Вакцина для иммунопрофилактики и иммунотерапии заболеваний человека и животных, вызванных патогенными и условно-патогенными грамотрицательными микроорганизмами кишечной группы и их экзотоксинами, и способ ее получения (варианты), иммуноглобулиновый препарат (варианты) и способ его получения, иммунобиологический препарат, поликомпонентная вакцина

Вакцина для иммунопрофилактики и иммунотерапии заболеваний человека и животных, вызванных патогенными и условно-патогенными грамотрицательными микроорганизмами кишечной группы и их экзотоксинами, и способ ее получения (варианты), иммуноглобулиновый препарат (варианты) и способ его получения, иммунобиологический препарат, поликомпонентная вакцина

Реферат

Группа изобретений относится к биотехнологии, медицине, ветеринарии и может найти широкое использование при производстве вакцин против патогенных и условно-патогенных грамотрицательных микроорганизмов кишечной группы, иммуноглобулиновых и иммунобиологических препаратов, при лечении, при профилактике, а также при производстве пищевых продуктов, кормов для животных и биологически активных добавок.

Известно, что в основе патогенеза диарей, сопровождающих течение колиинфекции, дизентерии, сальмонеллезов, а также диарей, вызываемых протеем и другими грамотрицатсльными микроорганизмами кишечной группы, лежит воздействие выделяемых возбудителями перечисленных инфекций экзотоксинов (нейротоксинов), обладающих энтеротоксической активностью и имеющих иммунохимическое родство по термолабильному антигену между собой и с холерогеном. Различия в патогенетическом проявлении данных заболеваний во многом зависят от уровня выделения экзотоксинов этими микроорганизмами (Габидуллин З.Г., Жукова С.Л., Езепчук Ю.В., Бондаренко В.М. //ЖМЭИ. - 1989. - N12. - с.14-16; Джавец Э., Мельник Дж.Л., Эйдельберг Э.А. Руководство по медицинской микробиологии. Пер. с англ. - М.: Медицина, 1982. - т.2. - 384 с.; Иванов Н.Р., Ермолов В.И. Иммунные препараты молока и их применение при острых кишечных инфекциях у детей. - Саратов: Изд-во Саратовского университета, 1985. - 120 с.; Камзолкина Н.Б., Караваева Л.Т., Джапаридзе М.Н. Профилактика особо опасных инфекций. - М., 1977. - с.51; Коротаев А.И., Бабичев С.А. Медицинская микробиология, иммунология и вирусология. - С.-Петербург: Специальная литература. - 1998. - 592 с.; Медицинская микробиология. /Под ред. А.М.Королюка и В.Б.Сбойчакова. - С.-Петербург. - 1999. - ч.1. - 272 с.; Федоров Ю.Н.. Брылин А.П., Досталева М.И. //Сельскохозяйственная биология. - 1988. - N5. - с.117-124; Acres S. //J.Dairy Sci. - 1985. - vol.68. - N1. - p.229-256; Barber C., Eyian E., Keyelar Y. //Rev. Immunol. - 1969. - vol.33. - p.101; Climents J., Finkelstein R. //Infect. Immun. - 1978. - vol.22. - N3. - p.709-713; Mulezyh М., Adamus G., Witnowska D., Romanowska E. //Arch.Immunol.Ther.Exp. - 1981. - vol.29. - p.85; Mulles W., Schlecht S., Westphal O. // Zbl. Bakt.Hyg.I.Abt.Orig.A. - 1980. - vol.64. - p.248; O,Brien A.D., Chen M.E., Holmes R.K. ct al. //Lancet. - 1984. - vol.14. - p.77-78; Супотницкий М.В. - Микроорганизмы, токсины и эпидемии. - М.: Вузовская книга. - 2000. - 376 с.).

Экспериментально доказано, что иммунитет против энтеропатогенной кишечной палочки, шигелл и других грамотрицательных микроорганизмов во многом определяется наличием антитоксических антител, в первую очередь, к термолабильному компоненту экзотоксина (Вартанян Ю.П., Северцева М.К., Станиславский Е.С.// ЖМЭИ. - 1980. - N8. - с.87-90; Emody L., Ketyi I., Kuch В., Pacsa S. //Acta Sci Hung. - 1979. - vol.26. - N3. - p.223-241; Klipstein F., Engert F., Sort H. //Infect. Immun. - 1980. - vol.28. - N1. - p.163-170). Степень выраженности антитоксического иммунитета зависит от многих причин, в частности от иммуногенности анатоксинов. Например, экзотоксины шигелл разных видов иммуногенетически родственны, но только экзотоксин S.dysenteriae 1 обладает наиболее сильными цитотоксическими свойствами, а полученный из него анатоксин - выраженной иммуногенностью. С одной стороны, это связано с тем, что экзотоксин вида S.dysenteriae (Шига-токсин - старое, но до сих пор используемое название) обладает более высоким молекулярным весом, с другой стороны, продуцируемые S.Sonnei и S.Flexneri экзотоксины вырабатываются в 1000 и более раз меньшем количестве. Поэтому как перекрестно реагирующие, так и специфические антитела более выражены после вакцинации животных Шига-анатоксином (Супотницкий М.В. Микроорганизмы, токсины и эпидемии. - М.: Вузовская книга. - 2000. - 376 с.; Голубева И.В., Килессо В.А., Киселева Б.С. и др. Энтеробактерии: руководство для врачей. - М.: Медицина, 1985. - 321 с.; Камзолкина Н.Б., Эпштейн-Литвак Р.В., Кокорина Т.А. //БЭБИМ., - 1971. - N2. - с.70; Тимаков В.Д., Петровская В.Г., Бондаренко В.М. Биологические и генетические характеристики бактерий рода Shigella. - М.: Медицина. - 1980. - 296 с.; Keusch G.T., lacewicz M. //J.Infect.Dis. - 1977. - vol.135. - p.551; O,Brien A.D., Thompson M.K., Gemski P., Doctor B.P. et al. //Infect.Immun. - 1971. - vol.15. - p.796).

