Способ лечения хронических диффузных заболеваний печени

Способ лечения хронических диффузных заболеваний печени

Реферат

Настоящее изобретение относится к области медицины, в частности к методам лечения хронических диффузных заболеваний печени, сопровождающихся развитием печеночно-клеточной недостаточности, включая цирроз печени токсической, вирусной и смешанной этиологии, хронические гепатиты, первичный склерозирующий холангит, но не ограничиваясь этими патологиями. Причиной печеночно-клеточной недостаточности у больных хроническими диффузными заболеваниями печени является гибель гепатоцитов вследствие токсического воздействия различных агентов и замещение погибших клеток соединительной тканью. Единственным эффективным методом лечения конечных стадий печеночно-клеточной недостаточности остается трансплантация печени. Однако дефицит донорских органов является лимитирующим фактором. В этой связи большой интерес представляют технологии заместительной клеточной терапии, которые являются альтернативой органной трансплантации. Известно, что высокая регенераторная способность печени обусловлена пролиферацией гепатоцитов. Поэтому одним из направлений заместительной клеточной терапии является трансплантация зрелых гепатоцитов. Изолированные гепатоциты могут вводиться в подкожную клетчатку, селезенку, паренхиму печени [1]. При этом в качестве донорского материала могут использоваться не только гепатоциты взрослого человека, но и клетки фетальной печени [2, 3].

Так, описан метод, согласно которому с целью купирования печеночно-клеточной недостаточности аутологичные гепатоциты, выделенные из фрагментов печени, вводились в селезенку больным с циррозом печени и хроническим гепатитом [4]. Трансплантация гепатоцитов не сопровождалась развитием каких-либо осложнений, однако в силу использования аутологичного материала и получения малого количества гепатоцитов заметного клинического эффекта отмечено не было. Известен также способ, согласно которому пациентам под капсулу прямой мышцы живота вводили аллогенные клетки (в количестве около миллиарда клеток), полученные из печени 9-17-недельных плодов человека. Введение таких клеток не сопровождалось развитием трансплантационных реакций и у части пациентов сопровождалось уменьшением проявлений печеночно-клеточной недостаточности [5].

Недостатком вышеизложенных методов является то, что введение гепатоцитов позволяет только временно улучшить функцию печени, не влияя существенным образом на процессы репарации поврежденной печеночной паренхимы. Большую проблему представляет изоляция донорских гепатоцитов и поддержание их функциональной активности при хранении, риск переноса инфекции при использовании аллогенного донорского материала и возможность развития трансплантационных реакций. В случае использования клеток эмбриональной печени существуют морально-этические ограничения, высокий риск контаминации материала бактериальной и/или вирусной микрофлорой. Кроме того, в литературе обсуждается возможность злокачественной трансформации эмбриональных клеток.

Проведенные впоследствии исследования показали, что наряду с гепатоцитами важную роль в регенерации печени, особенно при хронических повреждениях печеночных клеток, играют стволовые клетки печени, способные дифференцироваться в гепатоциты и холангиоциты. Так, известен способ получения стволовых клеток печени для лечения дегенеративных заболеваний печени [Патент US 6,129,911, опуб. 10.10.2000 г.]. Согласно данному методу из ткани печени получают стволовые клетки (СК) или дуплеты стволовых клеток с гепатоцитами, которые вводятся пациентам. Процедура выделения СК включает дезаггрегацию соединительной ткани путем ферментативной обработки, фильтрацию через поры нейлонового волокна, центрифугирование в градиенте плотности перколла, негативную селекцию на магнитных бусах, ферментативную обработку трипсином и позитивную селекцию клеток, экспрессирующих маркеры стволовых клеток - СК19, ССАМ, дипептидил-пептидаза-4 с помощью магнитных бус или проточной цитофлюориметрии. Полученные стволовые клетки вводятся либо через портальную вену, либо депонируются в селезенку, поджелудочную железу. Источником клеток может быть собственная печеночная ткань, полученная при биопсии или частичной гепатэктомии; трупная печеночная ткань доноров; печеночная ткань плодов. Существенными недостатками этого подхода являются сложность и дороговизна выделения стволовых клеток печени, ограничение в получении достаточного количества аутологичных стволовых клеток и отсутствие доказательной базы эффективности лечения при патологии печени у человека.

