Фармацевтический состав, обладающий ноотропной активностью

Фармацевтический состав, обладающий ноотропной активностью

Реферат

Изобретение относится к фармацевтической промышленности и касается лекарственных средств, обладающих ноотропной активностью, получаемых из растительного сырья.

Наиболее близким к предлагаемому является ноотропное лекарственное средство растительного происхождения "Гинсана" (Pharmaton, Швейцария), получаемое из интродуцированного в Швейцарии корня белого женьшеня [1], не имеющего сырьевой базы на территории России.

Новая техническая задача - расширение арсенала способов получения лекарственных средств из отечественного растительного сырья, обладающих ноотропной активностью.

Поставленную задачу решают новым фармацевтическим составом, обладающим ноотропной активностью, содержащим действующее вещество и наполнители, причем, в качестве действующего вещества он содержит сгущенный экстракт княжика сибирского (Atragene speciosa Weinm.) при остаточной влажности 25% и наполнители при следующем соотношении мас.%:

Экстракт княжика густой	20,02-21,24
Молочный сахар	53,54-56,86
Микрокристаллическая целлюлоза	13,39-14,21
Полиплаздон XL-10	3,03-3,21
Крахмал картофельный	2,27-2,41
Аэросил	3,79-4,03
Магния стеарат	0,97-1,03

Также фармацевтический состав может быть выполнен в виде твердой лекарственной формы, также фармацевтический состав может быть выполнен в виде таблеток.

Лекарственное средство представляет собой таблетки плоскоцилиндрической формы с риской, кремового цвета с темными вкраплениями, специфическим запахом и вкусом.

Качественный и количественный состав таблеток определяют исходя из фармакологических (ноотропный эффект) и технологических (внешний вид, содержание действующих веществ, средняя масса, распадаемость, прочность на истирание и на излом, тест растворения) свойств предлагаемых вариантов таблеток.

Основным ингредиентом лекарственного средства является густой экстракт княжика, полученный методом реперколяции по Н.А.Чулкову [2].

Надземную измельченную часть княжика экстрагируют 25% этанолом в батарее из 5 перколяторов с интервалом слива через 1 сутки при соотношении сырье - жидкий экстракт (1:1). Полученный жидкий экстракт стандартизируют по сухому остатку, содержанию фенолоспиртов и тяжелых металлов.

Жидкий экстракт сгущают под вакуумом при температуре 50°С на роторном испарителе ИР-1М. Выход густого экстракта составляет 13,9±0,1%, содержание влаги до 25%. Проведенные исследования подтверждают то, что густой экстракт княжика проявляет выраженный ноотропный эффект в дозе 100 мг/кг (табл.4-6).

Вспомогательные вещества, применяемые для изготовления таблетируемой массы с экстрактом (молочный сахар, микрокристаллическая целлюлоза, полиплаздон XL-10, аэросил, магния стеарат) широко используют в качестве целевых добавок (вспомогательные вещества) химико-фармацевтической промышленности при производстве таблеток [2].

Технологический процесс получения таблеток состоит из следующих стадий:

1. Подготовка материала.

2. Смешение, гранулирование массы, сушка.

3. Таблетирование и оценка качества таблеток.

4. Фасовка и упаковка.

Во всех прописях количество крахмала, полиплаздона, аэросила и магния стеарата оставалось постоянным, а изменяли соотношение только лактозы и микрокристаллической целлюлозы.

Пример 1 (таблица 1).

1 стадия. Крахмал картофельный и магния стеарат просеивают через вибросито с капроновой тканью для сит №38 и №23 соответственно. Молочный сахар просеивают через сито с размером отверстия 0,5 мм - не должно быть остатка на сите.

2 стадия. В смеситель загружают просеянные молочный сахар, микрокристаллическую целлюлозу, полиплаздон, крахмал, аэросил, тщательно перемешивают и вводят подогретый густой экстракт княжика. Перемешивают до равномерного распределения экстракта в течение 15 мин. Однородную увлажненную массу сушат 20 мин при температуре 55°С. После сушки массу пропускают через гранулятор с отверстием сита 2 мм и опудривают магния стеаратом.

Взятое соотношение исходных ингредиентов (вспомогательных веществ) является оптимальным. Масса обладает хорошей сыпучестью, прессуемостью и точно дозируется.

3 стадия. Полученную массу таблетируют на таблеточной машине "Kilian" и таблетки стандартизируют. Таблетки распадаются за 8,0±0,4 мин, прочность на излом (прибор Erweka) составляет 105,8±1,69 Н, прочность на истираемость 99,49±0,51%.

