Состав для стабилизации липидов

Состав для стабилизации липидов

Иллюстрации

Показать все

Реферат

Изобретение относится к области пищевой технологии, а именно к способам защиты липидов, масел, жиров от окисления и окислительной деструкции, и может быть использовано в пищевой, косметической и химико-фармацевтической промышленности для получения стабильных липидсодержащих пищевых добавок (нутрицевтиков), лечебно-косметических средств и лекарственных препаратов.

Для торможения процессов окисления применяют антиоксиданты (ингибиторы окисления), которые находят все более широкое применение для предотвращения окислительных превращений липидов и содержащих их препаратов in vitro, а также in vivo в комплексной терапии широкого круга заболеваний /Герчук М.П. Антиокислители в пищевой промышленности // Журн. Всесоюз. хим. общества им. Д.И.Менделеева. - 1960. - N. 4. - С.395-402. Авакумов В.М., Ковлер М.А., Кругликова - Львова Р.П. Лекарственные средства метаболической терапии на основе витаминов и ферментов (Обзор) // Вопросы мед. химии. - 1992. - Т.38. - N 4. - С.14-21. Дурнев А.Д, Середенин С.В. Антиоксиданты как средства защиты генетического аппарата // Хим.-фарм. журн. - 1990. - N. 2. - С.92-100/. Таким образом, антиоксиданты, присутствующие в лекарственном или косметическом препарате, являются не только действующим началом этих средств, но могут значительно тормозить их окисление в процессе длительного хранения, способствуя сохранению в нативном состоянии легкоокисляемых биологически активных компонентов.

Рекомендуемые курсы назначения нутрицевтиков, пероральных лекарственных средств, липидных препаратов с антиоксидантами достаточно продолжительны (до 30 дней), что определяет особую тщательность в подборе ингибиторов окисления /Дегтярев И.А., Заиков Г.Е. Ионол. Распределение в организме и биологическое действие // Хим.-фарм. журн. - 1985. - N 10. - С.1160-1168. Ленинжер А. Основы биохимии. - М.: - Мир. - 1985. - Т.1. - 385 с./. Во всем мире ведется целенаправленный скрининг (отбор) полифункциональных стабилизаторов, лекарств антиоксидантного действия.

Известен состав для стабилизации липидов, включающий природный фенольный антиоксидант (α-токоферол или α-токоферол ацетат) и L-карнитин, действующий как синергист по отношению к ингибитору окисления, при следующих соотношениях компонентов: α-токоферол или α-токоферол ацетат 75,0-94,5%; L-карнитин 5,5-25,0%, добавляемых в концентрации 0,28-0,50% от массы липидов /патент 2157829 RU, МПК С 11 В 5/00, опубликованный 20. 10. 2000 г./.

α-Токоферол(6-гидрокси-2,5,7,8-тетраметил-2-фитил хроман) является наиболее изученным природным антиоксидантом. Свойства α-токоферола как антиоксиданта проявляются в целом ряде сложных эффектов на всех уровнях организации от мембранных образований до организма в целом. /Ленинжер А. Основы биохимии. - М.: - Мир. - 1985. - T.1. - 385 с./.

С целью расширения ассортимента нетоксичных биологически активный антиоксидантов в Институте биохимической физики (ИБХФ) им. Н.М.Эмануэля РАН на основе фенозана (метилокса) (β-3,5-дитрет.бутил-4-гидроксифенилпропионовой кислоты) синтезированы стерически затрудненные фенолы: N,N,N-триметиламиноэтиловый эфир β'-(3,5-дитрет.бутил-4-гидрокси-фенил)пропановой кислоты иодид и N,N-диметил-N-гексадецил-аминоэтиловый эфир β'-(3,5-дитрет.бутил-4-гидрокси-фенил)пропановой кислоты)бромид. Соединения не обладают местным и общетоксическим действием, не оказывают влияния на эмбриогенез и развитие потомства, проявляют антиацетилхолинэстеразную активность, регулируют рост клеток растений /Молочкина Е.М., Озерова И.Б., Брагинская Ф.И., Зорина О.М., Шишкина Л.Н. Антиоксидантные (АО) и антиацетилхолинэстеразные (антиАХЭ) свойства гибридных соединений группы Ихфанов // В сб.: Биоантиоксидант. Москва. - 1998. - С.153-154. Богатыренко Т.Н., Бурлакова Е.Б., Конрадов А.А. Активность антиоксидантов как регуляторов роста клеток растений и ее связь с их физико-химическими константами // В сб.: Биоантиоксидант. Москва. - 1998. - С.26-27./. Для N,N,N-триметиламиноэтилового эфира β'-(3,5-дитрет.бутил-4-гидрокси-фенил)пропановой кислоты иодида и N,N-диметил-N-гексадецил-аминоэтилового эфира β'-(3,5-дитрет.бутил-4-гидрокси-фенил)пропановой кислоты)бромида была определена острая токсичность при однократном введении препарата белым беспородным мышам по Прозоровскому. Для N,N,N-триметиламиноэтилового эфира β'-(3,5-дитрет.бутил-4-гидрокси-фенил)пропановой кислоты иодида ЛД₅₀ составляет 41 мг/кг, при пероральном введении - 221 мг/кг, для N,N-диметил-N-гексадецил-аминоэтилового эфира β'-(3,5-дитрет.бутил-4-гидрокси-фенил)пропановой кислоты)бромида ЛД₅₀ составляет 65 мг/кг (внутрибрюшинно).