Помимо стволовых клеток печени, в регенерации печени могут также участвовать СК костного мозга. Так, было показано, что при трансплантации аллогенного костного мозга доноров-мужчин в печени женщин-реципиентов обнаруживаются печеночные клетки с Y-хромосомой [6]. Кроме того, показано, что трансплантация СК костного мозга мышам в модели летальной патологии, связанной с выраженной печеночной недостаточностью вследствие дефицита фермента фумарилацетотацетат гидролазы, сопровождается выживанием 30% животных. Эти данные послужили основанием для использования СК костного мозга с целью стимуляции регенерации печени [7].

Так, Goff и Peterson был предложен способ трансплантации клеток костного мозга с целью стимуляции регенерации и восстановления печени [Патент № WO 0050048, опуб. 31.08.2000 г.]. Согласно данному способу для стимуляции регенерации в организм реципиента вводятся клетки костного мозга в дозе, достаточной, чтобы обеспечить образование новых гепатоцитов, холангиоцитов и/или овальных клеток печени. В качестве источника стволовых клеток также может использоваться обогащенная фракция овальных клеток печени, выделенных с помощью антител, распознающих Thy 1 антиген. Клетки костного мозга или овальные клетки могут быть генно-модифицированы, чтобы экспрессировать функциональный активный протеин, трансплантированы на матриксе или обработаны перед трансплантацией ростовыми факторами. Перед трансплантацией клетки костного мозга могут быть обогащены с помощью выделения клеток, экспрессирующих маркеры стволовых клеток (Thy 1, CD34, Flt-3 ligand, c-kit), с помощью методов сепарации на магнитных бусах, аффинной хроматографии или проточной цитофлюориметрии. При этом появление в печени клеток (гепатоциты, холангиоциты, овальные клетки) донорского костномозгового происхождения доказывалось на экспериментальных моделях крыс по появлению гепатоцитов с маркерами донорских стволовых клеток.

Однако существенным недостатком данного способа является отсутствие данных о его клинической эффективности при лечении патологии печени у человека. Не ясно, каким образом скажется появление гепатоцитов костномозгового происхождения на течение патологического процесса в печени. Тем более, что модель повреждения печени у экспериментальных животных принципиально отличается от реальной клинической ситуации по этиологическим факторам, срокам развития патологического процесса и механизмам его формирования. Другим недостатком является отсутствие данных об объеме забора костного мозга у человека, достаточного для генерации новых печеночных клеток.

Известен также способ лечения хронического гепатита (заявка RU №2003105379, опубликованная 20.09.2004 г.), заключающийся в гепатопротекторном и иммуносупрессивном воздействии путем введения гептрала, легалона, ЛИВ-52, преднизолона, азатиоприна и аминокислотных смесей, а также введении цитокина Г-КСФ, вызывающего миграцию стволовых кроветворных клеток из костного мозга на периферию, способных репопулировать печень и дифференцироваться в гепатоциты. Однако введение Г-КСФ у больных с хроническим гепатитом, как и при прочих хронических диффузных заболеваниях печени, может привести к активации воспалительного процесса вследствие способности Г-КСФ вызывать увеличение содержания нейтрофилов и продукции ими провоспалительных цитокинов. Кроме того, применение иммунодепрессантов может, с одной стороны, спровоцировать активацию репликации вирусов у больных с хроническим гепатитом вирусной этиологии, а с другой, - снизить эффективность миграции стволовых клеток в печень и дифференцировку их в эпителиальные клетки печени. Наконец, по своему определению метод рассчитан на лечение хронических гепатитов и не включает категорию больных с исходами в цирроз, при которых ведущим патогенетическим фактором является печеночно-клеточная недостаточность.