Сравнительный иммунохимический анализ корпускулярных антигенов грамотрицательных бактерий кишечной группы, предже всего энтеробактерий, также показывает значительное антигенное родство данных микроорганизмов. Образование хромосомных гибридов между E.Coli и бактериями родов Salmonella и Shigella говорит об очень высокой степени генетической гомологии данных бактерий, что и подтверждает сравнение хромосомных карт. Особо следует отметить родство E.Coli и Shigella. Геномы данных микроорганизмов родственны на 85-90%. Высокая степень подобия геномов обуславливает и высокое сходство антигенных свойств штаммов Shigella и E.Coli, находящее выражение в наличии перекрестных реакций с диагностическими агглютинирующими сыворотками. Важно отметить, что антигенный состав большинства представителей патогенных микроорганизмов кишечной группы человека и животных примерно совпадает (Голубева И.В., Килессо В.А., Киселева Б.С. и др. - Энтеробактерии: руководство для врачей. - М.: Медицина, 1985. - 321 с.; Коротаев A.M., Бабичев С.А. Медицинская микробиология, иммунология и вирусология. - С.-Петербург: Специальная литература. - 1998. - 592 с.; Медицинская микробиология. //Под ред. А.М.Королюка и В.Б.Сбойчакова. - С.-Петербург. - 1999. - ч.1. - 272 с.; Медицинская микробиология. //Под ред. В.И.Покровского и О.К.Поздеева. - М.: ГЭОТАР Медицина, 1999. - 1200 с.; Михайлов Н.В. //Матер. Междунар. Симпоз., посвященного году Л.Пастера. - С.-Петербург, 1995. - с.66; Стейниер Р., Эдельберг Э., Ингрэм Дж. Мир микробов. Пер. с англ. - М.: Мир, 1979. - т.3. - 486 с.).

Большую проблему для медицины представляют зоонозы - инфекции, общие для человека и животных (Макаров В.В., Воробьев А.А. //ЖМЭИ. - 1999. - N4. - с.111-115). До 70% всех диарейных заболеваний детей до 5-летнего возраста имеют пищевую этиологию. Например, заболеваемость сальмонеллезом в некоторых европейских странах достигает 300 случаев на 100 тыс. населения с летальностью 3%. В последние годы во многих развитых странах (США, Канада, Великобритания, Япония и др.) колибактериоз животных находится под пристальным вниманием ветеринарных и медицинских специалистов, а также ВОЗ, так как важную роль в инфекционной патологии человека стали играть эшерихии, вырабатывающие Шига-подобный токсин или веротоксин (VTEC), в частности серовар E.Coli 0157:Н7 (ЕСО). В России ситуация складывается еще более остро (Голубева И.В., Килессо В.А., Киселева Б.С. и др. - Энтеробактерии: руководство для врачей. - М.: Медицина, 1985. - 321 с.; Голутва Н.К., Хазенсон Л.Б., Сафонова Н.В. //Матер.Междунар.Симпоз., посвященного году Пастера. - С.-Петербург. - 1995. - с.53; Куликовский А.В., Панин А.Н., Соснина В.В. //Ветеринария. - 1997. - N3. - с.25-27; Макаров В.В., Воробьев А.А. //ЖМЭИ. - 1999. - N4. - с.111-115; Медицинская микробиология. //Под ред.В.И.Покровского и О.К.Поздеева. - М.: ГЭОТАР Медицина, 1999. - 1200 с.; Сергевнин В.И. //Эпидемиология и инфекционные болезни. - 1974. - N4. - с.32-34; Стейниер Р., Эдельберг Э., Ингрэм Дж. Мир микробов. Пер. с англ. - М.: Мир, 1979. - т.3. - 486 с.; WHO Consultation on Selected Emerging Foodbome Dis. //WHO/CDS/VPH. - 1995; Zoonoses. //WHO Veterinary Public Health Unit. Publications and Documents. - 1995).

Как следует из проведенного анализа, в настоящее время отсутствуют отечественные и импортные вакцины, содержащие шигеллезные анатоксины, кроме того, отечественная промышленность не выпускает шигеллезные вакцины (Медуницын Н.В. Вакцинология. - М., "Триада - Х", 1999, 272 с.).