Предложенные производные фенозана, в отличие от α-Токоферола, обладают бифункциональными свойствами - антиокислительным действием и наличием в молекуле положительно заряженного атома азота, позволяющего удерживать ее на поверхности клеточных мембран с фиксацией на определенном месте за счет липовильного фрагмента (поплавковый эффект). Подобная структура обеспечивает адресную посылку антиоксидантов и создает возможность использования их для подавления патологических процессов в клетке организма, при которых нарушаются проницаемость клеточных мембран и интенсифицируются процессы перекисного окисления липидов.

На основе такого подхода новые производные фенозана могут применяться для лечения заболеваний, вызываемых вирусом иммунодефицита, цитомегаловирусом, а также при воспалительных заболеваниях, вызванных грамположительными бактериями (стафилококки, менингококки) и др.

N,N,N-триметиламиноэтиловый эфир β'-(3,5-дитрет.бутил-4-гидрокси-фенил)пропановой кислоты иодид или N,N-диметил-N-гексадецил-аминоэтиловый эфир β'-(3,5-дитрет.бутил-4-гидрокси-фенил)пропановой кислоты)бромид проявляют активность в реакции с пероксидными радикалами и обладают дополнительно способностью непосредственно взаимодействовать с гидропероксидами, разрушая их без образования свободных радикалов, что не наблюдается в присутствии α-токоферола. Разрушение гидропероксидов под влиянием изучаемых соединений, в свою очередь, является причиной выигрыша в периодах индукции и ведет к обеспечению высокой эффективности изучаемых соединений по сравнению с прототипом.

Для изучаемых синтетических антиоксидантов имеет место положительная корреляционная связь между концентрацией и величиной ингибирующего эффекта, что не наблюдается для α-токоферола, указанная зависимость имеет экстремальный характер и при высоких концентрациях антиоксидантное действие α-токоферола сменяется на проантиоксидантное.

Задачей предлагаемого изобретения является экономия использования дорогостоящих соединений, достижение ингибирующего эффекта меньшим количеством антиоксиданта.

Техническим результатом изобретения является упрощение состава и повышение его ингибирующего эффекта при наименьших концентрациях антиоксидантов.

Указанный технический результат достигается тем, что в состав для стабилизации липидов, включающий фенольный антиоксидант, в качестве которого использован индивидуальный N,N,N-триметиламиноэтиловый эфир β'-(3,5-дитрет.бутил-4-гидрокси-фенил)пропановой кислоты иодид или N,N-диметил-N-гексадецил-аминоэтиловый эфир β'-(3,5-дитрет.бутил-4-гидрокси-фенил)пропановой кислоты)бромид, в следующих концентрациях,

N,N,N-триметиламиноэтиловый эфир
β'-(3,5-дитрет.бутил-4-гидрокси-фенил)
пропановой кислоты иодид	от 0,10 до 5,00 мМ,

или

N,N-диметил-N-гексадецил-аминоэтиловый эфир
β'-(3,5-дитрет.бутил-4-гидрокси-фенил)
пропановой кислоты)бромид	от 0,10 до 5,00 мМ,

добавляемых в количестве 0,01-0,68% от массы липидов.

Предлагаемые соединения обладают сравнимой антиоксидантной активностью, имеют близкое химическое строение и могут быть взаимозаменяемыми.