Технической задачей настоящего изобретения является создание способа лечения хронических диффузных заболеваний печени, включающих лечение широкого спектра болезней, сопровождающихся печеночно-клеточной недостаточностью, в том числе цирроза печени.

Поставленная задача решается за счет применения гепатопротекторов и трансплантации стволовых клеток, непосредственно выделенных из аспирата костного мозга пациента, которые вводят внутривенно и внутрипеченочно под ультразвуковым контролем, содержащих количество СD34-позитивных клеток, достаточное для достижения клинического эффекта.

Применение заявленного способа позволяет добиться значимого улучшения клинико-лабораторных показателей за счет снижения проявлений печеночно-клеточной недостаточности у больных хроническими диффузными заболеваниями печени, в том числе у пациентов с циррозом печени токсической и вирусной этиологии. При этом лечение с использованием предложенного способа является хорошо переносимым и не вызывает развития каких-либо побочных или токсических реакций.

Способ осуществляется следующим образом. Пациент получает курсовое лечение гепатопротекторами в виде препаратов урсодезоксихолиевой кислоты (урсосан или урсофальк в дозе 10-15 мг/кг веса/сутки и/или гептрал (800 мг, в/в, 5-10 инъекций). После этого у больного в условиях операционной при анестезиологической поддержке специалистом-гематологом проводится процедура трепанобиопсии, во время которой из крыла подвздошной кости в стерильный флакон с раствором гепарина (10000-15000 Ед) забирается аспират костного мозга в объеме 200-300 мл. В лабораторном блоке флакон инкубируется при 37°С в течение 40 мин. После гравитационного разделения цельного костного мозга в отдельный флакон собирается "верхняя" фракция, состоящая из клеток лейковзвеси, которые затем центрифугируются и осаждаются (1200 об/мин, 15 мин). Надосадок, содержащий аутоплазму, собирают в отдельный стерильный флакон, а осадок клеток лейковзвеси ресуспендируют в 40-50 мл фосфат-забуференного физиологического раствора, содержащего 10 Ед/мл гепарина (ЗФР/гепарин). Затем клетки лейковзвеси наслаивают на градиент плотности фиколла-верографина (1,078 г/л) и центрифугируют в течение 20 мин при 3000 об/мин. Собранные из интерфазы костномозговые мононуклеарные клетки (МНК КМ) троекратно отмывают в ЗФР/гепарине. С целью характеристики выделенных клеток и подсчета стволовых кроветворных клеток определяют общее количество выделенных МНК КМ, их жизнеспособность по окраске трипановым синим, а также относительное содержание среди них CD34⁺ стволовых клеток методом проточной цитофлюориметрии (FACSCallibur, Becton Dickinson). Половину выделенных клеток ресуспендируют в 2-3 мл физиологического раствора, дополненного 10% (v/v) аутоплазмы (первая порция). Другую половину - в 50-100 мл физиологического раствора, дополненного 10% (v/v) аутоплазмы (вторая порция). Первую порцию вводят внутрипеченочно в 3-5 точек из одного укола под ультразвуковым контролем. Вторую порцию - внутривенно капельно.

