаллизовывают из смеси ацетонитрил/метанол (6:1). Рентгеноструктурный анализ этого кристалла дает (1R,2R)-конфигурацию. Выход 136,9 г (46%). После обработки (см.