Штаммы микроорганизмов-деструкторов:zoogloea sp. 14h, arthrobacter sp. 13h, arthrobacter sp. 15h, bacillus sp. 3h, bacillus sp. 12 h, используемые для ремедиации водоемов и почв, загрязненных нефтью и нефтепродуктами, и ассоциация штаммов микроорганизмов-деструкторов на их основе

Штаммы микроорганизмов-деструкторов:zoogloea sp. 14h, arthrobacter sp. 13h, arthrobacter sp. 15h, bacillus sp. 3h, bacillus sp. 12 h, используемые для ремедиации водоемов и почв, загрязненных нефтью и нефтепродуктами, и ассоциация штаммов микроорганизмов-деструкторов на их основе

Реферат

Изобретение относится к промышленной и экологической микробиологии и может быть использовано как для непосредственной очистки почв от нефтезагрязнений путем внесения биомассы в грунт, так и для утилизации органоминерального нефтяного сорбента.

Известно применение микроорганизмов для утилизации углеводородов нефти. Способностью утилизировать сырую нефть и нефтепродукты обладает ряд микроорганизмов.

Известен биопрепарат на основе штаммов Arthrobacter globiformis ВКПМ S-1551 и Rhodococcus crythropolis ВКПМ S-1550, предназначенный для очистки воды и почвы от нефти и нефтепродуктов, обладающий высокой окислительной способностью в широком диапазоне температур и рН среды [1].

Недостатком данного препарата является добавление ПАВ в состав препарата для дезинтеграции частиц нефти.

Известен штамм Arthrobacter sp. МИП-89 ВКПМ 1576 для разложения сырой нефти и нефтепродуктов [2].

Недостатком данного препарата является сложность воспроизведения уникальных условий селекции штамма (условия космического полета).

Наиболее близким к заявляемому техническому решению (прототипом) является ассоциация микроорганизмов под названием Devouroil, позволяющая производить эффективную очистку поверхности воды и почвы от загрязнения нефтепродуктами [3, прототип].

Недостатком этой ассоциации является сравнительно низкая активность нефтедеструкции при пониженных температурах (5-10°С).

Опираясь на литературные данные [Патент РФ №2142996 "Штамм Arthrobacter sp. для разложения сырой нефти и нефтепродуктов", С 02 F 3/34] проведено сравнение биодеструктивной активности предложенной ассоциации с прототипами - Деворойл и МИА-74. Показано, что степень очистки от нефтезагрязнений с использованием препаратов-прототипов через 60 суток составляет 52,7% и 80,3% соответственно, а биодеструктивная активность предложенной ассоциации составляет от 63,4% до 71,3%. При этом необходимо учитывать, что характер загрязнений и концентрация нефтепродуктов в почве отличаются. Учитывая процессы самоочистки почв, показано, что процент утилизации нефтезагрязнений микроорганизмами составляет 14,4% для Деворойла и 42% для МИА-74 и 42-49,9% для предложенной ассоциации (таблица 1). Таким образом, использование данной ассоциации для очистки воды и почв предполагает высокую деградацию нефтезагрязнений.

Таблица 1
Сравнительная характеристика биодеградации нефти ассоциациями микроорганизмов в почве
Образец	Количество внесенной нефти (г/кг почвы)	Количество остаточной нефти через 60 суток (г/кг почвы)	Степень утилизации (%)
Контроль	18,8	11,6	38,3%
Деворойл	18,8	8,9	52,7%
МИА-74	18,8	3,7	80,3%
Контроль	100	78,6	21,4%
Предлагаемая ассоциация	100	36,6	63,4%

Задачей изобретения является получение ассоциации штаммов микроорганизмов-деструкторов нефтепродуктов для ремедиации загрязненных водоемов и почв, а также утилизации органоминерального нефтяного сорбента.

Поставленная задача решается применением ассоциации микроорганизмов, включающих штаммы: Zoogloea sp. 14H, Arthrobacter sp. 13H, Arthrobacter sp. 15H, Bacillus sp. 3H, Bacillus sp. 12H.

