Способ ускоренной гистологической проводки трепанобиоптатов костного мозга

Способ ускоренной гистологической проводки трепанобиоптатов костного мозга

Реферат

Изобретение относится к медицине, в частности к гематологии, и касается приготовления гистологических препаратов трепанобиоптатов костного мозга.

Трепанобиопсия подвздошной кости является обязательным методом прижизненной диагностики заболеваний системы крови. Качество препарата трепанобиоптата костного мозга играет решающую роль при постановке диагноза, так как позволяет распознать не только тканевые взаимоотношения в костном мозге, но и выявить патологию на клеточном уровне. Кроме того, большое значение имеют сроки получения клиницистами заключения гистолога, что определяет постановку точного диагноза и выбор тактики терапии.

Стандартный способ приготовления гистологических препаратов из губчатой костной ткани описан в руководстве "Микроскопическая техника" (Под ред. Д.С.Саркисова и Ю.Л.Перова. - М.: Медицина, 1996. - 544 С.). Он включает в себя ряд последовательных этапов - фиксацию в забуференном 10% растворе формалина (рН 7,0), промывку в воде, декальцинацию в 5% растворе азотной кислоты в течение 2-3 суток, обработку препаратов в 5% растворе алюмокалиевых квасцов - 24 часа, промывку в воде, обезвоживание в спиртах и заливку в парафин.

Одним из самых продолжительных этапов подготовки трепанобиоптатов костного мозга для микроскопического анализа в настоящее время остается процесс декальцинации костной ткани (2-3 суток). Данный этап можно ускорить путем обработки в микроволновой (MB) печи исследуемого материала, помещенного в декальцинирующий раствор (Зубкова Т.В. и соавт. /Арх. Патол. - 1997. - № 2 с. - 64-66).

Недостатками данного способа, выбранного за прототип, являются длительность процедуры декальцинации - 3-4 часа, использование больших объемов декальцинатора (0,5 л), применение 96° спирта (400 мл) для промывки после декальцинации.

При приготовлении гистологических препаратов в соответствии с прототипом происходит большая затрата времени на этапе декальцинации. Это отражается на качестве препаратов, так как этот способ является более травматичным для клеток костного мозга, а также менее экономичным. Для устранения этого недостатка мы впервые применили щадящую декальцинацию трепанобиоптатов костного мозга с помощью МВ-облучения.

Цель изобретения - ускорение гистологической обработки трепанобиоптатов костного мозга и получение стабильно хорошего качества микроскопических препаратов.

Поставленная цель достигается изменением способа МВ-обработки трепанобиоптатов костного мозга на этапе декальцинации и укорочением времени этой процедуры с 3-4 часов до 1-го часа.

Способ применяют следующим образом.

Для приготовления гистологических препаратов трепанобиоптатов костного мозга полученный материал фиксируется в забуференном нейтральном 10% растворе формалина (рН 7,0) в течение суток, промывается в проточной воде 3 часа. Далее проводится этап декальцинации в МВ-печи: в пенициллиновый флакончик с 5% раствором азотной кислоты (10 мл) помещается трепанобиоптат, который нагревается в МВ-печи при мощности 180 Вт в течение 5 мин до оптимальной температуры 50±3°, водная нагрузка - 0,4-0,5 л (ее температура должна быть постоянной комнатной). После нагрева препарат перекладывается в другой флакончик со свежим декальцинатором, меняется водная нагрузка и вновь проводится та же процедура в МВ-печи. МВ-обработка повторяется от 7 до 10 раз, в среднем на эту процедуру затрачивается времени не более 1 часа. Далее препарат помещается в 5% раствор алюмокалиевых квасцов на 3 часа, промывается в проточной воде 3 часа, обезвоживается в спиртах и заливается в парафин.

Благодаря применению МВ-обработки в процессе щадящей декальцинации трепанобиоптатов костного мозга удалось сократить сроки проведения этой процедуры в среднем на 2-3 дня от стандартной методики и на 2-3 часа соответственно прототипу и получать качественные срезы на четвертые сутки от начала исследования.

Пример. Больная К., 24 лет, поступила в гематологическую клинику 5.05.2003. На основании данных анамнеза, клинического обследования, результатов лабораторных исследований установлен предположительный диагноз: Апластическая анемия.

При поступлении состояние больной тяжелое. Бледность кожных покровов и слизистых. Фебрильная гипертермия, выраженная слабость. В анализе крови: Hb - 67 г/л; Эр. - 2,0×l0¹²/л; Лейк. - 1,0×10⁹/л, с/я - 7%, лф - 93%, тромб - 30×10⁹/л, СОЭ - 40 мм/ч. В миелограмме - клеточность костного мозга снижена (3,0×10⁹/л), костный мозг представлен в основном клетками периферической крови.

Для уточнения диагноза больной проведена билатеральная трепанобиопсия задних остей подвздошных костей. Последующая обработка трепанобиоптатов костного мозга проводилась двумя способами - по стандартной методике с применением и без применения щадящей декальцинации. В результате: применение щадящей декальцинации позволило сократить сроки гистологической проводки препарата на 2-е суток и дало возможность охарактеризовать состояние гемопоэтической ткани на четвертые сутки от начала исследования.

По предложенной методике было проведено 200 трепанобиоптатов костного мозга задней ости подвздошной кости у больных с различными гематологическими заболеваниями. Получены качественные микроскопические препараты на 4 сутки от начала исследования.

Способ ускоренной гистологической проводки трепанобиоптатов костного мозга, включающий этап декальцинации препарата в 10 мл 5%-ного раствора азотной кислоты с воздействием нагревания в микроволновой печи при мощности 180 Вт в течение 5 мин до оптимальной температуры 50±3°С, при водной нагрузке 0,4-0,5 л постоянной комнатной температуры, после чего препарат перекладывают во флакон свежего декальцинирующего раствора, берут свежую водную нагрузку и обработку повторяют 7-10 раз.