Блок-сополимер с пониженным содержанием примесей, полимерный носитель, фармацевтические препараты в полимерной форме и способы их получения

Блок-сополимер с пониженным содержанием примесей, полимерный носитель, фармацевтические препараты в полимерной форме и способы их получения

Иллюстрации

Показать все

Реферат

ОБЛАСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Настоящее изобретение относится к блок-сополимеру высокой степени чистоты, который можно использовать в качестве носителя для транспортировки лекарств или т.п., к полимерному носителю, который образован в результате конденсации блок-сополимера с антрациклиновым противораковым агентом, и используется в качестве носителя лекарств, к полимерному фармацевтическому препарату, полученному с использованием полимерного носителя, и к способу их получения. Кроме того, настоящее изобретение относится также к способу количественного определения примесей, содержащихся в блок-сополимере.

ПРЕДПОСЫЛКИ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Известен подход, с помощью которого, используя полимерный носитель, который образует мицеллы, лекарства, гены и т.п., доставляют в нужный участок живого организма; однако в том, что касается используемого для этой цели блок-сополимера, то содержащиеся в нем примеси не были удалены из него в достаточной степени.

Обычно процессы очистки синтетических высокомолекулярных соединений, таких как блок-сополимеры, осуществляли, используя методы, такие как диализ, ультрафильтрация и осаждение. В способах очистки с использованием диализа и ультрафильтрации процессы разделения и очистки осуществляют на основе различий в молекулярных массах. Обычно мембраны для диализа и ультрафильтрационные пленки классифицируют на группы в зависимости от максимальной молекулярной массы, которую они пропускают; однако наблюдаются большие расхождения в точности молекулярных масс фракций. Соответственно, способы очистки синтетических высокомолекулярных соединений, таких как блок-сополимеры, с помощью диализа и ультрафильтрации, не могут обеспечить достаточной степени очистки в тех случаях, когда нет значительных различий между молекулярной массой целевого синтетического высокомолекулярного соединения и молекулярными массами примесей. Кроме того, эти способы не пригодны для промышленного использования и в большинстве случаев используются в качестве лабораторных способов очистки.

Напротив, способ очистки, в котором используют процесс осаждения, широко использовался как способ, который пригоден также и для промышленного применения. В этом способе, используя различия в растворимости, примеси удаляют таким образом, чтобы осуществить процесс очистки, и этот способ превосходен для удаления низкомолекулярных компонентов из синтетического высокомолекулярного соединения, такого как блок-сополимер. Однако, в том случае, когда молекулярные массы примесей, таких как полиэтиленгликоли и поли(кислые аминокислоты), велики, существует лишь небольшое различие в растворимостях синтетических высокомолекулярных соединений, таких как блок-сополимеры, и в растворимостях примесей; в результате высокомолекулярные соединения, такие как блок-сополимеры, не удается очистить в достаточной степени, используя процесс осаждения.

Как было описано выше, примеси с высокой молекулярной массой, содержащиеся в блок-сополимере, не удавалось удалить в достаточной степени, и до сих пор не известен способ очистки, который удобно использовать для получения блок-сополимера, который применим также для фармацевтических препаратов и т.п. Кроме того, что касается образующего мицеллы блок-сополимера, обладающего амфипатическими свойствами, обычный способ количественного определения содержания примесей в блок-сополимере не дает удовлетворительных аналитических результатов.

В обычном способе синтетическое высокомолекулярное соединение, такое как блок-сополимер, растворяют в растворителе и анализируют, используя высокоскоростную жидкостную хроматографию, совмещенную с гель-фильтрационной колонкой (гель-проникающая хроматография: GPC).

Однако в том случае, когда существует лишь небольшое различие в молекулярных массах блок-сополимера и содержащихся в нем примесей, оказывается затруднительным разделить их до чистых пиков, и не представляется возможным получить достаточные характеристики для количественного определения содержания примесей.

Кроме того, даже в том случае, когда существует достаточное различие в их молекулярных массах, если количество примесей мало, не удается получить чистые пики. Это связано с тем, что, так как механизм гель-проникающего разделения использует молекулярную диффузию, пики имеют тенденцию к уширению на хроматограмме, что приводит к недостаточным высотам пиков для компонент, содержащихся в малых количествах. Соответственно, обычные методы не могли обеспечить достаточно эффективного способа количественного определения.

Кроме того, так как при использовании обычного способа разделяют и количественно определяют основной компонент и примеси на основании только различия в молекулярных массах, при этом не получают качественной информации, например относительно строения и происхождения примесей.

