Способ нормализации иммунобиохимического гомеостаза коров в предродовом и послеродовом периодах

Способ нормализации иммунобиохимического гомеостаза коров в предродовом и послеродовом периодах

Реферат

Изобретение относится к ветеринарии, касается способа нормализации иммунобиохимического гомеостаза у коров во время беременности и в послеродовом периоде и может быть использовано для лечебно-профилактической защиты коров от массовых болезней репродуктивных органов и получения высокорезистентного приплода.

Исследования показывают, что многочисленные стрессы и интенсивная эксплуатация высокопродуктивных коров, как правило, сопровождаются функциональными расстройствами системы органов размножения и их высокой заболеваемостью во время беременности, родов и в послеродовом периоде. По данным ряда авторов, акушерская патология в эти физиологические периоды репродукции может принимать массовый характер и сопровождается снижением воспроизводительной функции. Так, родовые и послеродовые осложнения у коров снижают их оплодотворяемость на 17,7-26,0%, увеличивают продолжительность бесплодия на 42 дня, уменьшают выход приплода на 12-18% (1).

В развитии акушерской патологии существенную роль играет состояние иммунобиохимического гомеостаза, в частности клеточного и гуморального иммунитета и естественной резистентности. Так, отмечено, что накануне и в день отела у коров снижается количество Т- и В-лимфоцитов, что особенно заметно при патологическом отеле, после которого в послеродовом периоде их уровень восстанавливается медленно (2).

Установлено, что в основе этиопатогенеза массовой акушерской патологии у коров лежит состояние стрессовой дезадаптации, сопровождающееся гиперактивностью процессов перекисного (свободно-радикального) окисления липидов (ПОЛ), снижением активности системы антиоксидантной защиты (АОЗ) и иммунологической резистентности, связанным с иммунодепрессивным действием продуктов ПОЛ. Период запуска и отел, являсь мощными стрессовыми факторами для организма стельных коров, сопровождаются активацией процессов ПОЛ и снижением активности системы АОЗ. Уровень токсических продуктов ПОЛ (диеновые конъюгаты, кетодиены, малоновый альдегид) в предродовом периоде характеризуются высокими показателями, а активность системы АОЗ, как в ферментативном (каталаза, глутатион-пероксидаза), так и в неферментативном (витамины А, Е, С) звене - низкими. После отела коров показатели продуктов ПОЛ возрастают еще более резко, а показатели системы АОЗ снижаются.

В настоящее время избыточное накопление в организме продуктов ПОЛ рассматривается как один из ведущих универсальных механизмов повреждения клетки вследствие нарушения структурно-функциональной организации биомембран.

Следовательно, избыточное накопление в организме токсических продуктов ПОЛ в предродовом и раннем послеродовом периодах является основой развития цепи структурно-метаболических изменений, способствующих возникновению и развитию послеродового эндометрита (нарушение ионного равновесия между клеткой и внешней средой нарушает механизмы возбуждения и сокращения миометрия, а повреждение эндотелиальных клеток и деполимеризация гиалуроновой кислоты снижает их защитную роль и создает условия для деятельности микрофлоры).

Значение состояния иммунобиохимического гомеостаза в качестве патогенетического фактора акушерской патологии коров подтверждается низкой эффективностью способов профилактики с применением лекарственных препаратов без учета иммунобиохимических процессов (3).