Ассоциация представляет собой смесь природных нефтеокисляющих микроорганизмов, которые были выделены из почв и стоков, загрязненных нефтепродуктами.

Использование ассоциации штаммов микроорганизмов-деструкторов позволяет утилизировать широкий фракционный спектр углеводородов нефти в более короткие сроки обработки за счет комбинированного воздействия несколькими видами микроорганизмов.

Преимуществом ассоциации штаммов микроорганизмов является способность роста на обедненных синтетических питательных средах и высокая скорость окисления нефтепродуктов, что позволяет использовать препарат для ремедиации водоемов и почв. Кроме того, высокая предельная концентрация углеводородов, при которой наблюдается полная утилизация загрязнителя; высокая пороговая концентрация загрязнителя, ингибирующая рост микроорганизмов; широкий диапазон температуры и рН, при котором микроорганизмы утилизируют углеводороды нефти; полная деградация загрязнителя наблюдается в течение 20-30 дней, в зависимости от начальной концентрации углеводорода; высокая устойчивость штаммов к ионам тяжелых металлов: Си, Cr, Zn, Mn и так как это ассоциация - увеличивается возможность биодеградации широкого диапазона разнообразных фракций углеводородов, что обеспечивает более глубокую очистку.

Оценку способности штаммов микроорганизмов биодеградировать нефть проводят в лабораторных условиях по следующим показателям: убыли суммы углеводородов и изменению фракционного состава нефти в процессе биодеструкции.

Эффективность биодеградации загрязнения оценивают по суммарной убыли углеводородов нефти в процессе культивирования, принимая за 100% исходную концентрацию загрязнения [6]. Изменения качественного состава загрязняющего агента определяют методами газожидкостной хроматографии. В качестве контроля используют нативную нефть, не подвергавшуюся биодеградации. Учет численности живых клеток микроорганизмов во всех экспериментах проводят методом предельных разведений на элективных средах.

Накопительные культуры микроорганизмов-деструкторов углеводородов нефти получены из почв, отобранных в районе нефтяного месторождения с разной степенью и временем загрязнения, а также из проб воды отстойников очистных сооружений.

Использование штамма Zoogloea sp. 14H, обладающего свойством образовывать экзополисахариды, решает проблему ПАВ, стоящую перед многими производителями аналогичных препаратов.

Деструктивная активность ассоциации против углеводородов нефти и нефтепродуктов при рабочей концентрации 1% составляет 60-80% в широком диапазоне температур (5-35°С) и рН (5,0-8,0).

Выделенные штаммы микроорганизмов депонированы в Институте «Коллекция культур микроорганизмов» ГНЦ ВБ «Вектор» (НИИ ККМ ГНЦ ВБ «Вектор»), где им присвоены номера:

Zoogloea sp. 14H - В-983

Arthrobacter sp. 13H - В-984

Arthrobacter sp. 15H - В-985

Bacillus sp.3H-B-981

Bacillus sp. 12H - В-982

Все штаммы облигатные аэробы, температура для роста штаммов: Zoogloea sp. 14H, Arthrobacter sp. 13H, Arthrobacter sp. 15H, Bacillus sp. 3H, Bacillus sp. 12H составляет 5-45°C, при рН 4,5-9,5. Штаммы непатогенны, нетоксичны.

Характеристика штамма Zoogloea sp. 14H:

Штамм бактерий Zoogloea sp. 14H выделен из образца воды аэротенка Новосибирских очистных сооружений. Штамм отселектирован по признаку углеводородокисляющей активности в отношении нефти и нефтепродуктов.

Морфолого-культуральные признаки. На агаризованной среде МД с глюкозой штамм образует округлые, гладкие, выпуклые, полупрозрачные колонии желтоватого цвета с ровными краями. В мазке, приготовленном из 24-часовой культуры, выросшей на МД или СПА, обнаруживаются палочки с закругленными концами, почти овальные, размером 1,0×2,0 мкм, подвижные, грамотрицательные. Спор и цист не образуют. В старых культурах клетки окружены хорошо заметной капсулой. На поздних стадиях роста в жидкой среде культуры имеют вид хлопьев и пленок или зооглеи.