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Авторы настоящего изобретения предприняли обширные исследования с целью решения вышеуказанных задач, результатом чего явилось настоящее изобретение.

Другими словами, настоящее изобретение относится к:

1) Блок-сополимеру полиэтиленгликолей и поли(кислой аминокислоты), или его соли, где содержание в нем примесей не превышает 10 мас.%.

2) Блок-сополимеру или его соли по п.1, где примесями являются полиэтиленгликоли и поли(кислые аминокислоты).

3) Блок-сополимеру или его соли по п.1 или 2, где поли(кислая аминокислота) является полиаспарагиновой кислотой.

4) Блок-сополимеру или его соли по п.1 или 2, где блок-сополимер является сополимером, представленным формулой (I):

(где R¹ представляет атом водорода или низшую алкильную группу, R² представляет связующую группу, R³ представляет метиленовую группу или этиленовую группу, и R⁴ представляет атом водорода или защитную группу аминогруппы, и n является целым числом от 5 до 1000, m является целым числом от 2 до 300, и х является целым числом от 0 до 300; однако х не может быть больше, чем m).

5) Блок-сополимеру или его соли по п. 4, где R¹ представляет алкильную группу, содержащую от 1 до 5 атомов углерода, R² представляет алкиленовую группу, содержащую от 1 до 5 атомов углерода, R³ представляет метиленовую группу или этиленовую группу, и R⁴ представляет атом водорода или ацильную группу, содержащую от 1 до 5 атомов углерода, n является целым числом от 5 до 1000, m является целым числом от 2 до 300, и х является целым числом от 0 до 300, однако х не может быть больше, чем m в формуле (1).

6) Блок-сополимеру или его соли по п. 4, где R¹ представляет метильную группу, R² представляет триметиленовую группу, R³ представляет метиленовую группу, и R⁴ представляет ацетильную группу, n является целым числом от 20 до 500, m является целым числом от 10 до 100, и х является целым числом от 0 до 100, однако х не может быть больше, чем m в формуле (1).

7) Способу получения блок-сополимера или его соли по любому из пп.1-6, в котором производное полиэтиленгликоля очищают с помощью ионообменной смолы для получения блок-сополимера, и, при необходимости, после удаления защитной группы, осуществляют процесс очистки, используя разделительную/адсорбционную смолу.

8) Полимерному носителю, где поли(кислую аминокислоту) блок-сополимера по любому из пп.1-6 конденсируют с остатком антрациклинового противоракового агента.

9) Полимерному носителю по п. 8, где конденсация поли(кислой аминокислоты) и остатка антрациклинового противоракового агента является конденсацией карбоновой кислоты боковой цепи поли(кислой аминокислоты) и остатка антрациклинового противоракового агента.

10) Полимерному носителю по п. 8 или 9, где остаток антрациклинового противоракового агента является остатком доксорубицина.

11) Полимерному носителю по п. 8 или 9, где остаток антрациклинового противоракового агента в поли(кислой аминокислоте) характеризуется степенью связывания от 30 до 55%.

12) Способу получения полимерного носителя по любому из пп.8-11, где после выделения продукта конденсации блок-сополимера, раскрытого в любом из пп.1-6, и вспомогательного агента реакции, продукт конденсации взаимодействует с антрациклиновым противораковым агентом.

13) Способу получения полимерного носителя по п.12, где антрациклиновый противораковый агент является доксорубицином или его солью.

14) Полимерному фармацевтическому препарату, содержащему комплекс блок-сополимер - лекарство, в котором антрациклиновый противораковый агент содержится во внутреннем ядре мицеллы, образованной полимерным носителем по любому из пп.8-11.

15) Полимерному фармацевтическому препарату по п.14, где антрациклиновый противораковый агент является доксорубицином или его солью.

16) Полимерному фармацевтическому препарату по пп.14 или 15, где комплекс блок-сополимер - лекарство находится в форме высушенного вымораживанием вещества.

17) Способу количественного определения содержания примесей, содержащихся в блок-сополимере полиэтиленгликолей и поли(кислой аминокислоты) по п.1, включающий стадии:

растворения блок-сополимера в растворителе;

обработки раствора смолой и

обработки обработанного раствора с помощью высокоскоростной жидкостной хроматографии, с использованием колонки для гель-проникающей хроматографии.