Коррекцию иммунобиохимического гомеостаза проводят с применением биологически активных веществ, например адаптогенов, антистрессовых средств, антиоксидантов. Из антиоксидантов особенно широко применяют неорганические и органические соединения селена и препараты на их основе в качестве ультрамикродобавок к кормам (4). Так, известен способ профилактики послеродовых заболеваний у коров, включающий двукратное за 40-50 дней до и через месяц после первой инъекции внутримышечное введение 10 мл 0,5%-ного раствора селена с одновременным введением в рацион комплекса микро- и макроэлементов, что обеспечивает повышение резистентности организма коров (5). Известен также способ коррекции патологий обмена веществ и лечения и профилактики их последствий, включающий использование универсального комплексного препарата, содержащего селенит натрия, витамин Е, янтарную кислоту, сульфат цинка и фармазин, который вводят внутримышечно за 45, 30, 15 дней до родов и в день родов (6). Однако известные способы при сложности их осуществления не обеспечивают нормализацию иммунобиохимического гомеостаза в полном объеме, воздействуя на его отдельные показатели без учета механизмов нарушения метаболизма в зависимости от физиологического состояния животного, важнейшим из которых является нарастание напряженности в метаболических процессах, сопровождающееся накоплением токсических продуктов ПОЛ в предродовом периоде и значительное повышение их уровня после отела. В этих физиологических периодах репродукции происходит интенсивное использование пластических соединений тканей, в первую очередь жира, в дальнейшем - структурных липидов (6). Мобилизация жирных кислот вследствие нарушения утилизации в сопряженных реакциях их окисления с углеводами приводит к поступлению в кровь недоокисленных соединений, что на фоне ослабления системы АОЗ из-за многочисленных стрессов и интенсивной эксплуатации создает благоприятные условия для активации неферментативного окисления липидов и как результат - к угнетению клеточных и гуморальных факторов иммунитета.

Цель изобретения - высокоэффективный и экологически безопасный способ нормализации иммунобиохимического гомеостаза у коров в предродовом и послеродовом периодах.

Поставленная цель достигается комплексом оптимально подобранных биологически активных средств с антиоксидантной активностью и параметрами их применения по оригинальной схеме.

Способ осуществляется следующим образом.

Коровам за 20-25 дней до отела однократно внутримышечно вводят 0,5% раствор селенита натрия в дозе 10 мл, двукратно до и двукратно после отела с интервалом 10 дней - тетравит в дозе 10 мл с содержанием в 1 мл 50000 ME витамина А, 25000 ME витамина D, 20 мг витамина Е и 5 мг витамина F, в течение 20-25 дней до и после отела внутрь янтарную кислоту в дозе 1,0 г.

Осуществимость способа определялась в научно-производственном опыте на коровах черно-пестрой породы молочной продуктивностью 3500-3800 кг в условиях одного из хозяйств Нижегородской области с высокой (более 90%) заболеваемостью репродуктивных органов после отела.

Перед проведением опыта и на 2-3 день после отела от 10 коров каждой группы брали пробы крови для оценки состояния иммунобиохимического гомеостаза по показателям гемоглобина, эритроцитов, общего белка сыворотки крови и белковых фракций (определялись общепринятыми методами), глюкозы (определялись орто-толуидиновым методом), общих липидов (определялись по методу Криницкого в модификации Волгина /1969/), продуктов ПОЛ - диеновых конъюгатов и кетодиенов (определялись по методу Плацерта /1976/), малонового диальдегида (определялись в реакции с тиобарбитуровой кислотой), лизоцимной активности сыворотки крови (определялись по методу В.Г.Дорофейчук), бактерицидной активности сыворотки крови (определялись по методу О.В.Смирновой и Т.А.Кузьминой), фагоцитарной активности нейтрофилов крови (определялись по методу B.C.Гостева), активности каталазы (определялись в реакции с молибдатом аммония), витамина А /ретинола/ (определялись в реакции с треххлористой сурьмой), витамина Е /токоферола/ (определялись по методу Биери в модификации Р.Ш.Киселевич, С.И.Скварко /1972/).

Сущность способа поясняется примерами.