Данный способ лечения хронических диффузных заболеваний печени был проверен в клинических условиях на базе иммунологического отделения клиники иммунопатологии ГУ НИИ Клинической иммунологи СО РАМН г.Новосибирска. Предложенным способом было пролечено 14 пациентов (8 мужчин и 6 женщин) в возрасте от 27 до 67 лет. Согласно данным гистологического исследования биоптата печени у всех пациентов выявлялся цирроз печени. Согласно классификации Чайлд-Пью цирроз в стадии А диагностировался в 43% (6/14) случаев, в стадии В - в 50% (7/14)случаев, стадии С - в 7% (1/14). Причиной цирроза у 4 пациентов явился токсический гепатит, у 6 - хронические вирусные гепатиты (В, С или сочетанные варианты - В+С, B+D), у 4 - гепатиты смешанной этиологии (вирусный+токсический). Количество выделенных из аспирата костного мозга МНК варьировало от 0,65×10⁹ до 5,3×10⁹ клеток и в среднем составляло 1,77±0,2×10⁹. Количество вводимых СК в пересчете на СD34-позитивные клетки составило в среднем 107±26×10⁶ клеток, варьируя в диапазоне минимальных и максимальных значений от 40 до 240×10⁶ клеток.

Трансплантация стволовых клеток характеризовалась хорошей переносимостью, в частности отсутствием побочных реакций. Субфебрильная температура регистрировалась только у 2 из 14 пациентов. По данным проспективного наблюдения, через 1-3 месяца после трансплантации 43% пациентов отмечали субъективное улучшение состояния в виде снижения выраженности астеновегетативного синдрома, улучшения работоспособности и жизненной активности. Объективно уменьшение отеков, болевого, диспепсического и геморрагического синдромов регистрировалось соответственно в 57; 86; 93 и 43% случаев. По данным биохимического обследования через 1-3 месяца после трансплантации увеличение альбумина сыворотки крови отмечалось у 64,3% пациентов, снижение ACT и АЛТ - у 71,4% пациентов. Ухудшение состояния в виде нарастания печеночно-клеточной недостаточности спустя 2 месяца после трансплантации было зарегистрировано только у 1 пациента.

Таким образом, предложенный способ лечения хронических диффузных заболеваний печени с использованием гепатопротекторов и трансплантации аутологичных стволовых клеток костного мозга позволяет добиться положительной динамики клинико-лабораторных показателей, в том числе снижения цитолиза и улучшения белково-синтезирующей функции печени, что свидетельствует о снижении выраженности печеночно-клеточной недостаточности. При этом лечение с использованием предложенного способа является хорошо переносимым и не вызывает развития каких-либо побочных или токсических реакций.

Ниже приведены клинические примеры, поясняющие данный способ лечения у больных с циррозом печени.

Пример 1. Больной А., 41 год.

Поступил в клинику иммунопатологии 15.10.2003 г. с жалобами на сильную общую слабость, снижение работоспособности, изжогу, постоянную горечь во рту, рвоту иногда с примесью крови, боли ноющего характера в правом подреберье, не связанные с приемом пищи, кожный зуд.

Пациент на протяжении многих лет злоупотреблял алкоголем. Диагноз цирроза печени был впервые поставлен в 1994 году, когда появились слабость, увеличение живота, снижение массы тела, боли в правом подреберье и эпигастрии. Тогда же была диагностирована язвенная болезнь двенадцатиперстной кишки. Маркеры на гепатиты В, С и D всегда были отрицательные. Неоднократно лечился в гастроэнтерологических отделениях.

При осмотре: состояние больного средней тяжести. Кожные покровы сухие, серовато-желтого цвета, в подмышечных областях гипергидроз. На коже груди единичные сосудистые звездочки, гинекомастия, в околопупочной области расширение вен передней брюшной стенки, наличие пальмарной эритемы. Язык влажный, "малиновый", у корня покрыт беловато-желтым налетом, на языке единичные мелкие "трещины".

При пальпации живот мягкий, пальпируется увеличенная выступающая на 5 см печень, край плотный, закруглен. Размеры печени по Курлову 14×15,5×16 см. Селезенка не пальпируется. Свободной жидкости в брюшной полости не определяется. Результат патогистологического исследования: Хронический гепатит умеренной степени активности (ИГА=18 баллов), сформированный цирроз печени. В анализах: ПТИ - 84%, количество тромбоцитов 177 тыс/мкл; АСТ - 0,73 мМ/л; АЛТ - 0,60 мМ/л; индекс Де Ритиса - 1,2; ГГТП - 53,3; КФК - 373 Ед/л; холестерин - 6,69 мМ/л; бетта-липопротеиды - 64,5 Ед; общий белок - 77 г/л, альбумин - 49 г/л. По данным УЗИ: размеры печени увеличены - правая доля 14×13 см, левая - 6,0×5,4 см, селезенка S=58 см². Эхоскопически диффузные изменения печени, спленомегалия, признаки портальной гипертензии.