18) Способу количественного определения по п.17, в котором растворителем является вода, которая может содержать органический растворитель, который смешан с водой, смола является ионообменной смолой, и примесями являются полиэтиленгликоли.

19) Способу количественного определения по п.17, в котором растворителем является вода, которая может содержать органический растворитель, который смешан с водой, смола является разделительной/адсорбционной смолой, которая адсорбирует соединение, содержащее простую эфирную связь, и примесями являются поли(кислые аминокислоты).

ПРЕДПОЧТИТЕЛЬНЫЙ СПОСОБ ОСУЩЕСТВЛЕНИЯ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Далее следует описание с более подробным обсуждением деталей изобретения.

Первый аспект настоящего изобретения относится к блок-сополимеру полиэтиленгликолей и поли(кислой аминокислоты), или его соли, в котором содержание примесей не превышает 10 мас.%. В результате анализа примесей, содержащихся в блок-сополимере, было обнаружено, что эти примеси состоят из полиэтиленгликолей и поли(кислой аминокислоты), то есть полиаминокислоты, содержащей карбоновую кислоту в своей боковой цепи. Примеры полиэтиленгликолей включают полиэтиленгликоль и полиэтиленгликоль с одной концевой алкоксигруппой. Примеры поли(кислой аминокислоты) включают полиглутаминовую кислоту и полиаспарагиновую кислоту.

В настоящем изобретении, что касается поли(кислой аминокислоты) в блок-сополимере полиэтиленгликолей и поли(кислой аминокислоты), примеры ее включают полимер α- и/или β-аминокислоты, содержащей карбоксильную группу в боковой цепи, предпочтительно, полиглутаминовую или полиаспарагиновую кислоту, и что касается блок-сополимера, то его примеры включают блок-сополимеры, представленные вышеуказанными формулами (1) или (2), или их солями.

(где R¹ представляет атом водорода или низшую алкильную группу, R² представляет связующую группу, R³ представляет метиленовую группу или этиленовую группу, и R⁴ представляет атом водорода или защитную группу аминогруппы, и n является целым числом от 5 до 1000, m является целым числом от 2 до 300, и х является целым числом от 0 до 300; однако х не может быть больше, чем m).

Здесь, примеры R¹ включают атом водорода или низшую алкильную группу, и предпочтительно используют низшую алкильную группу, конкретные примеры которой включают метильную группу, этильную группу, н-пропильную группу и изопропильную группу; в частности, более предпочтительно используют метильную группу. Что касается связующей группы R², то ее примеры включают углеводородную группу, которая может быть разветвленной, и предпочтительно алкиленовую группу, и ее конкретные примеры включают этиленовую группу, триметиленовую группу и тетраметиленовую группу; в частности, наиболее предпочтительно используют этиленовую группу и триметиленовую группу. Что касается R³, то используют метиленовую группу или этиленовую группу, и более предпочтительно используют метиленовую группу.

Что касается R⁴, то используют атом водорода или защитную группу аминогруппы, а что касается защитной группы аминогруппы, то она конкретно не ограничена, и можно использовать любую группу, если она является обычно используемой защитной группой для аминогруппы; в частности, предпочтительно используют низшую ацильную группу, и ее конкретные примеры включают формильную группу, ацетильную группу, пропионильную и бутироильную группу, и более предпочтительно используют ацетильную группу. Здесь n является целым числом от 5 до 1000, более предпочтительно, от 20 до 500, наиболее предпочтительно, 80 до 300, m является целым числом от 2 до 300, более предпочтительно, от 10 до 100, наиболее предпочтительно от 20 до 50, и х является целым числом от 0 до 300, более предпочтительно, от 0 до 100, наиболее предпочтительно, от 0 до 50; однако х не может быть больше, чем m.

Что касается солей блок-сополимера настоящего изобретения, то их конкретные примеры включают соли щелочных металлов, соли щелочноземельных металлов, аммонийные соли и органические аммонийные соли, и предпочтительными солями являются натриевая соль, калиевая соль, кальциевая соль, аммонийная соль и соль триэтиламмония.

Считают, что примеси, содержащиеся в блок-сополимере, не образуют мицелл и не имеют функций служения в качестве полимерного носителя для лекарства, гена или т.п.; поэтому для целей использования в медицине содержание примесей предпочтительно снижают до величины, не превышающей 10%, более предпочтительно, не превышающей 5%.