Лекарственное средство обладает выраженной ноотропной активностью (табл.7-9).

4 стадия. Таблетки фасуют в контурные ячейковые упаковки по 10 штук.

Пример 2 (таблица 2).

Получение таблетируемой массы проводят, как в примере 1, но без использования микрокристаллической целлюлозы. Масса обладает хорошей сыпучестью и хорошо прессуется, но полученные из нее таблетки не удовлетворяют требованиям нормативной документации (НД) - не более 15 мин - по распадаемости (свыше 20 мин).

Пример 3 (таблица 3).

Получение таблеток проводят по технологической схеме, указанной в примере 1. Таблетируемая масса хорошо прессуется, обладает хорошей сыпучестью, но качество таблеток не удовлетворяет требованиям НД по распадаемости (17 мин).

При использовании молочного сахара без микрокристаллической целлюлозы (пример 2), а также в равных соотношениях 1:1 (пример 3) распадаемость таблеток составила от 20 до 17 мин соответственно. При введении в пропись таблеток микрокристаллической целлюлозы в количестве в четыре раза меньше, чем молочного сахара, распадаемость таблеток удовлетворяет требованиям НД и составляет 8,0±0,7 мин.

Определение подлинности экстрактов и таблеток проводят методом тонкослойной хроматографии (ТСХ) по качественной реакции на фенолоспирты с ванилин-фосфорным реактивом. Фенолоспирты характерны для сырья княжика сибирского, которые переходят в экстракт и таблетки княжика ("Атрасинол"). Количественное определение фенолоспиртов проведено в унифицированном ряду сырье - жидкий и густой экстракты -таблетки "Атрасинол".

Пример 4 (таблицы 4-7).

Фармакологические исследования выполняли на мышах-самцах линии СВА массой тела 20-22 г. Все животные 1 категории (конвенциональные линейные мыши) были получены из коллекционного фонда лаборатории экспериментального биологического моделирования Института фармакологии Томского научного центра СО РАМН.

Эксперименты проводят в осенне-зимний период. Работы в рамках экспериментальных методик выполняют с 10 ч утра и заканчивают к 15 ч. Животных содержат в виварии на обычном рационе кормления при свободном доступе к воде и пище (за исключением тех случаев, где иные условия оговариваются особо). Умерщвление животных осуществляли передозировкой эфирного наркоза.

Исследование влияния густого экстракта княжика сибирского на ориентировочно-исследовательское поведение оценивали на модели "открытое поле", изучали обучаемость условному рефлексу пассивного избегания у мышей, перенесших гипоксическую травму (табл.4, 5). Также для более точной оценки дополнительно выполняли исследования по влиянию препарата на течение иммобилизационного стресса (табл.6).

Ориентировочно-исследовательское поведение изучали в условиях модели "открытое поле", представляющей один из наиболее часто используемых методических приемов, применяемых для суждения о функциональном состоянии центральной нервной системы [3, 4]. Экспериментальная установка "открытое поле" представляет камеру размером 40×40×20 см с квадратным полом и стенками белого цвета. Ее пол, разделенный на 16 квадратов, имеет в каждом из них круглое отверстие диаметром 3 см. Сверху камера освещается электрической лампой накаливания мощностью 100 Вт, расположенной на высоте 1 м от пола. Мышь помещают в один из углов камеры и в течение 2 мин регистрируют количество перемещений с квадрата на квадрат (горизонтальная активность), количество вставаний на задние лапки (вертикальная активность), количество обследований отверстий (норковый рефлекс), количество умываний (груминг) и количество актов дефекации по количеству фекальных шариков (болюсов), вычисляют коэффициент асимметрии поведения в виде отношения количества горизонтальных перемещений к общей двигательной активности, выраженного в процентах.