В более ранних источниках упоминается дизентерийная вакцина из S.Flexneri или S.Sonne и дивакцина из них (Руководство по вакцинному и сывороточному делу. - //Под ред. П.Н.Бургасова. М.: "Медицина", 1978, 440 с.). Однако эти вакцины не нашли применения в практической медицине, т.к. за счет отсутствия в них анатоксина после вакцинации у людей не вырабатываются антитоксические антитела, кроме того, имеет место низкая иммуногенность препаратов.

Таким образом, из уровня техники не известна вакцина и способ ее получения, которая содержала бы шигеллезный анатоксин, а также анатоксины, используемые для лечения и профилактики широкого круга заболеваний, вызываемых условно-патогенными и патогенными грамотрицательными микроорганизмами кишечной группы.

В ветеринарии разработана полиспецифическая гипериммунная сыворотка против рота-, корона-, герпесвирусов и E.Coli (К 99, А 20) для локальной защиты и иммунотерапии смешанных форм диареи новорожденных телят (Патент RU 2043772, 20.09.95; Патент RU 2054289, 20.02.96; Патент RU 2086236, 10.08.97). Данный препарат не обладает антитоксической активностью и не содержит антител к шигеллам.

В США запатентован способ получения иммунного препарата, получаемого из молока и молозива иммунных коров и обладающего активностью к энтеробактериям, патогенных для человека и сельскохозяйственных животных (Патент США N4402938, кл. A 61 K 39/00, 1983; заявка Германии N3924420, кл. A 61 K 35/20, 1991).

В нашей стране во врачебной практике применяются два пероральных иммуноглобулиновых препарата, полученных из иммунного молозива коровы, - так называемые иммунные лактоглобулины (название, утвердившееся в России): против условно-патогенных бактерий и сальмонелл (Медуницын Н.В. Вакцинология. - М., "Триада-Х", 1999, 272 с.; Соболева С.В. //Автореф. дисс. в форме научного доклада... докт.мед.наук. - Ростов-на-Дону, 1991. - 38 с.) и против кишечной палочки и протея (Медуницын Н.В. Вакцинология. - М., "Триада-Х", 1999, 272 с.; Соболева С.В. //Автореф.дисс. в форме научного доклада... докт.мед.наук. - Ростов-на-Дону, 1991. - 38 с.; Соболева С.В., Ермолов В.И., Валенцев В.Е. и др. //Сб. "Актуальные вопросы иммунологии, аллергологии и молекулярной биологии". - Краснодар, 1987. - т.63. - с.119-121; Соболева С.В., Минеева Л.Д., Рабинович В.Д., Федорова Т.А. //Ж. Микробиол. - 1989. - N8. - с.7-12).

Как показал проведенный анализ уровня техники в отношении иммуноглобулиновых препаратов, в литературе отсутствует информация об иммуноглобулиновых препаратах, содержащих антитела к каким-либо токсинам патогенных грамотрицательных микроорганизмов кишечной группы и шигеллам. Все известные иммунные иммуноглобулиновые препараты имеют в своем составе антитела только к клеточной стенке микроорганизмов.

Наиболее близким техническим решением в отношении иммуноглобулинового препарата и способа его получения будет противоколипротейный лактоглобулин, представляющий собой иммуноглобулиновый препарат, получаемый путем иммунизации коров, забора молозива, получения иммунной сыворотки (Иванов Н.Р., Ермолов В.И. Иммунные препараты молока и их применение при острых кишечных инфекциях у детей. Саратов. Изд. Сарат. у-та, 1985, с.35-44). Недостатком данного иммуноглобулинового препарата является невысокая специфическая активность, отсутствие антитоксических антител и антител к шигеллам, что подтверждено экспериментально на живых моделях.

Задачей заявленного изобретения является создание и получение высокоэффективной и низкотоксичной вакцины для иммунопрофилактики и иммунотерапии заболеваний человека и животных, вызванных патогенными и условно-патогенными грамотрицательными микроорганизмами кишечной группы и их экзотоксинами, создание иммуноглобулиновых препаратов, обладающих лечебным и профилактическим эффектами в отношении заболеваний человека и животных, вызванных патогенными и условно-патогенными грамотрицательными микроорганизмами кишечной группы и их экзотоксинами, создание иммунобиологических препаратов, обладающих лечебным и профилактическим эффектами в отношении широкого круга заболеваний внутренних и наружных органов человека и животных, вызванных различными патогенными и условно-патогенными грамотрицательными и грамположительными микроорганизмами и их токсинами, вирусами, грибами, простейшими, гельминтами.

Поставленная задача достигается тем, что для получения вакцины для иммунопрофилактики и иммунотерапии заболеваний человека и животных, вызванных патогенными и условно-патогенными грамотрицательными микроорганизмами кишечной группы и их экзотоксинами, выращивают токсигенные штаммы R-формы S.dysenteriae, производят лизис клеток путем обработки хлороформом, центрифугируют, затем полученный супернатант обрабатывают предельными одноосновными карбоновыми кислотами и их производными, например трихлоруксусной кислотой, каприловой кислотой до рН 3,0-5,0, центрифугируют с получением осадка, содержащего корпускулярные антигены и шигеллезный экзотоксин, растворяют осадок в буфере с получением раствора рН 7,5-9,0, добавляют формалин в количестве 0,4-0,8% от количества раствора, или бензойную кислоту, или соли бензойной кислоты в количестве 0,07-4,0% от количества раствора, или их смесь, при этом количество формалина составляет 0,1-0,3% от количества раствора, количество бензойной кислоты или ее солей 0,03-2,5% от количества раствора, выдерживают раствор при температуре 30-60°С в течение 2 часов - 60 дней до перехода экзотоксина в анатоксин с получением вакцины. Перед расфасовкой вакцину можно подвергать лиофильной сушке с получением гранул и порошков. Перед расфасовкой в вакцину можно вводить мазевую основу или основу для суппозитория.