Пример 1. Для изучения влияния различных биологически активных средств с антиоксидантной активностью (селенита натрия в виде 0,5% раствора, тетравита и янтарной кислоты) на процессы ПОЛ и состояние иммунобиохимического гомеостаза по принципу аналогов формировали 4 группы глубокостельных коров по 10 голов в каждой. Коровам первой опытной группы за 20-25 дней до отела однократно внутримышечно вводили 0,5% раствор селенита натрия в дозе 10 мл, коровам второй опытной группы в течение 20-25 дней до и после отела давали внутрь янтарную кислоту в дозе 1,0 г, коровам третьей опытной группы за 20-25 дней до и в первые 20 дней после отела внутримышечно вводили тетравит с интервалом 10 дней. Коровам четвертой группы препаратов не применяли, они служили контролем. Результаты исследований приведены в таблицах 1 и 2.

Таблица 1Влияние различных антиоксидантов на показатели продуктов ПОЛ и системы АОЗ у коров
Показатели	Группы коров
1-я, n=10 гол.(селенит натрия)	2-я, n=10 гол. (янтарная кислота)	3-я, n=10 гол. (тетравит)	4-я, n=10 гол. (без препаратов)
М±m	±в %	M±m	±в %	M±m	±в %	M±m	±в %
Диеновые конъюгаты, ед. А/мл		+16,7		+8,7		33,3		+63,6
Кетодиены, ед. А/мл		+18,2		+12,7		+54,6		+75,0
Малоновый диальдегид, мкмоль/л		+1,5		+1,5		+9,9		+32,4
Каталаза, Мкат/л		-10,2		-15,4		-18,2		-49,2
Витамин А, Мкмоль/л		-32,6		-31,7		-12,6		-57,0
Витамин Е, Мкмоль/л		-26,5		-24,6		-18,4		-45,1
Примечание: в числителе - показатели за 20-25 дней до отелав знаменателе - показатели на 2-3 день после отела

Таблица 2Влияние различных антиоксидантов на состояние иммунобиохимического гомеостаза коров
Показатели	Группы коров
1-я, n=10 гол (селенит натрия)	2-я, n=10 гол (янтарная кислота)	3-я, n=10 гол (тетравит)	4-я, n=10 гол (без препаратов)
М±m	±в %	M±m	±в %	M±m	±в %M	±m	±в %
Гемоглобин, г/л		+20,8		+19,5		+7,45		+2,4
Эритроциты, 1012/л		+9,4		+9,3		+9,6		+1,9
Общий белок сыворотки крови, г/л		+9,3		+6,5		+5,9		+1,1
Гаммаглобулины, %		+18,3		+21,2		+14,9		-12,0
Глюкоза, ммоль/л		+20,5		+20,7		-21,4		-47,4
Общие липиды, г/л		-13,7		-12,5		-13,3		+4,2
Лизоцимная активность, %		+21,9		+27,3		+17,7		-42,9
Бактерицидная активность, %		+14,8		+13,4		+13,9		-7,3
Фагоцитарная активность нейтрофилов, %		+8,0		+7,2		+9,8		-15,0
Примечание: в числителе - показатели за 20-25 дней до отелав знаменателе - показатели на 2-3 день после отела

Показатели продуктов ПОЛ - диеновые конъюгаты, кетодиены и малоновый диальдегид - у коров за 20-25 дней до отела характеризовались высокими уровнями, превышавшими физиологическую норму для данного периода в 1,59-1,74, 1,08-1,1 и 4,49-4,64 раза соответственно. Показатели системы АОЗ были снижены как в неферментативном (витамины А и Е), так и в ферментативном (каталаза) звене. На 2-3 день после отела показатели продуктов ПОЛ - диеновые конъюгаты, кетодиены и малоновый диальдегид - значительно повысились и превысили физиологическую норму для данного периода в 1,2-1,8, 1,1-1,29 и 2,08-2,73 раза соответственно, а показатели системы АОЗ напротив понизились (таблица 1). В зависимости от примененных средств меньше всего показатели продуктов ПОЛ повышались в следующей последовательности: вторая группа - янтарная кислота, первая группа - селенит натрия, третья группа - тетравит, что свидетельствовало о снижении интенсивности процессов ПОЛ под влиянием испытанных средств.