Диагноз после обследования: цирроз печени этаноловой этиологии, активная фаза, умеренной степени активности. Стадия А по классификации Чайлд-Пью.

Пациенту проведен курс лечения гепатопротекторами (гептрал 400 мг, в/в ×5 дней). 22.10.03 произведена трепанобиопсия и получено 200 мл аспирата костного мозга из крыла подвздошной кости, из которых выделено 650×10⁶ МНК, содержащих 60×10⁶ CD34⁺ клеток. Из них половина клеток в 2 мл физиологического раствора была введена под контролем УЗИ внутрипеченочно, а другая половина в объеме 50 мл физиологического раствора была введена внутривенно, калельно. Трансплантация стволовых клеток не сопровождалась развитием побочных эффектов. При осмотре через месяц отмечено улучшение состояния: значительное уменьшение слабости; исчезновение болей; изжоги, рвоты не отмечал; горечь во рту не беспокоит. При физикальном обследовании размеры печени уменьшились и составили по Курлову 12,5×14×15 см.

Через год - 01.11.2004 г. госпитализирован в клинику для повторного обследования. Жалобы: редко возникающие боли в правом подреберье, связанные с движением, склонность к запорам. При осмотре: пальмарная эритема отсутствует, уменьшилось количество сосудистых звездочек (имеется только одна телеангиоэктазия в области шеи), отмечается уменьшение выраженности гинекомастии. Пальпируется уплотненная левая доля печени, безболезненная. Размеры печени клинически не увеличены.

По данным патогистологического исследования: хронический гепатит слабой степени активности (ИГА=10 баллов). Фиброз 4 стадии (цирроз). В анализах крови тромбоциты - 162 тыс/мкл; АЛТ - 0,67 мМ/л; АСТ - 0,46 мМ/л; индекс Де Ритиса 0,68; альбумин - 44 г/л, КФК - 307 Ед/л, холестерин - 6,12 мМ/л; бетта-липопротеиды - 60,1 Ед.

Результаты УЗИ: печень - размеры нормальные: правая доля - 12×11 см, левая - 7×5,7 см, воротная вена - 14 мм; селезенка - S=50 см². Эхоскопически диффузные изменения печени, умеренные признаки портальной гипертензии.

Таким образом, спустя 12 месяцев после лечения по предложенному способу отмечена явная положительная динамика клинико-лабораторных показателей в виде исчезновения выраженной слабости, диспепсических расстройств, повышения работоспособности и толерантности к физическим нагрузкам, нормализации размеров печени и селезенки, снижения активности воспалительного процесса с 18 до 10 баллов по результатам гистологического исследования биоптатов печени, улучшение биохимических показателей крови.

Пример 2. Больная А., 36 лет.

Поступила в клинику иммунопатологии 15.06.2004 г. с жалобами на выраженную общую слабость, увеличение объема живота, отеки голеней и стоп, снижение диуреза в дни, свободные от приема мочегонных препаратов, желтушность кожи и склер, сухость кожи, сухость во рту, жажду, снижение аппетита и вздутие кишечника, боли в правом подреберье, одышку при незначительной нагрузке, сердцебиение, подкожные кровоизлияния на ногах и животе.