Эффективность стабилизаторов оценивалась несколькими независимыми методами /Сторожок Н.М. Межмолекулярные взаимодействия компонентов природных липидов в процессе окисления. Дис.... д-ра хим. наук. М.: Институт биохимической физики им. Н.М.Эмануэля РАН, 1996. С.360. Цепалов В.Ф., Харитонова А.А., Гладышев Г.П. и др. Определение констант скорости и коэффициентов ингибирования фенолов-антиоксидантов с помощью модельной цепной реакции // Кинетика и катализ. - 1977. - Т.18. - вып.5. - С.1261-1267/:

- изучалась кинетика поглощения кислорода при инициированном окислении липидных субстратов различного происхождения в присутствии предлагаемого состава и прототипа;

- тестировалась кинетика накопления первичных продуктов окисления - гидропероксидов методом иодометрического титрования (ПЧ) при аутоокислении липидов в при повышенных температурах (60±0,2°С)

Изучение кинетики поглощения кислорода проводилось манометрическим методом в установках типа Варбурга при инициированном окислении липидов в присутствии инициатора азобисизобутиронитрила (АИБН) в концентрации 3 мМ при температуре 60±0,5°С. Контролем служили образцы липидов без добавок антиоксидантов.

В качестве субстратов окисления использовали как природные липиды (сиговых рыб) и метиловые эфиры олеиновой кислоты (метилолеат). Опытная серия рыбных липидов была наработана на Салехардском рыбоконсервном заводе по методу /Сторожок Н.М., Кутузова И.В. Состав для стабилизации липидов. Патент 2077552, Россия, опубл. в БИ №11. - 1997 г./. Изучение жирно-кислотного состава липидов позволило установить присутствие значительного количества полиненасыщенных жирных кислот (до 37%), в том числе пента- и гексаенов до 12% и 2% соответственно /Ушкалова В.Н., Артамонова Н.А., Сторожок Н.М., Горяев М.И. Жирно-кислотный состав общих и нейтральных липидов сиговых Обского бассейна. // Химия природ. соединен. - 1981. - №5. - С.555-558/.

Эффективность индивидуальных компонентов и их комбинаций исследовалась в широком диапазоне концентраций:

N,N,N-триметиламиноэтиловый эфир
β'-(3,5-дитрет.бутил-4-гидрокси-фенил)
пропановой кислоты иодид	от 0,10 до 5,00 мМ

или

N,N-диметил-N-гексадецил-аминоэтиловый эфир
β'-(3,5-дитрет.бутил-4-гидрокси-фенил)
пропановой кислоты)бромид	от 0,10 до 5,00 мМ

что составляло для указанных выше компонентов (0,01-0,68%) от массы липидов.

В присутствии определенной добавки индивидуальных ингибиторов окисления α-токоферола, N,N,N-триметиламиноэтилового эфира β'-(3,5-дитрет.бутил-4-гидрокси-фенил)пропановой кислоты иодида или N,N-диметил-N-гексадецил-аминоэтилового эфира β'-(3,5-дитрет.бутил-4-гидрокси-фенил)пропановой кислоты)бромида, а также прототипа записывалась кинетика окисления с использованием вышеописанных методов. На основании полученных данных строились кинетические кривые поглощения кислорода (мм³ O₂) либо накопления пероксидов (г I₂/100 г липида).

Из кинетических кривых определялись периоды индукции (τ), за которые принимали:

- время (в мин), за которое процесс инициированного окисления липидов достигал максимальной скорости (τ_инд).

- время (в часах) накопления пероксидов, количественно соответствующих значению ПЧ 0,1% I₂.

Ингибирующее действие индивидуальных компонентов и их смесей оценивали по абсолютному значению разницы между периодами индукции окисления субстратов с индивидуальным антиоксидантом (τ_АО), смесью стабилизирующих добавок (τ_инг.) и без них (τ_о) по формуле

ε=Δτ=τ_инг-τ_AO,

либо выражали ее в относительных единицах Δτ/τ_АО, в %.

Критерием антиоксидантного действия служили начальная (Wo_{2 нач}×10^-7, М×c^-1) и максимальная (Wo_{2 max}×10^-7, М×c^-1) скорость процесса окисления в присутствии и в отсутствии антиоксиданта. Эффективность стабилизации окисления определяли также по величине Wo_{2 max (МО)}/Wo_{2 max (МО+AO)}, количественно характеризующем степень уменьшения скорости поглощения кислорода в присутствии метилолеата (МО) и метилолеата с добавками индивидуальных антиоксидантов (АО).