Физиолого-биохимические свойства. Хемоорганотрофы, аэробы. Метаболизм дыхательного типа, оксидазо- и каталазоположительные. Гидролизуют желатин, крахмал. Способны окислять углеводороды нефти. Температура роста 5-40°С, рН 4,0-9,0, способен расти при концентрации NaCl до 5%, непатогенен.

Способ хранения: низкотемпературное замораживание в растворе глицерина при температуре минус 60°С.

Характеристика штамма Bacillus sp. 3Н.

Штамм бактерий Bacillus sp. 3Н выделен из образца почвы Томского нефтеперерабатывающего комбината. Штамм отселектирован по признаку углеводородокисляющей активности в отношении нефти и нефтепродуктов.

Морфолого-культуральные признаки. На агаризованной среде МД с глюкозой штамм образует округлые, шероховатые, плоские, непрозрачные колонии желтоватого цвета с лопастными краями. В мазке, приготовленном из 24-часовой культуры, выросшей на МД или СПА, обнаруживаются палочки с закругленными концами, в парах или цепочках, размером 1,0-2,5×2,0-6,0 мкм, подвижные, грамположительные. Споры овальные, в клетке расположены терминально, устойчивые к высоким температурам, диаметр споры не превышает диаметра клетки. Сапрофиты.

Физиолого-биохимические свойства. Хемоорганотрофы, аэробы. Метаболизм дыхательного типа, каталазоположительные. Гидролизуют желатин, крахмал. Способны окислять углеводороды нефти. Температура роста 10-45°С, рН 4,0-9,0, способны расти при концентрации NaCl до 5%, непатогенны.

Способ хранения: низкотемпературное замораживание в растворе глицерина при температуре минус 60°С.

Характеристика штамма Bacillus sp. 12H.

Штамм бактерий Bacillus sp. 12H выделен из образца почвы, взятого около хранилища нефти на острове Муксалма (Соловецкие острова). Штамм отселектирован по признаку углеводородокисляющей активности в отношении нефти и нефтепродуктов.

Морфолого-культуральные признаки. На агаризованной среде МД с глюкозой штамм образует округлые, гладкие, выпуклые, полупрозрачные колонии желтоватого цвета с ровными краями. В мазке, приготовленном из 24-часовой культуры, выросшей на МД или СПА, обнаруживаются палочки с закругленными концами, в парах или цепочках, размером 1,0-2,5×2,0-6,0 мкм, подвижные, грамположительные. Споры овальные, в клетке расположены терминально, устойчивые к высоким температурам, диаметр споры не превышает диаметра клетки. Сапрофит.

Физиолого-биохимические свойства. Хемоорганотрофы, аэробы. Метаболизм дыхательного типа, каталазоположительные. Гидролизуют желатин, крахмал. Способны окислять углеводороды нефти. Температура роста 10-45°С, рН 4,0-9,0, способны расти при концентрации NaCl до 5%, непатогенны.

Способ хранения: низкотемпературное замораживание в растворе глицерина при температуре минус 60°С.

Характеристика штамма Arthrobacter sp. 13H.

Штамм бактерий Arthrobacter sp. 13H выделен из образца почвы, взятого около хранилища нефти на острове Муксалма (Соловецкие острова). Штамм отселектирован по признаку углеводородокисляющей активности в отношении нефти и нефтепродуктов.

Морфолого-культуральные признаки. На агаризованной среде МД с глюкозой штамм образует округлые, гладкие, выпуклые, непрозрачные колонии кремового цвета с ровными краями. В мазке, приготовленном из 24-часовой культуры, выросшей на МД или СПА, обнаруживаются палочки одиночные, иногда в парах, с закругленными концами, размером 0,8-1,5×1,5-4,5 мкм, малоподвижные, грамположительные. Спор и цист не образуют. Сапрофит.