Кроме того, второй аспект настоящего изобретения относится к способу получения блок-сополимера полиэтиленгликолей и поли(кислой аминокислоты) или его соли, где полиэтиленгликоли очищают, используя ионообменную смолу, с последующим образованием блок-сополимера с поли(кислой аминокислотой), и после удаления при необходимости защитной группы; блок-сополимер очищают, используя разделительную/адсорбционную смолу. Что касается блок-сополимера полиэтиленгликолей и поли(кислой аминокислоты), то предпочтительно используют тот же блок-сополимер полиэтиленгликолей и поли(кислой аминокислоты). В тех случаях, когда блок-сополимер защищен защитной группой, то, что касается защитных групп, хотя нет конкретных ограничений, если только они нормально защищают карбоксильную группу в боковой цепи кислой аминокислоты, примеры их включают сложный эфир с низшим спиртом и сложный эфир с низшим спиртом, замещенным арильной группой, которая может иметь заместитель. Конкретными примерами являются метиловый сложный эфир, этиловый сложный эфир, пропиловый сложный эфир, бутиловый сложный эфир, бензиловый сложный эфир, фенэтиловый сложный эфир, n-метоксибензиловый сложный эфир и n-нитробензиловый сложный эфир. Что касается способа удаления защитной группы, то подходящий способ выбирают из обычно используемых способов в зависимости от характера защитной группы, и можно использовать, например, гидролитический способ с применением кислоты или щелочи, и способ гидрогенолиза с использованием катализатора, или т.п.

Что касается блок-сополимера полиэтиленгликолей и поли(кислой аминокислоты) настоящего изобретения с пониженным содержанием примесей, то в последующем описании будет обсужден способ очистки, например, соединения, представленного формулой (1).

Что касается способа получения блок-сополимера, то предложены различные способы; например, в выложенной японской патентной заявке (Japanese Patent Application Laid-Open) № 6-206832 раскрыт способ, в котором материал, полученный в результате модификации гидроксидной группы полиэтиленгликоля, содержащего на одном конце метоксигруппу, подвергают реакции полимеризации с производными аспарагиновой кислоты с последующей защитой аминогруппы, затем сложноэфирную связь гидролизуют для получения блок-сополимера; однако до сих пор не было известно какого-либо способа очистки для получения блок-сополимера высокой степени чистоты.

Способ модификации гидроксидной группы полиэтиленгликоля, содержащего на одном конце метоксигруппу, можно осуществить способом, в котором используют реакции, известные специалистам в этой области; например, были предложены следующие способы:

способ, где в реакции участвует этиленимин или т.п., способ, где, после осуществления реакции присоединения Михаэля для акрилонитрила, метакрилонитрила или т.п. нитрильную группу восстанавливают, превращая в аминогруппу, способ, где, после замещения группы гидроксида группой галогена, осуществляют реакцию с аминоспиртом, таким как этаноламин, и способ, где гидроксидную группу непосредственно превращают в нитрильную группу, а затем восстанавливают до аминогруппы.

Полиэтиленгликоли, концевая группа которых модифицирована до аминогруппы, включают полиэтиленгликоли, содержащие на одном конце неполную модификацию, например, полиэтиленгликоль, содержащий на одном конце гидроксидную группу, и полиэтиленгликоль, к концевой группе которого присоединен акрилонитрил.

Такие полиэтиленгликоли, с неполной модификацией можно удалить отдельно, используя ионообменные материалы, содержащие кислотную функциональную группу. Хотя и без конкретных ограничений, если они только содержат кислотную функциональную группу, примеры ионообменных материалов, которые можно использовать, включают: Diaion SKIB (продукт Mitsubishi Chemical Corporation), Diaion PK-216 (продукт Mitsubishi Chemical Corporation), Diaion WK-10 (продукт Mitsubishi Chemical Corporation), Diaion WK20 (продукт Mitsubishi Chemical Corporation), Amberlite 120В (продукт Rohm and Haas Japan Co.), Amberlite 200C (продукт Rohm and Haas Japan Co.) / Amber lite IRC-50 (продукт Rohm and Haas Japan Co.), Amberlite IRC-76 (продукт Rohm and Haas Japan Co.) и DowexSOW (продукт Dow Chemical Corp.), которые служат в качестве ионообменных смол; и также включают SP-Sephadex C-25 (продукт Pharmacia Biotech), SP-Sephadex С-50 (продукт Pharmacia Biotech), CM-Sephadex C-25 (продукт Pharmacia Biotech), CM-Sephadex С-50 (продукт Pharmacia Biotech), SP-Toyopearl 550 (продукт Toso К.К.), SP-Toyopearl 650 (продукт Toso К.К.), CM-Sephadex 550 (продукт Pharmacia) и CM-Sephadex 650 (продукт Pharmacia), которые служат в качестве ионообменных гелей, и, в частности, предпочтительно используют SP-Toyopearl 650 и CM-Sephadex 650.