Было установлено, что зависимость изменения периодов индукции для индивидуального α-токоферола носит экстремальный характер. Диапазон эффективных концентраций расположен в области (0,25-8,0) мМ, что соответствует (0,03-1,08) % от массы липидов, максимум указанной зависимости определялся при концентрации 2,5 мМ (0,34% от массы липидов). Зависимости изменения величины периодов индукции от концентрации N,N,N-триметиламиноэтилового эфира β'-(3,5-дитрет.бутил-4-гидрокси-фенил)пропановой кислоты иодида или N,N-диметил-N-гексадецил-аминоэтиловый эфир β'-(3,5-дитрет.бутил-4-гидрокси-фенил)пропановой кислоты)бромида в системе окисления носили линейный характер, указанные соединения превосходили по своему ингибирующему действию смесь α-токоферола с L-карнитином.

Сущность изобретения иллюстрируется следующими примерами:

ПРИМЕР 1

Берут 10 г (точная навеска) эфиров ненасыщенных высших жирных кислот, например метилолеата или метиллинолеата, и добавляют 0,0078 г N,N,N-триметиламиноэтилового эфира β'-(3,5-дитрет.бутил-4-гидрокси-фенил)пропановой кислоты иодида или N,N-диметил-N-гексадецил-аминоэтиловый эфир β'-(3,5-дитрет.бутил-4-гидрокси-фенил)пропановой кислоты)бромида, что составляет соответственно 0,08% от массы липидов.

ПРИМЕР 2

Берут 10 г (точная навеска) эфиров ненасыщенных высших жирных кислот, например метилолеата или метиллинолеата. Добавляют 0,0049 г N,N,N-триметиламиноэтилового эфира β'-(3,5-дитрет.бутил-4-гидрокси-фенил)пропановой кислоты иодида или N,N-диметил-N-гексадецил-аминоэтиловый эфир β'-(3,5-дитрет.бутил-4-гидрокси-фенил)пропановой кислоты)бромида, что составляет соответственно 0,05% от массы липидов.

ПРИМЕР 3

Берут 10 г (точная навеска) рыбных липидов, например липидов сиговых рыб. Добавляют 0,0108 г N,N,N-триметиламиноэтилового эфира β'-(3,5-дитрет.бутил-4-гидрокси-фенил)пропановой кислоты иодида или N,N-диметил-N-гексадецил-аминоэтиловый эфир β'-(3,5-дитрет.бутил-4-гидрокси-фенил)пропановой кислоты)бромида, что составляет 0,11% от массы липидов.

ПРИМЕР 4

Берут 10 г (точная навеска) эфиров ненасыщенных высших жирных кислот, например метилолеата или метиллинолеата, и добавляют 0,0027 г N,N,N-триметиламиноэтилового эфира β'-(3,5-дитрет.бутил-4-гидрокси-фенил)пропановой кислоты иодида или N,N-диметил-N-гексадецил-аминоэтиловый эфир β'-(3,5-дитрет.бутил-4-гидрокси-фенил)пропановой кислоты)бромида, что составляет соответственно 0,03% от массы липидов.

ПРИМЕР 5

Берут 10 г (точная навеска) эфиров ненасыщенных высших жирных кислот, например метилолеата или метиллинолеата, и добавляют 0,0338 г N,N,N-триметиламиноэтилового эфира β'-(3,5-дитрет.бутил-4-гидрокси-фенил)пропановой кислоты иодида или N,N-диметил-N-гексадецил-аминоэтиловый эфир β'-(3,5-дитрет.бутил-4-гидрокси-фенил)пропановой кислоты)бромида, что составляет соответственно 0,34% от массы липидов.

ПРИМЕР 6

Берут 10 г (точная навеска) эфиров ненасыщенных высших жирных кислот, например метилолеата или метиллинолеата, и добавляют 0,0676 г N,N,N-триметиламиноэтилового эфира β'-(3,5-дитрет.бутил-4-гидрокси-фенил)пропановой кислоты иодида или N,N-диметил-N-гексадецил-аминоэтиловый эфир β'-(3,5-дитрет.бутил-4-гидрокси-фенил)пропановой кислоты)бромида, что составляет соответственно 0,68% от массы липидов.