Больной себя считает с 1994 г. После проведения операции "кесарево сечение" длительно сохранялась общая слабость, субфебрилитет. В 1995 г. появились желтушность и зуд кожи. Диагностирован хронический холангиогепатит. Лечение включало гепатопротекторы, инфузионную терапию, витамины. В 1999 г. стала отмечать повышение массы тела за счет увеличения объема живота, снижение диуреза. При очередном обследовании в 2000 г. выявлены антитела к ВГС, при УЗИ - признаки цирроза печени, асцита, портальной гипертензии, на основании чего диагностирован цирроз печени вирусной этиологии, хронический вирусный гепатит С. Дополнительно были назначены диуретики с начальным хорошим эффектом - купировались признаки асцита. С осени 2003 г., несмотря на постоянный прием мочегонных препаратов, асцит сохранялся. После выписки из стационара практически не отмечалось улучшения, в 2004 г. присоединились отеки ног. В мае 2004 г. во время очередной госпитализации на ФГС выявлены признаки варикозного расширения вен пищевода, в анализах крови - анемический синдром легкой степени тяжести, гипопротеинемия с гипоальбуминемией, гепатоспленомегалия.

При объективном осмотре состояние больной средней степени тяжести, контактна, речь несколько замедленна. Отмечается иктеричность кожи и склер, "малиновый язык", расширение вен передней брюшной стенки, резкое увеличение объема живота, напряженность передней брюшной стенки за счет асцита. При пальпации живот умеренно болезненный по ходу кишечника, вздут. Печень и селезенка не пальпируются, перкуторно - размеры печени уменьшены, спленомегалия.

По данным лабораторных обследований выявлена анемия (Hb=101 г/л), лейкопения (лейкоцитов 3,2×10⁹/л) и тромбоцитопения (тромбоциты 77 тыс/мкл). Общий белок - 55,8 г/л; альбумины - 26,2 г/л; тимоловая проба - 15,7; билирубин общий - 60,6 мкМ/л, АЛТ - 190 Ед/л; ACT - 80 Ед/л; в моче определялось наличие ацетона и уробилина. По результатам УЗИ - уменьшение размеров печени, цирроз, асцит, портальная гипертензия, спленомегалия. Результаты патогистологического исследования от 17.06.2004 подтверждают признаки хронического гепатита умеренной степени активности, формирующийся цирроз печени. ПЦР на вирусный гепатит С в биоптате печени - отрицательная. При рентгеноскопии грудной клетки выявлен правосторонний гидроторакс.

Диагноз после обследования: Цирроз печени вирусной этиологии. Хронический вирусный гепатит С, активная фаза (умеренная степень активности). Стадия В по классификации Чайлд-Пью. Симптомы портальной гипертензии - варикозное расширение вен пищевода и передней брюшной стенки. Асцит. Синдром печеночно-клеточной недостаточности. Синдром гиперспленизма (цитопенический синдром). Правосторонний гидроторакс.

Больной проведен курс лечения гепатопротекторами, включающий урсофальк (10 мг/кг/сутки - 10 дней) и гептрал (800 мг в/в в течение 10 дней). 26.06.2004 г. выполнена процедура трансплантации аутологичных стволовых клеток. Выделенные из аспирата костного мозга МНК, содержащие 240 млн CD34⁺ клеток, введены в виде двух порций - 500 млн. в объеме 2 мл внутрипеченочно и 500 млн. в объеме 50 мл в/в капельно. Побочных реакции при введении стволовых клеток не наблюдалось.

При динамическом наблюдении через 1 месяц отмечено улучшение состояния: купировалась повышенная утомляемость, снизилась масса тела за счет уменьшения асцита, исчезли отеки на ногах, желтушность кожи, метеоризм, синяки на ногах, желтушная окраска склер. По данным лабораторного обследования: купировалась анемия (Hb - 130 г/л), увеличилось количество тромбоцитов до 290 тыс/мкл. В анализе мочи присутствия ацетона и уробилина не отмечено, АЛТ - 73 Ед/л, ACT - 118 ед., билирубин общий 24,8 мкМ/л, общий белок 75 г/л, альбумины - 32,1 г/л, тимоловая проба - 12 Ед.