Способ очистки полученного полиэтиленгликоля может быть либо порционным способом, либо способом с использованием колонки; причем более предпочтительно использовать способ с использованием колонки. Другими словами, полиэтиленгликоль, содержащий на одном конце метоксигруппу, содержащий модифицированную концевую группу, растворяют в растворителе. Растворитель, который можно использовать, конкретно не ограничен, если только его можно использовать в способе ионообмена, и предпочтительно используют воду или смешанный растворитель вода/органический растворитель, такой как вода/метанол и вода/ацетонитрил. Затем полученный раствор пропускают через колонку, в которую был загружен вышеуказанный ионообменный материал, восстановленный в H⁺ форме, и затем колонку промывают водой или смешанным растворителем вода/органический растворитель, с тем чтобы полиэтиленгликоли, которые были не полностью модифицированы, были удалены из нее. После этого, полиэтиленгликоль, содержащий на одном конце метоксигруппу, с концевой группой, модифицированной до аминогруппы, который был адсорбирован, элюируют, используя растворитель, к которому добавлено основное вещество, такое как водный аммиак или смешанный растворитель водный аммиак/органический растворитель. Элюированный таким образом раствор обрабатывают соответствующим способом, таким как конденсирование или сушка вымораживанием, с тем, чтобы получить полиэтиленгликоль, содержащий на одном конце метоксигруппу, где концевая группа модифицирована до аминогруппы, с высокой степенью чистоты.

Затем осуществляют взаимодействие полиэтиленгликоля, содержащего на одном конце метоксигруппу, где концевая группа модифицирована до аминогруппы, например, с N-карбоновым ангидридом аминокислоты, в которой карбоксильная группа боковой цепи была защищена, с тем, чтобы получить блок-сополимер, и, при необходимости, концевую аминогруппу затем ацетилируют, используя уксусный ангидрид или т.п. После этого, при необходимости, удаляют защитные группы на боковых цепях, с тем, чтобы получить блок-сополимер полиэтиленгликоль - поли(кислая аминокислота).

Полученный таким образом блок-сополимер полиэтиленгликоль - поли(кислая аминокислота) содержит в качестве примеси поли(кислую аминокислоту); однако, его можно очистить, используя разделительную/адсорбционную смолу. Что касается разделительной/адсорбционной смолы, то ее примеры включают силикагель, силикатные порошки, силикагель, модифицированный углеводородами, и смолу стирол/дивинилбензол, и предпочтительно используют смолу стирол/дивинилбензол; кроме того, более предпочтительно используют HP-20 SS (продукт Mitsubishi Chemical Corporation).

Способ очистки полученного сополимера полиэтиленгликоль - поли(кислая аминокислота) может быть либо порционным, либо способом с использованием колонки; и более предпочтительно используют способ с использованием колонки. Другими словами, блок-сополимер полиэтиленгликоль - поли(кислая аминокислота) растворяют в растворителе. Растворитель, который можно использовать, конкретно не ограничен, если только он обладает достаточными основными свойствами для диссоциации поли(кислой аминокислоты), и применим в отношении разделительной/адсорбционной смолы; и предпочтительные примеры включают водный раствор гидроксида щелочного металла или смешанный раствор водного раствора гидроксида щелочного металла и органического растворителя, такой как водный раствор гидроксид натрия/метанол и водный раствор гидроксид натрия/ацетонитрил. Раствор блок-сополимера полиэтиленгликоль - поли(кислая аминокислота) в растворителе пропускают через колонку, в которую помещена разделительная/адсорбционная смола, и затем через колонку пропускают водный раствор гидроксида натрия или смешанный растворитель, состоящий из водного раствора гидроксида натрия/органического растворителя, для того, чтобы удалить поли(кислую аминокислоту). После этого, адсорбированный блок-сополимер полиэтиленгликоль - поли(кислая аминокислота) элюируют, используя менее полярный растворитель, такой как смешанный растворитель, состоящий из воды/органического растворителя с возрастающим содержанием органического растворителя. Элюированный таким образом раствор подвергают соответствующей последующей обработке, такой как конденсирование, сушка вымораживанием или осаждение, с тем, чтобы получить блок-сополимер полиэтиленгликоль - поли(кислая аминокислота) с высокой степенью чистоты.