Эффективность ингибирующего действия указанных выше соединений оценивали на основании данных кинетики поглощения кислорода, получаемых с использованием манометрического метода, подробно изложенного в описании изобретения. Полученные результаты приведены в табл.1. Из данных табл.1 видно, что все рекомендуемые концентрации ингибиторов окисления превосходят по величине эффективности прототип. Наибольшую эффективность по сравнению с прототипом проявляет N,N,N-триметиламиноэтиловый эфир β'-(3,5-дитрет.бутил-4-гидрокси-фенил)пропановой кислоты иодид или N,N-диметил-N-гексадецил-аминоэтиловый эфир β'-(3,5-дитрет.бутил-4-гидрокси-фенил)пропановой кислоты)бромид, в концентрации 5 мМ, что составляет 0,68% от массы липидов. Так, при окислении метилолеата в присутствии N,N,N-триметиламиноэтилового эфира β'-(3,5-дитрет.бутил-4-гидрокси-фенил)пропановой кислоты иодида или N,N-диметил-N-гексадецил-аминоэтилового эфира β'-(3,5-дитрет.бутил-4-гидрокси-фенил)пропановой кислоты)бромида, максимально достигаемый ингибирующий эффект составляет 6250 и 6300 мин соответственно, тогда как смесь α-токоферола с L-карнитином (включающая 86,0% α-токоферола и 14,0% L-карнитина) обеспечивает максимальный индукционный период в 1130 мин, при этом эффективность предлагаемой смеси выше эффективности прототипа на 453-458%

Высокоэффективной является концентрация, приведенная в примере 5, соизмеримая с концентрацией α-токоферола в прототипе. При ингибировании окисления с добавками 2,5 мМ N,N,N-триметиламиноэтилового эфира β'-(3,5-дитрет.бутил-4-гидрокси-фенил)пропановой кислоты иодида или N,N-диметил-N-гексадецил-аминоэтилового эфира β'-(3,5-дитрет.бутил-4-гидрокси-фенил)пропановой кислоты)бромида рыбных липидов индукционные периоды составили 1200 и 1250 мин соответственно. Следовательно, эффективной для метилолеата, а также рыбных липидов оказалась концентрация антиоксидантов 2,5 мМ, что составляет 0,34% от массы липидов

Эффективность указанной выше концентрации в идентичных условиях окисления была сопоставлена с периодами индукции опыт α-контроля (неингибированных липидов) и антиоксидантным действием прототипа (табл.1, 2).

Было установлено, что эффективность использования новых антиоксидантов в разных субстратах составляет от (175-185)% по сравнению со смесью α-токоферола с L-карнитином (прототип) (табл.1).

При изучении кинетики накопления гидропероксидов было показано, что периоды индукции в опытах с концентрацией N,N,N-триметиламиноэтилового эфира β'-(3,5-дитрет.бутил-4-гидрокси-фенил)пропановой кислоты иодида или N,N-диметил-N-гексадецил-аминоэтилового эфира β'-(3,5-дитретбутил-4-гидрокси-фенил)пропановой кислоты)бромида 0,2 мМ, добавляемой в количестве 0,03% от массы липидов, процент разрушения гидропероксидов составляет 54,7% и 50,1% соответственно, что не наблюдается в присутствии прототипа (табл.3).

Из сравнения ингибирующего действия исследуемых концентраций видно, что абсолютная величина периодов индукции наиболее эффективной концентрации N,N,N-триметиламиноэтилового эфира β'-(3,5-дитрет.бутил-4-гидрокси-фенил)пропановой кислоты иодида или N,N-диметил-N-гексадецил-аминоэтилового эфира β'-(3,5-дитрет.бутил-4-гидрокси-фенил)пропановой кислоты)бромида, добавляемых в количестве 0,34% от массы липидов, выше при окислении метилолеата (3150 и 3200 мин соответственно), чем при окислении рыбных липидов (1200 и 1250 мин соответственно). Эти данные объясняются более высокой степенью ненасыщенности входящих в состав рыбных липидов высших жирных кислот /Ушкалова В.Н., Артамонова Н.А., Сторожок Н.М., Горяев М.И. Жирно-кислотный состав общих и нейтральных липидов сиговых Обского бассейна. // Химия природ, соединен. - 1981. - №5. - С.555-558./, следовательно, и более высокой их окисляемостью. Ввведение рекомендуемой концентрации исследуемых соединений воссоздает антиоксидантную систему и обеспечивает эффективную защиту липидов от окисления. Более высокая ингибирующая способность указанной выше смеси по сравнению с прототипом была доказана несколькими независимыми методами (обсуждаемыми выше) (табл.1, 2, 3). Установлен наиболее эффективный диапазон концентраций антиоксидантов от 0,10 до 5,00 мМ, ниже концентрации 0,10 мМ антиоксидант малоэффективен (период индукции составляет 30-40 мин), свыше концентрации 5 мМ эффективность снижается из-за предела растворимости соединений в субстрате окисления.