Физиолого-биохимические свойства. Хемоорганотрофы, аэробы. Метаболизм окислительного типа, каталазоположительные. Способны окислять углеводороды нефти. Температура роста 5-40°С, рН 5,0-8,0, способен расти при концентрации NaCl до 5%, непатогенен.

Способ хранения: низкотемпературное замораживание в растворе глицерина при температуре минус 60°С.

Характеристика штамма Arthrobacter sp. 15H.

Штамм бактерий Arthrobacter sp. 15H выделен из образца почвы взятого в пойме реки Муксунуоха (Саха-Якутия). Штамм отселектирован по признаку углеводородокисляющей активности в отношении нефти и нефтепродуктов.

Морфолого-культуральные признаки. На агаризованной среде МД с глюкозой штамм образует округлые, гладкие, выпуклые, непрозрачные колонии желтоватого цвета с ровными краями. В мазке, приготовленном из 24-часовой культуры, выросшей на МД или СПА, обнаруживаются палочки одиночные, иногда в парах, с закругленными концами, размером 0,8-1,5×1,5-4,5 мкм, малоподвижные, грамположительные. Спор и цист не образуют. Сапрофит.

Физиолого-биохимические свойства. Хемоорганотрофы, аэробы. Метаболизм окислительного типа, каталазоположительные. Способны окислять углеводороды нефти. Температура роста 5-40°С, рН 5,0-8,0, способен расти при концентрации NaCl до 5%, непатогенен.

Способ хранения: низкотемпературное замораживание в растворе глицерина при температуре минус 60°С.

Предлагаемая ассоциация состоит из пяти штаммов микроорганизмов, которые хорошо сочетаются между собой. Штаммы, входящие в данную ассоциацию, обладают подобными культуральными характеристиками: оптимальная температура роста, состав и рН среды. При культивировании в средах с нейтральным рН без добавок углеводородов нефти и при добавлении нефти или мазута процентный состав микроорганизмов изменяется незначительно, а при использовании сред с кислым рН - увеличивается количество бактерий штаммов Zoogloea sp.14H, Arthrobacter sp.13H и Arthrobacter sp.15H, но уменьшается количество бацилл до 10%. В связи с тем, что бациллы являются спорообразующими микроорганизмами, возможно сохранение штаммов при неблагоприятных условиях, с дальнейшей способностью к возобновлению деятельности при улучшении ситуации. Присутствие в ассоциации штамма Zoogloea sp.l4H, способного образовывать экзополисахариды, дает возможность диспергировать нефтяную пленку, что увеличивает доступность углеводородов для других штаммов.

Состав среды МД (г/л):

Na₂HPO₄ - 6, КН₂РО₄ - 3, MgSO₄×7H₂О - 0,1, NH₄Cl - 1, NaCl - 0,5, дрожжевой экстракт - 0,05, рН 4,5-9,5.

В качестве источника углерода используют углеводороды нефти, мазут, толуол, фенол, динитрофенол, бензапирен, смесь нефтепродуктов (дизельное топливо, керосин, соляр). Для выделения микроорганизмов-деструкторов индивидуальные углеводороды добавляют к синтетической питательной среде МД в количестве 1-4%, для дезинтеграции частиц нефти используют Tween 85 - 0,1% от количества нефтепродукта. Контролем во всех случаях является аналогичная питательная среда без источников углерода. Идентификацию микроорганизмов проводят общепринятыми методами в соответствии с описанием, данным в определителе бактерий [4, 5].

Существенными отличиями изобретения являются:

- Высокая предельная концентрация углеводородов, при которой наблюдается полная утилизация загрязнителя: для нефти это составляет 0,5-0,7%, а для мазута - 0,4-0,5%;

- Высокая пороговая концентрация загрязнителя, ингибирующая рост микроорганизмов: 10% мазута или 15% нефти в составе жидкого субстрата не ингибируют рост микроорганизмов ассоциации;

- Широкий диапазон температурный и рН, при котором микроорганизмы утилизируют углеводороды нефти;

- Полная деградация загрязнителя наблюдается в течение 20-30 дней в зависимости от начальной концентрации углеводорода и состава субстрата;

- Высокая устойчивость штаммов к ионам тяжелых металлов: Си, Cr, Zn, Mn.

