Способ диагностики стертой формы врожденной гиперплазии коры надпочечников с дефектом 11бета-гидроксилазы

Способ диагностики стертой формы врожденной гиперплазии коры надпочечников с дефектом 11бета-гидроксилазы

Реферат

Изобретение относится к медицине, а именно к эндокринологии и лабораторной диагностике, и может быть использовано для диагностики стертой формы врожденной гиперплазии коры надпочечников (ВГКН) с дефектом 11β-гидроксилазы при вирильных синдромах, аденомах коры надпочечников и у больных с артериальной гипертензией неясного генеза.

Важнейшим биохимическим маркером 11β-гидроксилазной недостаточности является 11-дезоксикортизол. Повышение содержания в крови 11-дезоксикортизола (S) и 11-дезоксикортикостерона (DOC) считается характерным лабораторным признаком недостаточности 11β-гидроксилазы. Диагноз может быть заподозрен при повышении концентраций гормонов после стимуляции адренокортикотропным гормоном (АКТГ) в 3 и более раз над 95-м перцентилем нормы для соответствующего возраста (White P.С. Steroid 11β-hydroxylase deficiency and related disorders // Endocrinol. Metab. Clin. N. Am. - 2001. - Vol.30, №1. - P.61-79.). Наиболее распространенными в нашей стране являются пробы с использованием препарата «Синактен-депо», который является синтетическим аналогом АКТГ с длительностью действия 36 часов (пик через 9 часов после введения).

Ряд авторов обращает внимание на то, что у многих пациентов с дефектом 11β-гидроксилазы повышен уровень 17-ОНП, что вполне объяснимо, так как данный стероид является субстратом для синтеза S. Однако это может привести к ошибочной диагностике дефекта 21-гидроксилазы, что повлечет за собой неправильный выбор тактики лечения.

Задачей изобретения является расширение арсенала средств диагностики стертой формы ВГКН с дефектом 11β-гидроксилазы.

Поставленная задача решается тем, что в способе диагностики стертой формы ВГКН с дефектом 11β-гидроксилазы, включающем проведение пробы с адренокортикотропным гормоном и определение в крови уровня 11-дезоксикортизола (S), согласно изобретению методом высокоэффективной жидкостной хроматографии дополнительно определяют в крови уровни кортизола (F), кортизона (Е), кортикостерона (В), рассчитывают соотношения уровня кортизола к уровню кортизона (F/E) и к уровню 11-дезоксикортизола (F/S) и при уровне 11-дезоксикортизола более 7,0 нг/мл, уровне кортикостерона менее 17 нг/мл, соотношении F/E менее 5 и соотношении F/S менее 16 диагностируют стертую форму ВГКН с дефектом 11β-гидроксилазы.

Для определения критериев диагностики были обследованы 26 больных со случайно выявленными опухолями коры надпочечников (инциденталомами), 45 женщин с вирильным синдромом и 19 больных с гипоталамическим синдромом, у которых были установлены нарушения надпочечникового стероидогенеза, характерные для дефекта 11β-гидроксилазы, и 30 здоровых людей, которые составили контрольную группу.

На основании изучения данных, полученных при количественном определении в крови кортикостероидов методом обращенно-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) при стимуляции кортикотропином пациентов исследуемых групп, были установлены диагностические критерии стертой формы ВГКН с дефектом 11β-гидроксилазы.

Статистическая обработка данных осуществлялась с использованием пакета STATISTICA for WINDOWS (версия 5.11). Количественные показатели представлялись в виде Me (LQ-UQ), где Ме-медиана, LQ-нижний квартиль, UQ-верхний квартиль. В случае распределения, близкого к нормальному, данные представлялись в виде средних значений (М)±стандартное отклонение (STD). Сравнение средних значений количественных показателей осуществлялось с использованием непараметрического критерия Манна-Уитни. Статистически значимым считался критерий достоверности р<0,05.

Способ осуществляют, например, следующим образом.

Исследования проводят до пробы и на пробе через 9 часов после введения 1 мг «Синактен-депо». Для анализа берут 1 мл сыворотки крови. Хроматографирование проводят, например, при следующих условиях: хроматограф жидкостный Чехия, насос НРР 4001, УФ детектор LCD 2563 (λ=254 нм), колонка Kromasil С-18 150 мм, 5 мкм, изократический режим элюирования, подвижная фаза 30% и 45% ацетонитрил-вода CH3CN-H2O (1 часть - 26:74 v/v, 2 часть - 41:59 v/v), скорость элюента 0,3 мл/мин. Для улучшения разделения стероидов, имеющих близкие времена удерживания, применяют β-циклодекстрин. Предел обнаружения 1-2 нг/мл.