Причинно-следственная связь между существенными признаками изобретения и достижением технического результата следующая. Эффекты ингибирования N,N,N-триметиламиноэтилового эфира β'-(3,5-дитрет.бутил-4-гидрокси-фенил)пропановой кислоты иодида или N,N-диметил-N-гексадецил-аминоэтилового эфира β'-(3,5-дитрет.бутил-4-гидрокси-фенил)пропановой кислоты)бромида могут быть объяснены, исходя из представлений о механизме антиоксидантного действия используемых соединений. Установлено, что антиоксиданты воздействуют на сложный многостадийный процесс окисления по различным механизмам.

Так, в соответствии с литературными данными α-токоферол проявляет чрезвычайно высокую активность в реакции с пероксидными радикалами (RO₂ ^•), ведущими окисление. Константа скорости реакции токоферола с RO₂ ^• (реакции 7 согласно классической схемы) составляет 3,60×10⁶ M^-1×c^-1, что превышает значение К₇ для всех изученных природных и синтетических антиоксидантов /Сторожок Н.М., Храпова Н.Г., Бурлакова Е.Б. Исследование межмолекулярных взаимодействий компонентов природных липидов в процессе окисления // Химическая кинетика. - 1995. - т.14. - №11. - С.29-46. Бурлакова Е.Б., Крашаков С.А., Храпова Н.Г. Роль токоферола в пероксидном окислении липидов биомембран // Биологические мембраны. - 1998. - Т.15.- №2. - С.137-168//.

Таким образом, N,N,N-триметиламиноэтиловый эфир β'-(3.5-дитрет.бутил-4-гидрокси-фенил)пропановой кислоты иодид или N,N-диметил-N-гексадецил-аминоэтиловый эфир β'-(3,5-дитрет.бутил-4-гидрокси-фенил)пропановой кислоты)бромид проявляют активность в реакции с пероксидными радикалами с константой скорости реакции К₇=0,59×10⁴ M^-1×c^-1 и К₇=0,94×10⁴ M^-1×c^-1, соответственно, снижают скорость процесса окисления липидов в 5-10 раз, а также дополнительно снижают уровень гидропероксидов на 50-55% (табл.3). Разрушение гидропероксидов под влиянием изучаемых соединений, в свою очередь, является причиной выигрыша в периодах индукции и обеспечению высокой эффективности.

Предлагаемый состав, включающий N,N,N-триметиламиноэтиловый эфир β'-(3,5-дитрет.бутил-4-гидрокси-фенил)пропановой кислоты иодид или N,N-диметил-N-гексадецил-аминоэтиловый эфир β'-(3,5-дитрет.бутил-4-гидрокси-фенил)пропановой кислоты)бромид значительно достигает эффекта ингибирования по сравнению с прототипом. Сочетание в одной композиции антиоксиданта, действующего на разные элементарные реакции сложного окислительного процесса, позволяет увеличить ингибирующую способность антиоксиданта и эффективно тормозить окисление полиненасыщенных субстратов.

Состав для стабилизации липидов, включающий фенольный антиоксидант, отличающийся тем, что в качестве фенольного антиоксиданта использован индивидуальный N,N,N-триметиламиноэтиловый эфир β'-(3,5-дитрет.бутил-4-гидрокси-фенил)пропановой кислоты иодид или N,N-диметил-N-гексадецил-аминоэтиловый эфир β'-(3,5-дитрет.бутил-4-гидрокси-фенил)пропановой кислоты)бромид, в концентрациях:

N,N,N-триметиламиноэтиловый
эфир β'-(3,5-дитрет.бутил-4-гидрокси-фенил)пропановой
кислоты иодид	от 0,10 до 5,00 мМ
или
N,N-диметил-N-гексадецил-аминоэтиловый эфир
β'-(3,5-дитрет.бутил-4-гидрокси-фенил)
пропановой кислоты)бромид	от 0,10 до 5,00 мМ

добавляемых в количестве 0,01-0,68% от массы липидов.