Так как заявляемая ассоциация штаммов микроорганизмов-деструкторов предлагается впервые, можно сделать вывод о соответствии заявляемой ассоциации критериям изобретения «новизна» и «изобретательский уровень».

Далее следуют примеры конкретного выполнения использования заявляемой ассоциации микроорганизмов.

Таблицы 2-5 поясняют предлагаемое изобретение.

Пример 1. В колбу объемом 500 мл вливают 100 мл синтетической питательной среды МД рН 7,0 и сырой нефти до 1%. Инокулят штамма Arthrobacter sp. 15H выращивают на рыбном гидролизате при 25°С 24 ч. Осаждают и добавляют к среде в количестве 0,5 ОЕ. Образец культивируют при температуре 25°С 10 суток. Степень очистки составляет 77%. Наиболее активно штамм разлагает фракции нефти с углеводородным числом 13-21.

Пример 2. В колбу объемом 500 мл вливают 100 мл синтетической питательной среды МД рН 7,0 и сырой нефти до 1%. Инокуляты штаммов Zoogloea sp. 14H, Arthrobacter sp. 13H, Arthrobacter sp. 15H, Bacillus sp. 3H, Bacillus sp. 12H выращивают на рыбном гидролизате при 25°С 24 ч. Осаждают и добавляют к среде в количестве 0,5 ОЕ. Соотношение штаммов бактерий составляло: Zoogloea sp. 14H - 20%, Arthrobacter sp. 13H - 25%, Arthrobacter sp. 15H - 25%, Bacillus sp. 3H - 15%, Bacillus sp. 12H - 15%. Образец культивируют при температуре 25°С 10 суток. Степень очистки составляет 76%. Степень очистки от углеводородов нефти при культивировании образца на 15°С 10 суток составляет 70%.

Пример 3. В колбы объемом 500 мл взвешивают по 1 грамму сырой нефти и вливают по 100 мл синтетической питательной среды МД с рН 7,0 или 5,0. Инокуляты штаммов Zoogloea sp. 14H, Arthrobacter sp. 13H, Arthrobacter sp. 15H, Bacillus sp. 3H, Bacillus sp. 12H выращивают на рыбном гидролизате при 25°С 24 ч. Осаждают и добавляют к средам в количестве 0,5 ОЕ. Образцы культивируют при температуре 25°С 7 суток и при температуре 5°С 14 суток. Биодеструктивная активность (БДА) штаммов, среднее значение пяти экспериментов, утилизации нефти представлена в таблице 2. Результаты экспериментов показали, что наиболее благоприятными условиями для утилизации углеводородов нефти являются высокая температура (10-25°С), нейтральный рН среды и наличие нескольких видов микроорганизмов.

Пример 4. В колбы объемом 500 мл взвешивают по 1 грамму мазута и вливают по 100 мл синтетической питательной среды МД с рН 7,0 или 5,0. Инокуляты штаммов Zoogloea sp. 14H, Arthrobacter sp. 13H, Arthrobacter sp. 15H, Bacillus sp. 3H, Bacillus sp. 12H выращивают на рыбном гидролизате при 25°С 24 ч. Осаждают и добавляют к средам в количестве 0,5 ОЕ. Образцы культивируют при температуре 25°С 7 суток и при температуре 5°С 14 суток. Биодеструктивная активность (БДА) штаммов, среднее значение пяти экспериментов, утилизации мазута представлена в таблице 3.