Другим вариантом поставленная задача достигается тем, что для получения вакцины для иммунопрофилактики и иммунотерапии заболеваний человека и животных, вызванных патогенными и условно-патогенными грамотрицательными микроорганизмами кишечной группы и их экзотоксинами, выращивают токсигенные штаммы R-формы S.dysenteriae, производят лизис клеток путем обработки хлороформом, центрифугируют, затем полученный супернатант обрабатывают предельными одноосновными карбоновыми кислотами и их производными, например трихлоруксусной кислотой, каприловой кислотой, до рН 3,0-5,0, центрифугируют с получением осадка, содержащего корпускулярные антигены и шигеллезный экзотоксин, растворяют осадок в буфере с получением раствора рН 7,5-9,0, добавляют формалин в количестве 0,4-0,8% от количества раствора, или бензойную кислоту, или соли бензойной кислоты в количестве 0,07-4,0% от количества раствора, или их смесь, при этом количество формалина оставляет 0,1-0,3% от количества раствора, количество бензойной кислоты или ее солей 0,03-2,5% от количества раствора, выдерживают раствор при температуре 30-60°С в течение 2 часов - 60 дней, затем проводят дополнительную обработку путем доведения количества свободного формальдегида до 0,18-0,25% от количества раствора, или свободной бензойной кислоты, или ее солей в количестве 0,07-4,0% от количества раствора, или их смесь, при этом количество свободного формальдегида составляет 0,037-0,12% от количества раствора, а количество свободной бензойной кислоты или ее солей 0,03-2,5% от количества раствора, выдерживают при 30-60°С в течение 2 часов - 30 дней до перехода экзотоксина в анатоксин с получением вакцины, затем проводят расфасовку и укупорку. При этом перед расфасовкой конечный продукт можно подвергать лиофильной сушке с получением гранул или порошков.

Перед расфасовкой в вакцину можно вводить мазевую основу или основу для суппозитория.

Вакцина для иммунопрофилактики и иммунотерапии заболеваний человека и животных, вызванных патогенными и условно-патогенными грамотрицательными микроорганизмами кишечной группы и их экзотоксинами, при выращивании S.dyscnteriae на казеиновом бульоне подвергается обработке супернатанта трихлоруксусной кислотой, полученная вышеизложенными способами вакцина представляет собой фракцию шигеллезных корпускулярных антигенов и анатоксин, содержит белок в количестве 10-15 мг/мл, нуклеиновые кислоты 0,2- 0,5 мг/мл, липиды - следы. При выращивании микробной культуры на других питательных средах состав вакцины, как показали эксперименты, может варьировать по составу.

Данная вакцина может применяться для иммунопрофилактики и иммунотерапии заболеваний человека и животных, вызванных патогенными и условно-патогенными грамотрицательными микроорганизмами кишечной группы и их экзотоксинами.

Для получения иммуноглобулинового препарата проводят иммунизацию животных вакциной для иммунопрофилактики заболеваний у человека и животных, вызванных патогенными и условно-патогенными грамотрицательными микроорганизмами кишечной группы и их экзотоксинами, полученной вышеизложенными способами, затем проводят забор у животных иммунного молока и/или молозива, и/или крови, получают иммуноглобулиновую фракцию. При этом после стерилизации можно осуществлять сушку.

Иммуноглобулиновый препарат, полученный вышеизложенным способом, содержит фракцию иммуноглобулинов G, А и М в соотношении (10-50):(0,01-5):(1-10). Как показали исследования, соотношение иммуноглобулинов в препарате находится в полной зависимости от используемого сырья и может сильно варьировать в зависимости от породы животных, их возраста, времени лактации, времени года, рациона питания, состава рациона питания, перенесенных заболеваний, состояния здоровья, генетических аномалий, иногда встречающегося у жвачных животных врожденного естественного иммунодефицита по IgA.

Иммуноглобулиновый препарат может содержать дополнительно по меньшей мере один компонент, выбранный из ряда: вкусовые добавки, ароматические добавки, основа для суппозиториев, основа для мазевых форм, технологические добавки для таблетирования.