Состояние иммунобиохимического гомеостаза у коров за 20-25 дней до отела характеризовалось снижением ряда показателей ниже уровня физиологической нормы - содержание гемоглобина на 3,3-5,6%, количество эритроцитов на 10-13%, гамма-глобулинов на 4,4-8,8%, что указывало на наличие гипоксии и снижение иммунобиологической резистентности, а содержание глюкозы до уровня нижней границы физиологической нормы - на снижение интенсивности процессов гликолиза и биоэнергетических процессов. Установлен повышенный уровень общих липидов вследствие нарушения метаболизма липоидных соединений, что может привести к расстройству синтеза стероидных гормонов и нарушению инволюционных процессов репродуктивных органов после отела. Низкие показатели лизоцимной, бактерицидной активности сыворотки крови и фагоцитарной активности нейтрофилов крови свидетельствовали о снижении естественной резистентности сухостойных коров. После отела у коров контрольной группы отмечено резкое падение показателей естественной резистентности и глюкозы. У коров опытных групп проявилась тенденция к нормализации иммунобиохимического гомеостаза, о чем свидетельствовало повышение основных показателей - содержание гемоглобина, количество эритроцитов, содержание общего белка сыворотки крови, количество гамма-глобулинов, уровень глюкозы, лизоцимная, бактерицидная активность сыворотки крови и фагоцитарная активность нейтрофилов крови (таблица 2).

Пример 2. Для изучения влияния различных сочетаний биологически активных средств с антиоксидантной активностью (0,5% раствор селенита натрия, тетравита и янтарной кислоты) и параметров их применения на процессы ПОЛ и состояние иммунобиохимического гомеостаза по принципу аналогов формировали 4 группы глубокостельных коров. Коровам первой группы (32 гол.) за 20-25 дней до отела применяли однократную внутримышечную инъекцию 0,5% раствора селенита натрия в дозе 10 мл, внутримышечные инъекции тетравита в дозе 10 мл двукратно с интервалом 10 дней до и после отела и в течение 20-25 дней до и после отела внутрь янтарную кислоту в дозе 1,0 г. Коровам второй группы (27 гол.) за 20-25 дней до отела применяли однократную внутримышечную инъекцию 0,5% раствора селенита натрия в дозе 10 мл, внутримышечные инъекции тетравита в дозе 10 мл двукратно с интервалом 10 дней до и после отела. Коровам третьей группы (10 гол.) препараты не применяли, они служили контролем. Результаты представлены в таблицах 3 и 4.

Сочетанное применение антиоксидантов обеспечивало нормализацию иммунобиохимического гомеостаза (при этом сочетанное применение селенита натрия и тетравита - до уровня нижней границы физиологической нормы, сочетанное применение селенита натрия, тетравита и янтарной кислоты - до уровня средней границы физиологической нормы) вследствие снижения уровней продуктов ПОЛ и активации системы АОЗ (таблицы 3 и 4).

Таблица 3Влияние сочетаний различных антиоксидантов на показатели продуктов ПОЛ и системы АОЗ у коров
Показатели	Группы животных
1-я, n=33 гол. (селенит натрия + тетравит + янтарная кислота)	2-я, n=27 гол. (селенит натрия + тетравит)	3-я, n=10 гол. (без препаратов)
М±m	±в %	M±m	±в %	M±m	±в %
Диеновые конъюгаты, ед. А/мл		-46,6		+9,7		+40,7
Кетодиены, ед. А/мл		-20,7		+7,0		+61,8
Малоновый диальдегид, мкмоль/л		-20,4		+2,2		+27,9
Каталаза, мкат/л		+6,5		+3,7		-29,4
Витамин А, мкмоль/л		+12,3		+5,0		--33,5
Витамин Е, мкмоль/л		+10,7		+1,4		-26,0
Примечание: в числителе - показатели за 20-25 дней до отелав знаменателе - показатели на 2-3 день после отела