Третий аспект настоящего изобретения относится полимерному носителю, который получен путем конденсирования очищенного блок-сополимера полиэтиленгликолей и поли(кислой аминокислоты), вместе с антрациклиновым противораковым агентом. Что касается полимерного носителя, то предложены высокомолекулярные соединения, представленные следующими формулами (3) или (4). Настоящее изобретение включает также их соли.

(где R представляет гидроксидную группу или остаток антрациклинового противоракового агента, R¹ представляет атом водорода или низшую алкильную группу, R² представляет связующую группу, R³ представляет метиленовую группу или этиленовую группу, и R⁴ представляет атом водорода или защитную группу аминогруппы, и n является целым числом от 5 до 1000, m является целым числом от 2 до 300, и х + у является целым числом от 0 до 300; однако х + у не может быть больше, чем m).

Что касается R в соединениях, представленных формулами (3) или (4) настоящего изобретения, примеры его включают гидроксидную группу или остаток антрациклинового противоракового агента. В поли(кислой аминокислотной) части блок-сополимера порядок связывания соответствующих составляющих частей конкретно не ограничен и может быть случайным или упорядоченным набором. Тип связи между остатком карбоновой кислоты в боковой цепи поли(кислой аминокислоты) блок-сополимера и остатком антрациклинового противоракового агента конкретно не ограничен, и предпочтительно используют амидную связь с аминогруппой остатка антрациклинового противоракового агента. В частности, предпочтительно используют амидную связь, образованную первичной аминогруппой аминосахарной части остатка антрациклинового противоракового агента. Доля антрациклинового противоракового агента, связанного с остатками карбоновой кислоты боковых цепей поли(кислой аминокислотной) части, составляет от 1 до 100%, и если принять во внимание способность образовывать мицеллы, эта доля должна предпочтительно находиться в интервале значений от 10 до 60%, более предпочтительно от 30 до 55%. Примеры остатков антрациклинового противоракового агента включают остатки, такие как даунорубицин, доксорубицин, акрарубицин, эпирубицин и пирарубицин, и более предпочтительно использовать доксорубициновые остатки.

R¹, R², R³, R⁴, n и m имеют предпочтительно указанные выше значения.

Здесь, х + у является целым числом от 0 до 300, предпочтительно от 0 до 100, более предпочтительно от 0 до 50, и х и у могут принимать любые значения, включая 0, если только каждый из них является целым числом, удовлетворяющим вышеуказанным условиям.

Кроме того, четвертый аспект настоящего изобретения относится к способу получения полимерного носителя, который получают таким способом, где: очищенный блок-сополимер полиэтиленгликолей и поли(кислой аминокислоты) конденсируют со вспомогательным реакционным агентом, и, после выделения полученного в результате конденсации соединения, осуществляют реакцию с антрациклиновым противораковым агентом. Полимерный носитель получают способом, раскрытым в брошюре международной публикации № W097/12895, то есть способом, где блок-сополимер и антрациклиновый противораковый агент конденсируют, используя дегидратирующий конденсирующий агент типа карбодиимида; однако, при этом ацилизомочевина, которая является активным промежуточным соединением, за счет внутримолекулярной перегруппировки превращается в ацилмочевину в качестве побочного продукта, что приводит к получению полимерного носителя с примесью ацилмочевины. Выделяя соединение, полученное в результате конденсирования блок-сополимера и вспомогательного реакционного агента, оказывается возможным уменьшить содержание побочного продукта - ацилмочевины, и соответственно получить полимерный носитель с меньшей примесью ацилмочевины. Температура отверстия для ввода газового хроматографа должна быть доведена до достаточно высокого значения, тогда количество примеси побочного продукта ацилмочевины количественно измеряют, определяя количество изоцианатных производных, которые образовались при термическом разложении ацилмочевины.