Пример 5. Ассоциация штаммов микроорганизмов ˜ деструкторов:

Zoogloea sp. 14Н, Arthrobacter sp. 13H, Arthrobacter sp. 15H, Bacillus sp. 3H, Bacillus sp. 12H в сочетании с органоминеральным сорбентом обеспечивает более глубокую очистку поверхности воды и почвы от загрязнения нефтепродуктами. Сорбент служит носителем для клеток бактерий и обладает способностью сорбировать значительные количества нефти на своей гидрофобной поверхности. Клетки бактерий могут быть также использованы для утилизации остаточной нефти после использования и отжима сорбента.

В лабораторных условиях была показана возможность использования данной ассоциации при очистке сорбента «Сорбойл»: к 1 г сорбента «Сорбойл» добавляют 2 г нефти, перемешивают и помещают в колбу на 250 мл с 50 мл среды МД и ассоциацией штаммов микроорганизмов в количестве 0,5 ОЕ. Образец культивируют при температуре 25°С 10 суток. Степень очистки от углеводородов нефти при культивировании образца на 25°С 10 суток составляет 69% относительно контрольной смеси сорбента с нефтью. В качестве контроля используют смесь сорбента с микроорганизмами, где было показано отсутствие ингибирующего влияния сорбента на микроорганизмы.

Пример 6. Для проверки эффективности работы полученной ассоциации были проведены эксперименты по выращиванию овощных культур на почвах, загрязненных нефтепродуктами, с предварительной обработкой их (перед посевом) микроорганизмами-нефтедеструкторами. Для эксперимента использовали подзолистую почву. Нагрузка нефтью составила 100 г/кг почвы. В кюветы вносили по 5 кг почвы, добавляли нефть и обрабатывали бактериальной суспензией, а также суспензией, смешанной с сорбентом («Сорбойл»). Использовали 7 кювет:

1 - почва (контрольный вариант)

2 - почва с нефтью

3 - почва с нефтью и сорбентом (9-10 весовых %)

4 - почва с нефтью и бактериальной суспензией (12H+13Н+15Н)

5 - почва с нефтью и бактериальной суспензией (ассоциация)

6 - почва с нефтью, сорбентом и бактериальной суспензией (12Н+13Н+15Н)

7 - почва с нефтью, сорбентом и бактериальной суспензией (ассоциация).

100 миллилитров бактериальной суспензии для обработки 5 кг почвы содержит от 3,8×10⁷ кл/мл до 4,8×10⁸ кл/мл каждого штамма: в первом случае штаммы - 12Н+13Н+15Н, а в случае ассоциации - 12Н+13Н+15Н+14Н+3Н, что составляет от 6,0×10⁵ до 9,0×10⁶ кл/г почвы. Семена фасоли сеяли через 10 дней после внесения микроорганизмов, результаты обрабатывали через 60 суток культивирования. Эксперимент проводили в двух повторностях. Результаты представлены в таблице 5. Остаточную нефть определяли весовым методом, результаты представлены в таблице 5. В эксперименте показано, что внесение в почву микроорганизмов-нефтедеструкторов снижает концентрацию углеводородов в 2-2,5 раза, а применение сорбента способствует очистке еще примерно на 10%.

Таблица 2
Биодеструктивная активность микроорганизмов по утилизации сырой нефти в жидкой среде
Образец	pH 7.0	pH 5.0
25°С, 7 суток	5°С, 14 суток	25°С, 7 суток	5°С, 14 суток
15Н	67,36%	33,11%	30,2%	21,39%
14Н	38,8%	11,0%	14,8%	17,6%
13Н	18,9%	28,9%	17,6%	12,9%
12Н	68,4%	23,6%	9,5%	7,6%
3Н	17,6%	20,0%	28,8%	12,3%
Ассоциация	74,3%	58,5%	61,4%	42,4%