Иммунобиологический препарат содержит иммуноглобулиновый препарат и по меньшей мере один компонент, выбранный из ряда: иммуноглобулиновые препараты человека и/или животных, лактоферрин, ферменты, ингибиторы протеолитических ферментов, препараты нормофлоры человека и/или животных, дрожжи, витамины, витаминоподобные вещества, белки острой фазы человека и/или животных, цитокины человека и/или животных, компоненты высших растений, компоненты низших растений, компоненты продуктов природного происхождения, продукты пчеловодства, энтеросорбенты, антибиотики, противомикробные химиопрепараты, сульфаниламидные препараты, противомикробные и противопаразитарные препараты природного происхождения, противотуберкулезные препараты, противовирусные препараты, противогрибковые антибиотики, синтетические противогрибковые препараты, стимуляторы метаболических процессов, антиоксиданты, минеральные добавки, углеводы, липиды, заменимые и/или незаменимые аминокислоты, органические кислоты, алкалоиды, гликозиды, вкусовые добавки, ароматические добавки, основа для суппозиториев, основа для мазевых форм, технологические добавки для таблетирования или их смесь.

При этом иммуноглобулиновые препараты человека и/или животных выбраны из ряда: фракция иммуноглобулинов, иммуноглобулин G, иммуноглобулин А, иммуноглобулин М, иммуноглобулин Т, фрагменты иммуноглобулинов.

Ферменты выбраны из ряда: лактопероксидаза, лизоцим, трипсин, химотрипсин, химопсин, террилитин, терридеказа, рибонуклеаза, дезоксирибуноклеаза, коллаганаза, аспераза, лизоамидаза, профезим, карипазин, пепсин, сок желудочный натуральный, пепсидал, абомин, панкреатин, ораза, солизим, сомилаза, нигедаза, панзином форте, панкурмен, фестал, дигестал, энзистал, мезим форте, лидаза, ронидаза, цитохром С, пенициллиназа.

Ингибиторы протеолиза выбраны из ряда: пантрипин, ингитрил, контрикал, гордокс.

Препараты нормофлоры человека и/или животных выбраны из ряда: бифидобактерии, лактобактерии, стрептококки, штаммы апатогенной кишечной палочки, сахаромицеты.

Дрожжи выбранны из ряда: дрожжи пивные, дрожжи пекарские.

Витамины выбраны из ряда: А, группы В, D, К, Р, PP, U, Е, кальция пантотенат, пантенол.

Витаминоподобные вещества выбраны из ряда: метилметионинсульфония хлорид, кальция пангамат, холина хлорид, липоевая кислота, липамид, оротовая кислота, пангамовая кислота, парааминобензойная кислота, инозит, карнитин.

Белки острой фазы человека и/или животных выбраны из ряда: гаптоглобин, α-фетопротеин, орозомукоид, церулоплазмин, С-реактивный белок, α1-антитрипсин, α1-антихимотрипсин, Gc-глобулин.

Цитокины выбраны из ряда: интерфероны (ИФ), интерлейкины (ИЛ), факторы некроза опухолей (ФНО), трансформирующий фактор роста β (ТФРβ), колониестимулирующие факторы (КСФ), фактор подавления лейкемии (LIF), CD95.