Через 3 месяца - в сентябре 2004 г. отмечено дальнейшее снижение массы тела за счет уменьшения выраженности асцита, купирование диспепсического синдрома. При обследовании: Hb - 120 г/л, лейкоциты - 2,8×10⁹/L, тромбоциты - 190 тыс/мкл, АЛТ - 60 Ед/мл, ACT - 87 Ед/мл, билирубин общий 9 мкМ/л, общий белок - 66 г/л, альбумин - 30,8 г/л, тимоловая проба - 11,65 Ед. Полученные данные свидетельствуют о том, что спустя 1-3 месяца после лечения по предложенному способу у больной отмечена положительная динамика клинико-лабораторных показателей в виде снижения выраженности астеновегетативного синдрома, асцита, анемического и тромбоцитопенического синдромов, улучшения белково-синтетической функции печени (увеличение уровня альбумина), снижение цитолиза (уменьшение тимоловой пробы и АЛТ), нормализации анализа мочи (исчезновение ацетона и уробилина), что в целом указывает на уменьшение выраженности печеночно-клеточной недостаточности.

Таким образом, проверка предложенного подхода в клинических условиях позволяет сделать вывод, что данный способ, включающий применение гепатопротекторов и трансплантацию аутологичных стволовых клеток костного мозга позволяет добиться значимого улучшения клинико-лабораторных показателей за счет снижения проявлений печеночно-клеточной недостаточности, прежде всего синдромов цитолиза, мезенхимально-воспалительного, желтухи, портальной гипертензии и в несколько меньшей степени - холестаза, у больных хроническими диффузными заболеваниями печени, в том числе у пациентов с циррозом печени токсической и вирусной этиологии. При этом лечение с использованием предложенного способа является хорошо переносимым и не вызывает развития каких-либо побочных или токсических реакций.

Литература

1. Ohashi К., Park F., Kay M.A. Hepatocyte transplantation: clinical and experimental application. // J. Mol. Med. - 2001. - Vol.79. - P.617-630.

2. Hagihara M. et al: Effects of iso and xeno fetal liver fragments transplantation on acute and chronic liver failure in rats. Cell Transplant 3: 283-290, 1994.

3. Sukhikh G.T., Shtil A.A. Stem cell transplantation for treatment of liver diseases: From biological foundations to clinical experience (Review) // Inter. J. Mol. Med. - 2003. - Vol.11. - P.395-400.

4. Mito M., Kusano M., Kawaura Y. Hepatocyte transplantation in man. // Transplant Proc. - 1992. - Vol.24. - P.3052-3053.

5. Шумаков В.И., Гальперин Э.И., Неклюдова Е.А. Трансплантация печени. - M., 1981.

6. Alison MR., Poulsom R., Jeffery R., Dhillon AP., Quaglia A., Jacob J., Novelli M., Prentice G., Williamson J., Wright NA.: Hepatocytes from non-hepatic adult stem cells. Nature. - 2000. - Vol.406. - P.257-260.

7. Lagasse E., Connors H., Al-Dhalimy M., Reitsma M., Dohse M., Osbome L., Wang X., Finegold M., Weissman I.L., Grompe M. Purified hematopoietic stem cells can differentiate into hepatocytes in vivo. // Nat. Med. - 2000. - Vol.6. - P.1229-1234.

1. Способ лечения хронических диффузных заболеваний печени, включающий использование гепатопротекторов и трансплантацию стволовых клеток костного мозга, отличающийся тем, что используют стволовые клетки, непосредственно выделенные из аспирата костного мозга пациента, порцию которых рассчитывают таким образом, чтобы количество СD34-позитивные клеток в ней составило от 40 до 240×10⁶ клеток, которую делят на две половины, первую вводят внутрипеченочно, а вторую - внутривенно.

2. Способ по п.1, отличающийся тем, что хроническим диффузным заболеванием печени является цирроз печени.