Гипоксическую травму изучали в условиях гипоксии гермообъема. Для более детальной оценки влияния гипоксической травмы у мышей изучали не только выживаемость в условиях гипоксии, но и оценивали функциональное состояние центральной нервной системы по состоянию ориентировочно-исследовательского поведения и памяти по воспроизведению условного рефлекса пассивного избегания (УРПИ), который вырабатывают непосредственно перед гипоксическим воздействием, как это описано ниже. Гипоксию гермообъема моделировали помещением мышей, предварительно отобранных по массе (г), в герметически закрываемую камеру объемом 250 мл. Мышей выдерживали до наступления судорожного припадка, после чего животных извлекали из камеры, давали отсидеться 1 ч и затем у них изучали ориентировочно-исследовательское поведение в "открытом поле". Методика условного рефлекса пассивного избегания [3, 5] основана на подавлении врожденного рефлекса предпочтения темного пространства у грызунов. Экспериментальная установка представляет камеру, состоящую из двух отсеков - большого (светлого) и малого (темного). Животное помещают в светлый отсек и через некоторое время оно переходит в темный, после чего отверстие, соединяющее оба отсека, перекрывают дверкой и на пол темного отсека, представляющего собой решетку из параллельных чередующихся электродов, подают электрический ток импульсами продолжительностью 50 мс частотой 5 Гц и амплитудой 50 мА. Через 20 с дверку открывают и животное может выскочить в светлый отсек с обычным полом. В результате описанной процедуры у животных вырабатывали условный рефлекс избегания темного пространства. Для выработки рефлекса животное помещали в угол камеры светлого отсека, противоположный от входа, и наблюдали в течение 3 мин. Регистрировали время первого захода в темный отсек (латентное время захода), суммарное время пребывания в темном отсеке, количество животных с выработанным рефлексом. Сохраненным рефлекс считали, если в течение 3 мин наблюдения животное ни разу не посетило темный отсек. Если латентное время захода превышало 150 с, это считалось признаком наличия рефлекса. Проверку наличия рефлекса осуществляли через 24 и 48 ч после гипоксического воздействия.

Иммобилизационный стресс создавали подвешиванием животных за шейную складку на 22 ч [6]. По истечении указанного времени мышей снимали и через 15 мин после стресса у них изучали ориентировочно-исследовательское поведение в "открытом поле", регистрируют эмоциональную реакцию по методу Brady и Nauta [7], определяли количество лейкоцитов в периферической крови, после чего животных забивали и определяли массу селезенки, тимуса, надпочечников, подсчитывали количество язв на слизистой оболочке желудка и рассчитывали весовые коэффициенты органов в пересчете на 20 г массы тела. Затем по методу Ю.И.Добрякова [6] определяли степень выраженности стресса в баллах. При оценке поведенческих показателей использовали балльную шкалу, аналогичную принятой в методе Ю.И.Добрякова в нашей модификации [8].

Препараты и экстракты вводили зондом в желудок в виде раствора или взвеси в воде очищенной 5-кратно в течение 5 дней (5-й раз за 1 ч до тестирования). В качестве препаратов сравнения использовали пирацетам ("Ноотропил", Chieh-Polfa Group) в дозе 400 мг/кг как эталонный препарат на ноотропную активность.

Полученные экспериментальные данные обрабатывали статистически с использованием параметрического критерия Фишера и непараметрического критерия Вилкоксона [9, 10].

Результаты исследования приведены в табл.4-7.

Как показывают данные в таблицах 4 и 5, густой экстракт княжика во всех дозах практически в равной мере улучшает указанные поведенческие показатели при регистрации через 1 ч после гипоксической травмы. При проверке через 24 ч после гипоксического воздействия густой экстракт княжика восстанавливает воспроизводимость рефлекса приблизительно в равной мере во всех исследованных дозах от 75 до 92%.

При проведении исследований по влиянию на поведение и состояние внутренних органов при остром иммобилизационном стрессе густой экстракт княжика положительно влиял на поведение животных, перенесших стресс. Это выражалось в активации поведения, нормализации изменений коэффициента асимметрии поведения и эмоциональной реакции, измененных стрессом. Отмечено также снижение лейкоцитоза и количества язв в желудке (табл.6). При этом эффект экстракта княжика превосходит по ноотропной активности (сохранность ориентирвочно-исследовательского поведения в открытом поле и условного рефлекса пассивного избегания после гипоксической травмы) эталонный препарат "Гинсана" и соответствует с незначительным преимуществом эффекту пирацетама. В условиях данной методики оптимальной является доза 100 мг/кг. Густой экстракт княжика и таблетки на его основе не отличаются по фармакологической активности.

Таким образом, густой экстракт княжика и таблетки на его основе (табл.7, 8) проявляют выраженный ноотропный эффект в дозе 100 мг/кг, которая включена в таблетки. Так как вспомогательные вещества, такие как аэросил, магния стеарат, нерастворимы в воде, то таблетки вводятся животным в виде суспензии, что не мешает всасыванию действующих веществ в желудочно-кишечном тракте.

Литература

1. Chinna С. Current clinical aspects of ginseng research // Osterreichische Apoteker - Zeitung. - 1992. - В.19, №46. - S.377-381.