Фракции, представляющие собой настои и/или экстракты, и/или отвары, и/или отжимы, и/или порошок высших растений, выбраны из ряда: алоэ, алтей лекарственный, апельсин, аралия маньчжурская, абрикос обыкновенный, агава американская, аденосма индийская, аир болотный, айован душистый, акантопанакс шиповатый, акация белая, альпиния лекарственная, амарант колосичный, ананас настоящий, андрографис метельчатый, анамаррена асфоделиевая, анжелика китайская, анис обыкновенный, арахис подземный, арбуз съедобный, арека околоплодная, арония черноплодная, артишок колючий, астрагал шерстистоцветковый, атрактилодес яйцевидный, багульник болотный, бадан толстолистный, бадьян настоящий, базилик обыкновенный, банан культурный, бархат амурский, баранец, барбарис обыкновенный, береза повислая, бессмертник, блюмея смолоносная, бобы овощные, борщевик рассеченный, босвелия священная, боярышник, брусника, будра плющевидная, бузина черная, буквица лекарственная, бурачник лекарственный, валериана лекарственная, ваниль, василек синий, вахта трехлистная, вербейник обыкновенный, вербена лекарственная, вероника лекарственная, виноград культурный, витания снотворная, вишня, володушка серповидная, волчец кудрявый, ворсянка лекарственная, вяз ржавый, гардения жасминовидная, гарпагофитум распростертый, гвоздика душистая, гедихий венценосный, герань луговая, гибискус сирийский, гингко двухлопастный, голубика лесная, гомалонема душистая, горец птичий, горечавка шероховатая, горох посевной, гортензия метельчатая, горицвет, горянка, гранатовое дерево, грейпфрут, гречиха посевная, груша обыкновенная, гуарана купана, гуттуиния сердцевидная, девясил высокий, дереза китайская, диоскорея мохнатая, донник лекарственный, дуб обыкновенный, душица, дягиль лекарственный, ежевика сизая, желтокорень канадский, женьшень, жимолость алтайская, заманиха высокая, зантоксилум перечный, звездчатка средняя, зверобой продырявленный, земляника лесная, земляника садовая, золотарник обыкновенный, золотысячник обыкновенный, зубровка душистая, ива белая, имбирь лекарственный, императа цилиндрическая, инжир обыкновенный, иссоп лекарственный, истод сенега, йохимбе, какао настоящее, календула лекарственная, калина обыкновенная, каперсы колючие, капуста белокачанная, кардамон настоящий, картофель, кассия остролистная, конский каштан, кизил лекарственный, клевер луговой, клоповник посевной, клопогон даурский, клубника, клюква болотная, кола блестящая, кондуранго, кориандр посевной, коровяк густоцветковый, коричник настоящий, котовник кошачий, кофейное дерево, крапива двудомная, кровохлебка лекарственная, крушина слабительная, кукуруза обыкновенная, куркума длинная, лабазник вязолистный, лаванда колосовидная, лавр благородный, лапчатка гусиная, лебеда раскидистая, левзея сафлоровидная, лен посевной, леспедеза копеечниковая, леспедеза головчатая, лещина обыкновенная, лимон, лимонник китайский, линдера чилибухолистная, липа сердцелистная, лопух большой, лотос орехоносный, лук репчатый, любисток лекарственный, люцерна посевная, майоран садовый, мак-самосейка, малина обыкновенная, мальва лесная, манго сизое, мандарин китайский, маслина европейская, мать-и-мачиха обыкновенная, матэ, марена красильная, мелисса лекарственная, миробаллан, мирровое дерево, можжевельник обыкновенный, момордика кохинхинская, моринда лекарственная, морковь посевная, морская капуста, мята перечная, облепиха крушиновидная, овес посевной, одуванчик лекарственный, орех грецкий, орех мускатный, наперстянка, пажитник сенной, папайя, пассифлора мясо-красная, пастушья сумка, папоротник мужской, перец душистый, перец водяной, перец кава, перец стручковый, перец кубебе, перец черный, перец яванский, персик обыкновенный, петрушка огородная, пижма обыкновенная, пинеллия тройничная, пион уклоняющийся, пихта сибирская, плюхея индийская, повилика японская, подорожник большой, подсолнечник обыкновенный, полынь горькая, померанец горький, почечный чай, псоралея лещинолистная, прутняк, пуерария лопастная, пустырник сердечный, пфаффия, пшеница мягкая, пырей ползучий, расторопша пятнистая, ревень, редька посевная, ремания китайская, репешок обыкновенный, рис посевной, родиола розовая, рожь, розмарин лекарственный, ромашка аптечная, росянка круглолистная, рябина обыкновенная, сассапариль китайский, свекла обыкновенная, сельдерей пахучий, сенна, сереноя ползучая, сида домашняя, смородина черная, смородина красная, смородина золотистая, сныть обыкновенная, солодка голая, солод, солянка холмовая, соссюрея репейниковая, софора японская, соя культурная, спаржа лекарственная, стальник пашенный, стеблелист василистниковидный, стевия, стенома клубневая, стеркулия, сушеница топяная, сыть круглая, сумах дубильный, тамаринд индийский, татарник колючий, терн, термопсис, толокнянка обыкновенная, топинамбур, тополь черный, тутовое дерево, тмин обыкновенный, тыква, тысячелистник обыкновенный, укроп огородный, унаби, ункария волосистая, фасоль обыкновенная, фенхель, физалис обыкновенный, форзиция висячая, хвощ полевой, хмель обыкновенный, хрен обыкновенный, хризантема индийская, центелла азиатская, цикорий обыкновенный, чабрец обыкновенный, частуха подорожниковая, череда трехраздельная, черемуха, черника обыкновенная, чеснок посевной, чилибуха, чистец буквицецветный, шалфей лекарственный, шандра обыкновенная, шафран посевной, шиповник коричный, шлемник байкальский, шпинат огородный, щавель курчавый, эвкалипт, эвкоммия вязолистная, элеутерококк колючий, эльшольция патрэна, эмблика лекарственная, эхинацея пурпурная, юкка, яблоня, ясень обыкновенный, ячмень обыкновенный.

Фракции, представляющие собой настои, и/или экстракты, и/или отвары, и/или отжимы, и/или порошок низших растений, выбраны из ряда: гриб белый, гриб лакированный трутовик, гриб опенок настоящий, комбука чай (чайный гриб), ламинария сахарная (морская капуста), мэйтаке, пахима, рейши, спирулина, фукус пузырчатый, хлорелла, цетрария исландская, черный березовый гриб - чага, шиитаке.

Фракции, представляющие собой настои, и/или экстракты, и/или отвары, и/или отжимы, и/или порошок продуктов природного происхождения, выбраны из ряда: акулий хрящ, безоаровый камень, воск пчелиный, сельскохозяйственных животных мышечный порошок, желатин, желчь, кальмары, костная ткань, крабы, креветки, кровь животных, мидии, моллюски, молозиво сгущеное, молоки лососевых рыб, молоко сухое обезжиренное, сгущенное, молочная сыворотка, морские ежи, муравьи, пантогематоген, панты, пантокрин, половые органы медведя и оленя, раковины молюсков, рыбий порошок, внутренние органы морской щуки, сколопендра, скорпион, хитин, хрящевая ткань сельскохозяйственных животных, черви земляные, черепахи панцырь, чернохвостая змея, яйцо. Продукты пчеловодства выбраны из ряда: прополис, мед, маточное молочко (апилак), пыльца растений.