Приводимое далее описание разъясняет вышеуказанный способ получения более конкретно: очищенный блок-сополимер растворяют в органическом растворителе, и к этому добавляют дегидратирующий конденсирующий агент и вспомогательный реакционный агент, с тем, чтобы осуществилась реакция, и производные алкилмочевины, образующиеся в этой реакции, отфильтровывают, с тем чтобы выделить из фильтрата активный сложноэфирный материал. Затем, после того как к полученному активному сложноэфирному материалу в органическом растворителе добавляют антрациклиновый противораковый агент или его соль, к этому добавляют основание, и полимерный носитель выделяют из реакционного раствора. Что касается органического растворителя, то хотя нет конкретных ограничений, если только реакционный материал в нем растворяется, предпочтительно используют неводный полярный растворитель, и его примеры включают диметилформамид, диметилацетамид и 1,3-диметил-2-имидазолидинон, и более предпочтительно используют диметилформамид. Что касается дегидратирующего конденсирующего агента, который можно использовать для конденсации блок-сополимера и вспомогательного реакционного агента, то используют конденсирующий агент, который обычно используют для пептидного синтеза, и предпочтительно используют такой как дициклогексилкарбодиимид (DCC) и 1-этил-3-(3-диметиламинопропил)карбодиимид (EDC). Что касается вспомогательного реакционного агента, то используют реакционный вспомогательный агент такой, который обычно используют для пептидного синтеза. Примеры его включают N-гидроксисоединения, и предпочтительно используют N-гидроксисукцинимид, N-гидроксибензотриазол и т.п. Что касается основания, которое можно использовать, то хотя нет конкретных ограничений, предпочтительно используют органическое основание, такое как триэтиламин. Что касается антрациклинового противоракового агента, то используют соединения на основе антрациклина, которые обеспечивают вышеуказанный остаток антрациклинового противоракового агента.

Кроме того, пятый аспект настоящего изобретения относится к полимерному фармацевтическому препарату, который содержит комплекс блок-сополимер - лекарство, где антрациклиновый противораковый агент заключен в ядра мицелл, образованных полимерным носителем, который получен в результате очистки блок-сополимера полиэтиленгликолей и поли(кислой аминокислоты). Примеры антрациклиновых противораковых агентов включают соединения, такие как даунорубицин, акрарубицин, эпирубицин и пирарубицин, или их соли, и наиболее предпочтительно использовать доксорубицин или его соли. Кроме того, следующий аспект настоящего изобретения относится также к полимерному фармацевтическому препарату, в котором комплекс блок-сополимер - лекарство находится в форме высушенного вымораживанием вещества. Способ получения вышеуказанного полимерного фармацевтического препарата конкретно не ограничен, и при необходимости можно использовать способ, раскрытый в открытой японской патентной заявке № 7-69900, который представляет способ, где смешанный растворитель, состоящий из диметилформамида и воды, в котором растворены блок-сополимер и антрациклиновый противораковый агент, подвергают диализу, используя мембрану для диализа, и осуществляют ультрафильтрации с использованием ультрафильтрационной пленки, и при необходимости сушат вымораживанием.

Кроме того, можно использовать другой способ, в котором блок-сополимер и антрациклиновый противораковый агент растворяют в смешанном растворителе, состоящем из смешанного с водой низкокипящего органического растворителя, такого как этанол и вода, и полученный раствор конденсируют, чтобы отогнать низкокипящий органический растворитель, и при необходимости сушат вымораживанием.

Шестой аспект настоящего изобретения относится к способу количественного определения, в котором после количественного определения содержания примесей, содержащихся в вышеуказанном блок-сополимере полиэтиленгликолей и поли(кислой аминокислоты), блок-сополимер растворяют в растворителе, и раствор обрабатывают смолой, затем обработанный раствор обрабатывают с помощью высокоскоростной жидкостной хроматографии, используя колонку для гель-проникающей хроматографии. Что касается блок-сополимера полиэтиленгликолей и поли(кислой аминокислоты) и примесей, содержащихся в блок-сополимере, то их примеры те же, что были раскрыты выше.

Что касается растворителя, используемого в настоящем изобретении для растворения блок-сополимера полиэтиленгликолей и поли(кислой аминокислоты) после количественного определения содержания полиэтиленгликолей, содержащихся в качестве примесей, можно использовать любой растворитель, который способен растворить блок-сополимер; и предпочтительно использовать, водный раствор, рН которого устанавливают, используя соответствующую соль, или смешанный растворитель, состоящий из этого водного раствора и органического растворителя, такого как метанол, этанол, ацетонитрил и тетрагидрофуран. Что касается солей, которые можно использовать для установления нужного значения рН, то можно использовать обычно используемые соли, обладающие буферирующей функцией, и предпочтительно используют фосфаты, бораты, гидрокарбонаты натрия, фталаты, трис-гидрохлориды и т.п.