2. Иванова А.А. Технология лекарственных форм. - М.: Медицина, 1991. - 4.2. - С.134-220).

3. Буреш Я. Методики и основные эксперименты по изучению мозга и поведения / Я.Буреш, О.Бурешова, Дж.П.Хьюстон - М.: Высшая школа, 1991. - 398 с.

4. Walsh R.N. The open - field test: a critical review / R.N.Walsh, R.A.Cummins // Psychol. Bull. - 1976. - V.83. - P.482-504.

5. Методические рекомендации по скринингу и доклиническому испытанию антигипоксических средств Мин. Здравоохранения СССР. - М.: 1989. - 20 с.

6. Добряков Ю.И. Скрининговый метод оценки антистрессорного действия препаратов // Стресс и адаптация: Тез. Всесоюз. симпоз. - Кишинев, 1978. - С.172.

7. Brady J.V. Subcortical mechanisms in emotional behavioral effective changes following septal forebrain lesions in albino rat / J.V.Brady, W.J.H.Nauta // J. comparative and physiol. psychol. - 1953. - V.46, №3. - P.339-341.

8. Суслов Н.И. Патогенетическое обоснование психофармакологических эффектов препаратов природного происхождения. Дисс. докт. мед. наук. - Томск, 1995. - 406 с.

9. Беленький М.Л. Элементы количественной оценки фармакологического эффекта. - Л.: Медицина, 1963. - С.81-147.

10. Зайцев Г.Н. Математическая статистика в экспериментальной ботанике. - М.: Наука, 1984. - 425 с.

Таблица 1
Пропись 1
Экстракта княжика густого (остаточная влажность 25%)	0,066 г	20,63%
Вспомогательных веществ (молочный сахар,		55,20%
микрокристаллическая целлюлоза,		13,80%
полиплаздон XL-10, крахмал картофельный, аэросил, магния	до 0,32 г	10,37%
стеарат)
Таблица 2
Пропись 2
Экстракта княжика густого (остаточная влажность 25%)	0,066 г	20,63%
Вспомогательных веществ (молочный сахар, полиплаздон XL-10, крахмал картофельный, аэросил, магния стеарат)	до 0,32 г	79,37%
Таблица 3
Пропись 3
Экстракта княжика густого (остаточная влажность 25%)	0,066 г	20,63%
Вспомогательных веществ (молочный сахар,		34,50%
микрокристаллическая целлюлоза,		34,50%
полиплаздон XL-10, крахмал картофельный, аэросил, магния стеарат)	До 0,32 г	10,37%

Таблица 4Влияние густого экстракта княжика сибирского в сравнении с пирацетамом на основные показатели ориентировочно-исследовательского поведения в "открытом поле" и сохранность условного рефлекса пассивного избегания у мышей после гипоксического воздействия (Хср±m; n=12)
Группы наблюдения, доза	Суммарная двигательная активность	Коэффициент асимметрии	Доля животных с наличием рефлексам, %
1 час	24 часа	1 час	24 часа	24 часа
Интактный контроль	35±4	51±4	44±3	50±6	100
Гипоксический	54±3*	60±2*	90±4*	85±4*	25*
контроль	р<0,05	р<0,05	р<0,05	р<0,05	р<0,05
Экстракт	50±7	56±4	52±5	56±3#	75#
княжика, 20 мг/кг				р<0,05	р<0,05
Экстракт	43±8	48±3#	52±4#	65±3#	92#
княжика, 100 мг/кг		р<0,05	р<0,05	р<0,05	р<0,05
Экстракт	38±4	49±5	57±5#	70±5#	82#
княжика, 500 мг/кг			р<0,05	р<0,05	р<0,05
Экстракт	42±6	19±4#	55±3#	49±4#	75#
княжика, 2000 мг/кг		р<0,05	р<0,05	р<0,05	р<0,05
Гинсана	42±6	43±4*	59±4#	75±5	83,3#
100 мг/кг		р<0,05	р<0,05		р<0,05
Пирацетам,	42±6	57±4#	63±5#	47±3	100#
400 мг/кг		р<0,05	р<0,05		р<0,05
Примечание: * - различия достоверны в отношении интактного контроля;# - различия достоверны в отношении гипоксического контроля.