Энтеросорбенты выбраны из ряда: препараты угля активированного, энтеросорбент СКН, карболонг, полифепан, цеолиты, гуммивит, каолин, кизельгур, монтмориллонит.

Антибиотики выбраны из ряда: препараты группы пенициллина, группы цефалоспоринов, цефамицины, карбапенемы, монобактамы, тетрациклины, антибиотики-аминогликозиды, антибиотики-макролиды, азалиды, препараты группы линкомицина, препараты группы левомицетина, рифамицин, ристомицин, фузидин, полимиксины, грамицидин, гелиомицин, спектиномицин, препараты группы стрептомицина, группы рифампицина, группы циклосерина, группы флоримицина, рифабутин, нистатин, леворин, амфотерицин, амфоглюкамин, микогептин, примицин.

Противомикробные химиопрепараты выбраны из ряда: производные 8-оксихинолина, производные нафтиридина, хинолоны, фторхинолоны, производные хиноксалина, производные нитрофурана.

Сульфаниламидные препараты выбраны из ряда: стрептоцид, норсульфазол, сульфазин, сульфаргин, сульфадимезин, этазол, сульфацил, уросульфан, сульфапиридазин, сульфамонометоксин, сульфадиметоксин, сульфален, сульфален-меглюмин, котримоксазол, альгимаф, сульфасалазин, салазосульфапиридин, салазопиридазин, салазодиметоксин, месалазин.

Противомикробные и противопаразитарные препараты природного происхождения выбраны из ряда: натрия уснинат, новоиманин, сангвиритрин, умкалор, эвкалимин, хлорофиллипт, арснарин, бализ-2, эктерицид, томицид, цветки ноготков, настойка софоры японской, аллилчеп.

Противотуберкулезные препараты выбраны из ряда: гидразид изоникотиновой кислоты, его производные и аналоги, производные пара-аминосалициловой кислоты, препараты группы этамбутола, группы пиразинамида, группы тиоацетазона, группы солютизона.

Противовирусные препараты разных групп выбраны из ряда: интенфероны, индукторы интенферона, ацикловир, ганцикловир, рибамидин, зидовудин, идоксуридин, ламивудин, диданозин, валацикловир, фамцикловир, рибавирин, индинавир, метисазон, индоксуридин, ремантадин, адапромин, дейтифорин, бонафтон, арбидол, оксолин, теброфен, риодоксол, фрореналь, флакозид, алпизарин, хелепин, мегосин, госсипол.

Противогрибковые антибиотики, выбранные из ряда: гризеофульвин, нистатин, леворин, леворина натриевая соль, амфотерицин В, амфоглюкамин, микогептин.

Синтетические противогрибковые препараты выбраны из ряда: клотримазол, кетокеназол, эконазол, миконазол, микозолон, изоконазол, флуконазол, бифоназол, аморолфин, итраконазол, тербинафин, нафтифин, декамин, микосептин, хинофунгин, нитрофунгин, октицил, анмарин.

Препараты, стимулирующие метаболические процессы, выбраны из ряда: метилурацил, пентоксил, калия оротат, лейкоген, кислота аденозинтрифосфорная, фосфаден, этаден, фосфокреатин, рибоксин, даларгин, семакс, дипромоний, карнитина хлорид, милдронат, ацемин, полиэтиленоксид, каталин, квинакс, филграстим, сарграмостим, молграмостим, ленограстим.

Антиоксиданты выбраны из ряда: витамины А и Е, дибунол, супероксиддисмутаза, эмоксипин, мексидол, убинон.

Минеральные добавки выбраны из ряда: препараты кальция, калия, натрия, железа, цинка, меди, марганца, кобальта, хрома, молибдена, фосфора, серы, магния, хлора, фтора, кремния, брома, серебра, бора, ванадия, германия.

Углеводы выбраны из ряда: глюкоза, фруктоза, лактоза, сахароза, мальтоза, инулин, крахмал, пищевые волокна, пектин, камеди, слизи.

Липиды выбраны из ряда: жирные насыщенные и ненасыщенные кислоты, миндальное масло, персиковое масло, облепиховое масло, масло шиповника, касторовое масло, кукурузное масло, хлопковое масло, арахисовое масло, масло пищевых отрубей, подсолнечное масло, масло семян тыквы, фосфолипиды, стерины, воски.

Заменимые и/или незаменимые аминокислоты выбраны из ряда: аргинин, аланин, цистеин, цистин, глутаминовая кислота, глутамин, глицин, гистидин, лейцин, лизин, метионин, орнитин, пролин, фенилаланин, тирозин, валин.

Органические кислоты выбраны из ряда: яблочная, лимонная, гидроксилимонная, тартроновая, виннокаменная, щавелевая, салициловая, муравьиная, уксусная, бензойная, оксибензойная, липоевая, протокатехоновая, пирокатехоновая, галловая, янтарная, малоновая, оксикоричная, оксикарбоновая, сорбиновая, парасорбиновая, оксисорбиновая, никотиновая.

Алкалоиды выбраны из ряда: кофеин, сальсолин, берберин, пальматин, тирорицин, колумбамин, капсаицин, вибурнин, амирин, теобромин, тсофиллин, ксантин, силимарин, стахидрин.