Кроме того, что касается растворителей, используемых для количественного определения полиаминокислот, содержащихся в качестве примесей, можно использовать любой растворитель, который способен растворить блок-сополимер полиэтиленгликолей и поли(кислой аминокислоты) и обеспечить диссоциацию карбоновых кислот в боковых цепях, после количественного определения полиэтиленгликолей; и предпочтительно использовать водный раствор, рН которого устанавливают, используя подходящую соль или смешанный растворитель, состоящий из такого водного раствора и органического растворителя, такого как метанол, этанол, ацетонитрил и тетрагидрофуран. Для того, чтобы должным образом обеспечить диссоциацию карбоновой кислоты в боковых цепях, рН растворителя предпочтительно устанавливают в интервале значений от 5 до 13, и, что касается соли, которую можно использовать для этой цели, то используют вышеуказанные фосфаты, бораты, гидрокарбонат натрия, фталаты, трис-гидрохлориды и т.п.

В настоящем изобретении, что касается смолы, которую используют для обработки раствора блок-сополимера после количественного определения содержания полиэтиленгликолей, содержащихся в блок-сополимере в качестве примесей, предпочтительно использовать ионообменную смолу, которая может образовывать противоион для иона диссоциированной группы блок-сополимера, то есть, анионообменноую смолу; и без конкретных ограничений можно использовать любую ионообменную смолу, такую как диалкиламин, триалкиламин и диалкилэтаноламин, если только она содержит основную функциональную группу.

Что касается способа анализа, то можно использовать либо порционный способ, либо способ, включающий использование колонки; причем более предпочтительно использовать способ с использованием колонки.

В способе с использованием колонки предложен способ, где: в открытую колонку загружают ионообменную смолу, такую как Diaion SA10A (продукт Mitsubishi Chemical Corporation), Diaion PA318 (продукт Mitsubishi Chemical Corporation), Diaion SA20A (продукт Mitsubishi Chemical Corporation), Diaion WA30 (продукт Mitsubishi Chemical Corporation), Diaion WA10 (продукт Mitsubishi Chemical Corporation), Amberlite IRA402 (продукт Rohm and Haas Japan Co.), Amberlite MR904 (продукт Rohm and Haas Japan Co.), Amberlite IRA410 (продукт Rohm and Haas Japan Co.), Amberlite IRA93 (продукт Rohm and Haas Japan Co.), Amberlite IRA68 (продукт Rohm and Haas Japan Co.) и Dowex66 (продукт Dow Chemical Japan Corp.); целлюлозный ионообменный материал, такой как Cellex QAE (продукт Bio-Rad Co., Ltd.), Cellex PEI (продукт Bio-Rad Co., Ltd.), Cellex D (продукт Bio-Rad Co., Ltd.) и Cellex DE52 (продукт Bio-Rad Co., Ltd.); или гелевый ионообменный материал, такой как QAE-Sephadex A25 (продукт Pharmacia Biotech), QAE-Sephadex A50 (продукт Pharmacia Biotech), DEAE-Sephadex A25 (продукт Pharmacia Biotech), DEAE-Sephadex A50 (продукт Pharmacia Biotech), DEAE-Separose CL-6B (продукт Pharmacia Biotech) и DEAE-Bio Gel А (продукт Pharmacia Biotech); или предложен другой способ, в котором коммерческий картридж, который заранее заправлен ионообменной смолой, используют для предварительной обработки с помощью высокоскоростной жидкостной хроматографии, такие как Sep-Pak QMA (продукт Waters Co., Ltd.), Sep-Pak NH2 (Waters Co., Ltd.), Bond Elut PSA (продукт Barian Co., Ltd.), Bond Elut DMA (продукт Barian Co., Ltd.) и Bond Elut SAX (продукт Barian Co., Ltd.). С точки зрения простоты анализов более предпочтительно использовать способ, в котором используют картриджи. В частности более предпочтительно использовать Sep-Pak QMA.

В случае количественного анализа полиэтиленгликолей, содержащихся в блок-сополимере в качестве примесей, некоторые полиэтиленгликоли, которые были подвергнуты вышеуказанной обработке на смоле и были элюированы без того, чтобы быть адсорбированными на смоле, анализируют, используя колонку для гель-проникающей хроматографии, для получения результатов анализа. В этом способе, так как элюированный раствор можно сконденсировать до высоких концентраций, оказывается возможным количественно анализировать полиэтиленгликоли с высокой степенью чувствитель