Таблица 3
Биодеструктивная активность микроорганизмов по утилизации мазута в жидкой среде
Образец	pH 7.0	pH 5.0
25°С, 7 суток	5°С, 14 суток	25°С, 7 суток	5°С, 14 суток
15Н	33,7%	24,4%	39,5%	23,5%
14Н	18,4%	11,9%	10,7%	10,1%
13Н	17,7%	10,1%	9,5%	6,9%
12Н	15,8%	10,2%	10,4%	3,9%
3Н	20,6%	15,7%	12,3%	5,5%
Ассоциация	60,5%	51,2%	48,6%	35,6%
Таблица 4
Всхожесть и развитие всходов овощных культур на почвах, загрязненных нефтью
Образец	Всхожесть семян	Развитие вегетативной части	Развитие корневой системы	Плодоношение
1-контроль	100%	100%	100%	+
2	50%	51,4%	68,2%	-
3	70%	59,9%	76,5%	+
4	70%	60,6%	73,8%	+
5	100%	81%	71,6%	+
6	100%	75,2%	87,5%	+
7	100%	72,4%	85,2%	+
Таблица 5
Биодеградация нефти ассоциацией микроорганизмов в почве
Образец	Количество внесенной нефти (г/кг почвы)	Количество остаточной нефти через 60 суток (г/кг почвы)	% остаточной нефти в почве через 60 суток
1-контроль	0	0	-
2	100	78,6	78,6%
3	100	66,5	66,5%
4	100	41,8	41,8%
5	100	36,6	36,6%
6	100	28,7	28,7%
7	100	32,6	32,6%

СПИСОК ИСПОЛЬЗУЕМОЙ ЛИТЕРАТУРЫ

1. Патент РФ №2115727 "Способ очистки объектов окружающей среды от углеводородов нефти и масел", С 02 F 3/34.

2. Патент РФ №2142997 "Штамм Arthrobacter sp. для разложения сырой нефти и нефтепродуктов", С 02 F 3/34.

3. Патент РФ №2023686 "Консорциум микроорганизмов Rhodococcus sp., Rhodococcus maris, Rhodococcus erythropolis, Pseudomonas stutzeri, Candida sp., используемый для очистки почвенных и солоноватоводных экосистем от загрязнения нефтепродуктами", С 02 F 3/34.

4. Определитель бактерий "Bergey's Manual of Systematic Bacteriology" 1986. 8^th ed V.2. Baltimore-Londone, William & Wilkins, 1105.

5. Определитель бактерий Берги/ под редакцией Дж. Хоулта, девятое издание, 1997, 800 с.

6. Барышникова Л.М., Грищенков В.Г., Аринбасаров М.У., Шкидченко А.Н., Воронин A.M. Биодеградация нефтепродктов штаммами - деструкторами и их ассоциациями в жидкой среде. / Прикл. биохимия и микробиология, 2001, т. 37, №5, с.542-548.

1. Штамм микроорганизма-деструктора Zoogloea sp.14H НИИ ККМ ГНЦ ВБ "Вектор" В983, используемый для ремедиации водоемов и почв, загрязненных нефтью и нефтепродуктами.

2. Штамм микроорганизма-деструктора Arthrobacter sp.13H НИИ ККМ ГНЦ ВБ "Вектор" В-984, используемый для ремедиации водоемов и почв, загрязненных нефтью и нефтепродуктами.

3. Штамм микроорганизма-деструктора Arthrobacter sp.15H НИИ ККМ ГНЦ ВБ "Вектор" В-985, используемый для ремедиации водоемов и почв, загрязненных нефтью и нефтепродуктами.

4. Штамм микроорганизма-деструктора Bacillus sp.3H НИИ ККМ ГНЦ ВБ "Вектор" В-981, используемый для ремедиации водоемов и почв, загрязненных нефтью и нефтепродуктами.

5. Штамм микроорганизма-деструктора Bacillus sp.12H НИИ ККМ ГНЦ ВБ "Вектор" В-982, используемый для ремедиации водоемов и почв, загрязненных нефтью и нефтепродуктами.

6. Ассоциация штаммов микроорганизмов-деструкторов по пп.1-5, Zoogloea sp.14H, Arthrobacter sp.13H, Arthrobacter sp.15H, Bacillus sp.3H, Bacillus sp.12H, используемая для ремедиации водоемов и почв, загрязненных нефтью и нефтепродуктами.