Гликозиды выбраны из ряда: стероидные сапонины, тритерпеновые сапонины, антрагликозиды, горькие гликозиды (иридоиды), сердечные гликозиды.

Иммунобилогический препарат может представлять собой лиофильно высушенный порошок, гранулы, капсулы.

Иммунобилогический препарат может дополнительно содержать фармацевтические компоненты для таблетирования.

Иммунобилогический препарат может дополнительно содержать фармацевтические компоненты для получения суппозиториев.

Иммунобилогический препарат может дополнительно содержать фармацевтические компоненты для получения мазевых форм.

Иммуноглобулиновый препарат может применяться для профилактики и лечения заболеваний человека и животных, вызванных патогенными и условно-патогенными грамотрицательными микроорганизмами кишечной группы и их экзотоксинами.

Иммуннобиологический препарат может применяться для лечения и профилактики широкого круга заболеваний внутренних и наружных органов человека и животных, вызванных различными патогенными и условно-патогенными грамотрицательными и грамположительными микроорганизмами и их токсинами, вирусами, грибами, простейшими, гельминтами.

Поликомпонентная вакцина может содержать по крайней мере два компонента, при этом в качестве одного из компонентов содержит вакцину для иммунопрофилактики и иммунотерапии заболеваний человека и животных, вызванных патогенными и условно-патогенными грамотрицательными микроорганизмами кишечной группы и их экзотоксинами, полученную вышеизложенными способами.

Доказательством эффективности вакцины для профилактики заболеваний человека и животных, вызванных патогенными и условно-патогенными грамотрицательными микроорганизмами кишечной группы и их экзотоксинами в отношении патогенных и условно-патогенных грамотрицательных микроорганизмов кишечной группы и их экзотоксинов, являются лабораторные испытания на животных, культурах клеток и реакции гемагглютинации как самой вакцины, так и иммуноглобулиновых препаратов, полученных из молозива, молока и крови иммунизированых этой вакциной лабораторных и сельско-хозяйственных животных, а также клинические испытания противошигеллезного иммунного иммуноглобулинового препарата (противошигеллезный лактоглобулин), полученного из молозива иммунных коров.

При иммунизации вакциной для иммунопрофилактики и иммунотерапии заболеваний человека и животных, вызванных патогенными и условно-патогенными грамотрицательными микроорганизмами кишечной группы и их экзотоксинами, полученной нами, вырабатываются антитела к широкому кругу условно-патогенных и патогенных грамотрицательных микроорганизмов кишечной группы и их экзотоксинам.

Проведены эксперименты по сравнению при проверке антитоксической и антибактериальной защиты противошигеллезных препаратов (иммуноглобулиновые препараты козы и коровы), лактоглобулинов (препараты иммунных иммуноглобулиновых препаратов) противоколипротейного и против условно-патогенных бактерий сальмонелл (по требованию ГИСК им. Л.А. Тарасовича), неиммунных препаратов, а также по сравнению противошигеллезных препаратов с нормальным гамма-глобулином человека.

Опыты по нейтрализации шигеллезного экзотоксина противошигеллезными препаратами и выделенного из него иммуноглобулина G ставились на мышах и культуре клеток HeLa. При постановке на мышах использовался внутрибрюшинный метод и тест отека лапок мыши.

При 2,4-2,5 LD₅₀ иммунные противошигеллезные препараты в среднем в 344 раза превосходят по антитоксической активности неиммунные препараты молока, а при 3,5-4,4 LD₅₀ - в среднем 578 раз. Сравнивая между собой IgG, выделенный из иммунного и неиммунного препарата молока козы, наблюдаем различие по антитоксической активности при 2,5-3,1 LD₅₀ в 520 раз, при 3,9-4,2 LD₅₀ - в 627 раз. Противошигеллезные препараты по антитоксической активности превышали противоколипротейный лактоглобулин в 50-400 раз, различие между первым и лактоглобулином против условно-патогенных бактерий и сальмонелл составило 166-367 раз и более. Противошигеллезные препараты превышали активность неиммунного лактоглобулина в 140-366 раз. Если принять уровень антитоксической активности неиммунного препарата за нулевой, то можно сказать, что лактоглобулин против условно-патогенных бактерий и сальмонелл не обладает антитоксической активностью, а противоколипротейный также не имеет данных антител либо содержит их крайне мало.

В тесте отека лапок мыши противошигеллезный препарат полностью предупреждал развитие отека лапок в дозе 0,093-0,187 мг, а выделенный из него IgG - 0,062-0,125 мг, в то время как при введении неиммунного препарата и полученного IgG в дозе 1 мг наблюдалось полное отсутствие положительного эффекта, т.е. отек лапок сохранялся. Представлялось невозможным поставить эксперименты с введением в лапку мыши весом 10 г больше 1 мг неиммунных препаратов.

При проверке антитоксической активности противошигеллезного иммуноглобулина на клетках HeLa было определено, что для обезвреживания ЦТД₁₀₀ требуется в 128-198 раз меньше иммунного препарата, чем неиммунного. Причем при сравнении с антитоксическим внутрибрюшинным тестом на мышах цитотоксический тест на клетках HeLa дает более однородные от опыта к опыту результаты.

Антибактериальная протективная активность противошиг