Таблица 4

Влияние сочетаний различных антиоксидантов на состояние иммунобиохимического гомеостаза коров

Показатели	Группы животных
1-я, n=33 гол (селенит натрия + тетравит + янтарная кислота)	2-я, n=27 гол (селенит натрия + тетравит)	3-я, n=10 гол (без препаратов)
М±m	±в %	M±m	±в %	M±m	±в %
Гемоглобин, г/л		+13,5		+11,5		+3,1
Эритроциты, 1012/л		+15,4		+10,9		+1,9
Общий белок сыворотки крови, г/л		+7,1		+4,4		-2,3
Гамма-глобулины, %		+32,5		+12,7		-7,2
Глюкоза, ммоль/л		+16,3		+14,7		-22,6
Общие липиды, г/л		-18,0		-14,0		+3,2
Лизоцимная активность, %		+38,0		+22,5		-41,5
Бактерицидная активность, %		+23,6		+21,0		-5,8
Фагоцитарная активность нейтрофилов, %		+16,4		+9,6		-10,7
Примечание: в числителе - показатели за 20-25 дней до отелав знаменателе - показатели на 2-3 день после отела

Полученные данные подтвердили достижение заявленного технического результата - нормализация иммунобиохимического гомеостаза сочетанным применением селенита натрия, тетравита и янтарной кислоты по заявленной схеме. При сравнении динамики изменения показателей токсических продуктов ПОЛ, системы АОЗ и иммунобиохимического гомеостаза под влиянием отдельных антиоксидантов или их сочетаний наблюдали положительную тенденцию, которая выражалась в снижении показателей продуктов ПОЛ и повышении показателей системы АОЗ и иммунобиохимического гомеостаза. Однако если антиоксиданты преимущественно повышали отдельные показатели иммунобиохимического гомеостаза и снижали показатели роста уровня продуктов ПОЛ, то их сочетание при менее выраженном влиянии на отдельные показатели иммунобиохимического гомеостаза обеспечивало резкое снижение уровня токсических продуктов ПОЛ и как результат - повышение активности системы АОЗ и показателей естественной резистентности. Повышение уровня естественной резистентности по основным показателям до физиологической нормы создает необходимую основу для эффективной лечебно-профилактической защиты коров от массовых болезней репродуктивных органов и получения высокорезистентного приплода.

Источники информации, принятые во внимание:

1. Нежданов А.Г., Дащукаева К.Г. Фетоплацентарная недостаточность и ее профилактика у коров. //Ветеринария. - 1999. - №7. - С.6-11.

2. Яблонский В.А., Пригара В.В. Иммунный статус коров при нормальном и патологическом отелах //Ветеринария. - 1984. - №8. - С.50-51.

3. Ерохин А.С., Федорченко О.А., Кувшинов B.C. Профилактика нарушений воспроизводительной функции коров //Ветеринария. - 1998. - №3. - С.37-38.

4. Problems on selenium in animal nutrition. Norw. J. agr. Sci. - 1993. - Suppl. 11. - P.1-216.

5. Патент РФ №2201221 С2, 2003 г.

6. Заявка РФ №2001115497 А, опуб. 2003.06.20.

Способ нормализации иммунобиохимического гомеостаза коров в предродовом и послеродовом периодах, включающий сочетанное применение 0,5% раствора селенита натрия и активнодействующих средств, отличающийся тем, что в качестве активнодействующих средств используют тетравит и янтарную кислоту по следующей схеме: коровам за 20-25 дней до отела однократно внутримышечно вводят 0,5% раствор селенита натрия в дозе 10 мл, двукратно до и двукратно после отела с интервалом 10 дней - тетравит в дозе 10 мл с содержанием в 1 мл 50000 ME витамина А, 25000 ME витамина D, 20 мг витамина Е и 5 мг витамина F в течение 20-25 дней до и после отела внутрь янтарную кислоту в дозе 1,0 г.