Определяют уровни 11-дезоксикортизола, кортизола, кортизона, кортикостерона, рассчитывают соотношения уровня кортизола к уровню кортизона (F/E) и к уровню 11-дезоксикортизола (F/S) и при уровне 11-дезоксикортизола более 7,0 нг/мл, уровне кортикостерона менее 17 нг/мл, соотношении F/E менее 5 и соотношении F/S менее 16 на пробе диагностируют стертую форму ВГКН с дефектом 11β-гидроксилазы.

Способ иллюстрируется следующими клиническими примерами.

1. Пациентка Н. 32 г., Вирильный синдром, мышечная слабость, акне, гиперандрогения.

Традиционные методы диагностики:

Проба с синактеном: кортизол - 315-600 нмоль/л, 17-ОНП - 0,9-3,5 нг/мл, андростендион - 1,1-0,9 нг/мл, ДЭА - 15 нг/мл. На основании традиционных методов исключен дефект 21-гидроксилазы.

Данные ВЭЖХ кортикостероидов крови:
№	Наименование	Фон	Проба с синактеном	Ед. измерения
1	Кортизол (F)	73,6	133,6	нг/мл
2	Кортизон (Е)	15,4	32,1	нг/мл
3	Кортикостерон (В)	2,4	11,9	нг/мл
4	11-дезоксикортикостерон (DOC)	1	1	нг/мл
5	11-дезоксикортизол (S)	11,2	15,7	нг/мл
6	F/E	4,7	4,1
7	F/S	6,6	8,5

Увеличение уровня 11-дезоксикортизола на пробе с синактеном до 15,7 нг/мл, повышение кортикостерона до 11,9 нг/мл и индексы F/E и F/S свидетельствуют о стертой форме ВГКН с дефектом 11β-гидроксилазы.

2. Пациент Ш. 18 л. 167 см, 46 кг. Слабость, артериальная гипертензия, задержка полового развития.

№	Наименование	Фон	Проба с синактеном	Ед. измерения.
1	Кортизол (F)	24,2	160,6	нг/мл
2	Кортизон (Е)	14,2	40	нг/мл
3	Кортикостерон (В)	1	15,4	нг/мл
4	11-дезоксикортикостерон (DOC)	3,8	2	нг/мл
5	11-дезоксикортизол (S)	6,3	23,5	нг/мл
6	F/E	1,7	4,0
7	F/S	3,8	6,8
8	17-ОНП	1,0	3,0	нг/мл
9	Кортизол	258	1000	Н моль/л
10	Андростендион	2,4	2,5	нг/мл
11	Тестостерон	12		Н моль/л
12	ДЭА	12	20	Мкг/мл
13	ЛГ	1,7		МЕ/л
14	ФСГ	1,1		МЕ/л

Увеличение уровня 11-дезоксикортизола, уровень кортикостерона и индексы F/S и F/E на пробе с синактеном свидетельствуют о стертой форме ВГКН с дефектом 11β-гидроксилазы.

3. Пациентка Д. 47 лет. - инциденталома 1,3×1,4 см, артериальная гипертензия с 20 лет, ожирение (ИМТ=53,0), синдром поликистозных яичников.

№	Наименование	Фон	Проба с синактеном	Ед. измерения
1	Кортизол (F)	40,7	187,2	нг/мл
2	Кортизон (Е)	10,5	38,2	нг/мл
3	Кортикостерон (В)	2	9,8	нг/мл
4	11-дезоксикортикостерон (DOC)	1	1	нг/мл
5	11-дезоксикортизол (S)	8,4	28,7	нг/мл
6	F/E	3,8	4,9
7	F/S	4,8	6,5
8	17-ОНП	0,5	2,5	нг/мл
9	Кортизол	290	872	Н моль/л
10	Андростендион	3,7	3,3	нг/мл
11	ДЭА-сульфат	2,4		Мкг/мл

Увеличение уровня 11-дезоксикортизола, уровень кортикостерона и индексы F/S и F/E на пробе с синактеном свидетельствуют о стертой форме ВГКН с дефектом 11β-гидроксилазы.

Заявленный способ диагностики стертой формы врожденной гиперплазии коры надпочечников с дефектом 11β-гидроксилазы дает дополнительные критерии диагностики, расширяя тем самым арсенал средств.

Способ диагностики стертой формы врожденной гиперплазии коры надпочечников с дефектом 11β-гидроксилазы, включающий проведение пробы с адренокортикотропным гормоном и определение в крови уровня 11-дезоксикортизола, отличающийся тем, что методом высокоэффективной жидкостной хроматографии дополнительно определяют в крови уровни кортизола, кортизона, кортикостерона, рассчитывают соотношения уровня кортизола к уровню кортизона и к уровню 11-дезоксикортизола и при уровне 11-дезоксикортизола более 7,0 нг/мл, уровне кортикостерона менее 17 нг/мл, соотношении уровня кортизола к уровню кортизона менее 5 и соотношении уровня кортизола к уровню 11-дезоксикортизола менее 16 диагностируют стертую форму врожденной гиперплазии коры надпочечников с дефектом 11β-гидроксилазы.