Таблица 5Влияние густого экстракта княжика сибирского в сравнении с пирацетамом на содержание лейкоцитов в периферической крови и процесс язвообразования в желудке у животных, перенесших иммобилизационный стресс (Хср±m; n=12)
Группа наблюдения, доза	Количество лейкоцитов, г/л	Количество язв в желудке	Баллы
Интактный контроль	7,2±0,6	0°0	0
Стрессовый	14,5±1,9*	2,0±0,3*	24
контроль	р<0,001	р<0,001
Экстракт	7,5±1,6#	0,9±0,2#	13
княжика, 20 мг/кг	р<0,001	р<0,01
Экстракт	5,4±0,3#	0,2±0,1#	9
княжика, 100 мг/кг	р<0,001	р<0,001
Экстракт	8,0±1,0#	0,5±0,3#	11
княжика, 500 мг/кг	р<0,001	р<0,05
Экстракт	9,0±0,8#	0,3±0,2#	11
княжика, 2000 мг/кг	р<0,001	р<0,001
Гинсана	9,1±0,9#	0.4±0.2#	11
100 мг/кг	р<0,001	р<0.001
Пирацетам,	9,1±0,9#	0,4±0,2#	10
400 мг/кг	р<0,001	р<0,001
Примечание: * - различия достоверны в отношении интактного контроля;# - различия достоверны в отношении стрессового контроля

Таблица 6Влияние таблеток княжика сибирского в сравнении с пирацетамом на основные показатели ориентировочно-исследовательского поведения в "открытом поле" и сохранность условного рефлекса пассивного избегания у мышей после гипоксического воздействия (Хср±m; n=12)
Группа наблюдения, доза	Суммарная двигательная активность	Коэффициент асимметрии	Доля животных с наличием рефлекса, %
1 час	24 часа	1 час	24 часа	24 часа
Интактный контроль	35±4	48±2	44±3	50±6	100
Гипоксический	54±3*	60±2*	90±4*	85±4*	25*
контроль	р<0,05	р<0,05	р<0,05	р<0,05	р<0,05
Таблетки	50±5	44±4	52±5#	63±3#	90#
княжика, 640 мг/кг			р<0,05	р<0,05	р<0,05
Экстракт	43±8	48±3#	52±4#	65±3#	92#
княжика, 100 мг/кг		р<0,05	р<0,05	р<0,05	р<0,05
Гинсана	42±6	43±4*	59±4#	75±5	83,3#
100 мг/кг		р<0,05	р<0,05		р<0,05
Пирацетам,	49±3	57±4	63±5#	47±3	100#<0,05
400 мг/кг			р<0,05
Примечание: * - различия достоверны в отношении интактного контроля;# - различия достоверны в отношении гипоксического контроля.

Таблица 7Влияние таблеток княжика в сравнении с пирацетамом на содержание лейкоцитов в периферической крови и процесс язвообразования в желудке у животных, перенесших иммобилизационный стресс (Хср±m; n=12)
Группа наблюдения, доза	Количество лейкоцитов, г/л	Количество язв в желудке	Баллы
Интактный контроль	7,2±0,6	0±0	0
Стрессовый	14,5±1,9*	2,0±0,3*	24
контроль	р<0,001	р<0,001
Таблетки	6,5±0,6#	0,2±0,2#	9
княжика, 640 мг/кг	р<0,001	р<0,01
Экстракт	5,4±0,3#	0,2±0,1#	9
княжика, 100 мг/кг	р<0,001	р<0,001
Гинсана	9,1±0,9#	0.4±0.2#	11
100 мг/кг	р<0,001	р<0.001
Пирацетам,	9,1±0,9#	0,4±0,2#	10
400 мг/кг	р<0,001	р<0,001
Примечание: * - различия достоверны в отношении интактного контроля;# - различия достоверны в отношении стрессового контроля

1. Ноотропное средство, содержащее экстракт княжика сибирского, отличающееся тем, что оно содержит сгущенный экстракт княжика сибирского, полученный путем сгущения жидкого спиртового экстракта княжика сибирского под вакуумом при температуре 50°С до содержания влаги 25%, и наполнители, включающие молочный сахар, микрокристаллическую целлюлозу, полиплаздон XL-10, крахмал картофельный, аэросил, магния стеарат при следующем соотношении, мас.%:

Экстракт княжика сибирского сгущенный	20,02-21,24
Молочный сахар	53,54-56,86
Микрокристаллическая целлюлоза	13,39-14,21
Полиплаздон XL-10	3,03-3,21
Крахмал картофельный	2,27-2,41
Аэросил	3,79-4,03
Магния стеарат	0,97-1,03

2. Состав по п.1, отличающийся тем, что выполнен в виде таблеток.